ABO血型鑒定的方法步驟與注意事項

1、ABO血型鑒定的方法步驟與注意事項一. 原理根據紅細胞上有或無A抗原或B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及0型4種?？衫眉t細胞凝集試驗，通過正、反定型準確鑒 定ABC血 型。所謂正定型，是用已知抗一 A和抗一B分型血清來測定 紅細胞上有無相 應的A抗原或B抗原；所謂反定型，是用已知A細胞 和B細胞來測定血清中 有無相應的抗一 A或抗一 B。二. 試劑和材料1. 抗一 A （B型血）、抗一 B （A型血）及抗一 A十B （0型血）分型血清（制備方法見本節(jié)附注）2. 5%A B及0型試劑紅細胞鹽水懸液，制備方法見本節(jié)附注；3. 受檢者血清；4. 受檢者5%紅細胞鹽水懸液，制備方法見本節(jié)附注。三

2、. 方法1 試管法（1）取潔凈小試管3支，分別標明抗一 A、抗一 B和抗一 A十B，用 滴管 分別加抗一 /抗一 B和抗一 A十Bo分型血清各I滴于試管底部，再以滴管 分別加入受檢者5%紅細胞鹽水懸液1滴，混和。（2）另取潔凈小試管3支，分別標明A、B和0細胞。用滴管分別加 入 受檢者血清I滴于試管底部，再分別以滴管加入/ B和0型5%試劑紅細胞 懸液I滴，混和。(3) 立即以 1000r / min 離心 Imino(4) 將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細胞浮起，先以內眼觀察有 無凝集 (或溶血)現(xiàn)象。如內眼不見凝集，應將反應物倒于玻片上，再 以低倍鏡檢t旦O(5) 觀察結果時既要看有無凝集

3、，更要注意凝集強度，此有助于A、E亞型、類E或cisAB的發(fā)現(xiàn)。(6)凝集強度判斷標準凝集強度判斷標準4+紅細胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3+紅細胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2+紅細胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細胞。1 +肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細胞+-鏡下可見數(shù)個紅細胞凝集在起，周圍有很多游離紅細胞MF混合凝集外觀(mixed field)是指鏡下可見少數(shù)紅細胞凝 集，而極大多數(shù)紅細胞仍呈分散分布。表示陰性，鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布。2. 玻片法(1) 取清潔玻片1張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標明抗-A、抗-B和抗-A十B,分別用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分

4、型 血清I滴 于標明的方格內，再各加受檢者2%紅細胞懸液1滴，混和。(2) 另取潔凈玻片一張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標明A細胞、B細胞和0細胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管 滴加A、B和0型試劑紅細胞懸液1滴（3）將玻片（或白瓷板）不斷輕輕轉動，使血清與細胞充分混勻，連 續(xù) 約15min,以肉眼觀察有無凝集（或溶血）反應。如以玻片作試驗時，也可用 低倍鏡觀察結果。四. 結果判定ABO血型正反定型結果分型血清+受檢者紅細胞受檢者血清+試劑紅細胞受檢者血型抗-A抗-B抗-ABA細胞B細胞0細胞+A+B+0+AB注；“十”為凝集；“-”為不凝集。五附注及注意事項1. 分型血清質量

5、性能符合要求，用畢后應放置冰箱保存，以免細菌污 染。2. 試劑紅細胞以3個健康者同型新鮮紅細胞混和，用生理鹽水洗滌1 次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原。3. 試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。4. 操作方法應按規(guī)定，一般應先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便容 易核實是否漏加血清5. 按理IgM抗-A和抗-B與相應紅細胞的反應溫度以4C為最強,但為了 防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫（20 -240內進行試驗，37 C可 使反應減弱。6. 離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰 性結果。7. 觀察時應注意紅細胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū) 別。

6、8. 判斷結果后應仔細核對、記錄，避免筆誤。正反定型結果不一致的原 因六.常見有技術性問題或紅細胞和血清本身的問題1. 分型血清效價太低、親和力不強。如抗一A血清效價不高，可將A亞 型誤定為0型，AB型誤定為B型。2. 紅細胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當，使反應不明顯，誤判 為陰性反應。3. 受檢者紅細胞上抗原位點過少（如亞型）或抗原性減弱（見于白血 病或惡性腫瘤：以及類B或cisAB等。4. 受檢者血清中蛋白紊亂（高球蛋白血癥），或實驗時溫度過高， 常引起紅細胞呈緡錢狀排列。5. 受檢者血清中缺乏應有的抗-A及或抗一 B抗體，如丙種球蛋白缺乏 癥。6. 各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為

7、不凝集。部分溶血時，可溶性血 型物質中和了相應的抗體7. 由細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不 符的原 因。8. 血清中有意外抗體，如自身抗T ,常引起干擾。9. 老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結果不一致的解決辦法如 發(fā)現(xiàn)ABO正反定型結果不一致，先要重復作試驗1次。嚴格執(zhí) 行操作規(guī)程， 使用質量合格的試劑以及細心觀察和解釋試驗結果，就可解決明顯的問 題，對一些疑難問題月必須進一步研究。檢查步驟1.另從受檢者采取1份新鮮血液標本這樣可以糾正因污染或搞錯樣本造 成的不符合。2 .將紅細胞洗滌數(shù)次，配成5%鹽水細胞懸液，用抗一 A、抗一 B抗一A1,抗一 A十B及抗H做試

8、驗可以得到其它有用的信息。3. 對受檢紅細胞作直接抗球蛋白試驗，如結果呈陽性，表示紅細 胞已被 抗體致敏。4 用Al、Az、B、0紅細胞及自身紅細胞檢查受檢血清。如果懷疑 是抗一I,用0型（或AEO相合的）臍血紅細胞檢查。5. 如果試驗結果未見凝集，應將細胞及血清試驗至少在室溫和4C放置 30min,用顯微鏡檢查核實。6. 如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細胞與抗一A或抗一E血清作吸收及放散試驗以及受檢者唾液作A B、H血型物質測定。后者只對80% HAB分泌型的人有用。7. 如試驗結果紅細胞呈絹錢狀排列，加等滲鹽水1滴，混和，往 往可使絹 錢現(xiàn)象消失。應注意不應先加鹽水1滴于受檢者血清中而后 和紅細胞作試 驗，以免使血清中抗體被稀釋。8如受檢者為A型血而疑為有類E抗原時，可用下列方法進行鑒別：(1) 觀察細胞與抗一 A及抗一 B的凝集強度，與抗一 A的反應要比與 抗一B的反應強。這種區(qū)別用玻片法作試驗更為明顯。(2) 用受檢者紅細胞與自身血清作試驗，血清中的抗一B不凝集自身紅細 胞上的類E抗原。(3) 檢查唾液中是否有A、B物質，如果是分泌型，可檢岀A物質而物質。(4) 核對患者的診斷，類B抗原的形成與結腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感染有關。9. 如發(fā)現(xiàn)多凝集現(xiàn)象，應考