微生物檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)質(zhì)量管理

1、微生物檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)質(zhì)量管理微生物檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)質(zhì)量管理 張秀麗張秀麗 電話電話E-mail: 微生物檢驗(yàn)的特點(diǎn)-1 微生物種類繁多而又復(fù)雜，必須正確把微生物種類繁多而又復(fù)雜，必須正確把握樣本的采集時(shí)機(jī)、部位、運(yùn)送、保存握樣本的采集時(shí)機(jī)、部位、運(yùn)送、保存及處理等環(huán)節(jié)，選擇最佳方法，及時(shí)檢及處理等環(huán)節(jié)，選擇最佳方法，及時(shí)檢驗(yàn)，正確、規(guī)范操作，才能及時(shí)、準(zhǔn)確驗(yàn)，正確、規(guī)范操作，才能及時(shí)、準(zhǔn)確地報(bào)出準(zhǔn)確可靠的結(jié)果。地報(bào)出準(zhǔn)確可靠的結(jié)果。 微生物檢驗(yàn)的特點(diǎn) -2 五大衛(wèi)生樣品中的病原微生物數(shù)量少，種類又五大衛(wèi)生樣品中的病原微生物數(shù)量少，種類又多，生物學(xué)性狀也是多種多樣的，將環(huán)境中存在多，

2、生物學(xué)性狀也是多種多樣的，將環(huán)境中存在數(shù)量較多、具有一定代表性、檢測(cè)方法較簡(jiǎn)單的數(shù)量較多、具有一定代表性、檢測(cè)方法較簡(jiǎn)單的微生物作為指標(biāo)性微生物。根據(jù)這些指標(biāo)性微生微生物作為指標(biāo)性微生物。根據(jù)這些指標(biāo)性微生物的檢出情況，來(lái)判斷樣品被污染的程度，間接物的檢出情況，來(lái)判斷樣品被污染的程度，間接地指示病原微生物存在的可能；以及對(duì)人群是否地指示病原微生物存在的可能；以及對(duì)人群是否構(gòu)成潛在的威脅。構(gòu)成潛在的威脅。 一、微生物檢驗(yàn)過(guò)程關(guān)鍵控制點(diǎn)n微生物檢驗(yàn)過(guò)程是個(gè)涉及多個(gè)子過(guò)程的系統(tǒng)，微生物檢驗(yàn)過(guò)程是個(gè)涉及多個(gè)子過(guò)程的系統(tǒng)，一般包括：一般包括：n采樣與運(yùn)輸（需要時(shí)）、樣本接收、保存與處置、采樣與運(yùn)輸（需要

3、時(shí)）、樣本接收、保存與處置、樣品制備、檢驗(yàn)與記錄、結(jié)果與報(bào)告等子過(guò)程。樣品制備、檢驗(yàn)與記錄、結(jié)果與報(bào)告等子過(guò)程。n每個(gè)子過(guò)程又由多個(gè)環(huán)節(jié)構(gòu)成，個(gè)個(gè)環(huán)節(jié)又受多種每個(gè)子過(guò)程又由多個(gè)環(huán)節(jié)構(gòu)成，個(gè)個(gè)環(huán)節(jié)又受多種因素影響，因此識(shí)別和控制關(guān)鍵環(huán)節(jié)是質(zhì)量管理的因素影響，因此識(shí)別和控制關(guān)鍵環(huán)節(jié)是質(zhì)量管理的重點(diǎn)。重點(diǎn)。 過(guò)程關(guān)鍵控制點(diǎn)n影響微生物檢測(cè)結(jié)果正確性和可靠性的關(guān)鍵控影響微生物檢測(cè)結(jié)果正確性和可靠性的關(guān)鍵控制點(diǎn)及其控制要求涉及到的要素包括：制點(diǎn)及其控制要求涉及到的要素包括：n服務(wù)和供應(yīng)品的采購(gòu)服務(wù)和供應(yīng)品的采購(gòu)- -試劑與培養(yǎng)基的控制試劑與培養(yǎng)基的控制n人員人員n設(shè)施和環(huán)境條件設(shè)施和環(huán)境條件n檢測(cè)和校準(zhǔn)

4、方法及方法確認(rèn)檢測(cè)和校準(zhǔn)方法及方法確認(rèn)n設(shè)備設(shè)備n測(cè)量的溯源性測(cè)量的溯源性n抽樣抽樣n檢測(cè)和校準(zhǔn)物品的處置檢測(cè)和校準(zhǔn)物品的處置試劑與培養(yǎng)基的控制要求n實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有對(duì)試劑與培養(yǎng)基進(jìn)行檢查、評(píng)估，要實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有對(duì)試劑與培養(yǎng)基進(jìn)行檢查、評(píng)估，要求在初次使用和保存期限內(nèi)驗(yàn)證并記錄每一批對(duì)求在初次使用和保存期限內(nèi)驗(yàn)證并記錄每一批對(duì)檢測(cè)起決定性作用的試劑與培養(yǎng)基的適用性，不檢測(cè)起決定性作用的試劑與培養(yǎng)基的適用性，不得使用未達(dá)到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的試劑與培養(yǎng)基。得使用未達(dá)到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的試劑與培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)用水的控制要求n除非實(shí)驗(yàn)方法有特殊要求，培養(yǎng)基、試劑及稀釋劑配制用除非實(shí)驗(yàn)方法有特殊要求，培養(yǎng)基、試劑及稀釋劑配制用水應(yīng)經(jīng)

