化學(xué)抓呢也 殼聚糖中蛋白質(zhì)雜質(zhì)含量的測定》

1、中文題目：殼聚糖中蛋白質(zhì)雜質(zhì)含量的測定外文題目：Determination of protein impurity content in chitosan宋體四號左頂格畢業(yè)設(shè)計（論文）共19頁（其中：外文文獻及譯文19頁）圖紙共0張完成日期20××年×月答辯日期20××年×月宋體四號居中摘要因為殼聚糖這種物質(zhì)有毒、可以自然解體，所以這個物質(zhì)已經(jīng)被應(yīng)用到了醫(yī)學(xué)的每一個地方。這種物質(zhì)是自然形成的，所以它的里面有很多的雜志，這種物質(zhì)里面除了有蛋白質(zhì)還有一些不好的成分。要是只用比較單一的辦法解決，在手術(shù)中使用，容易導(dǎo)致發(fā)炎，還可能不容和，這樣

2、的話手術(shù)就失敗了。所以這種物質(zhì)里面的成分純不純直接影響這種物質(zhì)的適用范圍。要弄好這種物質(zhì)的質(zhì)量，還要能夠有技術(shù)將這種物質(zhì)變純，要確保這種物質(zhì)在醫(yī)學(xué)手術(shù)當(dāng)中能夠使用。這篇文章主要寫的是檢測這種物質(zhì)里面的雜質(zhì)的方法，要想制作這種高純度的物質(zhì)就要做好檢測的準(zhǔn)備。這篇文章?lián)榻B了四種檢測的方法，并且四種方法相互比較，并找出最好的方法作為檢測這種物質(zhì)的主要檢測辦法。四種實驗比較最后找到了最快速的方法檢測這種物質(zhì)的雜質(zhì)。關(guān)鍵詞：殼聚糖；監(jiān)測；蛋白質(zhì)AbstractBecausechitosanistoxicandcannaturallydisintegrate,thissubstancehasbeenap

3、pliedtoeverypartofmedicine.Thissubstanceisnaturallyformed,sotherearemanymagazinesinit,whichcontainsomebadingredientsinadditiontoprotein.Ifitisonlysolvedbyarelativelysimplemethod,itcaneasilyleadtoinflammationintheoperation,anditmaynotbeacceptable.Thentheoperationwillfail.Therefore,thepureimpurenessof

4、theingredientsinthissubstancedirectlyaffectsthescopeofapplicationofthissubstance.Togetthequalityofthissubstance,itisnecessarytohavethetechnologytopurifythesubstanceandtoensurethatitcanbeusedinmedicalprocedures.Thisarticleismainlyaboutthemethodofdetectingimpuritiesinthissubstance.Tomakesuchahigh-puri

5、tysubstance,itisnecessarytopreparefortesting.Thisarticleisbasedonfourmethodsofdetection,andthefourmethodsarecomparedwitheachother,andthebestmethodisfoundasthemaindetectionmethodfordetectingthissubstance.Fourexperimentalcomparisonsfinallyfoundthefastestwaytodetectimpuritiesinthismaterial.Keywords:Chi

6、tosan;monitoring;proteinII(羅馬數(shù)字編頁)目錄1前言12殼聚糖簡介2 2.1殼聚糖一般的變化性質(zhì)22.1.1脫乙酰度22.1.2分子量32.1.3殼聚糖的明顯特點3 2.2殼聚糖根據(jù)其特點的使用4 2.2.1在軟骨組織中的應(yīng)用4 2.2.2在骨組織中的使用5 2.2.3在皮膚上面的作用5 2.2.4在其他組織工程中的應(yīng)用73殼聚糖中蛋白質(zhì)的檢測方法73.1實驗材料7 3.2實驗儀器8 3.3殼聚糖中蛋白質(zhì)的檢測方法83.3.1考馬斯亮藍法83.3.2氨基酸分析法93.3.3二喹啉二羧酸（）法103.3.4元素分析法113.3.5其他檢測方法11 3.4結(jié)果與討論114

