受體的放射分析核醫(yī)學(xué)與核藥學(xué)教學(xué)學(xué)習(xí)課件

1、 第七章第七章 受體的放射分析受體的放射分析 1. 1. 概概 論論 受體受體: :細(xì)胞表面或亞細(xì)胞組分中的一種分子，可細(xì)胞表面或亞細(xì)胞組分中的一種分子，可以識別并特異地與有生物活性的化學(xué)信號物質(zhì)（配以識別并特異地與有生物活性的化學(xué)信號物質(zhì)（配基）結(jié)合，從而激活或啟動一系列生化反應(yīng)，最后基）結(jié)合，從而激活或啟動一系列生化反應(yīng)，最后導(dǎo)致該信號物質(zhì)特定的生物效應(yīng)。迄今為止，所有導(dǎo)致該信號物質(zhì)特定的生物效應(yīng)。迄今為止，所有已發(fā)現(xiàn)的受體都是具有特定氨基酸序列和特定構(gòu)型已發(fā)現(xiàn)的受體都是具有特定氨基酸序列和特定構(gòu)型的蛋白質(zhì)。每一種受體在細(xì)胞上都有特定的宏觀分的蛋白質(zhì)。每一種受體在細(xì)胞上都有特定的宏觀分布和

2、微觀分布。布和微觀分布。 一、受體功能 （1 1）識別特異的信號物質(zhì)）識別特異的信號物質(zhì)-配基，識別配基，識別的表現(xiàn)在于兩者的特異結(jié)合。的表現(xiàn)在于兩者的特異結(jié)合。 （2 2）把識別和接受的信號準(zhǔn)確無誤的放）把識別和接受的信號準(zhǔn)確無誤的放大并傳遞到細(xì)胞內(nèi)部，同時啟動一系列大并傳遞到細(xì)胞內(nèi)部，同時啟動一系列胞內(nèi)生化反應(yīng)，最后導(dǎo)致特定的細(xì)胞反胞內(nèi)生化反應(yīng)，最后導(dǎo)致特定的細(xì)胞反應(yīng)，應(yīng)， 使得胞間信號轉(zhuǎn)換為胞內(nèi)信號。使得胞間信號轉(zhuǎn)換為胞內(nèi)信號。二、受體的分類:1 1、膜受體、膜受體 跨膜跨膜 2 2、核受體、核受體 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi) 受體的亞型：受體的亞型：指受體分子結(jié)構(gòu)上既有部分相同之指受體分子結(jié)構(gòu)上既有

3、部分相同之處，也存在部分差別，它們對一定的配基有不同處，也存在部分差別，它們對一定的配基有不同的親和力，在生物學(xué)上具有各自不同的效應(yīng)。受的親和力，在生物學(xué)上具有各自不同的效應(yīng)。受體亞型的區(qū)分是生物進(jìn)化的結(jié)果，有利于機(jī)體處體亞型的區(qū)分是生物進(jìn)化的結(jié)果，有利于機(jī)體處理信息的能力及適應(yīng)性更強(qiáng)。理信息的能力及適應(yīng)性更強(qiáng)。 受體數(shù)量：受體數(shù)量：占細(xì)胞蛋白總量十萬之一到百萬分之占細(xì)胞蛋白總量十萬之一到百萬分之一（一個細(xì)胞上僅有數(shù)千個受體分子），一般方一（一個細(xì)胞上僅有數(shù)千個受體分子），一般方法難以分離和測定受體分子。法難以分離和測定受體分子。 配體：配體：是指能和受體結(jié)合并引起相關(guān)是指能和受體結(jié)合并引起相

4、關(guān)效應(yīng)的化合物。除了與受體結(jié)合外本效應(yīng)的化合物。除了與受體結(jié)合外本身并無其他功能，它不能參加代謝產(chǎn)身并無其他功能，它不能參加代謝產(chǎn)生有用產(chǎn)物，也不直接誘導(dǎo)任何細(xì)胞生有用產(chǎn)物，也不直接誘導(dǎo)任何細(xì)胞活性，更無酶的特點，它唯一的功能活性，更無酶的特點，它唯一的功能就是通知細(xì)胞在環(huán)境中存在一種特殊就是通知細(xì)胞在環(huán)境中存在一種特殊信號或刺激因素。信號或刺激因素。 配體與受體的結(jié)合是一種分子識別過程，它靠配體與受體的結(jié)合是一種分子識別過程，它靠氫鍵、離子鍵與范德華力的作用，隨著兩種分子空氫鍵、離子鍵與范德華力的作用，隨著兩種分子空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)程度增加，相互作用基團(tuán)之間距離就會間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)程度增加，相互作用基團(tuán)

5、之間距離就會縮短，作用力就會大大增加，因此分子空間結(jié)構(gòu)的縮短，作用力就會大大增加，因此分子空間結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性是特異結(jié)合的主要因素?；パa(bǔ)性是特異結(jié)合的主要因素。 同一配體可能有兩種或兩種以上的不同受體，同一配體可能有兩種或兩種以上的不同受體，例如乙酰膽堿有煙堿型和毒蕈型兩種受體，同一配例如乙酰膽堿有煙堿型和毒蕈型兩種受體，同一配體與不同類型受體結(jié)合會產(chǎn)生不同的細(xì)胞反應(yīng)。如體與不同類型受體結(jié)合會產(chǎn)生不同的細(xì)胞反應(yīng)。如 AchAch可以使骨骼肌興奮，但對心肌則是抑制的。配基可以使骨骼肌興奮，但對心肌則是抑制的。配基可以是神經(jīng)遞質(zhì)、激素、某些藥物等?？梢允巧窠?jīng)遞質(zhì)、激素、某些藥物等。 三、跨膜受體的信號