5、蒸餾、去離子或反轉(zhuǎn)滲透處理并無(wú)菌、無(wú)干擾劑和水應(yīng)經(jīng)蒸餾、去離子或反轉(zhuǎn)滲透處理并無(wú)菌、無(wú)干擾劑和抑制劑，配制用水應(yīng)滿足下列參數(shù)：抑制劑，配制用水應(yīng)滿足下列參數(shù)：a) a) 電阻率在電阻率在2525時(shí)應(yīng)時(shí)應(yīng)300000 .cm300000 .cm），建議每周檢測(cè)一次），建議每周檢測(cè)一次b) b) 菌落總數(shù)小于菌落總數(shù)小于1000 cfu/mL1000 cfu/mL，建議每月檢測(cè)一次，建議每月檢測(cè)一次c) c) 重金屬（重金屬（CdCd，CrCr，CuCu，NiNi，PbPb等）小于等）小于0.05mg/L0.05mg/L，重金屬，重金屬總量小于總量小于10mg/L10mg/L，建議每年檢測(cè)一次。，

6、建議每年檢測(cè)一次。nGB/T27405-2008 GB/T27405-2008 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測(cè)5.45.4試劑和試劑和培養(yǎng)基中的規(guī)定培養(yǎng)基中的規(guī)定培養(yǎng)基質(zhì)量控制方法培養(yǎng)基質(zhì)量控制方法 1. 1.理化試驗(yàn)方法理化試驗(yàn)方法n1.1pH值測(cè)定值測(cè)定: 滅菌前后都應(yīng)該測(cè)定滅菌前后都應(yīng)該測(cè)定pH值值, 采用連接可滲透陶器型液體接頭的電極測(cè)定液采用連接可滲透陶器型液體接頭的電極測(cè)定液體培養(yǎng)基的體培養(yǎng)基的pH, 固體培養(yǎng)基可用平頭電極或者固體培養(yǎng)基可用平頭電極或者連接微型探頭的電極測(cè)定連接微型探頭的電極測(cè)定pH。pH值在滅菌前值在滅菌前后均需測(cè)定后均需測(cè)定,

7、 測(cè)量時(shí)盡量使培養(yǎng)基溫度降到測(cè)量時(shí)盡量使培養(yǎng)基溫度降到2025, 校正通常用接近校正通常用接近40g/L的的NaOH或者接近或者接近36.5g/L (約約1mol/L) HCl。 1.理化試驗(yàn)方法理化試驗(yàn)方法1.2凝膠強(qiáng)度測(cè)定凝膠強(qiáng)度測(cè)定: 凝膠強(qiáng)度也是一個(gè)重要指標(biāo)凝膠強(qiáng)度也是一個(gè)重要指標(biāo), 滅滅菌條件特別是菌條件特別是pH會(huì)影響凝膠強(qiáng)度。會(huì)影響凝膠強(qiáng)度。Gelometer (Marine Colloids Inc1, 2, Edison Place, Sp ringfield, NJ 07081,U1S1A1) 和和the LFRA Texture Analyser (C1S1 Steven

8、s & Son L td1 Dolphin Yard, HolywellHill, St1 Albans, Herts, U.K.)均能提供良好的測(cè)量性能。這種儀器均能提供良好的測(cè)量性能。這種儀器利用直徑為利用直徑為10mm25mm的圓柱形金屬探頭測(cè)量的圓柱形金屬探頭測(cè)量壓破瓊脂表面時(shí)所需的壓力。壓破瓊脂表面時(shí)所需的壓力。2. 2.微生物學(xué)方法微生物學(xué)方法n根據(jù)培養(yǎng)基的用途不同，培養(yǎng)基的質(zhì)量控制方法不同。2.1普通增菌培養(yǎng)基質(zhì)量控制 將質(zhì)控菌種新鮮培養(yǎng)液按將質(zhì)控菌種新鮮培養(yǎng)液按1 1：1000010000稀釋，稀釋，接種接種0.010.01mlml（約約100100CFUCFU）培養(yǎng)，

9、應(yīng)獲得培養(yǎng)，應(yīng)獲得充分生長(zhǎng)。充分生長(zhǎng)。2.1.1 混合增菌培養(yǎng)法SC肉湯肉湯質(zhì)控目標(biāo)菌：鼠傷寒沙門氏菌、質(zhì)控目標(biāo)菌：鼠傷寒沙門氏菌、 非目標(biāo)菌：大腸桿菌非目標(biāo)菌：大腸桿菌 方法：將目標(biāo)菌和非目標(biāo)菌肉湯新鮮培養(yǎng)物按照方法：將目標(biāo)菌和非目標(biāo)菌肉湯新鮮培養(yǎng)物按照99：1進(jìn)行混進(jìn)行混 合，接種合，接種SC肉湯，肉湯，35培養(yǎng)培養(yǎng)18-24h，適當(dāng)稀釋，涂適當(dāng)稀釋，涂 布麥康凱瓊脂，沙門氏菌為無(wú)色菌落，平布麥康凱瓊脂，沙門氏菌為無(wú)色菌落，平 板上應(yīng)板上應(yīng)90% 以上均為沙門氏菌生長(zhǎng)，大腸桿菌為粉紅色，平板上以上均為沙門氏菌生長(zhǎng)，大腸桿菌為粉紅色，平板上 生長(zhǎng)應(yīng)生長(zhǎng)應(yīng)10%。2.1.2 測(cè)定增菌倍數(shù)法 四

