VEGF在兒童血管瘤與血管畸形中的表達及意義

1、VEGF在兒童血管瘤與血管畸形中的表達及意義【摘要】 目的：研究血管內皮生長因子(VEGF)在兒童血管瘤與血管畸形中的表達，為臨床辨別血管瘤及血管畸形、指導血管瘤的治療及檢驗治療效果提供客觀有效的指標。方法：采用免疫組化SP法檢測VEGF在血管瘤不同分期、血管畸形、正常血管中的表達情況。結果：VEGF在血管瘤中有高表達;在增殖期的表達率高于消退早期和消退晚期(P<0.05)。在血管畸形及正常血管中均未見陽性表達。結論：VEGF在血管瘤中有高表達，且與其分期明顯有關。 【關鍵詞】 血管瘤;血管畸形;VEGF;免疫組織化學AbstractObjective：Tostudythedif

2、ferentexpressionofvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)inhemangiomaandvascularmalformationandprovideanefficaciousindexfordistinguishinghemangiomafromvascularmalformation，andforguidingthetreatmentorcheckingupthetreatmenteffectofhemangioma.Method：ImmunohistochemistrySPmethodwasusedtotesttheexpressiono

3、fVEGFateachstageofhemangioma，invascularmalformationandnormalbloodvessels.Results：AnintensiveexpressionofVEGFwasfoundinhemangiomawithahigherexpressiverateattheproliferativestagethanattheearlierorlaterparacmasticstage(P<0.05).NoexpressionofVEGFwasfoundinnormalbloodvesselsandvascularmalformation

4、.Conclusion：ThehigherexpressionofVEGFfoundinhemangiomahasobviouscorrelationwithdifferentstagesofthedisease.Keywordshemangioma;vascularmalformation;VEGF;immunohistochemistry血管瘤是一種血管增生性疾病，可導致多種嚴重的并發(fā)癥，甚至可以危及生命。1982年，Mulliken和Glowacki提出了新的分類標準，認為傳統(tǒng)分類的“血管瘤”實為“先天性血管病變”，而其又可分為血管瘤和血管畸形兩大類1。血管內皮生長因子(vascular

5、endothelialgrowthfactor，VEGF)作為血管內皮細胞特異性生長因子，特異性地作用于血管內皮細胞，參與血管瘤的發(fā)生和增殖，對于平滑肌細胞和其它類型細胞則無作用2。為了研究VEGF在血管瘤中的作用，我們利用免疫組織化學方法測定VEGF在血管瘤及血管畸形中的表達情況，進而探討其在血管瘤增殖、退化過程中的作用及意義。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 研究對象 選取中國醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)院和解放軍二二醫(yī)院2000至2005年共58例手術切除標本，其中男31例，女27例，患兒年齡為1個月至13歲，平均5.5歲。按照Mulliken標準1，將標本分為血管瘤及血管畸形，并將血管瘤標本

6、分為增殖期、消退早期和消退晚期。血管瘤標本共49例，其中增殖期31例，消退早期11例，消退晚期7例;血管畸形為9例，均取自皮膚。另取5例含有正常血管的皮膚標本作為對照。全部標本為10%甲醛固定，石蠟包埋。1.1.2 主要試劑 鼠抗人單克隆抗VEGF抗體、SP超敏免疫組織化學試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒、EDTA均購于福州邁新生物技術公司。1.2 實驗方法 免疫組織化學方法檢測采用鏈霉菌素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法(即SP法)。4m厚度連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟入水，一抗為鼠抗人單克隆抗VEGF抗體(克隆號JH121)，所有操作按照SP試劑盒說明進行。抗原修復采用EDTA抗原修復液熱浴修復。D

7、AB染色，蘇木素復染。同時用已知陽性片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。1.3 結果判定 每張切片隨機選取5個視野，每個視野計數100個細胞，計算陽性細胞的百分比。以血管內皮細胞胞漿出現棕黃色顆粒為陽性表達。按著色細胞百分數記分，小于20%為0分;20%50%為1分;大于50%為2分。按著色強度記分，無著色為0分;淺棕色為1分;深棕色為2分。將著色細胞百分數記分與著色強度記分相乘，總記分0分為陰性(-);12分為弱陽性(+);4分為強陽性(+)。1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSSforwindows11.5統(tǒng)計分析軟件進行分析，對VEGF在血管瘤不同分期中及不同年齡組中的表達采用卡方檢驗和