6、傳遞通路 跨膜受體是含糖或不含糖的蛋白質(zhì)分跨膜受體是含糖或不含糖的蛋白質(zhì)分子，它的主要作用是將細(xì)胞外的信號傳導(dǎo)子，它的主要作用是將細(xì)胞外的信號傳導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi)，信號再從細(xì)胞漿傳遞到效應(yīng)器到細(xì)胞內(nèi)，信號再從細(xì)胞漿傳遞到效應(yīng)器，最后是一個特定的生物學(xué)效應(yīng)。信號的，最后是一個特定的生物學(xué)效應(yīng)。信號的這種傳導(dǎo)過程稱為信號傳導(dǎo)通路（這種傳導(dǎo)過程稱為信號傳導(dǎo)通路（signal signal transudation pathwaytransudation pathway），它是當(dāng)今生物），它是當(dāng)今生物學(xué)領(lǐng)域中一個重大的研究課題。學(xué)領(lǐng)域中一個重大的研究課題。四、受體與配基結(jié)合的特性 1 1、可飽和性（、可飽和性

7、（satiabilitysatiability）：）：受體結(jié)合反應(yīng)呈高受體結(jié)合反應(yīng)呈高親和性和低容量，而非特異結(jié)合則呈低親和性和高容親和性和低容量，而非特異結(jié)合則呈低親和性和高容量，后者的劑量反應(yīng)曲線不呈可飽和性。量，后者的劑量反應(yīng)曲線不呈可飽和性。2 2、可逆性（、可逆性（reversibilityreversibility）：）：激素、遞質(zhì)和藥物激素、遞質(zhì)和藥物與特異性受體結(jié)合反應(yīng)是可逆的，當(dāng)受體周圍的配基與特異性受體結(jié)合反應(yīng)是可逆的，當(dāng)受體周圍的配基濃度降低，結(jié)合反應(yīng)就逆向進(jìn)行，即配基受體復(fù)合物濃度降低，結(jié)合反應(yīng)就逆向進(jìn)行，即配基受體復(fù)合物很快解離，解離后的配基是原形，不起代謝變化，這很

8、快解離，解離后的配基是原形，不起代謝變化，這跟酶與底物作用結(jié)果不同，底物經(jīng)酶作用后變成代謝跟酶與底物作用結(jié)果不同，底物經(jīng)酶作用后變成代謝產(chǎn)物。產(chǎn)物。 3 3、特異性和親和性、特異性和親和性 受體具有特異識別配基的性能，因此只有嚴(yán)格受體具有特異識別配基的性能，因此只有嚴(yán)格構(gòu)型和構(gòu)象的配基分子才能選擇性地與受體結(jié)合。構(gòu)型和構(gòu)象的配基分子才能選擇性地與受體結(jié)合。受體的特異性還表現(xiàn)在器官或組織（靶器官）的專受體的特異性還表現(xiàn)在器官或組織（靶器官）的專一性上，如雌激素對子宮、陰道、乳腺等器官有興一性上，如雌激素對子宮、陰道、乳腺等器官有興奮作用，這是因為這些器官上雌激素受體的數(shù)量明奮作用，這是因為這些器

9、官上雌激素受體的數(shù)量明顯高于非靶器官。受體的親和性是指受體和配基的顯高于非靶器官。受體的親和性是指受體和配基的結(jié)合能力，受體親和性高就說明受體和配基結(jié)合的結(jié)合能力，受體親和性高就說明受體和配基結(jié)合的牢固，不容易解離。牢固，不容易解離。4 4、與效應(yīng)的一致性、與效應(yīng)的一致性 受體的主要功能是介導(dǎo)配基的生物效應(yīng)，如果一種受體的主要功能是介導(dǎo)配基的生物效應(yīng)，如果一種蛋白能與某種物質(zhì)結(jié)合而不介導(dǎo)特定的生物效應(yīng)，那蛋白能與某種物質(zhì)結(jié)合而不介導(dǎo)特定的生物效應(yīng)，那么這種蛋白不能稱之為受體。所以用生物效應(yīng)作為觀么這種蛋白不能稱之為受體。所以用生物效應(yīng)作為觀察受體和配基性質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)是十分必要的。從配基的角察受體和

10、配基性質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)是十分必要的。從配基的角度分析，有的是陽性效應(yīng)，有的是陰性效應(yīng)。陽性效度分析，有的是陽性效應(yīng)，有的是陰性效應(yīng)。陽性效應(yīng)就是配基與受體結(jié)合后引起陽性生理效應(yīng)，稱為應(yīng)就是配基與受體結(jié)合后引起陽性生理效應(yīng)，稱為激激動劑動劑。陰性效應(yīng)就是配基與受體結(jié)合后不但不引起陽。陰性效應(yīng)就是配基與受體結(jié)合后不但不引起陽性生理效應(yīng)，而且阻斷內(nèi)源性配基的陽性生理作用，性生理效應(yīng)，而且阻斷內(nèi)源性配基的陽性生理作用，稱為稱為拮抗劑或阻斷劑拮抗劑或阻斷劑。 五、受體的生理調(diào)節(jié) 正常生理狀態(tài)下的受體處在一個不斷合成與降正常生理狀態(tài)下的受體處在一個不斷合成與降解的動態(tài)平衡中，但其數(shù)量和親和性也會因疾病、解的動態(tài)平