10、硫磺酸鹽煌綠增菌培養(yǎng)基四硫磺酸鹽煌綠增菌培養(yǎng)基( (TTB)TTB) n質(zhì)控菌株：質(zhì)控菌株：n目標(biāo)菌：傷寒桿菌目標(biāo)菌：傷寒桿菌 NICPBP 50098NICPBP 50098、鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌 NICPBP 50013NICPBP 50013。 非目標(biāo)菌：大腸桿菌非目標(biāo)菌：大腸桿菌 NICPBP 44156NICPBP 44156、 糞鏈球菌糞鏈球菌 NICPBP 32221NICPBP 32221。n方法：方法： - -將質(zhì)控菌肉湯培養(yǎng)物將質(zhì)控菌肉湯培養(yǎng)物1010倍稀釋至倍稀釋至1010-6-6； - -取取1 1mLmL稀釋菌液接種于稀釋菌液接種于9 9mLmL四硫磺酸鈉增菌

11、液，重復(fù)接種四硫磺酸鈉增菌液，重復(fù)接種3 3管，同時(shí)從管，同時(shí)從同一同一1010-6-6管稀釋液中吸取管稀釋液中吸取0.10.1mLmL，涂抹于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，重復(fù)涂抹于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，重復(fù)3 3副平板，副平板，3737培養(yǎng)培養(yǎng)1818h h后，平板菌落計(jì)數(shù)；后，平板菌落計(jì)數(shù)； 續(xù)- -沙門氏菌的增菌液沙門氏菌的增菌液3 3管各取管各取1 1mLmL混勻后，混勻后，1010倍系倍系列稀釋到列稀釋到1010-5-5，取，取0.10.1mLmL涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，重復(fù)重復(fù)3 3副平板，并于副平板，并于3737培養(yǎng)培養(yǎng)1818h h后，作菌落計(jì)后，作菌落計(jì)數(shù)。數(shù)。- -大腸桿菌和糞鏈

12、球菌的增菌液各大腸桿菌和糞鏈球菌的增菌液各3 3管分別混勻后管分別混勻后，稀釋到，稀釋到1010-2-2，取，取0.10.1mLmL涂布營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，各涂布營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，各重復(fù)重復(fù)3 3副平板，并于副平板，并于3737培養(yǎng)培養(yǎng)1818h h后，作菌落計(jì)后，作菌落計(jì)數(shù)。數(shù)。 測(cè)定增菌倍數(shù)法 （續(xù)2） 結(jié)果判定： 增菌后平板菌落計(jì)數(shù)平均值105 1）沙門氏菌增菌倍數(shù)= 105 增菌前平板菌落計(jì)數(shù)平均值 增菌后平板菌落計(jì)數(shù)平均值 1022） 大腸桿菌和糞鏈球菌增菌倍數(shù)= 102 增菌前平板菌落計(jì)數(shù)平均值3）合格指標(biāo)：沙門氏菌應(yīng)增菌105倍以上 大腸桿菌和糞鏈球菌增菌應(yīng)低于102 2.2 選擇性分離培

13、養(yǎng)基n 在此類培養(yǎng)基中，一般都含有某種指示在此類培養(yǎng)基中，一般都含有某種指示劑和抑菌劑，以指示某種生化反應(yīng)和抑劑和抑菌劑，以指示某種生化反應(yīng)和抑制某些非目標(biāo)菌的生長(zhǎng)。制某些非目標(biāo)菌的生長(zhǎng)。n目標(biāo)菌在這類培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的過(guò)程中，目標(biāo)菌在這類培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的過(guò)程中，伴隨著生化反應(yīng)，使其具有明顯的菌落伴隨著生化反應(yīng)，使其具有明顯的菌落特征，能與其他細(xì)菌相區(qū)別。特征，能與其他細(xì)菌相區(qū)別。 選擇性分離培養(yǎng)基（續(xù)）n將質(zhì)控菌種新鮮培養(yǎng)液按將質(zhì)控菌種新鮮培養(yǎng)液按1：10000稀釋，接種稀釋，接種0. 1ml（約約1001000CFU）涂布培養(yǎng)。涂布培養(yǎng)。n按按ISO/TS11133-1（食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)（

14、食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)制備和生產(chǎn)培養(yǎng)制備和生產(chǎn)培養(yǎng)基的導(dǎo)則基的導(dǎo)則第一部分）中要求，接種目標(biāo)陽(yáng)性菌、弱生長(zhǎng)陽(yáng)性菌株第一部分）中要求，接種目標(biāo)陽(yáng)性菌、弱生長(zhǎng)陽(yáng)性菌株、呈現(xiàn)不同生化特性的菌株和非目標(biāo)菌（被抑制菌株），觀察菌種、呈現(xiàn)不同生化特性的菌株和非目標(biāo)菌（被抑制菌株），觀察菌種的典型生長(zhǎng)情況，并通過(guò)靈敏度、特異性對(duì)該類培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行的典型生長(zhǎng)情況，并通過(guò)靈敏度、特異性對(duì)該類培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行控制。控制。n靈敏度：目標(biāo)菌應(yīng)能生長(zhǎng)靈敏度：目標(biāo)菌應(yīng)能生長(zhǎng)1001000CFU/板板n特異性：目標(biāo)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好，并具有典型特性，非目標(biāo)菌應(yīng)不生長(zhǎng)特異性：目標(biāo)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好，并具有典型特性，非目標(biāo)菌應(yīng)不生長(zhǎng)。

