電針對大鼠腦缺血急性期治療機理及神經(jīng)保護作用的研究

1、電針對大鼠腦缺血急性期治療機理及神經(jīng)保護作用的研究     【摘要】  目的 探討電針對大鼠腦缺血急性期治療機理及腦組織自由基水平與神經(jīng)功能缺損的相關(guān)性。方法 53只健康的雄性Wister大鼠，隨機分為針灸組、模型組、對照組。采用光化學法復(fù)制局灶性腦缺血急性期動物模型。分別在術(shù)后3h、24h檢測腦組織中MDA含量和SOD活性，同時進行神經(jīng)行為學觀察和神經(jīng)功能缺損評分。結(jié)果 模型組腦缺血后3 h MDA含量已明顯增高，24 h其值為正常組的3倍(P<0.01)。電針組24 h MDA含量相對降低，由(4.02±0.31)mol&#

2、183;ml-1降為(2.01±0.54)mol·ml-1，與模型組相比，P<0.05；電針組24h SOD的活性明顯增高，由（66±1.24）nu/mg pro上升為（103±2.54）nu/mg pro，與模型組相比，P<0.05。神經(jīng)功能缺損Zea Longa法評定顯示，24 h電針組的神經(jīng)功能缺損程度明顯低于模型組，其神經(jīng)功能缺損程度與腦組織MDA含量呈負相關(guān)，與SOD活性呈正相關(guān)。結(jié)論 電針可以通過干預(yù)大鼠缺血性腦組織自由基水平，對腦組織起保護作用，同時自由基的水平與腦缺血后神經(jīng)功能的缺損程度有密切關(guān)系(P<0.05)。 【關(guān)

3、鍵詞】  局灶性腦缺血模型大鼠 電針 丙二醛 超氧化物岐化酶    THERAPITIC AND NEUROPROTECTIVE EFFECT OF ELECTRI    Abstract  Objective  To study the mechanism of electric acupuncture on acute cerebral ischemia and free radical level in brain tissue correlated with degree of neurologi

4、c impairment in rats.  Methods 53 Wister rats were divided into electric acupuncture therapy group and control group. Rats' focal cerebral ischemia in acute stage was induced by photochemistry method. Changes in contents of MDA and in activity of SOD in brain homogenate were observed at 3h

5、and 24h.The degree of neurologic impairment was examined by Zea Longa' law. Results  After 3h the contents of MDA in brain ischemia tissue increased, and at 24h it increased by 3 times compared with control group. MDA contents at 24h in the acupuncture therapy group dropped significantly fr

6、om 4.02±0.31 mol·mL-1 to 2.01±0.54 mol·mL-1(P<0.05). Compared with the model group SOD activity at 24h was significantly raised from 66±1.24 nu/mg pro to 103±2.54 nu/mg pro (P<0.05). Zea Longa law evaluation showed that at 24h degree of neurologic impairment in th

7、e acupuncture therapy group was lower than the model group. The score of neurologic impairment had obvious negative correlation with the level of MDA and obvious positive correlation, by contrast, with activity of SOD in brain homogenate.  Conclusion  In acute stage,  acupuncture trea

8、tment can protect ischemia brain tissue and lessen the degree of neurologic impairment.    Key words  Cerebral ischemia model rats  Electric acupuncture  MDA  SOD    急性腦卒中后盡快改善腦部血液循環(huán)，糾正腦組織缺氧、維持神經(jīng)細胞存活和促進神經(jīng)生長是治療本病的關(guān)鍵。目前除了早期的藥物治療以外也在行針灸治療。本研究擬通過觀察電針對腦缺血