7、總結(jié)12致謝12參考文獻131前言甲殼素是這個世界上第二個被找到的天然物質(zhì)，這種物質(zhì)里面有非常多的氨基多糖，在軟軟的動物、有胳膊腿的動物、圈型的動物和真菌這些動物的身體里面都會有這種物質(zhì)。殼聚糖是甲殼素在某種條件下下經(jīng)過乙?；磻?yīng)再減掉一部分的乙酰氨基這樣就可以得到了，由氨基脫氧葡萄糖通過，糖苷鍵連接可以變成多糖的物質(zhì)。這樣來說的話，減少了一半的乙酰氨基的甲殼素就是現(xiàn)在叫的殼聚糖。殼聚糖的結(jié)構(gòu)式2殼聚糖簡介2.1殼聚糖一般的變化性質(zhì)殼聚糖這種物質(zhì)里面有非常厲害的分子內(nèi)和分子間氫鍵，所以他的里面會有一定程度的結(jié)晶。PKA差不多在6.6上下，不能和水也不能和帶堿的水在一起。當(dāng)PH值比6.5小的時侯

8、，因為H+這東西在，殼聚糖里面的分子中的能夠變成，把以前的東西都給破壞了，這樣就能在水里溶解，這種物質(zhì)可以融入硝酸鹽，還有很多有機酸可以溶里面。這種物質(zhì)的很簡單的性質(zhì)在下面表中可以體現(xiàn)，這里面大部分有脫乙酰度，這樣分布有兩個方面。殼聚糖里面的脫乙酰度差不多有一般以上，分子量也特別多，這和這種物質(zhì)造出來的時候有很大關(guān)系。殼聚糖的基本物化參數(shù)及其表征2.1.1脫乙酰度殼聚糖里面的脫乙酰度這種東西被說成殼聚糖大分子鏈上氨基葡萄糖單元占所有鏈節(jié)單元的比例，即氨基葡萄糖結(jié)構(gòu)單元數(shù)與總結(jié)構(gòu)單元數(shù)（氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖）的摩爾比，如圖所示。脫乙醜度對殼聚糖的性能影響很大，包括殼聚糖的溶解性、生物降解性

9、、化學(xué)反應(yīng)活性以及殼聚糖的應(yīng)用性能等。制備不同脫乙酰度的殼聚糖一般有兩種方法，其一是將甲殼素在濃堿液中加熱以除去其中的乙?；?，稱為升脫乙酰度過程；其二是將高脫乙酰度殼聚糖在均相條件下用乙酸酐進行乙?；磻?yīng)，稱為降脫乙酰度過程。計算殼聚糖的脫乙酰度的方法有很多如表所示，如滴定法、元素分析法、紅外紫外光譜法以及核磁共振法（）等，其中紅外光譜法具有測量范圍寬、簡單快捷等優(yōu)點，應(yīng)用較多。2.1.2分子量殼聚糖的分子量是其各個大分子鏈分子量的平均值。用的比較多的分子量的使用方法里面有重均分子量、數(shù)均分子量還有粘均分子量這三種。分子量的位置經(jīng)常使用相應(yīng)的指數(shù)來表達，這個數(shù)值等于。在這個里面，粘度法可以參考

10、這個公式°，其中（n）為表示這種物質(zhì)特別的粘稠，和為是有關(guān)系的系數(shù)。把殼聚糖這種物質(zhì)的粘稠度進行檢查實驗，這樣就能算出殼聚糖的粘均分子量的數(shù)量，這樣還是不能知道這里面的分子是怎么分布的。凝膠滲透色譜還有一個名字叫體積排阻色譜，這個可以在已經(jīng)知道的東西的幫助下可以算出殼聚糖的、和三種物質(zhì)的值。凝膠滲透色譜要是和光碰到了一起就沒有辦法結(jié)合在一起，這樣就能一下子得到這種物質(zhì)里面的。2.1.3殼聚糖的明顯特點殼聚糖這樣的物質(zhì)里面是有氨基的線性多糖等東西，這種物質(zhì)的分子的樣子主要就決定了這種物質(zhì)它的大特點，比如這種物質(zhì)的粘稠性、這種物質(zhì)很容易變成一種形狀，還能有非常好的抵抗細菌的功能。（） 粘