15、2.3 鑒別培養(yǎng)基n鑒別培養(yǎng)基是一類檢測(cè)細(xì)菌生理、生化特性的培鑒別培養(yǎng)基是一類檢測(cè)細(xì)菌生理、生化特性的培養(yǎng)基。它適用于細(xì)菌純培養(yǎng)物的分類與鑒定。養(yǎng)基。它適用于細(xì)菌純培養(yǎng)物的分類與鑒定。n鑒別培養(yǎng)基的基本反應(yīng)原理：借助于某些微生物鑒別培養(yǎng)基的基本反應(yīng)原理：借助于某些微生物所特有的某種酶，對(duì)培養(yǎng)基中某一特有成分進(jìn)行所特有的某種酶，對(duì)培養(yǎng)基中某一特有成分進(jìn)行分解，如脫氫、脫氨、脫羧、發(fā)酵、水解等作用分解，如脫氫、脫氨、脫羧、發(fā)酵、水解等作用。 續(xù) 在這些作用過(guò)程中往往會(huì)顯示一定的生化反應(yīng)，可以在這些作用過(guò)程中往往會(huì)顯示一定的生化反應(yīng)，可以根據(jù)這些特有的生化反應(yīng)情況，來(lái)判別某一或某些細(xì)菌是根據(jù)這些特有

16、的生化反應(yīng)情況，來(lái)判別某一或某些細(xì)菌是否存在，或所分離菌種是屬哪一類型。所以這類培養(yǎng)基的否存在，或所分離菌種是屬哪一類型。所以這類培養(yǎng)基的質(zhì)控，必須先用已知菌種進(jìn)行鑒定，在證明各種反應(yīng)顯示質(zhì)控，必須先用已知菌種進(jìn)行鑒定，在證明各種反應(yīng)顯示正常后方可使用。正常后方可使用。 質(zhì)控菌株質(zhì)控菌株 陽(yáng)性和陰性控制菌株陽(yáng)性和陰性控制菌株 操作操作 挑取斜面質(zhì)控菌單菌落菌苔，接種于待檢培養(yǎng)挑取斜面質(zhì)控菌單菌落菌苔，接種于待檢培養(yǎng)基，培養(yǎng)后觀察典型生化反應(yīng)。有些培養(yǎng)基需要制備標(biāo)準(zhǔn)基，培養(yǎng)后觀察典型生化反應(yīng)。有些培養(yǎng)基需要制備標(biāo)準(zhǔn)濃度菌懸液接種。濃度菌懸液接種。 續(xù) 質(zhì)控菌株：質(zhì)控菌株： 陽(yáng)性和陰性控制菌株陽(yáng)性

17、和陰性控制菌株 操作：操作： 挑取斜面質(zhì)控菌單菌落菌苔，接種于待挑取斜面質(zhì)控菌單菌落菌苔，接種于待檢培養(yǎng)基，培養(yǎng)后觀察典型生化反應(yīng)。有些培檢培養(yǎng)基，培養(yǎng)后觀察典型生化反應(yīng)。有些培養(yǎng)基需要制備標(biāo)準(zhǔn)濃度菌懸液接種。養(yǎng)基需要制備標(biāo)準(zhǔn)濃度菌懸液接種。人員要求n微生物檢驗(yàn)人員教育、培訓(xùn)、能力、資微生物檢驗(yàn)人員教育、培訓(xùn)、能力、資質(zhì)、層次配備與數(shù)量應(yīng)與所開(kāi)展的微生質(zhì)、層次配備與數(shù)量應(yīng)與所開(kāi)展的微生物工作相適應(yīng)。物工作相適應(yīng)。1.教育與培訓(xùn)n微生物檢驗(yàn)人員應(yīng)有具微生物或相近學(xué)科專業(yè)教微生物檢驗(yàn)人員應(yīng)有具微生物或相近學(xué)科專業(yè)教育背景的專業(yè)人員育背景的專業(yè)人員（原則上應(yīng)具有?？萍耙陨蠈W(xué)原則上應(yīng)具有專科及以上學(xué)歷

18、）；歷）； n培訓(xùn)主要是針對(duì)具體的實(shí)驗(yàn)操作而對(duì)有關(guān)人員進(jìn)培訓(xùn)主要是針對(duì)具體的實(shí)驗(yàn)操作而對(duì)有關(guān)人員進(jìn)行的專門培訓(xùn)，包括樣品的處理原則、微生物檢行的專門培訓(xùn)，包括樣品的處理原則、微生物檢測(cè)技能、儀器設(shè)備的正確使用、實(shí)驗(yàn)室生物安全測(cè)技能、儀器設(shè)備的正確使用、實(shí)驗(yàn)室生物安全、新技術(shù)、新方法的繼續(xù)教育等方面培訓(xùn)。培訓(xùn)、新技術(shù)、新方法的繼續(xù)教育等方面培訓(xùn)。培訓(xùn)應(yīng)保存計(jì)劃和效果評(píng)價(jià)記錄。應(yīng)保存計(jì)劃和效果評(píng)價(jià)記錄。2.資質(zhì)與確認(rèn)n一般資質(zhì)：微生物檢驗(yàn)人員經(jīng)培訓(xùn)，考一般資質(zhì)：微生物檢驗(yàn)人員經(jīng)培訓(xùn)，考核合格后持證上崗，可從事微生物檢驗(yàn)核合格后持證上崗，可從事微生物檢驗(yàn)工作。工作。 續(xù)n特殊資質(zhì)：特殊資質(zhì)：n從事消