9、急性期大鼠腦組織自由基水平的影響，以及分析腦組織自由基水平與神經(jīng)功能的相關(guān)性，探討腦缺血急性期應(yīng)用電針治療的機理和意義，為臨床缺血性腦血管疾病早期應(yīng)用電針治療奠定理論基礎(chǔ)。    1  材料與方法    1.1  材料    Wister雄性大鼠,12周,體重(250±50)g，二級動物。MDA、SOD測試盒(均購自南京建成生工程研究所)；WFZ800-D3A型單光束紫外/可見分光光度計(北京第二光學儀器廠)；G680電子針灸儀（上海醫(yī)用電子儀器廠）。  

10、  1.2  實驗方法    1.2.1  實驗分組：將53只大鼠分為正常對照組(假手術(shù)組）12只、模型組22只、電針治療組19只。根據(jù)缺血時間的不同，每組又隨機分為3h和24h兩組。    1.2.2  模型制備：采用光化學法1并略加改進,左側(cè)顳部入路,牙科鉆開直徑5 mm的骨窗暴露大鼠大腦中動脈起始部及嗅束至大腦下靜脈間的一段MCA為光照部位。光照分二步,首先股靜脈注入虎紅B15g·L-1(0.03g·kg-1),持續(xù)光照MCA起始部10 min,再經(jīng)股靜脈注入半量15g

11、·L-1的虎紅B，再光照嗅束至大腦下靜脈間的MCA段10 min，造模完成。正常對照組僅進行骨窗暴露。    1.2.3  治療方法：將大鼠用腦立體定位儀固定，選取百會、水溝、內(nèi)關(guān)、合谷、足三里穴，以32號毫針刺入,進針0.10.2 cm后連接至電子針灸儀的輸出電極上，選用頻率為3050 Hz交替的等波幅的疏密波,刺激強度以大鼠肢體輕微顫動為宜。電針第一次實施在造模后1 h，此后1次/6 h，10 min/次。模型組：對造模成功的大鼠，在同等條件下進行大鼠的抓取但不實施電針治療。    1.2.4  MD

12、A含量和SOD活性測定：術(shù)后3 h、24 h分別將斷頭置冰塊上取腦并用冰冷的生理鹽水沖洗，濾紙拭干，取病灶側(cè)腦組織塊1 g，稱重剪碎加入生理鹽水1:9(W:V)放入勻漿器碾磨，使組織充分勻漿，離心取上清液制備成10%組織勻漿液待測。MDA測定采用硫代巴比妥酸(TDA)比色法，利用可見分光光度計在波長532 nm處測定，單位：nmol·mL-1。SOD測定采用黃嘌呤氧化酶法，單位：nu/mg蛋白(pro)。具體操作步驟按試劑盒說明書進行。    1.2.5  腦缺血大鼠行為學觀察和神經(jīng)功能缺損評分（NSS）：連續(xù)觀察造模后大鼠的行為學表現(xiàn)，并按Z

13、ea Longa的6級評分法評分2：0分，無功能障礙；1分，不能伸展前肢；2分，向一側(cè)旋轉(zhuǎn)；3分，向一側(cè)傾倒；4分，無自主活動伴意識抑制；5分，死亡。         1.3  統(tǒng)計處理方法    采用SPSS11.0軟件包，實驗數(shù)據(jù)以x±S表示，組間比較采用單因素方差分析，相關(guān)性檢驗采用Ken-dalls  tau-b相關(guān)檢驗。    2  結(jié)果    2.1  電針對局灶性腦缺血急性

14、期大鼠腦組織MDA含量和SOD活性的影響    模型組MDA含量在3h時已增多并持續(xù)上升，24 h其值達正常組3倍(P<0.01)；SOD活性3 h時已明顯低于正常組，在24 h下降至最低點(P<0.01)；而電針組3 h時MDA含量與模型組相比已有所下降，24 h時MDA含量已明顯下降，由(4.02±0.31)mol·ml-1下降為(2.01±0.54)mol·ml-1，3h時SOD的活性與模型組相比有明顯增高，24 h時電針組SOD的活性為(103±2.54) nu/mg pro，而模型組為(36&