11、衡中，但其數(shù)量和親和性也會因疾病、藥物作用而發(fā)生變化。藥物作用而發(fā)生變化。1、向下調(diào)節(jié)（、向下調(diào)節(jié)（down-regulation） 細(xì)胞所處環(huán)境中某種激動劑的濃度增高或長期細(xì)胞所處環(huán)境中某種激動劑的濃度增高或長期作用，其結(jié)果使相應(yīng)受體的數(shù)量減少，并出現(xiàn)受體作用，其結(jié)果使相應(yīng)受體的數(shù)量減少，并出現(xiàn)受體對此物質(zhì)的敏感性下降，或耐受性增高等現(xiàn)象，如對此物質(zhì)的敏感性下降，或耐受性增高等現(xiàn)象，如哮喘病人長期服用哮喘病人長期服用-激動劑產(chǎn)生的耐受性增高，激動劑產(chǎn)生的耐受性增高，即藥效減弱。即藥效減弱。 2、向上調(diào)節(jié)（、向上調(diào)節(jié)（up-regulation） 細(xì)胞所處環(huán)境中某種拮抗劑的濃度過高或長期細(xì)胞所

12、處環(huán)境中某種拮抗劑的濃度過高或長期作用，結(jié)果會使受體數(shù)量增高，出現(xiàn)受體敏感性增作用，結(jié)果會使受體數(shù)量增高，出現(xiàn)受體敏感性增高，表現(xiàn)為增敏，或撤藥后反跳現(xiàn)象。如高血壓病高，表現(xiàn)為增敏，或撤藥后反跳現(xiàn)象。如高血壓病人長期服用心得安時對兒茶酚胺增敏，若突然停藥人長期服用心得安時對兒茶酚胺增敏，若突然停藥，可出現(xiàn)血壓升高的反跳現(xiàn)象。由于受體在整體條，可出現(xiàn)血壓升高的反跳現(xiàn)象。由于受體在整體條件下，隨機(jī)體狀態(tài)變化，會出現(xiàn)生理調(diào)節(jié)，因此對件下，隨機(jī)體狀態(tài)變化，會出現(xiàn)生理調(diào)節(jié)，因此對受體數(shù)量和親和性測定就成為研究病理變化和評價受體數(shù)量和親和性測定就成為研究病理變化和評價藥效的重要內(nèi)容。藥效的重要內(nèi)容。 六、

13、受體與疾病 遺傳缺陷與免疫異常為受體性疾病的常見原因遺傳缺陷與免疫異常為受體性疾病的常見原因 1 1、基因突變致使受體異常，引發(fā)功能障礙，基因突變致使受體異常，引發(fā)功能障礙，絕大多數(shù)是功能降絕大多數(shù)是功能降低或完全喪失，有家族史，病情嚴(yán)重。如睪酮受體基因突變致該低或完全喪失，有家族史，病情嚴(yán)重。如睪酮受體基因突變致該受體缺陷引起睪丸完全雌性化病。受體缺陷引起睪丸完全雌性化病。 2 2、機(jī)體對受體產(chǎn)生自身抗體，機(jī)體對受體產(chǎn)生自身抗體，激動（如激動（如GravesGraves綜合癥患者產(chǎn)生綜合癥患者產(chǎn)生TSHTSH受體抗體，直接持續(xù)激動甲狀腺受體抗體，直接持續(xù)激動甲狀腺TSHTSH受體）或阻斷（如

14、重癥肌受體）或阻斷（如重癥肌無力患者產(chǎn)生無力患者產(chǎn)生N-AchN-Ach受體抗體，占領(lǐng)但不記得受體）受體。受體抗體，占領(lǐng)但不記得受體）受體。 3 3、某些病有受體異常，非原始發(fā)病環(huán)節(jié)，為發(fā)病重要環(huán)節(jié)，采某些病有受體異常，非原始發(fā)病環(huán)節(jié)，為發(fā)病重要環(huán)節(jié)，采取針對措施可控制病情。取針對措施可控制病情。甲亢用甲亢用腎上腺素阻斷劑，哮喘用腎上腺素阻斷劑，哮喘用腎腎上腺素激動劑。上腺素激動劑。 4 4、受體與腫瘤受體與腫瘤：激素受體在腫瘤中存在與否決定治療方案（乳：激素受體在腫瘤中存在與否決定治療方案（乳腺癌腺癌 白血?。?；某些受體基因可突變成為癌基因，引發(fā)腫瘤。白血病）；某些受體基因可突變成為癌基因，

15、引發(fā)腫瘤。2.2.受體配基結(jié)合反應(yīng)的基本原理受體配基結(jié)合反應(yīng)的基本原理 RBARBA的基本原理與的基本原理與IRMAIRMA基本相同，應(yīng)用基本相同，應(yīng)用放射性標(biāo)記配體，在一定條件下與受體（放射性標(biāo)記配體，在一定條件下與受體（R R）結(jié)合成配體與受體復(fù)合物（）結(jié)合成配體與受體復(fù)合物（R R* *L L），分離），分離并測定并測定R R* *L L的放射性，然后經(jīng)數(shù)據(jù)處理，可的放射性，然后經(jīng)數(shù)據(jù)處理，可測得受體的親和力和受體的數(shù)量。測得受體的親和力和受體的數(shù)量。 一、受體與配基相互結(jié)合的基本規(guī)律一、受體與配基相互結(jié)合的基本規(guī)律 （一）質(zhì)量作用定律（一）質(zhì)量作用定律（mass action lawm