19、毒和操作高壓滅菌器的人員，應(yīng)從事消毒和操作高壓滅菌器的人員，應(yīng)具備消毒學(xué)常規(guī)知識(shí)，并通過(guò)質(zhì)量技術(shù)具備消毒學(xué)常規(guī)知識(shí)，并通過(guò)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督部門組織的特種壓力設(shè)備操作知識(shí)監(jiān)督部門組織的特種壓力設(shè)備操作知識(shí)的專門培訓(xùn)，取得合格證資質(zhì)后，由單的專門培訓(xùn)，取得合格證資質(zhì)后，由單位授權(quán)上崗。位授權(quán)上崗。 續(xù)n負(fù)責(zé)高致病性菌毒種和標(biāo)本運(yùn)輸?shù)娜藛T，需經(jīng)負(fù)責(zé)高致病性菌毒種和標(biāo)本運(yùn)輸?shù)娜藛T，需經(jīng)過(guò)國(guó)家疾控中心實(shí)驗(yàn)室管理處和國(guó)家民航總局過(guò)國(guó)家疾控中心實(shí)驗(yàn)室管理處和國(guó)家民航總局組織的相關(guān)培訓(xùn)，并取得民航總局頒發(fā)的組織的相關(guān)培訓(xùn)，并取得民航總局頒發(fā)的“中中國(guó)民用航空危險(xiǎn)品運(yùn)輸訓(xùn)練合格證國(guó)民用航空危險(xiǎn)品運(yùn)輸訓(xùn)練合格證”資質(zhì)

20、后，資質(zhì)后，方能完成運(yùn)輸交接和領(lǐng)取工作。方能完成運(yùn)輸交接和領(lǐng)取工作。n對(duì)于負(fù)責(zé)高致病性對(duì)于使用操作全自動(dòng)微生物對(duì)于負(fù)責(zé)高致病性對(duì)于使用操作全自動(dòng)微生物鑒定儀、核酸測(cè)序儀等大型精明儀器設(shè)備的人鑒定儀、核酸測(cè)序儀等大型精明儀器設(shè)備的人員和菌毒種、化學(xué)危險(xiǎn)品管理人員等，單位應(yīng)員和菌毒種、化學(xué)危險(xiǎn)品管理人員等，單位應(yīng)組織培訓(xùn)考核，并授權(quán)。組織培訓(xùn)考核，并授權(quán)。技能確認(rèn)與培訓(xùn)效果評(píng)價(jià)方法n通過(guò)開(kāi)展微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控通過(guò)開(kāi)展微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制、使用標(biāo)準(zhǔn)菌株或參加能力驗(yàn)證、實(shí)制、使用標(biāo)準(zhǔn)菌株或參加能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)活動(dòng)等方式，評(píng)估微生物檢驗(yàn)室間比對(duì)活動(dòng)等方式，評(píng)估微生物檢驗(yàn)人員的技能掌

21、握程度，客觀評(píng)價(jià)人員驗(yàn)人員的技能掌握程度，客觀評(píng)價(jià)人員培訓(xùn)的有效性。培訓(xùn)的有效性。n當(dāng)開(kāi)展新項(xiàng)目或進(jìn)行非經(jīng)常開(kāi)展項(xiàng)目或當(dāng)開(kāi)展新項(xiàng)目或進(jìn)行非經(jīng)常開(kāi)展項(xiàng)目或技術(shù)時(shí)，在檢測(cè)前應(yīng)對(duì)微生物檢測(cè)人員技術(shù)時(shí)，在檢測(cè)前應(yīng)對(duì)微生物檢測(cè)人員的操作技能再作確認(rèn)。的操作技能再作確認(rèn)。3.健康監(jiān)護(hù) n從事傳染病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的人員，特別是開(kāi)展高致從事傳染病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的人員，特別是開(kāi)展高致病性病原檢驗(yàn)和研究工作的人員，需建立個(gè)人健病性病原檢驗(yàn)和研究工作的人員，需建立個(gè)人健康檔案，保留上崗前個(gè)人特定空白血清；康檔案，保留上崗前個(gè)人特定空白血清；n每年進(jìn)行健康檢查和與從事特定病原檢驗(yàn)工作的每年進(jìn)行健康檢查和與從事特定病原檢驗(yàn)工作

22、的針對(duì)性疾病檢查，必要時(shí)預(yù)防性接種適用疫苗；針對(duì)性疾病檢查，必要時(shí)預(yù)防性接種適用疫苗；n建立實(shí)驗(yàn)室暴露或感染的處理工作程序和感染應(yīng)建立實(shí)驗(yàn)室暴露或感染的處理工作程序和感染應(yīng)急就醫(yī)等預(yù)案，確定定點(diǎn)醫(yī)院急就醫(yī)等預(yù)案，確定定點(diǎn)醫(yī)院。設(shè)施和環(huán)境條件設(shè)施和環(huán)境條件n衛(wèi)生微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有進(jìn)行微生物檢測(cè)所需的衛(wèi)生微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有進(jìn)行微生物檢測(cè)所需的適宜、充分的設(shè)施條件。適宜、充分的設(shè)施條件。n應(yīng)有具單向流的各功能區(qū)，包括：應(yīng)有具單向流的各功能區(qū)，包括：凈化室凈化室（局部（局部百級(jí)）（無(wú)菌室）、半無(wú)菌緩沖區(qū)、二級(jí)生物安百級(jí)）（無(wú)菌室）、半無(wú)菌緩沖區(qū)、二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室、微生物培養(yǎng)室、高壓滅菌與洗滌烘干全實(shí)