11、稠性：這種物質(zhì)粘附的能力，和它里面的結(jié)構(gòu)分布情況有很大的關(guān)系，分子里面有非常多的氨基和羥基，這樣就讓這種物質(zhì)變得非常有結(jié)合力，這種分子像線一樣的分布，可以有很好的柔韌性能。還要注意的是，這種物質(zhì)它是一種非常厲害的電解質(zhì)，可以通過靜電擁有很厲害的吸附力，可以吸水細胞，還有很多的別的雜志。所以這樣的物質(zhì)就會被作為裝藥的膠囊，可以很好的把藥傳送到人體各個地方。（） 定型性：這種物質(zhì)還有一個非常好的優(yōu)點，就是它很容易被鉆很多眼兒。是因為這種物質(zhì)的分子中的氨基很容易被水溶解了，然后使用冷凍的方法，或者放在某個地方進行干燥就會產(chǎn)生很多的眼兒。這樣可以用不同形狀的模具將這種材料做成不一樣的支架，像什么薄片，

12、管狀等等。（） 抵抗性：這種物質(zhì)的一個特點非常讓人喜歡它。經(jīng)過很多的實驗可以看出，這種物質(zhì)可以讓兔子的骨頭發(fā)炎。這是由于這種物質(zhì)里面有非常好的氨基基團，這個可以和細胞壁上面的東西相結(jié)合，這樣就能阻礙細菌的是傳輸過程，這樣細胞就很快死了。（） 這個特性以外，這種物質(zhì)還有非常好的相容性，快速讓實體溶解等等不錯的優(yōu)點。2.2殼聚糖根據(jù)其特點的使用殼聚糖這種物質(zhì)因為它里面的分子分布給了它很多的優(yōu)點，它和別的東西能相處的很好，可以把生物的尸體快速的化了，最后化解剩下的東西還沒有一點壞處，這種物質(zhì)能夠大面積的抵抗有毒物質(zhì)、能夠把血止住、還能把痛止住，這種物質(zhì)他還能讓一些生物表面的細胞長得非常的快。它在人的

13、身體里面可以進行溶解，還沒有什么不好的，可以做成很多種好的東西，像什么緩釋劑、助懸劑、增效劑、微球載體等我們?nèi)粘Ｊ褂玫臇|西；殼聚糖可以和很多的生物融合在一起，在手術(shù)中是非常好的東西，可以做成紗布敷傷口，可以做成手術(shù)的縫線，這種材料非常好的可以用來把血止住，讓傷口好的非?？?；殼聚糖這種物質(zhì)有非常好的抵抗細菌的功能，氨基里面的儲存量，還有分子的量，是影響這種特性的重要因素；這種物質(zhì)還能降低血壓，降低脂肪，一定程度上還能控制癌癥的發(fā)展。所以這種物質(zhì)在醫(yī)生眼中是非常喜歡的東西，它還能被做成薄膜在醫(yī)學(xué)上用的、可以做成人體的軟組織、手術(shù)使用的線、可以做成膠囊。這種材料在各種的溫度下它都不會改變，就算經(jīng)常在

14、溫度比較高的地方，他的樣子也是不會改變的、也不會縮小，這種材料在醫(yī)學(xué)上面有非常大的作用。2.2.1在軟骨組織中的應(yīng)用關(guān)節(jié)軟骨損傷后難以修復(fù)。殼聚糖在結(jié)構(gòu)上類似關(guān)節(jié)基膜中的糖胺聚糖，與軟骨細胞具有良好的相容性。Lu等將殼聚糖注射到大鼠關(guān)節(jié)內(nèi)，發(fā)現(xiàn)殼聚糖能夠減緩骨骺軟骨變薄，提高膝關(guān)節(jié)軟骨細胞的密度，說明殼聚糖在膝關(guān)節(jié)內(nèi)具有促進軟骨修復(fù)的能力。Yamane等將透明質(zhì)酸與殼聚糖復(fù)合用作軟骨支架材料，發(fā)現(xiàn)軟骨細胞能夠在支架材料上貼附和繁殖，形態(tài)正常，而且能合成豐富的胞外基質(zhì)。Xia等用凍干燥法制得殼聚糖明膠復(fù)合物支架，并將從豬軟骨分離的自體軟骨細胞種植在此復(fù)合支架上植入豬腹部皮下組織。植入后周，此彈性