16、ass action law） 簡單單位點系統(tǒng)：簡單單位點系統(tǒng)：指對某種受體而言，它的全部指對某種受體而言，它的全部受體都以相同的親和性以單分子與特定的配基相結(jié)合受體都以相同的親和性以單分子與特定的配基相結(jié)合，而且不表現(xiàn)明顯的正負(fù)協(xié)同作用，理論上講結(jié)合后，而且不表現(xiàn)明顯的正負(fù)協(xié)同作用，理論上講結(jié)合后產(chǎn)生的生物效應(yīng)也應(yīng)完全相同。這種系統(tǒng)稱之為。產(chǎn)生的生物效應(yīng)也應(yīng)完全相同。這種系統(tǒng)稱之為。 有時，一個受體系統(tǒng)中存在兩（多）種亞型，但有時，一個受體系統(tǒng)中存在兩（多）種亞型，但所用配基無選擇性，盡管亞型的生物效應(yīng)可能不全相所用配基無選擇性，盡管亞型的生物效應(yīng)可能不全相同，結(jié)合反應(yīng)卻表現(xiàn)出完全相同的特征

17、，這時，也可同，結(jié)合反應(yīng)卻表現(xiàn)出完全相同的特征，這時，也可作為單位點系統(tǒng)來看待。作為單位點系統(tǒng)來看待。（二）復(fù)合物的濃度和配基濃度的關(guān)系：（二）復(fù)合物的濃度和配基濃度的關(guān)系： 可以看出，可以看出，RLRL和和LT LT 并非線性關(guān)系，而并非線性關(guān)系，而是曲線關(guān)系，對一定數(shù)量（是曲線關(guān)系，對一定數(shù)量（RTRT固定）和一定固定）和一定親和力（親和力（KDKD固定）的受體來說，配基濃度從零固定）的受體來說，配基濃度從零開始上升時，復(fù)合物濃度先是上升很快，以后開始上升時，復(fù)合物濃度先是上升很快，以后逐漸變慢，最后絕大多數(shù)受體都變?yōu)閺?fù)合物，逐漸變慢，最后絕大多數(shù)受體都變?yōu)閺?fù)合物，也 就 是 受 體 被

18、飽 和 了 。 這 就 是 飽 和 曲 線也 就 是 受 體 被 飽 和 了 。 這 就 是 飽 和 曲 線 （saturation curve)saturation curve)（圖（圖9 91 1）。）。 曲線的高度曲線的高度主要反映受主要反映受體的數(shù)量多體的數(shù)量多少，曲線上少，曲線上升的快慢則升的快慢則主要反映受主要反映受體和配基的體和配基的親和力。親和力。 （三）非特異結(jié)合（三）非特異結(jié)合（non-specific bindingnon-specific binding，NSBNSB） 上述飽和曲線是受體與配基的特異結(jié)合形成的。這上述飽和曲線是受體與配基的特異結(jié)合形成的。這種結(jié)合的特點

19、是低容量和高親和力，所以容易飽和。但種結(jié)合的特點是低容量和高親和力，所以容易飽和。但是，任何受體標(biāo)本除特異結(jié)合外，還會有一部分非特異是，任何受體標(biāo)本除特異結(jié)合外，還會有一部分非特異結(jié)合，當(dāng)分離特異結(jié)合的復(fù)合物測量放射性時，這部分結(jié)合，當(dāng)分離特異結(jié)合的復(fù)合物測量放射性時，這部分非特異結(jié)合的放射性混在一起，測到的是總放射性非特異結(jié)合的放射性混在一起，測到的是總放射性（total bindingtotal binding，TBTB），必需先減去非特異結(jié)合），必需先減去非特異結(jié)合（NSBNSB），才能得到特異結(jié)合（），才能得到特異結(jié)合（specific bindingspecific binding，

20、SBSB）的放射性。的放射性。 NSBNSB主要來自雜蛋白，反應(yīng)器壁，分離材料的吸附，主要來自雜蛋白，反應(yīng)器壁，分離材料的吸附，它的特點是，容量很大，而親和力低，因此在一般情況下它的特點是，容量很大，而親和力低，因此在一般情況下不被飽和，也就是隨著配基濃度的升高，它不呈飽和曲線，不被飽和，也就是隨著配基濃度的升高，它不呈飽和曲線，而是一條上升的直線（圖而是一條上升的直線（圖9 9l l）。另外，如果系統(tǒng)中存在）。另外，如果系統(tǒng)中存在大量同種受體的非標(biāo)記配基，則放射性的大量同種受體的非標(biāo)記配基，則放射性的SBSB被非標(biāo)記配基被非標(biāo)記配基取代，而取代，而NSBNSB由于容量很大，空余的位點很多，放

21、射性不由于容量很大，空余的位點很多，放射性不被取代。所以要從被取代。所以要從TBTB中減去中減去NSBNSB，最基本的辦法是做一系，最基本的辦法是做一系列平行管，所有的條件都與列平行管，所有的條件都與 TBTB管相同，只是多加管相同，只是多加 10010010001000倍量的非標(biāo)記配基，將倍量的非標(biāo)記配基，將SBSB完全取代掉，這時的放射性完全取代掉，這時的放射性結(jié)合即為結(jié)合即為NSBNSB。由于。由于NSBNSB和放射配基呈直線關(guān)系，多點飽和和放射配基呈直線關(guān)系，多點飽和法的實驗中往往只需做法的實驗中往往只需做3 34 4點，再用直線回歸法求出其余點，再用直線回歸法求出其余各點的放射性。各