23、驗(yàn)室、微生物培養(yǎng)室、高壓滅菌與洗滌烘干室、培養(yǎng)基配制間以及耗材試劑儲(chǔ)藏室等。室、培養(yǎng)基配制間以及耗材試劑儲(chǔ)藏室等。n應(yīng)設(shè)計(jì)工作流保證整個(gè)微生物實(shí)驗(yàn)區(qū)的布局符合應(yīng)設(shè)計(jì)工作流保證整個(gè)微生物實(shí)驗(yàn)區(qū)的布局符合要求，明顯標(biāo)識(shí)各功能區(qū)。要求，明顯標(biāo)識(shí)各功能區(qū)。 續(xù)n病原微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有具有凈化室、二級(jí)以及病原微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有具有凈化室、二級(jí)以及二級(jí)以上級(jí)別生物安全實(shí)驗(yàn)室。二級(jí)以上級(jí)別生物安全實(shí)驗(yàn)室。n實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)應(yīng)以實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)應(yīng)以“無(wú)回路無(wú)回路”為宗旨；為宗旨；n整個(gè)試驗(yàn)區(qū)有防鼠、防蚊蟲或其他昆蟲進(jìn)入的整個(gè)試驗(yàn)區(qū)有防鼠、防蚊蟲或其他昆蟲進(jìn)入的設(shè)施（符合設(shè)施（符合GB/T 19489-2008規(guī)定）。規(guī)定

24、）。 續(xù)n一般設(shè)有：常規(guī)病原微生物檢驗(yàn)區(qū)、實(shí)一般設(shè)有：常規(guī)病原微生物檢驗(yàn)區(qū)、實(shí)驗(yàn)輔助區(qū)、驗(yàn)輔助區(qū)、PCR或分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)區(qū)、或分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)區(qū)、專門重點(diǎn)疾病實(shí)驗(yàn)區(qū)（專門重點(diǎn)疾病實(shí)驗(yàn)區(qū)（HIV實(shí)驗(yàn)室等）實(shí)驗(yàn)室等）、BSL-3試驗(yàn)區(qū)（有另外規(guī)定試驗(yàn)區(qū)（有另外規(guī)定 略）等。略）等?？刂拼胧﹏在病原微生物各試驗(yàn)區(qū)必須設(shè)置出入控在病原微生物各試驗(yàn)區(qū)必須設(shè)置出入控制設(shè)施，如門禁系統(tǒng)或其他物理隔離裝制設(shè)施，如門禁系統(tǒng)或其他物理隔離裝置或警戒線；置或警戒線；n在控制處設(shè)明顯的警示標(biāo)識(shí)，如生物安在控制處設(shè)明顯的警示標(biāo)識(shí)，如生物安全標(biāo)識(shí)、進(jìn)入控制提示語(yǔ)等；全標(biāo)識(shí)、進(jìn)入控制提示語(yǔ)等；n在控制進(jìn)入處設(shè)供參觀者使用的個(gè)

25、人防在控制進(jìn)入處設(shè)供參觀者使用的個(gè)人防護(hù)用品和記錄簿。護(hù)用品和記錄簿。環(huán)境監(jiān)測(cè)n實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定科學(xué)合理的環(huán)境監(jiān)測(cè)操作規(guī)程。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定科學(xué)合理的環(huán)境監(jiān)測(cè)操作規(guī)程。n潔凈區(qū)域應(yīng)檢測(cè)潔凈度狀態(tài)如：沉降菌、浮游潔凈區(qū)域應(yīng)檢測(cè)潔凈度狀態(tài)如：沉降菌、浮游菌、塵埃粒子數(shù)；設(shè)定可接受的背景菌落數(shù)量菌、塵埃粒子數(shù)；設(shè)定可接受的背景菌落數(shù)量，并且有文件化的規(guī)定來(lái)處理背景菌落總數(shù)超，并且有文件化的規(guī)定來(lái)處理背景菌落總數(shù)超標(biāo)情況。標(biāo)情況。n定期更換凈化室初效、中效和高效過(guò)濾器。定期更換凈化室初效、中效和高效過(guò)濾器。 續(xù)n生物安全柜應(yīng)監(jiān)測(cè)風(fēng)速、壓力、氣流方生物安全柜應(yīng)監(jiān)測(cè)風(fēng)速、壓力、氣流方向等指標(biāo)，必要時(shí)檢測(cè)箱體內(nèi)粒子

26、數(shù)和向等指標(biāo)，必要時(shí)檢測(cè)箱體內(nèi)粒子數(shù)和無(wú)菌檢測(cè)；無(wú)菌檢測(cè)；n緩沖間和無(wú)菌間均有紫外線殺菌燈（緩沖間和無(wú)菌間均有紫外線殺菌燈（2-2.5W/m3），應(yīng)定期檢查輻射強(qiáng)度，使），應(yīng)定期檢查輻射強(qiáng)度，使照射操作臺(tái)達(dá)照射操作臺(tái)達(dá)40 W/cm2。 續(xù)n傳統(tǒng)無(wú)菌操作室應(yīng)按要求進(jìn)行使用前后傳統(tǒng)無(wú)菌操作室應(yīng)按要求進(jìn)行使用前后的無(wú)菌處理。的無(wú)菌處理。n不符合要求的紫外燈、消毒液應(yīng)及時(shí)更不符合要求的紫外燈、消毒液應(yīng)及時(shí)更換。換。 n記錄與數(shù)據(jù)分析應(yīng)傾向于能夠確定污染記錄與數(shù)據(jù)分析應(yīng)傾向于能夠確定污染水平。水平。衛(wèi)生要求n應(yīng)盡可能減少在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行文件處理；應(yīng)盡可能減少在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行文件處理；n禁止把植物和個(gè)人物品帶入

