豬瘟疫苗研究進(jìn)展趙耘pdf

1、動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2004, 25 (1) : 39 42P rog ress in V eterina ry M ed icineX222 2豬瘟疫苗研究進(jìn)展趙耘, 寧宜寶(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所, 北京 100081)中圖分類號(hào): S852. 651; S858. 28 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A文章編號(hào): 1007 5038 (2004) 01 0039 04摘要: 豬瘟是豬的一種高度接觸性傳染病, 由 于其造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失, 故而為清除本病作 了很多工作。豬瘟疫苗的接種是控制豬瘟的重 要手段。豬瘟疫苗包括滅活苗、弱毒苗及基因工 程疫苗。豬瘟兔化弱毒苗因其優(yōu)良的免疫原性 是目前豬瘟防治應(yīng)用最為廣泛的疫

2、苗之一?；?因工程疫苗是目前豬瘟疫苗研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域, 其包括亞單位疫苗、合成肽苗、活載體苗、核酸 疫苗等。值得一提的是豬瘟病毒標(biāo)記疫苗研究 近年來發(fā)展迅速, 目前已出現(xiàn)商品化的亞單位 標(biāo)記疫苗, 可使豬瘟疫苗接種和自然感染區(qū)別 更為簡(jiǎn)單、快捷。本文就豬瘟疫苗的發(fā)展及應(yīng)用 作了簡(jiǎn)要介紹。關(guān)鍵詞: 豬瘟; 滅活苗; 弱毒苗; 基因工程疫苗豬瘟是豬的一種高度接觸性病毒性疾病, 對(duì)養(yǎng)豬業(yè) 影響很大。1984 年國際獸疫局(O IE ) 將其列入A 類傳 染病, 我國目前也將其定為- 類傳染病。豬瘟的防制歷 來是全世界豬瘟存在國非常重視的課題, 為此各國都投 入了大量的人力、物力, 并取得了很大的成績(jī)。

3、疫苗和疫 苗接種是控制豬瘟的重要手段。我國是以疫苗接種為防 制豬瘟主要手段。豬瘟疫苗的發(fā)展經(jīng)歷了早期的滅活 苗、弱毒苗到現(xiàn)在的基因工程疫苗。本文就豬瘟疫苗的 發(fā)展、應(yīng)用作簡(jiǎn)要概述, 以期為豬瘟的最終控制和消滅 提供理論依據(jù)。1豬瘟滅活苗過去使用結(jié)晶紫制備滅活苗。皮下注射滅活苗安全 性良好, 但注苗后的免疫力通常不高, 免疫應(yīng)答延遲, 既 使在數(shù)次加強(qiáng)免疫注射后也只能持續(xù)幾個(gè)月。注苗豬對(duì) 強(qiáng)毒攻擊雖然表現(xiàn)良好的臨床抵抗力, 卻對(duì)病毒感染敏 感, 而且強(qiáng)毒能穿透母體組織而感染胎兒。Do rset 等首先創(chuàng)制了豬瘟結(jié)晶紫滅活苗和組織疫 苗。我國馬聞天等 1947 年試制過豬瘟滅活疫苗。何正 禮、方時(shí)

4、杰、胡祥璧及李崇道等于 1951- 1952 年相繼報(bào) 道用不同毒株試制疫苗成功, 其中以石門系毒株血毒 苗, 效果最好。結(jié)晶紫甘油(0. 25% ) 和血毒之比為41, 38 減毒 5 7 d 都可制出好疫苗。田間試驗(yàn)結(jié)果表明 注苗后 6 個(gè)月和 10 個(gè)月仍有良好的保護(hù)力 1 。另外D henn in ( 1976 年) 報(bào)道用野毒株 A lfo rt A 19 株在PK 15 細(xì)胞上增殖培養(yǎng), 病毒經(jīng)超濾濃縮、聚合甘油醛 滅活、加油佐劑制成滅活油苗, 豬皮內(nèi)接種 2. 5 mL , 接種兩次, 或 1 次皮內(nèi)接種 5 mL , 免疫 2 個(gè)月后進(jìn)行強(qiáng)毒 攻擊, 結(jié)果完全保護(hù), 保護(hù)力至少

