SERS標(biāo)記的金納米棒探針用于免疫檢測

1、2009年第67卷化學(xué)學(xué)報(bào)V ol. 67, 2009第14期, 16031608 ACTA CHIMICA SINICA No. 14, 16031608 * E-mail: jwhuReceived March 2, 2009; revised April 5, 2009; accepted May 7, 2009.國家自然科學(xué)基金(Nos. 20603008, 20873037和湖南省自然科學(xué)基金(No. 06JJ3006資助項(xiàng)目.1604化學(xué)學(xué)報(bào)V ol. 67, 2009熒光譜峰較寬, 信號的選擇性相對較差; 若用熒光分子標(biāo)記, 還存在光解和光致褪色現(xiàn)象, 因而熒光標(biāo)記技術(shù)亦有其局限

2、性. 基于表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS的SERS 標(biāo)記技術(shù)是一種光譜標(biāo)記技術(shù), 始建立于20世紀(jì)80年代末8. 它利用金或銀等貴金屬納米顆粒來增強(qiáng)/放大表面吸附的拉曼活性分子的拉曼信號(即SERS, 以拉曼活性分子的SERS信號作為讀出示蹤信號. 近年來隨著納米科技的快速發(fā)展, SERS標(biāo)記技術(shù)已引起了國內(nèi)外科學(xué)家的廣泛關(guān)注9,10. 首先, 拉曼光譜具有高度的分子特征性, 且譜峰窄, 能減小不同分子間的譜峰重疊. 其次, 在多元檢測中一種波長的激發(fā)光就能激發(fā)出不同的拉曼活性分子的譜峰. 第三, SERS信號很少受光漂白的影響, 可在一定程度上為獲得較好的SERS信號而延長積分時間. 第四, S

3、ERS信號不象熒光分子那樣易發(fā)生自淬滅現(xiàn)象, 可通過增加拉曼活性分子數(shù)目來提高信號強(qiáng)度, 從而提高免疫檢測的靈敏度.目前, SERS免疫檢測呈現(xiàn)幾個基本的發(fā)展趨勢11. 第一, 如何解決SERS標(biāo)記免疫探針在固體基底上非特異性吸附造成的“假陽性”問題. SERS免疫檢測的基本方法是標(biāo)記抗體, 待測抗原和俘獲抗體之間形成“三明治”夾心結(jié)構(gòu). 理想情況下, 探針上的抗體通過抗體和抗原之間的特異性免疫反應(yīng)連接到俘獲抗體上. 除此以外的吸附為非特異性吸附, 由此造成假陽性和背景信號升高等. 通常可利用牛血清白蛋白來封閉固體基底上的空位以減少非特異性吸附. 第二, 實(shí)現(xiàn)從單組分到多組分檢測. Ni等12

4、最早嘗試了雙組分檢測. 國內(nèi)顧仁敖課題組13也成功地進(jìn)行了二組分檢測, 并初步進(jìn)行了三組分檢測的嘗試11. 第三, SERS探針的表面修飾. SERS 納米探針的表面修飾可以減少標(biāo)記分子從納米顆粒表面脫落, 提高信號的穩(wěn)定性, 并能有效減少探針的非特異性吸附問題. 除此以外, 探針還應(yīng)具備水溶性、抗團(tuán)聚和生物親和性的特點(diǎn). 目前, 表面修飾的發(fā)展趨勢是從第一代裸納米顆粒探針1215到第二代的SiO2修飾的探針10, 再到第三代高分子包覆的納米探針16. 我們在前期的工作中已明確: 可將膠體的空間穩(wěn)定理論作為設(shè)計(jì)制備各類納米探針的理論依據(jù)17, 即將生物親和性高分子吸附在納米顆粒/探針上, 以其

