(完整版)急性毒性試驗(yàn)

1、試驗(yàn)?zāi)康模杭毙远拘栽囼?yàn)是在 24 小時(shí)內(nèi)給藥1 次或 2 次（間隔 6-8 小時(shí)），觀察動物接受過量的受試藥物所產(chǎn)生的急性中毒反應(yīng)，為多次反復(fù)給藥的毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)劑量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人體過量時(shí)可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)、 I 期臨床的劑量選擇和觀察指標(biāo)的設(shè)計(jì)提供參考信息等。一、嚙齒類動物單次給藥的毒性試驗(yàn)（一）試驗(yàn)條件1. 動物品系：常用健康的小鼠、大鼠。選用其他動物應(yīng)說明原因。年齡一般為 7-9 周齡。同批試驗(yàn)中，小鼠或大鼠的初始體重不應(yīng)超過或低于所用動物平均體重的 20%.實(shí)驗(yàn)前至少馴養(yǎng)觀察 1 周，記錄 動物的行為活動、飲食、體重及精神狀況。2. 飼養(yǎng)管理：動物飼料應(yīng)符合動物的營養(yǎng)

2、標(biāo)準(zhǔn)。若用自己配制的飼料，應(yīng)提供配方及營養(yǎng)成分含量的檢測報(bào)告；若是購買的飼料，應(yīng)注明生產(chǎn)單位。應(yīng)寫明動物飼養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境因素的控制情況。3. 受試藥物：應(yīng)注明受試藥物的名稱、批號、來源、純度、保存條件及配制方法。（二）試驗(yàn)方法：由于受試藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、活性成分的含量、藥理、毒理學(xué)特點(diǎn)各異，毒性也不同，有的很難觀察到毒性反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)者可根據(jù)受試藥物的特點(diǎn)，由下列幾種實(shí)驗(yàn)方法中選擇一種進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。1 .伴隨測定半數(shù)致死量（LD50）的急性毒性試驗(yàn)方法。2 .最大耐受劑量（MTD試驗(yàn)方法：最大耐受劑量，是引起動物出現(xiàn)明顯的中毒反應(yīng)而不產(chǎn)生死 亡的劑量。3 . 最大受試藥物量試驗(yàn)方法：在合理的濃度及合

3、理的容量條件下，用最大的劑量給予實(shí)驗(yàn)動物，觀察動物的反應(yīng)。4 . 單次口服固定劑量方法（ Fixed-dose procedure ）。選擇5、 50 、 500 和 2000mg/kg 四個(gè)固定劑量。實(shí)驗(yàn)動物首選大鼠，給藥前禁食6-12 小時(shí)，給受試藥物后再禁食3-4 小時(shí)。如無資料證明雄性動物對受藥試物更敏感，首先用雌性動物進(jìn)行預(yù)試。根據(jù)受試藥物的有關(guān)資料，由上述四個(gè)劑量中選擇一個(gè)作初始劑量， 若無有關(guān)資料作參考， 可用 500mg/kg 作初始劑量進(jìn)行預(yù)試， 如無毒性反應(yīng)， 則用 2000mg/kg 進(jìn)行預(yù)試，此劑量如無死亡發(fā)生即可結(jié)束預(yù)試。如初始劑量出現(xiàn)嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，那就用下一個(gè)擋次