22、點的放射性。 （四）正負(fù)協(xié)同作用（四）正負(fù)協(xié)同作用 當(dāng)一部分受體與配基結(jié)合后使相鄰的受體的親和力當(dāng)一部分受體與配基結(jié)合后使相鄰的受體的親和力發(fā)生改變，倘若親和力逐步下降，稱之為負(fù)協(xié)同作用發(fā)生改變，倘若親和力逐步下降，稱之為負(fù)協(xié)同作用如曲線（如曲線（2 2） ，親和力逐步增大，稱之為正協(xié)同作用，親和力逐步增大，稱之為正協(xié)同作用如曲線（如曲線（3 3）。）。 （五）受體與配基反應(yīng)的動力學(xué)（五）受體與配基反應(yīng)的動力學(xué)（kineticskinetics） 受體與配基的結(jié)合反應(yīng)一般都較快（多數(shù)在數(shù)十受體與配基的結(jié)合反應(yīng)一般都較快（多數(shù)在數(shù)十秒至數(shù)十分鐘）達(dá)到平衡。當(dāng)周圍的游離配基急劇下秒至數(shù)十分鐘）達(dá)到

23、平衡。當(dāng)周圍的游離配基急劇下降，或非標(biāo)記配基濃度急劇升高時，放射性復(fù)合物的降，或非標(biāo)記配基濃度急劇升高時，放射性復(fù)合物的解離也很快，這種快速結(jié)合和快速解離對保證受體的解離也很快，這種快速結(jié)合和快速解離對保證受體的迅速反應(yīng)有很重要的意義。迅速反應(yīng)有很重要的意義。（六）競爭性取代反應(yīng)（六）競爭性取代反應(yīng) 在一個受體和放射配基的反應(yīng)系統(tǒng)中加入另在一個受體和放射配基的反應(yīng)系統(tǒng)中加入另一個化合物，它若能和受體的結(jié)合位點結(jié)合，則一個化合物，它若能和受體的結(jié)合位點結(jié)合，則會與放射配基競爭與受體結(jié)合，最終將表現(xiàn)為放會與放射配基競爭與受體結(jié)合，最終將表現(xiàn)為放射配基與受體形成復(fù)合物的能力降低，但受體數(shù)射配基與受體

24、形成復(fù)合物的能力降低，但受體數(shù)量不變量不變, ,所以叫競爭性取代反應(yīng)。此時，非標(biāo)記所以叫競爭性取代反應(yīng)。此時，非標(biāo)記的起競爭作用的配基稱為競爭劑的起競爭作用的配基稱為競爭劑, ,它們和受體結(jié)它們和受體結(jié)合后不改變受體分子的結(jié)構(gòu)。合后不改變受體分子的結(jié)構(gòu)。 表示競爭劑抑制作用強(qiáng)弱的指標(biāo)有二個：表示競爭劑抑制作用強(qiáng)弱的指標(biāo)有二個：ICIC5050值和值和KIKI。ICIC5050值是指抑制值是指抑制5050受體與放射配基結(jié)受體與放射配基結(jié)合所需競爭劑的濃度，合所需競爭劑的濃度，ICIC5050值大，表明競爭劑抑值大，表明競爭劑抑制作用小。制作用小。KIKI則是指競爭劑的平衡解離常數(shù)，則是指競爭劑的

25、平衡解離常數(shù)，KIKI越小，表明競爭劑抑制作用越大。越小，表明競爭劑抑制作用越大。 二、雙（多）位點系統(tǒng)二、雙（多）位點系統(tǒng) 一種配基可以和兩種以上的受體亞型結(jié)一種配基可以和兩種以上的受體亞型結(jié)合，每種亞型都有相應(yīng)的合，每種亞型都有相應(yīng)的KDKD值（自學(xué)）。值（自學(xué)）。3. 3. 受體放射分析的基本方法受體放射分析的基本方法 離體離體RBARBA基本方法的流程為基本方法的流程為： 一、放射性配基的要求一、放射性配基的要求 制備優(yōu)良的放射性配基是受體結(jié)合試驗的首要制備優(yōu)良的放射性配基是受體結(jié)合試驗的首要條件。對任何一種受體系統(tǒng)，通常都有好幾種標(biāo)記配條件。對任何一種受體系統(tǒng)，通常都有好幾種標(biāo)記配基

26、可供選擇。選擇應(yīng)從兩方面考慮：基可供選擇。選擇應(yīng)從兩方面考慮：配基的特性；配基的特性；實驗?zāi)康?。實驗?zāi)康摹?（一）對放射性配基的基本要求（一）對放射性配基的基本要求1 1、高比活度：、高比活度：組織細(xì)胞內(nèi)的受體濃度一般都很低組織細(xì)胞內(nèi)的受體濃度一般都很低，約，約10104 4-10-105 5個個/ /細(xì)胞，或細(xì)胞，或0.01-3.0 pmol/mg0.01-3.0 pmol/mg蛋白的水蛋白的水平，低比活度的配基難于達(dá)到分析靈敏度的要求。平，低比活度的配基難于達(dá)到分析靈敏度的要求。 一般要求配基比活度至少在一般要求配基比活度至少在3.73.710101111BqBq（10Ci10Ci）mmo