5、提供的空間穩(wěn)定來取代探針原來的電荷穩(wěn)定機(jī)制. 由于穩(wěn)定機(jī)制不同, 高分子穩(wěn)定的納米探針可以耐受高濃度鹽等苛性條件而不團(tuán)聚, 還可提供水溶性和生物親和性等諸多優(yōu)異的性能. 第四, 提高免疫檢測的靈敏度. 由前述SERS免疫檢測的基本方法可知, 提高免疫檢測靈敏度實(shí)際上就是要提高SERS信號強(qiáng)度. 因此通常選擇具有較大拉曼散射截面的分子作為標(biāo)記分子. 除此以外, 另一個方案是全面借鑒SERS領(lǐng)域的研究成果, 采用具有較強(qiáng)增強(qiáng)能力的納米顆粒來制備探針. 如Porter等18采用60 nm 的金顆粒來制備SERS免疫探針. Cao等19和徐等20,21則利用銀染色技術(shù)來提高SERS信號. Cui等22

6、采用表面具有孔洞的銀核金殼顆納米粒子來制備探針. Ji等23則采用金核銀殼納米顆粒來制備探針, 可通過改變Au/Ag 核與殼的厚度從而獲得強(qiáng)的SERS信號. Sanles-Sobrido 等24采用顆粒聚集體來制備探針.金納米棒有著獨(dú)特的光學(xué)性質(zhì), 并且在醫(yī)學(xué)、傳感和化學(xué)分離等方面有很好的應(yīng)用前景, 近年來已成為人們研究的熱點(diǎn)25. 金納米棒有兩個等離子體共振(SPR吸收帶: 橫向SPR吸收峰和縱向SPR吸收峰, 其中縱向等離子體吸收峰的位置可以隨其長徑比的增大而逐漸紅移25. 金納米棒SPR的這種可調(diào)性使其能作為很好的SERS基底. 因?yàn)榘凑誗ERS的電磁場增強(qiáng)機(jī)制, 當(dāng)激發(fā)光和SPR共振時

7、, 可以最大程度提高單個納米顆粒的增強(qiáng)能力26. 我們最近的實(shí)驗(yàn)和理論計(jì)算也證實(shí): 當(dāng)金納米棒縱向SPR與632.8 nm的激發(fā)光耦合時, 其增強(qiáng)能力確實(shí)比耦合程度小或沒有耦合時強(qiáng)27. 因而, 我們制備了長徑比為2.5的金納米棒, 使其縱向SPR和632.8 nm的激發(fā)光耦合. 并以此金納米棒來制備SERS納米探針, 進(jìn)行SERS免疫檢測研究.1 實(shí)驗(yàn)部分1.1 實(shí)驗(yàn)試劑氯金酸、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB、硼氫化鈉、硝酸銀、抗壞血酸(AA均為分析純, 購自上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司. N,N'-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC為分析純, 購自上海共價(jià)化學(xué)科技有限公司. 對巰基苯甲酸(M

8、BA、3,3'-二硫代二丙酸(99%、N-羥基丁二酰亞胺(NHS購自Aldrich公司. 羊抗鼠IgG、小鼠IgG、牛血清蛋白(BSA, PBS緩沖液(pH=7.2購自北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司. -甲氧基-巰基聚乙二醇(mPEG-SH, M W=5000由北京建凱科技有限公司特定合成. 四氫呋喃(THF、丙酮、正己烷購自天津大茂化學(xué)試劑有限公司. 玻璃鍍金基底由中國科學(xué)院安徽光學(xué)精密機(jī)械研究所提供. 先在清洗干凈的玻璃片基底上真空鍍上Ni-Cr層, 其上再鍍上金. 實(shí)驗(yàn)用水為Mini-Q超純水, 電阻率大于18.0 Mcm-1.1.2 3,3'-二硫代二丙酸丁二酰亞胺酯(D

9、SP的制備0.4836 g 3,3'-二硫代二丙酸(2.3 mmol溶于50 mL THF中, 向其中加入0.575 g (5 mmol NHS, 在0 下再加入1.03 g DCC (5 mmol, 在冰浴條件下攪拌反應(yīng)36 h. 過濾除去副產(chǎn)物N,N'-二環(huán)己基脲(DCU, 將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去THF. 用丙酮/正己烷重結(jié)晶兩次后得到白色固N(yùn)o. 14 郭紅燕等:SERS標(biāo)記的金納米棒探針用于免疫檢測1605體DSP.1.3 金納米棒的制備實(shí)驗(yàn)所用的金納米棒溶膠采用種子生長法合成28. 第一步種子的制備: 向7.5 mL 0.05 molL-1 CTAB中加入0.12 mL