15、#177;3.58) nu/mg pro，統(tǒng)計學處理顯示差異有顯著性(P<0.05)。詳細結(jié)果見表1。    2.2  電針對局灶性腦缺血急性期大鼠神經(jīng)功能行為學的影響    從結(jié)果看，造模成功大鼠清醒后即有精神差、反應(yīng)差、活動減少及前肢障礙等不良表現(xiàn)，手術(shù)對側(cè)肢體肌力、肌張力下降，前肢出現(xiàn)腕、肘屈曲及肩內(nèi)旋等偏癱樣改變。模型組有1只在2 h內(nèi)、3只在24 h內(nèi)死亡外，其余可見隨著時間延長大鼠的癥狀逐漸加重，其中24 h時有5只大鼠完全不能站立。電針  表1電針對腦缺血急性期大鼠腦組織MDA含量和SOD活性的

16、影響注:與正常組比較P0.05； 與模型組比較P0.05. 組除1只在3h死亡外，其余大鼠在24 h時大部分能夠伸展前肢，屈曲后肢，可以進行適量活動，反應(yīng)較好。Zea Longa法量化評分可見24 h時電針組分值明顯低于模型組（P0.05）；而模型組Zea Longa法量化分值由3 h的(3.50± 0.53)上升為24 h的(4.67±0.50)，說明功能缺損加重，統(tǒng)計學處理顯示有顯著差異（P0.05）。詳細結(jié)果見表2。表2神經(jīng)行為學障礙量化（Zea Longa法）計分表注：與模型組比較P0.05；同組前后比較P0.05.    2.3

17、60; 24 h Zea Longa法評分與腦組織MDA含量和SOD活性相關(guān)分析    相關(guān)分析顯示，腦梗死神經(jīng)功能評分與MDA含量呈負相關(guān),相關(guān)系數(shù)為-0.62；與SOD活性呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.67。相關(guān)系數(shù)檢驗均顯示有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。    3  討論    目前已有大量的資料證明腦梗死后,自由基所造成的脂質(zhì)過氧化是缺血性腦組織損傷的重要發(fā)病機制,氧自由基損傷可能是始動點3,4。本實驗中觀察到大鼠腦缺血后3h時MDA含量明顯增高,并持續(xù)上升,說明腦局灶性缺血形成后腦組織

18、的破壞呈進行性發(fā)展,與腦組織中的MDA含量成平行關(guān)系。SOD活力下降與MDA含量增多有關(guān)。    針刺是利用針灸刺激腧穴激發(fā)機體生理潛能，通過機體內(nèi)源性生理調(diào)節(jié)而防治疾病。本實驗取百會穴為主穴。針刺百會以培本扶正、宣陽通督、醒神開竅；內(nèi)關(guān)有養(yǎng)心安神、疏通氣血的功能；足三里有疏通經(jīng)絡(luò)、行氣活血的作用5。在試驗中我們觀察到電針組與模型組相比各階段MDA含量顯著降低,SOD活性升高，說明針灸具有內(nèi)源性調(diào)節(jié)作用。電針通過疏通經(jīng)絡(luò)、行氣活血的作用清除MDA生成，減少SOD的消耗，增強SOD的催化超氧陰離子自由基的歧化反應(yīng)，從而維持神經(jīng)細胞存活，減輕神經(jīng)功能的缺損。Zea Longa法量化評分顯示電針組大鼠的神經(jīng)功能缺損明顯好于模型組，其缺損程度與MDA含量呈負相關(guān)；與SOD活性呈正相關(guān)。降低氧自由基，減輕神經(jīng)功能缺損的程度是電針治療缺血性腦血管疾病的另一機理。參考文獻】  1 施新猷，王四旺，顧為望，等.比醫(yī)學M.西安：陜西科學技出版社,2005.582-5832 Zea Longa E,Weinstein Arlson .Reversible middle cerebral artery occlusion without cranie