15、軟骨不僅保持正常的組織學(xué)形態(tài)和生物學(xué)特性，還具有機械性能；軟骨細胞在支架的間隙中增殖與自體軟骨相似。以上研究表明殼聚糖在軟骨組織工程應(yīng)用中有良好生物相容性，能保持穩(wěn)定的形態(tài)，并具有促進軟骨修復(fù)的能力。2.2.2在骨組織中的使用骨頭變少了是經(jīng)常發(fā)生的疾病，就是骨頭生長的速度非常的慢，因為骨頭中的血液是非常的少的，血液在里面也不會流通，這樣人體里面的營養(yǎng)物質(zhì)就不會通過血液運送到骨頭需要的地方了。這種物質(zhì)可以用在生長骨頭的地方。它有非常好的吸收能力，可以把生長的基因帶上，送到骨頭上，這樣骨頭生長的速度就會加快，就不需要很長的時間才能康復(fù)。在人的身體外面讓骨頭細胞生長，醫(yī)生發(fā)現(xiàn)細胞在架子上是有很多層的

16、；里面有生長因子的細胞生長的非常好，還能表現(xiàn)出非常好的活力。在做把這種細胞送到人體內(nèi)的實驗，有生長因子的細胞比沒有生長因子的細胞長的非常的快。這說明這種物質(zhì)的粘稠性可以讓生長因子很好的用在細胞生長上面，還讓骨頭長成原來的樣子。Lahiji等在看這種材料在骨頭細胞上面的活力時，這種材料不僅僅可以讓細胞活得很好，還能讓骨頭細胞長成原來的樣子。這樣可以充分說明人的細胞是有生長功能和記憶功能，這種材料在醫(yī)用的支架上面有非常大的吸附作用。2.2.3在皮膚上面的作用2.2.3.1可以敷在傷口上面這種材料用在皮膚上面可以讓皮膚有很好的相容性和可以把不好的東西溶解了，還有非常好的柔軟性、彈性很好、水分不容易流

17、失、很通風(fēng)通氣、還能抵抗細菌。這種材料流動性非常的好，也有非常好的性能，可以作為很多的樣式。在很多的結(jié)構(gòu)上面，這種物質(zhì)里面有很多和人體里面相同的物質(zhì)，還有非常多的物質(zhì)也是一樣的，這樣他們用在醫(yī)學(xué)上面非常好，它們可以和生物融在一起。這種有這樣的特點，在做人造皮膚時可以有很大的發(fā)展前途。這種材料可以做手術(shù)用的線、紗布、繃帶、創(chuàng)可貼等各種手術(shù)中的東西，它們有下面一些作用：有非常好的通風(fēng)性，還能讓傷口及時通風(fēng)；可以通過涼爽的方法，讓病人不會太痛苦；他的吸水性可以讓酶自己降解；在降解的時候可以加快傷口的好轉(zhuǎn)，提高傷口好了的速度。等人做了一個非常神奇的東西用在傷口上面。殼聚糖膜上面有皮膚本身的組織和還有和

18、海綿一樣的一層。這樣的設(shè)計就是為了水和細菌都不會進來，還能讓傷口的臟東西都弄出來。海綿的吸水性非常好、可以有非常好的吸水性、這樣可以加強生物的再生能力。比較粘稠的皮膚表面將會有非常的好抵抗細菌的能力，這樣的話一些外來的生物就可以被抵擋。這個材料在把老鼠的皮膚修好時，還能很快的把血弄住，手術(shù)做了二十幾天就好的很快了。最新的皮膚長好了以后，他的細胞還是非常的規(guī)整的，再過兩個星期后，細胞就會長得更加好了，這說明這個傷口就快好了。2.2.3.2在傷口中的使用殼聚糖能夠止住血液流動，能夠抵抗細菌、還能讓傷口好的非?？臁⑺蟹浅：玫娜诤闲院瓦€有非常好的降解的功能，這個物質(zhì)非常適合用在傷口之上。目前市場上面