10、2.037×10-2 molL-1 HAuCl4溶液, 輕輕搖勻. 迅速向其中加入0.6 mL 0.01 molL-1冰浴冷卻的NaBH4溶液, 劇烈振蕩 2 min. 然后將制得的金納米種子在40 的水浴中靜置老化2 h后使用. 第二步金納米棒的生長: 向30 mL 0.05 molL-1 CTAB中加入40 L 0.01 molL-1的AgNO3溶液, 振蕩1 min. 再向其中加入0.74 mL 2.037×10-2 molL-1的HAuCl4溶液, 輕輕搖勻. 然后再迅速加入0.24 mL 0.1 molL-1的AA溶液, 劇烈振蕩至溶液變?yōu)闊o色. 最后加入0.3

11、mL上述金種子, 輕輕振蕩2 min后, 靜置3 h, 讓金種子生長成金納米棒. 離心(10000 rmin-1, 12 min洗滌金納米棒兩次后, 將純化后的金納米棒分散在超純水中備用.1.4 免疫金納米棒探針的制備向以上合成的1 mL 金納米棒溶膠中加入10 L 1.0×10-3 molL-1 MBA, 反應(yīng)4 h, 讓拉曼活性分子MBA 充分吸附到金納米棒上. 在這一步中要仔細(xì)控制加入MBA的量, 使之只部分占據(jù)金納米棒表面(約占據(jù)1/2, 為后續(xù)抗體吸附預(yù)留足夠的空位. 然后向吸附MBA分子的金納米棒溶膠中加入過量羊抗鼠IgG(2 mgmL-1, 分散于0.01 molL-1

12、, pH=7.2的PBS緩沖溶液中, 室溫下反應(yīng)1 h. 再向其中加入6 L 3.425×10-4 molL-1的mPEG-SH 來封閉金納米棒表面剩余空位. 為防止游離的MBA、羊抗鼠IgG和mPEG-SH的干擾, 將制備好的免疫金納米棒探針從溶液中離心分離出來, 再重新分散在超純水中備用.1.5 SERS標(biāo)記抗體-待測抗原-俘獲抗體“三明治”結(jié)構(gòu)的組裝玻璃鍍金基底在使用前依次在超純水、乙醇、丙酮、氯仿、丙酮、乙醇和超純水中超聲洗滌5 min, 烘干后放入1×10-4 molL-1的DSP乙醇溶液中, 室溫下浸泡12 h. 用乙醇洗去基底表面未吸附的DSP后, 氮?dú)獯蹈?

13、 將DSP修飾的鍍金片放入0.05 mgmL-1羊抗鼠IgG PBS緩沖溶液中, 于4 下放置12 h. 用PBS緩沖液沖洗基底, 除去未吸附的抗體. 再將其浸入2%的BSA溶液中, 4 下放置1 h, 封閉表面剩余空位, 以減少非特異性吸附. 用大量PBS緩沖液清洗基片, 然后保存在4 下的PBS緩沖溶液中.將基片氮?dú)獯蹈珊蠓旁?00 L不同濃度的小鼠IgG PBS緩沖溶液(0.01 molL-1, pH=7.2中振蕩24 h. 取出后先用大量的PBS緩沖溶液充分沖洗基底, 再用超純水沖洗, 并用氮?dú)獯蹈? 將小鼠IgG修飾的基底浸入標(biāo)記免疫金納米棒溶膠中, 室溫下放置 6 h. 取出基底,