5、持續(xù) 1 年以上。2豬瘟弱毒苗2. 1兔化弱毒自 1946 年開始, 國外相繼有 B aker ( 1946 )、Ko 2 p row sk i 等人報(bào)告用不同方法將不同的豬瘟病毒適應(yīng) 于家兔, 成為對(duì)豬毒力減弱的變異毒株。但這些變異毒 株接種豬仍可誘發(fā)嚴(yán)重反應(yīng)及死亡。我國 1954 年成功培育出豬瘟兔化弱毒株并制成疫 苗 (CL S) , 也叫“C 株”或“K 株”。疫苗病毒的復(fù)制主要 在淋巴樣組織, 特別是扁桃體, 但有時(shí)能從腎臟檢查出 苗毒抗原。該苗毒株雖然可以通過懷孕豬的胎盤屏障, 但不感染胎兒引起任何畸變。豬瘟兔化弱毒株毒力不返 強(qiáng), 在豬體內(nèi)連續(xù)傳代后仍保持原弱毒的特性。對(duì)乳豬 和

6、種豬無殘余毒性。接種各年齡的各品種豬, 不產(chǎn)生豬 瘟臨床癥狀, 僅出現(xiàn)輕微病毒血癥, 免疫后 4 32 d 內(nèi), 免疫豬不從尿中排毒, 免疫豬與非免疫豬同圈飼養(yǎng)60 d, 不發(fā)生接觸感染。檢查免疫豬臟器帶毒情況, 證明 免疫后 7 d 的豬體中脾及液中血尚存微量毒, 17 d 以 后, 免疫豬的血液、脾及骨髓中已均無病毒存在。免疫 10 14 日齡哺乳仔豬, 不影響發(fā)育, 注射懷孕 1 3 月 母豬, 不引起流產(chǎn)、死胎 1 。中國兔化弱毒能否在傳代細(xì)胞系培養(yǎng)這是上世紀(jì)80 年代末期到 90 年代初豬瘟兔化弱毒疫苗株研究的 熱點(diǎn)之一。R ivero (1988 年) 等報(bào)道將豬瘟兔化弱毒C 株在

7、M PK 細(xì)胞及R K 細(xì)胞上適應(yīng)培養(yǎng), 結(jié)果C 株更適 應(yīng)在M PK 細(xì)胞上增殖, 而且在M PK 細(xì)胞上增殖后對(duì) 兔子的毒力有所增強(qiáng)。1990 年 R ivero 等利用已適應(yīng)M PK 細(xì)胞的豬瘟兔化弱毒制苗對(duì) 2 月齡豬進(jìn)行免疫, 然后進(jìn)行強(qiáng)毒攻擊, 結(jié)果在免疫豬未發(fā)現(xiàn)病毒復(fù)制。隨 后Gua land i (1991)、Ferra ri (1992) 等分別利用豬瘟兔化 弱毒適應(yīng)M PK 細(xì)胞制苗, 得到了相似的結(jié)果, 其抗原 性不變, 滴度及免疫原性比兔體淋脾毒高, 免疫持續(xù)期 長(zhǎng)達(dá) 11 個(gè)月, 6 個(gè)月或 11 個(gè)月后強(qiáng)毒攻擊, 免疫豬能 抵抗強(qiáng)毒攻擊, 能產(chǎn)生高水平的抗體。SK

8、6 是另一個(gè)豬 瘟兔化弱毒適應(yīng)研究的傳代細(xì)胞系。T erp st ra 等 1990 年報(bào)道利用豬瘟兔化弱毒適應(yīng) SK 6 細(xì)胞制苗, 400 600 TC ID 50 劑量免疫后, 7 d 或 6 個(gè)月后用大于LD 50 劑量強(qiáng)毒攻擊, 結(jié)果均能完全保護(hù)。這意味著適應(yīng)傳代細(xì) 胞系的豬瘟兔化弱毒不僅可以用作一種廉價(jià)的疫苗, 而 且還可望提供一個(gè)更為有效的豬瘟疫苗制備方法。近年來, 豬瘟兔化弱毒口服免疫的研究日趨增多。 口服免疫可以極大地減少豬瘟免疫的工作強(qiáng)度, 使用簡(jiǎn)X 收稿日期: 2003204215基金項(xiàng)目: 國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃項(xiàng)目(G1999011905) ; 國家自然科學(xué)基金重大