19、已經(jīng)有這種物質(zhì)做的創(chuàng)可貼等等東西，這種東西就像人造的皮膚一樣，而且有非常好的透氣性，非常好的抵抗細菌的功能，這個東西有非常好的抵抗作用，非常厲害的是它能讓皮膚好的特別快。也可以做出水溶性的新材料，這種東西和水有非常好的親和力，也能和傷口有非常好的親和作用。這種東西可以在培養(yǎng)介質(zhì)用進行培養(yǎng)，這對傷口有非常好的用處。有的人觀察了傷口在空白、殼聚糖粉末、甲殼素粉末、水溶性殼聚糖（）粉末、水溶性殼聚糖溶液這好幾種的條件下面經(jīng)過處理，這種溶液對傷口愈合有非常好的作用。2.2.4在其他組織工程中的應(yīng)用這種材料用在軟骨頭的地方，還有骨頭上面，還有皮膚的外面，還可以用在皮膚外面，還能用于修復(fù)器官。這種東西還能

20、與器官很好的結(jié)合在一起，可以很好的修復(fù)器官。經(jīng)過對動物做了好幾次的實驗，把帶有這種物質(zhì)的因子弄進老鼠的生體里面，還可以把細胞的生命延長了，可以做成新的器官。在人體的每一個組織都有非常多的利用。3殼聚糖中蛋白質(zhì)的檢測方法3.1實驗材料3.2實驗儀器3.3殼聚糖中蛋白質(zhì)的檢測方法用兩種材料的殼聚糖（：，；：，）作為一個對象，用現(xiàn)在已經(jīng)有的辦法來進行檢測，考馬斯亮藍法、氨基酸分析法、法及元素分析法這一些已經(jīng)有的辦法來檢查這種物質(zhì)里面的雜質(zhì)，把這幾種辦法都試一遍，看看結(jié)果有沒有什么不一樣的地方。3.3.1考馬斯亮藍法3.3.1.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用非常準(zhǔn)確的粉末溶解在非常的純潔的水中，這樣就能做成標(biāo)準(zhǔn)液

21、。這樣就可以做成好幾種濃度的標(biāo)準(zhǔn)液體。弄0.1毫升各濃度下的標(biāo)液放在10L的管子當(dāng)中，加入L考馬斯亮藍液的磷酸，用棒子攪一攪，把水加到一升，最后放在棕色的瓶子里面，這樣可以躲避陽光，然后等待混合，弄勻，放了十分鐘以后，可以用紫外線進行鑒定，可以測試這種溶液的吸光性。每一個溶液都需要進行三次實驗，把超純水做成空白的。3.3.1.2樣品中蛋白含量的測定弄好一定量的殼聚糖粉末放在緩沖液中都溶解了，做成樣品。把樣品放在十毫升的試管里面，在加入考馬斯亮藍，混勻了再放十分鐘，放在紫外線下面可以測試一些吸光性。這樣可以進行三次的測試，這樣的就緩沖液可以作為空白液。3.3.1.3回收率測定各取標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白

22、溶液，在里面都加點0.05L，殼聚糖溶液放在試管中，每個試管里面加一點考馬斯亮藍，弄暈了，在10分鐘，在測試吸光的性能。以緩沖液為空白，都做三次實驗。3.3.2氨基酸分析法3.3.2.1樣品前處理弄0.5殼聚糖原料放在水管中，向里面加上16ml的溶液，加一點的氮氣，然后再一起密封好，在零下十度后，把它放到和室內(nèi)溫度一樣，用10把弄到中間，用20毫升的水進行定容。把1.6毫升放在試管里面，10000轉(zhuǎn)20分鐘，在進行繁衍。3.3.2.2樣品衍生及檢測用上面的水用400，再加0.040330，再加入0.2500，二硝基氟苯，弄勻了以后，在59度的溫度下面，放在水里面一個小時，冷卻后加入21，混起來