27、lmmol以上。另外，配基比活度高，加入反應(yīng)管的放射以上。另外，配基比活度高，加入反應(yīng)管的放射性配基量才有可能減少，從而有利于用小量標(biāo)本得到可性配基量才有可能減少，從而有利于用小量標(biāo)本得到可靠的數(shù)據(jù)，并有利降低非特異性結(jié)合率?？康臄?shù)據(jù)，并有利降低非特異性結(jié)合率。2 2、高親和力、高親和力: :親和力高，可以減少標(biāo)記配基用量，從親和力高，可以減少標(biāo)記配基用量，從而既可降低非特異性結(jié)合，又可使放射性配基與受體的而既可降低非特異性結(jié)合，又可使放射性配基與受體的結(jié)合物解離變慢，便于進(jìn)行結(jié)合和游離配基的分離。不結(jié)合物解離變慢，便于進(jìn)行結(jié)合和游離配基的分離。不僅方便操作，而且獲得的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。僅方便操作，而

28、且獲得的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。 3 3、特異性強(qiáng)、特異性強(qiáng): :即該配基與所研究受體有選擇性結(jié)合，即該配基與所研究受體有選擇性結(jié)合，理想的是該配基只與一種受體或受體亞型結(jié)合。但沒理想的是該配基只與一種受體或受體亞型結(jié)合。但沒有一種配基是完全選擇性的，所以要結(jié)合實驗研究的有一種配基是完全選擇性的，所以要結(jié)合實驗研究的目的，選擇對某一受體或其中某一亞型親和力高的放目的，選擇對某一受體或其中某一亞型親和力高的放射性配基。射性配基。4 4、高的穩(wěn)定性及放化純度、高的穩(wěn)定性及放化純度: :包括標(biāo)記的穩(wěn)定性、包括標(biāo)記的穩(wěn)定性、貯藏時的穩(wěn)定性以及溫育分析時之穩(wěn)定性貯藏時的穩(wěn)定性以及溫育分析時之穩(wěn)定性, ,同時具有同時具

29、有95%95%以上的放化純度。以上的放化純度。 總的來說總的來說, ,配基的選擇要根據(jù)實驗?zāi)縼矶?。配基的選擇要根據(jù)實驗?zāi)縼矶ā?目前，用作受體放射分析的放射性配基多用目前，用作受體放射分析的放射性配基多用3 3H H、125125I I標(biāo)記。標(biāo)記。 3 3H H標(biāo)記配基與原型配基為同型式，生物學(xué)標(biāo)記配基與原型配基為同型式，生物學(xué)活性好，多數(shù)情況下比活度也能達(dá)到要求，且半衰期活性好，多數(shù)情況下比活度也能達(dá)到要求，且半衰期長，使用方便，主要缺點是需用液閃測量，操作較麻長，使用方便，主要缺點是需用液閃測量，操作較麻煩，一般實驗室不能進(jìn)行標(biāo)記。多肽及蛋白質(zhì)配基多煩，一般實驗室不能進(jìn)行標(biāo)記。多肽及蛋白質(zhì)

30、配基多用用125125I I標(biāo)記，其優(yōu)點是可以達(dá)到較高的比活度。只要標(biāo)記，其優(yōu)點是可以達(dá)到較高的比活度。只要很好掌握標(biāo)記條件，仍能保持較好的生物活性。另外，很好掌握標(biāo)記條件，仍能保持較好的生物活性。另外，碘標(biāo)記法快速、方便、經(jīng)濟(jì)，一般實驗室可進(jìn)行。碘標(biāo)記法快速、方便、經(jīng)濟(jì)，一般實驗室可進(jìn)行。（二）放射性配基的質(zhì)量鑒定（二）放射性配基的質(zhì)量鑒定 1 1、放射化學(xué)純度、放射化學(xué)純度: : 除新鮮產(chǎn)品外除新鮮產(chǎn)品外, ,存放一定存放一定時間后的標(biāo)記配基均應(yīng)重測其放化純度，以時間后的標(biāo)記配基均應(yīng)重測其放化純度，以保證分析的準(zhǔn)確性。一般要求放化純度應(yīng)在保證分析的準(zhǔn)確性。一般要求放化純度應(yīng)在9595以上。

31、以上。 2 2、結(jié)合活性鑒定、結(jié)合活性鑒定 3 3、比活度：、比活度：受體結(jié)合分析的結(jié)果計算離不開受體結(jié)合分析的結(jié)果計算離不開準(zhǔn)確的比活度數(shù)據(jù)。準(zhǔn)確的比活度數(shù)據(jù)。二、受體標(biāo)本的制備二、受體標(biāo)本的制備 在受體結(jié)合實驗的研究中，所用的受體材料可以是在受體結(jié)合實驗的研究中，所用的受體材料可以是組織切片，也可以是完整的單層培養(yǎng)細(xì)胞或游離活細(xì)胞，組織切片，也可以是完整的單層培養(yǎng)細(xì)胞或游離活細(xì)胞，粗制的或純化的細(xì)胞膜受體，可溶性的受體蛋白等。粗制的或純化的細(xì)胞膜受體，可溶性的受體蛋白等。 （一）組織切片（一）組織切片 冷凍組織切片常用明膠粘貼于玻片上，在溫育緩沖冷凍組織切片常用明膠粘貼于玻片上，在溫育緩沖