27、實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。禁止把植物和個(gè)人物品帶入實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。n根據(jù)所檢測(cè)的微生物危害等級(jí)的不同，在實(shí)驗(yàn)根據(jù)所檢測(cè)的微生物危害等級(jí)的不同，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)穿著相應(yīng)的防護(hù)服，離開(kāi)工作區(qū)域時(shí)必須室內(nèi)穿著相應(yīng)的防護(hù)服，離開(kāi)工作區(qū)域時(shí)必須脫下。脫下。n這對(duì)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室和危害等級(jí)這對(duì)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室和危害等級(jí)II級(jí)以上實(shí)級(jí)以上實(shí)驗(yàn)室尤其重要。驗(yàn)室尤其重要。n應(yīng)準(zhǔn)備足夠數(shù)量的洗手設(shè)施和急救材料。應(yīng)準(zhǔn)備足夠數(shù)量的洗手設(shè)施和急救材料。檢測(cè)方法的確認(rèn)檢測(cè)方法的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)n非標(biāo)準(zhǔn)方法非標(biāo)準(zhǔn)方法n實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)（制定）的方法實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)（制定）的方法n超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法n擴(kuò)充和

28、修改過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行確認(rèn)；擴(kuò)充和修改過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行確認(rèn)；n在采用新的方法進(jìn)行檢測(cè)前，對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證在采用新的方法進(jìn)行檢測(cè)前，對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證n標(biāo)準(zhǔn)更后的方法的技術(shù)能力的確認(rèn)。標(biāo)準(zhǔn)更后的方法的技術(shù)能力的確認(rèn)。確認(rèn)方法n通過(guò)使用自然污染產(chǎn)品或人工污染預(yù)定微生物通過(guò)使用自然污染產(chǎn)品或人工污染預(yù)定微生物的樣品來(lái)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)方法的確認(rèn)。的樣品來(lái)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)方法的確認(rèn)。n向基質(zhì)中添加預(yù)定微生物能反映出實(shí)際檢測(cè)狀向基質(zhì)中添加預(yù)定微生物能反映出實(shí)際檢測(cè)狀況，這是簡(jiǎn)單模擬自然污染的狀態(tài)，是目前唯況，這是簡(jiǎn)單模擬自然污染的狀態(tài)，是目前唯一的最佳方法。一的最佳方法。n需要確認(rèn)的范圍取決于所用方法及其預(yù)期應(yīng)用需要確認(rèn)的范圍取

29、決于所用方法及其預(yù)期應(yīng)用范圍。范圍。驗(yàn)證指標(biāo)驗(yàn)證指標(biāo)對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)（制定）的方法、超對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)（制定）的方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過(guò)出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證指標(biāo)：的標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證指標(biāo)：定性微生物檢測(cè)方法定性微生物檢測(cè)方法n應(yīng)確認(rèn)其特異性、陽(yáng)性偏差、陰性偏差、檢測(cè)應(yīng)確認(rèn)其特異性、陽(yáng)性偏差、陰性偏差、檢測(cè)限、培養(yǎng)基影響、重復(fù)性和再現(xiàn)性。限、培養(yǎng)基影響、重復(fù)性和再現(xiàn)性。 續(xù)n定量微生物檢測(cè)方法定量微生物檢測(cè)方法n應(yīng)確認(rèn)其特異性、靈敏度、陽(yáng)性偏差、陰性偏應(yīng)確認(rèn)其特異性、靈敏度、陽(yáng)性偏差、陰性偏差、重復(fù)性、再現(xiàn)性以及規(guī)定的可變范圍內(nèi)

30、的差、重復(fù)性、再現(xiàn)性以及規(guī)定的可變范圍內(nèi)的檢測(cè)限。檢測(cè)限。n在檢測(cè)不同種類的樣品時(shí)，應(yīng)考慮不同培養(yǎng)基在檢測(cè)不同種類的樣品時(shí)，應(yīng)考慮不同培養(yǎng)基的差異。的差異。n應(yīng)使用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法評(píng)估檢測(cè)結(jié)果。應(yīng)使用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法評(píng)估檢測(cè)結(jié)果。證實(shí)的方法與指標(biāo)證實(shí)的方法與指標(biāo)適用于新方法與適用于新方法與標(biāo)準(zhǔn)變更標(biāo)準(zhǔn)變更（只年號(hào)變更除外只年號(hào)變更除外）的）的方法確認(rèn)方法確認(rèn)n向樣品中添加指示菌來(lái)簡(jiǎn)單模擬自然污染狀態(tài)向樣品中添加指示菌來(lái)簡(jiǎn)單模擬自然污染狀態(tài)，按標(biāo)準(zhǔn)方法操作。，按標(biāo)準(zhǔn)方法操作。n定性微生物檢測(cè)方法：測(cè)定檢測(cè)限、進(jìn)行生化定性微生物檢測(cè)方法：測(cè)定檢測(cè)限、進(jìn)行生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)。試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)。n 定量