14、 用超純水充分沖洗后用氮?dú)獯蹈? 形成“三明治”夾心結(jié)構(gòu)備用.1.6 測試儀器金納米棒粒子的形貌表征在JEM-1230型(JEOL公司透射電鏡(TEM上進(jìn)行. 紫外-可見光譜在UV2300型(上海天美科學(xué)儀器有限公司光譜儀上進(jìn)行. 基底表面形貌在JSM-6700F 掃描電子顯微鏡(SEM上進(jìn)行. 水力半徑在Zetasizer 3000HS型(英國Malvern公司Zeta 電位粒度儀上測定. SERS光譜在共焦顯微拉曼光譜儀LabRAM HR(法國Jobin Yvon公司上進(jìn)行. 激發(fā)波長為632.8 nm, 所有光譜均為一次10 s積分時間采集.2 結(jié)果與討論2.1 免疫金納米棒探針的制備和

15、表征圖1a為按種子生長法28合成的金納米粒子的TEM 圖. 由圖可見, 除少數(shù)近似為球形的粒子難以從溶膠中離心分離以外, 絕大多數(shù)金納米粒子為棒狀. 統(tǒng)計(jì)約150 個納米棒, 計(jì)算出其平均長徑比(棒長軸與短軸之比約為2.5. 通過電感耦合等離子體(ICP可以測出金納米棒溶膠中金元素的含量. 再根據(jù)TEM圖, 把納米棒看成一個兩端分別為半球狀的圓柱體. 從而計(jì)算出溶液中金納米棒的粒子數(shù)密度為 1.12×1012個/mL. 單個標(biāo)記分子MBA所占據(jù)的面積約為20 Å229. 據(jù)此可估算出所需加入MBA的量, 使其約占據(jù)金納米棒表面積的1/2, 以便留出足夠的空位來吸附抗體. 圖

16、1b為依次吸附MBA和抗體后的金納米棒的TEM圖, 和圖1a相比, 金納米棒之間的距離增大, 溶膠的分散性有了明顯改善. 這是由于大分子蛋白質(zhì)體積較大, 當(dāng)它通過靜電/化學(xué)鍵吸附到金納米棒上時, 可能會通過空間位阻阻礙棒與棒之間進(jìn)一步接近. 圖1c為依次吸附MBA和抗體, 表面空位再用mPEG-SH封閉后的金納米棒探針的形態(tài). 由圖可看出其分散性有了進(jìn)一步改善. 在制備探針時, 通常也是采用BSA來封閉探針顆粒表面的空位, 以減少探針與固體基底表面的非特異性吸附18. 由于PEG 鏈節(jié)是不帶電的中性基團(tuán), 對蛋白有很強(qiáng)的抗吸附能力30. 如Kim等31將PEG接枝到生物素修飾的聚賴氨酸上, 有

17、效抑制了聚賴氨酸對蛋白的非特異性作用. 其次, mPEG-SH比BSA體積小, 能更有效地封閉空位. 故我們采用mPEG-SH來封閉空位, 以降低探針的非特異性吸附. mPEG-SH以巰基基團(tuán)吸附到金納米顆粒表面, 其直鏈PEG鏈節(jié)則向外伸展到溶液中. 顯然, 如果PEG鏈的長度比探針上吸附的抗體的直徑大, 則會干擾1606化 學(xué) 學(xué) 報(bào) V ol. 67, 2009 抗體與待測抗原的結(jié)合. 為此, 我們采用mPEG-SH 和抗體分別單獨(dú)修飾70 nm 金溶膠, 并測量其水力半徑. 結(jié)果顯示PEG 修飾的金納米粒子水力半徑增大了約9 nm, 而抗體修飾的金納米粒子則增大了50200 nm 以上

18、. 說明用mPEG-SH 封閉空位不會干擾探針上的抗體與溶液中待測抗原的結(jié)合.圖1 純態(tài)金納米棒(a、MBA 和羊抗鼠IgG 修飾的金納米棒(b和MBA, 羊抗鼠IgG 和mPEG-SH 修飾的金納米棒(c的TEM 圖Figure 1 TEM images of pure gold nanorods (a, MBA and goat anti-mouse IgG modified gold nanorods (b, and MBA, goat anti-mouse IgG, and mPEG-SH modified gold nanorods (c由于SERS 免疫檢測的基本方法是將SERS