32、液中與標(biāo)記配基進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)后用緩沖液洗幾次即液中與標(biāo)記配基進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)后用緩沖液洗幾次即可，切片厚度一般為可，切片厚度一般為5-50m5-50m。用組織切片的目的更多。用組織切片的目的更多是研究受體的分布（用放射自顯影法或免疫組化）。是研究受體的分布（用放射自顯影法或免疫組化）。 （二）游離的完整細(xì)胞懸液（二）游離的完整細(xì)胞懸液 完整的活細(xì)胞可以是血細(xì)胞，培養(yǎng)的單層細(xì)胞，完整的活細(xì)胞可以是血細(xì)胞，培養(yǎng)的單層細(xì)胞，腫瘤的腹水型細(xì)胞以及經(jīng)處理的原代細(xì)胞等，使用完整腫瘤的腹水型細(xì)胞以及經(jīng)處理的原代細(xì)胞等，使用完整細(xì)胞的優(yōu)點：細(xì)胞的優(yōu)點：1 1、受體處于原有的正常環(huán)境中。膜未受擾亂，膜內(nèi)、受體處于

33、原有的正常環(huán)境中。膜未受擾亂，膜內(nèi)pHpH、離子梯度也保存著。受體與其相連的效應(yīng)系統(tǒng)（如、離子梯度也保存著。受體與其相連的效應(yīng)系統(tǒng)（如G G蛋白）也保存完好。蛋白）也保存完好。2 2、在受體功能反應(yīng)完全的情況下研究受體，可以同時、在受體功能反應(yīng)完全的情況下研究受體，可以同時觀察配基與受體結(jié)合的情況和細(xì)胞的生物效應(yīng)。所得的觀察配基與受體結(jié)合的情況和細(xì)胞的生物效應(yīng)。所得的結(jié)果更能反映受體的生理特點。結(jié)果更能反映受體的生理特點。3 3、能直接給出平均每一個細(xì)胞的受體數(shù)、能直接給出平均每一個細(xì)胞的受體數(shù)。 但完整細(xì)胞的受體分析較難控制分析條但完整細(xì)胞的受體分析較難控制分析條件。操作過程可能導(dǎo)致細(xì)胞表面

34、生理活性的改件。操作過程可能導(dǎo)致細(xì)胞表面生理活性的改變，因此結(jié)果有時不夠穩(wěn)定。另外，若細(xì)胞上變，因此結(jié)果有時不夠穩(wěn)定。另外，若細(xì)胞上某種受體的含量低，作分析時需加入大量細(xì)胞某種受體的含量低，作分析時需加入大量細(xì)胞才能獲得足夠的放射性計數(shù)，給實際工作帶來才能獲得足夠的放射性計數(shù)，給實際工作帶來一定困難。完整細(xì)胞來源分三種：一定困難。完整細(xì)胞來源分三種：從組織分從組織分離出游離細(xì)胞；離出游離細(xì)胞；血細(xì)胞；血細(xì)胞；培養(yǎng)細(xì)胞。一般培養(yǎng)細(xì)胞。一般都需采用臺盼藍(lán)等檢查細(xì)胞活性。都需采用臺盼藍(lán)等檢查細(xì)胞活性。 （三）膜制劑（三）膜制劑（membranous preparationmembranous pre

35、paration） 絕大多數(shù)受體結(jié)合分析使用膜制劑。使用膜制絕大多數(shù)受體結(jié)合分析使用膜制劑。使用膜制劑可以減少非特異性結(jié)合率。而且，在膜制備過程劑可以減少非特異性結(jié)合率。而且，在膜制備過程中，通過洗膜的方法，可以將內(nèi)源性配基洗去，并中，通過洗膜的方法，可以將內(nèi)源性配基洗去，并除去部分蛋白溶解酶。膜制劑通常也保存有受體除去部分蛋白溶解酶。膜制劑通常也保存有受體- -效效應(yīng)器結(jié)合系統(tǒng)。但受體功能的其他方面則失去了。應(yīng)器結(jié)合系統(tǒng)。但受體功能的其他方面則失去了。另外，膜內(nèi)離子濃度梯度、受體與細(xì)胞結(jié)構(gòu)關(guān)系也另外，膜內(nèi)離子濃度梯度、受體與細(xì)胞結(jié)構(gòu)關(guān)系也失去了。但是，受體結(jié)合需要的是膜雙層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)失去了。但

36、是，受體結(jié)合需要的是膜雙層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)本身，而不是細(xì)胞內(nèi)其他組份。所以膜碎片內(nèi)仍保本身，而不是細(xì)胞內(nèi)其他組份。所以膜碎片內(nèi)仍保留受體的藥理學(xué)特性。留受體的藥理學(xué)特性。 細(xì)胞膜和細(xì)胞漿受體的制備一般都利用蔗糖密度細(xì)胞膜和細(xì)胞漿受體的制備一般都利用蔗糖密度（0.250.250.3mol0.3molL L）梯度離心法分離不同的亞細(xì)胞）梯度離心法分離不同的亞細(xì)胞組分。其優(yōu)點是除去大部分雜蛋白，以減小非特異結(jié)組分。其優(yōu)點是除去大部分雜蛋白，以減小非特異結(jié)合。為保證所制得的膜受體保持良好的結(jié)合活性，需合。為保證所制得的膜受體保持良好的結(jié)合活性，需注意：注意：全部過程在全部過程在0-40-4下進(jìn)行操作。下進(jìn)行操