8、確切概率法。P<0.05有統(tǒng)計學意義。2 結果VEGF定位于血管內皮細胞胞漿，呈棕黃色顆粒。在31例增殖期血管瘤標本中有30例VEGF表達呈陽性，陽性表達率為96.77%;在11例消退早期血管瘤標本中有7例VEGF表達呈陽性，陽性表達率為63.64%;在7例消退晚期血管瘤標本中有4例VEGF表達呈陽性，陽性率為57.14%。在9例血管畸形標本及5例正常血管標本中均未見陽性表達。對VEGF的表達進行卡方檢驗，結果發(fā)現在血管瘤的不同分期中其表達率存在顯著性差異(表1，P<0.05)。表1 VEGF在血管瘤不同時期中的表達3 討論Fam等3認為血管形成包括細胞外基質的蛋白

9、分解，內皮細胞移行和增生，細胞外基質的產生，血管狀結構的形成和管道再通。血管瘤是血管生成異常性疾病，血管生成不受控制是其增殖的主要原因4。VEGF可以對血管生成的各步驟產生影響，從而調節(jié)血管的生成。VEGF是存在于內皮細胞的特異性生長因子，對內皮細胞有極強的促有絲分裂作用，而對其它細胞無此作用5，6。在腫瘤、缺血缺氧等情況下，VEGF及其受體呈現高表達，而VEGF不足時會導致血管腔閉合、血管退化7。在對HE染色的血管瘤及血管畸形標本進行分類時觀察到：在增生期的血管瘤標本中可見血管叢的內皮細胞增生活躍，細胞肥大，界限不清，常聚集成團，管腔不規(guī)則，甚至閉塞。間質內纖維組織很少并有較多的肥大細胞。而

10、從消退早期到消退晚期，則血管內皮細胞逐漸變扁平，內皮細胞數目逐漸減少，管腔明顯可見。同時血管間距逐漸增大，血管間結締組織逐漸增多，并且出現較多脂肪細胞。在血管畸形的標本中發(fā)現血管密集，管腔擴張明顯，且其內皮細胞與正常的血管內皮細胞無差別，無異常增生現象。免疫組化結果顯示：VEGF在血管瘤增殖期、消退早期、消退晚期的表達陽性率是依次遞減的，而在血管畸形標本及正常血管標本中均未見陽性表達。目前認為血管內皮細胞的增殖受多種因素的調節(jié)，而VEGF正是其中之一。VEGF的作用機制包括：是內皮細胞特異性有絲分裂原，在體外可促進內皮細胞生長，體內可誘導血管發(fā)生?？梢蕴岣哐芡ㄍ感浴？梢愿淖儼饣|，使其更有

11、利于血管的生長。許多生長因子如轉移生長因子(TGF)刺激血管新生的作用是通過誘導VEGF的表達而實現的8，9。我們的實驗結果也證明了VEGF在促血管瘤發(fā)生中的重要作用?！緟⒖嘉墨I】 1MullikenJB，GlowackiJ.Hemangiomasandvascularmalformationsininfantsandchildren：AclassificationbasedonendothelialcharacteristicsJ.PlastReconstSurg，1982，69：412.2袁新初，周乾毅.轉化生長因子1在毛細血管瘤組織中的表達J.武漢大學學報(醫(yī)學版)，2002，23(3)

12、：213-214.3FamNP，VermaS.ClinicalguidetoangiogenesisJ.Circulation，2003，108(21)：2613-2618.4FolkmanJ.ClinicalapplicationsofresearchonangiogenesisJ.NEnglJMed，1995，333(26)：1757-1763.5TokunagaT，OshikaY，AbeY，etal.Vascularendothelialgrowthfactor(VEGF)mRNAisoformexpressionpatterniscorrelatedwithlivermetastasi

13、sandpoorprognosisincoloncancerJ.BrJCancer，1998，77(6)：998.6AlvarezArroyoMV，CarameloC，AngelesCastillaM，etal.RoleofvascularendothelialgrowthfactorintheresponsetovesselinjuryJ.KidneyIntSuppl，1998，54(68)：7.7易成剛，郭樹忠.血管新生的機制及在整形外科領域中的研究進展J.實用美容整形外科雜志，2004，15：315-317.8NeufieldG，TesslerS，Gitay2GohenH，etal.Vascularendothelia