4、的劑量進(jìn)行預(yù)試，如該動物存活，就在此兩個(gè)固定劑量之間選擇一個(gè)中間劑量試驗(yàn)。每個(gè)劑量給一只動物，預(yù)試一般不超過 5 只動物。 每個(gè)劑量試驗(yàn)之間至少應(yīng)間隔 24 小時(shí)。 給受試藥物后的觀察期至少7 天， 如動物的毒性反應(yīng)到第7 天仍然存在，尚應(yīng)繼續(xù)再觀察7 天。在上述預(yù)試的基礎(chǔ)上進(jìn)行正式試驗(yàn)。每個(gè)劑量最少用 10 只動物，雌雄各半。根據(jù)預(yù)試的結(jié)果，由前面所述的四種劑量中選擇出可能產(chǎn)生明顯毒性但又不引起死亡的劑量；如預(yù)試結(jié)果表明， 50mg/kg 引 起死亡，則降低一個(gè)劑量檔次試驗(yàn)。試驗(yàn)觀察：給受試藥物后至少應(yīng)觀察 2周，根據(jù)毒性反應(yīng)的具體特點(diǎn)可適當(dāng)延長。對每只動物 均應(yīng)仔細(xì)觀察和詳細(xì)記錄各種毒性反

5、應(yīng)出現(xiàn)和消失的時(shí)間。給受試藥物當(dāng)天至少應(yīng)觀察記錄兩次，以后可 每天一次。觀察記錄的內(nèi)容包括皮膚、粘膜、毛色、眼睛、呼吸、循環(huán)、自主及中樞神經(jīng)系統(tǒng)行為表現(xiàn)等。動物死亡時(shí)間的記錄要準(zhǔn)確。給受試藥物前、給受試藥物后1周、動物死亡及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)應(yīng)稱取動物的體重。所有動物包括死亡或處死的動物均應(yīng)進(jìn)行尸檢，尸檢異常的器官應(yīng)作病理組織學(xué)檢查。固定劑量試驗(yàn) 法所獲得的結(jié)果，參考下表標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價(jià)。單次口服固定劑量試驗(yàn)法結(jié)果的評價(jià)劑量(mg/ kg)試驗(yàn)結(jié)果存活數(shù)100%100跖活毒性表現(xiàn)明顯100始 活無明顯中毒表現(xiàn)5.0高毒(Very toxic)(LD50< 25mg/kg)有毒(Toxic )(LD5

6、0= 25-200mg/kg )用50mg/kg試驗(yàn)50.0有毒或高毒用5mg/kg進(jìn)行試驗(yàn)有害(Harmful )(LD50= 200-2000mg/kg )用500mg/kg試驗(yàn)500.0有毒或有害用50mg/kg試驗(yàn)LD50>2000mg/kg用2000mg/kg試驗(yàn)20000用500mg/kg試驗(yàn)該化合物無嚴(yán)重急性中毒的危險(xiǎn)性、非嚙齒類動物的急性毒性試驗(yàn)（近似致死劑量試驗(yàn)）（一）試驗(yàn)條件1 .動物品系：一般用6只健康的Beagleg狗和猴。選用其他種屬的動物時(shí)應(yīng)說明原因。年齡一 般為6-8月齡。同批試驗(yàn)中，試驗(yàn)初始動物的體重應(yīng)不超過或者低于所用動物平均體重的20%.試驗(yàn)前至少馴養(yǎng)

7、觀察2周，觀察記錄動物的行為活動、飲食、體重、心電圖及精神狀況，擇其正常、健康、雌性無孕 者作為受試動物。2 .飼養(yǎng)管理：動物飼料應(yīng)符合動物的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。若用自己配制的飼料，應(yīng)提供配方及營養(yǎng)成分 含量的檢測報(bào)告；若是購買的飼料，應(yīng)注明生產(chǎn)單位。注明動物飼養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境因素的控制情況。3 .受試藥物：應(yīng)注明受試藥物的名稱、批號、來源、純度、保存條件及配制方法。（二）近似致死劑量試驗(yàn)方法：1. 估計(jì)可能的毒性范圍：根據(jù)小動物的毒性試驗(yàn)結(jié)果、受試藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和其它有關(guān)資料， 估計(jì)可能引起毒性和死亡的劑量范圍。2. 按50%遞增法，設(shè)計(jì)出含10-20個(gè)的劑量序列表3. 根據(jù)估計(jì)，由劑量序列表中找出可能的致