19、免疫探針與俘獲抗體通過待測抗原組裝成“三明治”式的夾心結(jié)構(gòu), 探針SERS 信號的強(qiáng)弱反映待測抗原濃度的高低. 因而, 探針在制備過程中和在“三明治”夾心結(jié)構(gòu)中應(yīng)保持分散態(tài), 避免團(tuán)聚. 如果探針納米顆粒團(tuán)聚, 則探針之間的耦合會進(jìn)一步提高SERS 信號強(qiáng)度26, 造成“假陽性”, 即待測抗原濃度出現(xiàn)正偏差.我們利用紫外-可見吸收光譜來監(jiān)測探針制備過程.圖2曲線a 為純態(tài)金納米棒溶膠的紫外-可見吸收光譜. 金納米棒的紫外-可見吸收譜有兩個SPR 共振吸收帶: 位于低波數(shù)段的橫向SPR 吸收峰和位于長波數(shù)處的縱向SPR 吸收峰25. 通過增大長徑比, 可將金納米棒縱向SPR 峰位置從可見光區(qū)調(diào)至

20、近紅外光區(qū). 我們在以前的工作中證實(shí): 縱向SPR 與632.8 nm 的激發(fā)光耦合程度越大, SERS 信號越強(qiáng)27. 本實(shí)驗(yàn)中就選用長徑比為2.5的金納米棒, 通過其SPR 和拉曼光譜儀632.8 nm 的激光耦合來提高SERS 信號. 圖2b, 2c 和2d 顯示, 金納米棒上依次吸附MBA 、抗體和mPEG-SH 后, 其縱向峰SPR 峰位置稍紅移. 但在長波數(shù)方向沒有出現(xiàn)新的聚集體的吸收峰, 說明無團(tuán)聚現(xiàn)象. 圖2e 是離心清洗后的免疫探針(除去未吸附的雜質(zhì)的紫外-可見光譜. 離心后棄去上層清液會損失一部分金納米棒, 導(dǎo)致縱向SPR 吸收峰的強(qiáng)度降低. 同時縱向和橫向SPR 吸收峰強(qiáng)

21、度的比例比離心前有所下降, 其原因尚不清楚. 若免疫探針發(fā)生團(tuán)聚, 則在縱向SPR 長波數(shù)方向出現(xiàn)明顯的新吸收峰, 因而從圖2e 可判斷免疫探針沒有團(tuán)聚. 我們在實(shí)驗(yàn)中仔細(xì)控制探針的制備條件, 并采用紫外-可見光譜監(jiān)測, 選用非團(tuán)聚的探針用于后面的免疫檢測.圖2 純態(tài)金納米棒(a, MBA 修飾的金納米棒(b, MBA 和羊抗鼠IgG 修飾的金納米棒(c, MBA, 羊抗鼠IgG 和mPEG-SH 修飾的金納米棒(d和(d中的金納米棒經(jīng)離心清洗后重新分散在超純水中(e的紫外-可見光譜Figure 2 UV-vis spectra of pure gold nanorods (a, MBA mo

22、dified gold nanorods (b, MBA and goat anti-mouse IgG modified gold nanorods (c, MBA, goat anti-mouse IgG, and mPEG-SH modified gold nanorods (d and the gold nanorods that were centrifugation-purified from (d and then redispersed in ultrapure water (e2.2 “三明治”結(jié)構(gòu)的表面狀態(tài)表征和SERS 免疫檢測我們采用DSP 來修飾鍍金基底. 它通過二硫