23、后面放在0.23的濾器過濾后，取1.6ml放在樣品瓶子里面，隨時可以研究。3.3.2.3檢測條件流動相：0.06（p7.4±0.08）流動相：乙腈：超純水：（）體積流量：0.6min，柱溫：39°，進樣量：op；檢測時間：60min；檢測波長：450。3.3.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作弄個3標(biāo)準(zhǔn)氨基酸液，經(jīng)過處理后，分別用H2P做成種不同純度后于0.23nm的濾器過濾后取1.4ml放在測試瓶中進行HPLC進行檢查。3.3.2.5回收率的測定想這個材料中加一些東西，上面的說法后進行處理。因為這種材料會被酸水化解，水被化解后會對氨基酸檢測會有很大的作用，所以用假的殼聚糖（，即將氨基葡

24、萄糖和乙酰氨基葡萄糖按照一定量的比例進行調(diào)整，配成的“殼聚糖”）為空白（這種假的材料經(jīng)考馬斯亮藍法檢查，其蛋白含量為），這樣可以最大限度地被影響。3.3.3二喹啉二羧酸（）法已經(jīng)弄好的蛋白質(zhì)做的溶液（）加一點什么都沒有的水到達、這五種不同純度的水，再放一些蛋白液在這些試管里面，在加上一點的蛋白液，一起混合在一起，在37度的水的條件下，放半個小時在下測試各種吸光的性能。進行兩種平行，把純凈水作為最空白的。3.3.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作把已經(jīng)弄好的蛋白液（）放一定量的白水使它變成、這五種純度的水溶液，每種溶液里面在加m放在試管中，再加入工作液5，弄好了，在37度的水中放半個小時后，在在檢查他的吸光性

25、能。進行兩次，把白水做成開始溶液。3.3.3.2樣品中蛋白含量的測定在精確的弄0.007殼聚糖粉放在試管里面，里面再加點純水200毫升，再加入工作液2毫升，弄好，再37度的水里面，放半個小時后再紫外分光光度計下檢查這種材料的吸光性。每次都進行兩遍，把純凈水做成空白的。3.3.3.3回收率的測定精準(zhǔn)的使用0.007不同的殼聚糖粉放在試管里面，在里面加上210毫升的（卩）溶液，工作液弄一毫升加進去，把它弄弄好，在37度的水中放半個小時后，在太陽光下光度計是下檢查這種材料的吸光性能。每次做兩遍，還把水作為空白。3.3.4元素分析法經(jīng)過上面的四種辦法后，還有元素分析法。元素分析的方法計算蛋白質(zhì)的溶液：

26、（）6.25（這里面，是蛋白質(zhì)；是元素分析測出來的含量，是非常有關(guān)的技術(shù)，這個里面有一些特殊的物質(zhì)決定，6.25表示蛋白質(zhì)中理論的含量。）3.3.5其他檢測方法還有現(xiàn)在可以使用熒光的方法來檢測這種蛋白質(zhì)，用這種方法非常的簡單，也非常的快、還特別的靈活，本論文作了甲基尿苷、白藜蘆醇、燦爛甲酚藍、同步熒光法的嘗試。3.4結(jié)果與討論選擇怎么測試這種材料的蛋白質(zhì)時候，要小心一些事情：要非常的精準(zhǔn)；小心蛋白質(zhì)的性質(zhì)，還有這個里面的雜質(zhì)；還有實驗要的時間。現(xiàn)在檢查蛋白質(zhì)的方法特別多有凱氏定氮法、雙縮脲法、福林酚法（法）、紫外吸收法、考馬斯亮藍法及法。這些材料里面有一些蛋白質(zhì)的含量還沒有，殼聚糖溶液這個里面的蛋白含量