8、死劑量范圍，在此范圍內(nèi)，每間隔一個(gè)劑量給一只動物，測出最低致死劑量和最高非致死劑量，然后用二者之間的劑量給一只動物，此劑量即為所要求的近 似致死劑量。4. 給藥途徑：原則上應(yīng)與臨床用藥途徑相同，如有不同，應(yīng)說明理由。5. 觀察記錄：給受試藥物后觀察 14 天，當(dāng)天給受試藥物后持續(xù)觀察 30 分鐘，第 1-4 小時(shí)再觀 察一次，以后每天觀察一次。仔細(xì)觀察記錄各動物的中毒表現(xiàn)和其出現(xiàn)和消失時(shí)間、毒性反應(yīng)的特點(diǎn)和死亡時(shí)間。中毒死亡或中毒表現(xiàn)明顯者，需作大體解剖檢查。尸檢異常的組織器官應(yīng)作組織病理學(xué)檢查。三、說明：（一）創(chuàng)新藥物應(yīng)提供兩種動物的急性毒性試驗(yàn)資料，一種為嚙齒類動物，另一種為非嚙齒類 動物

9、。（二）溶于水的藥物，嚙齒類動物應(yīng)提供兩種給藥途徑的毒性試驗(yàn)資料，一種靜脈注射途徑，一種臨床途徑，若臨床用靜脈注射途徑時(shí)，可只做靜脈注射的急性毒性試驗(yàn)。反復(fù)給藥的毒性試驗(yàn)（長期毒性試驗(yàn)）一、目的觀察動物反復(fù)給予受試藥物后，對機(jī)體產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度，主要的毒性靶器官及其 損害的可逆性，提供無毒性反應(yīng)劑量及臨床上主要的監(jiān)測指標(biāo)，為制定人用劑量提供參考。二、試驗(yàn)條件（一）動物1 .動物品系：一般用兩種動物，一種嚙齒類動物，另一種為非嚙齒類動物。常用SD或Wister大鼠和 Beagle 狗或者猴。選用其他動物，應(yīng)說明原因。2 .年齡：根據(jù)試驗(yàn)期限的長短而定。大鼠一般69周齡。Beagleg狗

10、一般612月齡。試驗(yàn)開始時(shí)體重差異不應(yīng)超過或者低于該次試驗(yàn)動物平均體重的 20%.3 . 實(shí)驗(yàn)前至少馴養(yǎng)觀察 2 周。觀察記錄動物的行為活動、飲食、體重、精神狀況、心電圖、有 關(guān)血液學(xué)及血液生化學(xué)等功能指標(biāo)。選擇正常、健康、雌性無孕動物作為受試動物。（二）飼養(yǎng)管理1. 飼料：所用飼料應(yīng)符合動物的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。若用自己配制的飼料，應(yīng)提供配方及營養(yǎng)成分含量 的檢測報(bào)告；若是購買的飼料，應(yīng)提供生產(chǎn)單位。2. 實(shí)驗(yàn)的環(huán)境條件：應(yīng)寫明動物飼養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境因素的控制情況。（三）受試藥物：應(yīng)寫明受試物的名稱、批號、來源、純度、保存條件及配制方法。三、試驗(yàn)方法（一）試驗(yàn)分組：一般設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)對照組。必要時(shí)尚需設(shè)

11、溶媒對照組。低劑量組原則上應(yīng)高于同種動物藥效有效劑量，在此劑量下，動物不出現(xiàn)毒性反應(yīng)；高劑量組原則上應(yīng)使動物產(chǎn)生明顯的或嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，甚至引起少數(shù)動物死亡；為觀察毒性反應(yīng)的劑量關(guān)系，在高、低劑量組之間應(yīng)再設(shè)1 個(gè)中劑量組。（二）動物數(shù)：每組動物的數(shù)量應(yīng)根據(jù)給藥周期的長短決定。大鼠一般為雌、雄各1030只；Beagle狗或者猴，一般雌、雄各 34只。（三）給藥途徑：原則上應(yīng)與臨床用藥途徑相同。若用其他途徑應(yīng)說明原因。口服給藥一般采用灌胃給予受試藥物。如采用將受試藥物混入飼料中服用，應(yīng)提供受試藥物與飼料混合的均勻性、受試物的穩(wěn)定性、有關(guān)受試物質(zhì)量檢查及說明動物食入規(guī)定受試藥物的量等方面的資 料，