23、鍵斷裂, 形成Au-S 鍵組裝在金基底上. 其活性酯鍵則可以和抗體上的NH 2反應(yīng), 從而將抗體組裝在金基底上. 用No. 14 郭紅燕等:SERS標(biāo)記的金納米棒探針用于免疫檢測1607DSP處理的基底有利于抗體在基底表面的直立排列, 從而更好地捕捉待測抗原. 圖3a是抗體修飾后的金基底, 圖中插圖是未經(jīng)任何修飾的空白基底. 圖3b是俘獲抗 圖3 DSP-抗體修飾的金基底(圖中插圖是空白的金基底(a, DSP-抗體-抗原修飾的基底(b, 抗原濃度為1×10-4 mgmL-1時“三明治”結(jié)構(gòu)(圖中插圖是抗原濃度為0時的情況 (c和抗原濃度為1×10 mgmL-1時“三明治”結(jié)

24、構(gòu)的SEM圖(d Figure 3 SEM images of (a DSP-goat anti-mouse IgG modified gold substrate (the inset is the SEM image of bare Au substrate without any modification, (b DSP-goat anti-mouse IgG-mouse IgG modified gold substrate, (c sandwich structure assembled at mouse IgG concentration of 1×10-4 mgmL-1

25、 (the inset shows the SEM image for the case without addition of mouse IgG, and (d sandwich structure assembled at mouse IgG concentration of 1×10 mgmL-1體(即修飾在金基底上的抗體和抗原反應(yīng)后基底的SEM圖. 由圖可見, 抗原在金基底上呈島狀分布. 圖3c 和3d 是經(jīng)免疫反應(yīng)組裝出的“三明治”夾心結(jié)構(gòu)的SEM 圖. 當(dāng)無抗原時, 金基底上幾乎看不到金納米棒探針(圖3c中插圖, 說明非特異性吸附不明顯. 隨著抗原濃度的增加, 金基底上

26、開始出現(xiàn)金納米棒探針(圖3c. 在高濃度抗原條件下, 探針在基底上的數(shù)目較多, 分布比較均勻、分散, 較大程度上減少了棒與棒之間的聚集/耦合(圖3d.圖4是鍍金基底上組裝的SERS標(biāo)記抗體-待測抗原-俘獲抗體“三明治”夾心結(jié)構(gòu)的SERS光譜圖. 實(shí)驗(yàn)中采用一系列不同濃度的待測抗原來組裝“三明治”夾心結(jié)構(gòu). 從圖中可看出, 隨著抗原濃度的增大, MBA的SERS信號逐漸增強(qiáng). 因而, SERS信號變化說明抗原-抗體的結(jié)合屬于特異性吸附. 與SEM觀察一致, 當(dāng)抗原濃度為0, 圖中的SERS信號很弱. 說明用mPEG-SH封閉探針表面剩余空位, 確實(shí)可以有效抑制非特異性吸附. 在同樣的實(shí)驗(yàn)條件下,

27、 當(dāng)用BSA封閉空位的探針做檢測時, 其非特異性吸附要強(qiáng)一些. 這可能是由于BSA表面有大量的官能團(tuán)可與基底作用. 圖5是SERS峰1073 cm-1的積分面積與抗原濃度的關(guān)系圖. 由圖可見, 能檢出的抗原濃度范圍高于1×10-8 mgmL-1 .圖4 不同濃度小鼠IgG組裝出的“三明治”結(jié)構(gòu)的SERS光譜Figure 4SERS spectra of the sandwich structures assembled at varying mouse IgG concentrations3 結(jié)論我們以具有較大拉曼散射截面的對巰基苯甲酸作為SERS標(biāo)記分子, 以金納米棒來制備免疫探針

28、, 制得了SERS標(biāo)記抗體-待測抗原-俘獲抗體的“三明治”夾1608 化 學(xué) 學(xué) 報(bào) 13 Vol. 67, 2009 Ge, M.; Yao, J.-L.; Cui, Y.; Jiang, Y.; Gu, R.-A. Chem. J. Chin. Univ. 2007, 28(8, 1464 (in Chinese. (葛明, 姚建林, 崔顏, 蔣蕓, 顧仁敖, 高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué) 報(bào), 2007, 28(8, 1464. Li, S.-J.; Gu, R.-A. Acta Chim. Sinica 2004, 62(20, 2118 (in Chinese. (李淑瑾, 顧仁敖, 化學(xué)學(xué)報(bào),