37、作。制備緩制備緩沖液的蔗糖密度，離子強(qiáng)度，沖液的蔗糖密度，離子強(qiáng)度，pHpH值及其它物質(zhì)（如值及其它物質(zhì)（如 EDTAEDTA，MgMg2 2）應(yīng)嚴(yán)格控制。）應(yīng)嚴(yán)格控制。組織勻漿條件應(yīng)保持一組織勻漿條件應(yīng)保持一致。致。離心的時間、速度、溫度應(yīng)保持恒定。離心的時間、速度、溫度應(yīng)保持恒定。為防為防止膜受體蛋白被蛋白酶水解常加蛋白酶抑制劑。止膜受體蛋白被蛋白酶水解常加蛋白酶抑制劑。 細(xì)胞組份的分離一般采用差速離心法。通過適當(dāng)控制離細(xì)胞組份的分離一般采用差速離心法。通過適當(dāng)控制離心力及離心時間可使某些顆粒組份沉淀，而另一些保留在上心力及離心時間可使某些顆粒組份沉淀，而另一些保留在上清液中。細(xì)胞組份的一

38、般分離流程如下：清液中。細(xì)胞組份的一般分離流程如下： 三、結(jié)合反應(yīng)的類型三、結(jié)合反應(yīng)的類型 （一）標(biāo)記配基飽和法（一）標(biāo)記配基飽和法1 1、單點飽和法：、單點飽和法：定量受體制劑加大量的標(biāo)記定量受體制劑加大量的標(biāo)記配基使受體得以飽和結(jié)合。根據(jù)受體配基使受體得以飽和結(jié)合。根據(jù)受體- -配基復(fù)配基復(fù)合物的放射性計算受體結(jié)合容量（或結(jié)合位合物的放射性計算受體結(jié)合容量（或結(jié)合位點數(shù)）。這種方法操作簡便、標(biāo)本用量少。點數(shù)）。這種方法操作簡便、標(biāo)本用量少。但只憑單點實驗數(shù)據(jù)計算受體結(jié)合容量，比但只憑單點實驗數(shù)據(jù)計算受體結(jié)合容量，比多點法的結(jié)果略低，不能給出多點法的結(jié)果略低，不能給出KDKD，誤差也相，誤差

39、也相對大些。對大些。 2 2、多點飽和法：、多點飽和法：一定量的受體制劑，逐步一定量的受體制劑，逐步增加標(biāo)記配基的量（一般增加標(biāo)記配基的量（一般7-87-8個實驗點），個實驗點），使受體的結(jié)合趨于飽和。用曲線擬合法或使受體的結(jié)合趨于飽和。用曲線擬合法或直線擬合法計算受體結(jié)合容量和親和力直線擬合法計算受體結(jié)合容量和親和力（RTRT、KDKD），結(jié)果可靠性高。但受體標(biāo)本、），結(jié)果可靠性高。但受體標(biāo)本、標(biāo)記配基用量大，工作量大。標(biāo)記配基用量大，工作量大。 （二）非標(biāo)記配基飽和法（二）非標(biāo)記配基飽和法 一定量的受體制劑和標(biāo)記配基，逐漸增加一定量的受體制劑和標(biāo)記配基，逐漸增加非標(biāo)記配基（一般非標(biāo)記配基（

40、一般7 78 8個實驗點），使受體飽個實驗點），使受體飽和結(jié)合，曲線擬合法或直線擬合法計算受體結(jié)和結(jié)合，曲線擬合法或直線擬合法計算受體結(jié)合容量和親和力。這種方法克服了多點飽和法合容量和親和力。這種方法克服了多點飽和法標(biāo)記配基用量大的缺點，但由于非標(biāo)記配基的標(biāo)記配基用量大的缺點，但由于非標(biāo)記配基的用量逐漸加大，放射性逐步減少，必需標(biāo)記配用量逐漸加大，放射性逐步減少，必需標(biāo)記配基比活度較高才能得到滿意結(jié)果?；然疃容^高才能得到滿意結(jié)果。 四、分析條件的選擇四、分析條件的選擇 （一）標(biāo)記配基濃度（一）標(biāo)記配基濃度 （二）受體濃度（二）受體濃度 （三）溫育溫度與時間（三）溫育溫度與時間 （四）緩沖液（

41、四）緩沖液 五、結(jié)合與游離配基的分離五、結(jié)合與游離配基的分離 受體受體- -配基結(jié)合分析主要是測定反應(yīng)平衡時結(jié)合配基結(jié)合分析主要是測定反應(yīng)平衡時結(jié)合配基的量，求解受體的密度與平衡解離常數(shù)。反應(yīng)配基的量，求解受體的密度與平衡解離常數(shù)。反應(yīng)一般在達(dá)到平衡后先經(jīng)分離，再測結(jié)合部分的放射一般在達(dá)到平衡后先經(jīng)分離，再測結(jié)合部分的放射性。理論上，一經(jīng)分離，反應(yīng)的平衡就會被破壞，性。理論上，一經(jīng)分離，反應(yīng)的平衡就會被破壞，所以選擇適當(dāng)?shù)姆蛛x方法和環(huán)境，使受體所以選擇適當(dāng)?shù)姆蛛x方法和環(huán)境，使受體- -配基復(fù)合配基復(fù)合物在分離過程中的解離減少到最低限度。低溫是降物在分離過程中的解離減少到最低限度。低溫是降低解離的最有效手段，分離快慢也是重要因素。低解離的最有效手段，分離快慢也是重要因素。 常用的分離方法有離心法、濾膜法、吸附法、透常用的分離方法有離心法、濾膜法、吸附法、透析法、電泳法等。若復(fù)合物解離快，則只能選擇快析法、電泳法等。若復(fù)合物解離快，則只能選擇快速的分離方法。同時一定要在分離時間，分離溫度速的分離方法。同時一定要在分離時間，分離溫度等方面保持各樣品管之間的一致性，以減少誤差等方面保持各樣品管之間的一致性，以減少誤差。4.4.受體放射分析的數(shù)據(jù)