9、項(xiàng)目(398932902122)作者簡(jiǎn)介: 趙耘(1968- ) , 女, 副研究員, 博士, 主要從事動(dòng)物傳染病學(xué)、分子病毒學(xué)研究。40動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展2004 年第 25 卷第 1 期(總第 129 期)便。Chenu t 等 1999 年報(bào)道利用C 株口服免疫家豬、野Pest i”亞單位商品化疫苗免疫哺乳仔豬, 對(duì)哺乳仔豬的豬、綿羊、家兔及野兔, 結(jié)果家豬免后 4 d 扁、脾、淋巴免疫程序進(jìn)行了研究, 結(jié)果兩次免疫間隔 4 周、2 免后結(jié)、胸腺、糞及尿中分離不到病毒, 3 周血清學(xué)陽轉(zhuǎn), 免14 d 攻毒組免疫豬無臨床癥狀、無病毒血癥、不排毒,后 6 周攻毒, 能完全保護(hù)強(qiáng)毒攻擊; 7

10、46;8 野豬免后血清兩次免疫間隔 4 周、2 免后同時(shí)攻毒組免疫豬排毒; 兩抗體陽性, 扁和脾分離不到病毒; 綿羊接種后不表現(xiàn)臨次免疫間隔 2 周, 2 免后 14 d 攻毒組免疫豬只在攻毒后床癥狀, 血清抗體陰性; 家兔接種后表現(xiàn)輕度熱反應(yīng); 野第五天出現(xiàn)病毒血癥, 但不排毒, 兩次免疫間隔 2 周、2兔則無癥狀; 家兔和野兔二者有少數(shù)表現(xiàn)血清學(xué)抗體陽免后 7 d 攻毒組免疫豬排毒; 一次免疫、14 d 后攻毒則性 2 。Kaden 等 2001 年報(bào)道以C 株對(duì)斷奶仔豬進(jìn)行口不能抵抗強(qiáng)毒攻擊 11 。服免疫, 結(jié)果進(jìn)行大劑量 Ko slov 強(qiáng)毒株攻擊的免疫豬3. 2豬瘟合成肽苗2

11、46;2ö2ö死亡; 3 5 進(jìn)行小劑量A lfo rt187強(qiáng)毒株攻擊的免疫豬利用重組DNA 技術(shù)根據(jù)病毒基因組的核苷酸序存活, 血清抗體陽性, 但從鼻腔排毒, 其中 4 只豬表現(xiàn)瞬列, 可推導(dǎo)出病毒蛋白質(zhì)的氨基酸序列, 從而可用人工時(shí)病毒血癥; 而所有進(jìn)行M V 140R iem s 低毒力毒株的合成方法制備病毒主要抗原相應(yīng)的寡肽, 制備合成肽免疫豬均存活, 表現(xiàn)短時(shí)病毒血癥, 均有抗體, 但所有存苗。Dong 等報(bào)道合成 5 段豬瘟石門株B C 區(qū) 693 777活豬體內(nèi)均無CSFV 或CSFV RNA 3 。同年Soo s 等報(bào)位氨基酸, 偶聯(lián)B SA 制成合成肽苗

12、, 結(jié)果免疫豬能產(chǎn)生道以C 株在分娩前 167 217 d 口服免疫母豬, 結(jié)果所高滴度的抗體, 并能完全保護(hù)強(qiáng)毒的攻擊。并以此多肽有 3周齡及 80% 6周齡仔豬中和抗體滴度為 140,制備高免血清, 此血清14 和16 稀釋后能抑制C 株25%10 周齡仔豬中和抗體滴度達(dá)到 120, 所有仔豬的兔體熱反應(yīng), 而用合成多肽對(duì)高免血清進(jìn)行親和層析EL ISA 抗體檢測(cè)均為陽性 4 。處理后, 則不能抑制C 株的兔體熱反應(yīng) 12 。2. 2低溫細(xì)胞培養(yǎng)豬瘟弱毒苗3. 3豬瘟活載體疫苗(1) GPE 株。此弱毒株是 1959 年由日本的 Sa sa是將外源目的基因用重組DNA 技術(shù)克隆到活的ha

13、ra 研制的。選用的毒株是ALD 強(qiáng)毒株, 采取的方法載體病毒中制備的一種疫苗, 可直接用這種疫苗經(jīng)多種是將ALD 株在豬睪丸細(xì)胞通過 142 代, 隨后用終點(diǎn)稀途徑免疫動(dòng)物。目前研究最多的是痘病毒。其他作為候釋法選出純系毒株, 再通過牛睪丸細(xì)胞 26 代減毒, 如上選病毒載體還有腺病毒、乳多空病毒、口瘡病毒、禽痘病挑選純系毒株, 再適應(yīng)于豚鼠腎細(xì)胞傳 41 代, 最后用雞毒、偽狂犬病毒等。痘苗病毒擁有廣泛的宿主范圍, 毒性新城疫病毒強(qiáng)化法選出 END 陰性純系毒株, 該毒株能低, 是較早作為生產(chǎn)基因重組疫苗的載體之一。R um e很好的在 30 溫度中增殖。以此毒株制苗, 無殘余毒nap f