29、2004, 62(20, 2118. Wang, L.-Y.; Ji, X.-H.; Yuan, H.; Ma, L.; Kong, X.-G.; Liu, Y.-C.; Yang, W.-S.; Bai, Y.-B.; Li, T.-J. Acta Chim. Sinica 2002, 60(12, 2115 (in Chinese. (王連英, 紀(jì)小會, 袁航, 馬嵐, 孔祥貴, 劉益春, 楊文勝, 白玉白, 李鐵津, 化學(xué)學(xué)報(bào), 2002, 60(12, 2115. Qian, X.; Peng, X.-H.; Ansari1, D. O.; Yin-Goen, Q.; Chen, G.

30、 Z.; Shin, D. M.; Yang, L.; Young, A. N.; Wang, M. D.; Nie, S. Nat. Biotechnol. 2008, 26, 83. Wu, C.; Guo, H.-Y.; Hu, J.-W. Acta Chim. Sinica 2009, 67, 1621 (in Chinese. (吳超, 郭紅燕, 胡家文, 化學(xué)學(xué)報(bào), 2009, 67, 1621. Driskell, J. D.; Kwarta, K. M.; Lipert, R. J.; Porter, M. D.; Neill, J. D.; Ridpath, J. F. An

31、al. Chem. 2005, 77, 6147. Cao, Y. C.; Jin, R.; Nam, J.-M.; Thaxton, C. S.; Mirkin, C. A. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 14676. Xu, S.; Ji, X.; Xu, W.; Li, X.; Wang, L.; Bai, Y.; Zhao, B. Ozaki, Y. Analyst 2004, 129, 63. Xu, S.-P.; Wang, L.-Y.; Xu, W.-Q.; Zhao, B.; Yuan, H.; Ma, L.; Bai, Y.-B.; Fan, Y.

32、-G. Chem. J. Chin. Univ. 2003, 24(5, 900 (in Chinese. (徐抒平, 王連英, 徐蔚青, 趙冰, 袁航, 馬嵐, 白玉白, 樊玉國, 高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào), 2003, 24(5, 900. Cui, Y.; Ren, B.; Yao, J.-L.; Gu, R.-A.; Tian, Z.-Q. J. Phys. Chem. B 2006, 110, 4002. Ji, X.; Xu, S.; Wang, L.; Liu, M.; Pan, K.; Yuang, H.; Ma, L.; Xu, W.; Li, J.; Bai, Y.; Li, T.

33、 Colloids Surf., A 2005, 257258, 171. Sanles-Sobrido, M.; Exner, W.; Rodríguez-Lorenzo, L.; Rodríguez-González, B.; Correa-Duarte, M. A.; ÁlvarezPuebla, R. A.; Liz-Marzán, L. M. J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 2699. Pérez-Juste, J.; Pastoriza-Santos, I.; Liz-Marzán, L

34、. M.; Mulvaney, P. Coord. Chem. Rev. 2005, 249, 1870. Xu, H.; Käll, M. Top. Appl. Phys. 2006, 103, 87. Guo, H.; Ruan, F.; Lu, L.; Hu, J.; Pan, J.; Yang, Z.; Ren, B. J. Phys. Chem. C 2009, 113, 10459. Nikoobakht, B.; El-Sayed, M. A. Chem. Mater. 2003, 15, 1957. Chang, S.-C.; Chao, I.; Tao, Y.-T.

35、 J. Am. Chem. Soc. 1994, 116, 6792. Castner, D. G.; Ratner, B. D. Surf. Sci. 2002, 500, 28. Kim, K.; Park, H. K.; Kim, N. H. Langmuir 2006, 22, 3421. (A0903022 Zhao, C. 14 15 16 圖 5 SERS 信號強(qiáng)度與抗原濃度的關(guān)系圖 Figure 5 Integrated SERS intensity of the peak at 1073 cm1 as a function of mouse IgG concentration 17 心結(jié)構(gòu). 通過金納米棒的 SPR 和激發(fā)光的