31、微生物檢測(cè)方法：測(cè)定指示菌的回收率定量微生物檢測(cè)方法：測(cè)定指示菌的回收率；結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：指示菌的回收率應(yīng)；結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：指示菌的回收率應(yīng)不低于不低于70% 70% 。設(shè)備與設(shè)備與測(cè)量的溯源性n微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂并實(shí)施設(shè)備維護(hù)、校準(zhǔn)和微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂并實(shí)施設(shè)備維護(hù)、校準(zhǔn)和性能驗(yàn)證規(guī)程性能驗(yàn)證規(guī)程n對(duì)儀器設(shè)備的校準(zhǔn)和對(duì)儀器設(shè)備的校準(zhǔn)和/或檢定（驗(yàn)證）、確認(rèn)或檢定（驗(yàn)證）、確認(rèn)的編制總體要求的編制總體要求 續(xù) 微生物檢測(cè)涉及的需定期檢定的儀器設(shè)備有：微生物檢測(cè)涉及的需定期檢定的儀器設(shè)備有：天平、砝碼、天平、砝碼、pH計(jì)、分光光度計(jì)、溫度和壓計(jì)、分光光度計(jì)、溫度和壓力儀表、消毒壓力容器、滅菌柜安全閥

32、、游標(biāo)力儀表、消毒壓力容器、滅菌柜安全閥、游標(biāo)卡尺等。卡尺等。n計(jì)量器具執(zhí)行計(jì)量器具執(zhí)行中華人民共和國(guó)強(qiáng)制檢定的工中華人民共和國(guó)強(qiáng)制檢定的工作計(jì)量器具管理辦法作計(jì)量器具管理辦法規(guī)定，規(guī)定，編制年度檢定計(jì)編制年度檢定計(jì)劃，依法送檢劃，依法送檢 使用與維護(hù)記錄n實(shí)驗(yàn)室在儀器設(shè)備完成相應(yīng)的檢定、校準(zhǔn)、驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室在儀器設(shè)備完成相應(yīng)的檢定、校準(zhǔn)、驗(yàn)證、確認(rèn)其性能，并形成相應(yīng)的操作、維護(hù)和證、確認(rèn)其性能，并形成相應(yīng)的操作、維護(hù)和保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程后方可正式使用，使用要保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程后方可正式使用，使用要有記錄。有記錄。n為保證設(shè)備處于良好工作狀態(tài)，應(yīng)定期維護(hù)和為保證設(shè)備處于良好工作狀態(tài)，應(yīng)定期維護(hù)和期間

33、核查，并保存相關(guān)記錄。期間核查，并保存相關(guān)記錄。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)菌株n標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)提供了測(cè)量中基標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)提供了測(cè)量中基本的可溯源性，其可用來(lái)：本的可溯源性，其可用來(lái)：na) 證明結(jié)果的準(zhǔn)確性；證明結(jié)果的準(zhǔn)確性；nb) 校準(zhǔn)設(shè)備；校準(zhǔn)設(shè)備；nc) 監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室運(yùn)轉(zhuǎn)；監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室運(yùn)轉(zhuǎn)；nd) 驗(yàn)證試驗(yàn)方法；驗(yàn)證試驗(yàn)方法；ne) 比較試驗(yàn)方法。比較試驗(yàn)方法。標(biāo)準(zhǔn)菌株標(biāo)準(zhǔn)菌株n微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)來(lái)自認(rèn)可的國(guó)微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)來(lái)自認(rèn)可的國(guó)內(nèi)或國(guó)外菌種收藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或內(nèi)或國(guó)外菌種收藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的商使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)

34、特性等效的商業(yè)派生菌株。業(yè)派生菌株。 續(xù)n標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株和工作菌株從標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株和工作菌株從儲(chǔ)備菌株傳代培養(yǎng)次數(shù)不得超過(guò)儲(chǔ)備菌株傳代培養(yǎng)次數(shù)不得超過(guò)5次次n除非標(biāo)準(zhǔn)方法中要求并規(guī)定，或?qū)嶒?yàn)室除非標(biāo)準(zhǔn)方法中要求并規(guī)定，或?qū)嶒?yàn)室能夠提供文件化證據(jù)證明其相關(guān)特性沒(méi)能夠提供文件化證據(jù)證明其相關(guān)特性沒(méi)有改變。有改變。n工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株。標(biāo)準(zhǔn)菌株工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株。標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。抽（采）樣采樣與樣本運(yùn)輸采樣與樣本運(yùn)輸n針對(duì)不同疾病和檢驗(yàn)?zāi)康闹朴喸敿?xì)的采樣計(jì)劃和針對(duì)不同疾病和檢驗(yàn)?zāi)康闹朴喸敿?xì)的采樣計(jì)劃和方案，包括采樣時(shí)間、對(duì)象、樣本種類、方法、方案，包括采樣時(shí)間、對(duì)象、樣本種類、方法、標(biāo)識(shí)、包裝運(yùn)輸、實(shí)施人員等，準(zhǔn)備相關(guān)記錄表標(biāo)識(shí)、包裝運(yùn)輸、實(shí)施人員等，準(zhǔn)備相關(guān)記錄表n準(zhǔn)備采樣器械和試劑準(zhǔn)備采樣器械和試劑n實(shí)施現(xiàn)場(chǎng)樣本采集與記錄實(shí)施現(xiàn)場(chǎng)樣本采集與記錄n樣本保存與運(yùn)輸樣本保存與運(yùn)輸n樣本交接等。樣本交接等。樣品接收n樣品接收登記（樣品名稱、送檢單位、樣品接收登記（樣品名稱、送檢單位、數(shù)量、日期、