12、以確保獲得準(zhǔn)確可靠的試驗(yàn)結(jié)果。臨床用藥途徑為靜脈注射時(shí)，由于給藥周期長，大鼠靜注有困難時(shí)，可用其它適宜的途徑代替。原則上應(yīng)每天給藥。試驗(yàn)周期長的試驗(yàn)，也可采取每周給藥6 天。每天給藥時(shí)間應(yīng)相同。應(yīng)根據(jù)體重增長情況適時(shí)調(diào)整給藥量。（四）觀測項(xiàng)目：原則上應(yīng)根據(jù)受試物的特點(diǎn)選擇其相應(yīng)的觀測指標(biāo)。一般共性的觀測指標(biāo)最少應(yīng)包括以下內(nèi)容：1. 一般觀察：外觀體征、行為活動、腺體分泌、呼吸、糞便性狀、食量、體重、給藥局部反應(yīng)、狗的心電圖變化等。大鼠群養(yǎng)時(shí)，應(yīng)將出現(xiàn)中毒反應(yīng)的動物取出單籠飼養(yǎng)。發(fā)現(xiàn)死亡或?yàn)l死動物，應(yīng)及時(shí) 尸檢。試驗(yàn)期間如動物發(fā)生非藥物性的疾病反應(yīng)時(shí)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行隔離處理。2. 血液學(xué)指標(biāo)：紅細(xì)胞

13、、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、白細(xì)胞總數(shù)及其分類、血小板。3. 血液生化指標(biāo)： 天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（ AST） 、 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（ ALT） 、 堿性磷酸酶（ ALP） 、尿素氮（BUN、總蛋白（TP）、白蛋白（Alb ）、血糖（GLU、總膽紅素（T-BIL ）、肌酊（Crea）、總 膽固醇（T-CHO）。4. 系統(tǒng)尸解和病理組織學(xué)檢查：系統(tǒng)尸解：應(yīng)全面細(xì)致，為組織病理學(xué)檢查提供參考。臟器重量：一般應(yīng)稱取下列臟器和組織的重量并計(jì)算臟器系數(shù)：心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、 甲狀腺、睪丸、子宮、腦、前列腺。病理組織學(xué)檢查：對照組和高劑量組動物及尸檢異常者應(yīng)詳細(xì)檢查，其它劑量組在高劑量組有異常時(shí)才

14、進(jìn)行檢查。內(nèi)容包括：腎上腺、胰腺、胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸、腦垂體、前列腺、腦、脊髓、心、脾、胸骨（骨和骨髓）、腎、肝臟、肺、淋巴結(jié)、膀胱、子宮、卵巢、甲狀腺、胸腺、睪丸（連附睪）、視神經(jīng)。（五）恢復(fù)性觀察：最后一次給受試藥物后24小時(shí)，每組活殺部分動物檢測各指標(biāo)，留下部分動物，根據(jù)受試物的特點(diǎn)，繼續(xù)觀察一定時(shí)間再活殺檢查，以了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能出現(xiàn)的延遲 性毒性反應(yīng)。在此期間除了不給受試物外，其它觀察內(nèi)容與給受試物期間相同。（六）觀測指標(biāo)的時(shí)間和次數(shù)：應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)期限的長短和受試物的特點(diǎn)而定。原則上應(yīng)盡量發(fā) 現(xiàn)最早出現(xiàn)的毒性反應(yīng)。四、說明（一）關(guān)于反復(fù)給藥毒性試驗(yàn)的期限：原則上根據(jù)臨床用藥的療程而定。1 .一般藥物的給