14、 (1991) 等將編碼 CSFV 結(jié)構(gòu)蛋白基因插入痘苗病力, 成功的控制了日本的豬瘟 5 。毒的 T K 基因中, 獲得了能表達(dá)該結(jié)構(gòu)蛋白的重組痘苗( 2) T h iverva l 株。是 1976 年法國的A ynaud 所研病毒, 將這種重組病毒免疫豬, 可使豬抵抗強(qiáng)毒攻制。選用的毒株是A lfo rt 強(qiáng)毒, 采取的方法是將強(qiáng)毒擊 13 。隨后 1995 年 Kon ig 等將編碼CSFV N p ro、E 0、A lfo rt 株用 PK 15 細(xì)胞培養(yǎng)于 29 30 連續(xù)傳 170E 1 和 E 2 基因分別插入痘苗病毒中, 獲得了能表達(dá) E 2代, 通過終點(diǎn)稀釋法選出一株純系弱

15、毒。這個(gè)溫度變異或 E 0 蛋白的重組病毒, 免疫豬能獲得針對(duì)致死劑量強(qiáng)毒株對(duì)各種年齡的豬均安全有效, 保持堅(jiān)強(qiáng)免疫原性,毒攻擊的保護(hù) 14 。2001 年H ahn 等報(bào)道構(gòu)建了重組豬目前在法國已推廣使用, 控制豬瘟效果較好 5 。痘病毒, 結(jié)果重組病毒在豬源、猴源和人源細(xì)胞上均表3豬瘟基因工程疫苗現(xiàn)減毒。以此表達(dá)CSFV E 2 蛋白, 結(jié)果E 2 蛋白以二聚3. 1豬瘟亞單位苗體形式存在于感染細(xì)胞胞漿內(nèi) 15 。是將編碼某種特定蛋白質(zhì)的基因組, 與適當(dāng)質(zhì)?；騻慰袢《臼橇硪粋€(gè)重要的活病毒載體, 外源基因病毒載體重組后導(dǎo)入受體(細(xì)菌、酵母或動(dòng)物細(xì)胞) , 使可穩(wěn)定地插入其DNA 。已證實(shí)將

16、CSFV 的 E 2 基因插其在受體中高效表達(dá), 提取所表達(dá)的特定多肽, 加佐劑入偽狂犬的 gX 基因位點(diǎn), 既不會(huì)改變偽狂犬病毒的細(xì)即制成亞單位苗。E 2 蛋白是豬瘟病毒主要保護(hù)性抗原,胞或宿主嗜性, 也不會(huì)使偽狂犬病毒的毒力發(fā)生變化。能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體, 保護(hù)機(jī)體免受強(qiáng)毒攻擊。因1991 年 van Ziji 等報(bào)道利用 PRV 減毒活病毒載體構(gòu)建此 H u lst (1993)、Boum a (1999) 及 T sibezov (2000) 等分了 PRV 與 CSFV E 1 重組病毒, 結(jié)果接種豬能產(chǎn)生針別利用桿狀病毒高效表達(dá)了CSFV E 2 蛋白, 分別用 20對(duì) PRV

17、及 CSFV 高水平的中和抗體, 能抵抗 PRV 及LCSFV 強(qiáng)毒攻擊 16 。Peeter (1997) 等構(gòu)建了能表達(dá)CS2g、32 m g 及 200 m g E 2 蛋白免疫豬, 均能完全抵抗致死劑量強(qiáng)毒的攻擊 68 。有關(guān)CSFV E 2 亞單位疫苗免疫öFV E 2 蛋白的 gD gE 雙缺失的偽狂犬病毒重組疫苗,效果、能否阻止豬瘟病毒垂直傳播及免疫程序等方面目免疫接種試驗(yàn)表明該活載體疫苗能使豬獲得對(duì)偽狂犬前已作了很多工作。Boum a 等報(bào)道利用CSFV E 2 亞單 位疫苗肌肉接種免疫豬, 分別在免疫后 14, 10, 7 d 進(jìn)行 B rescia 株強(qiáng)毒攻擊,

18、結(jié)果免疫后 14 d 及 10 d 攻毒組免 疫豬不散毒, 而免疫后 7 d 攻毒組免疫豬散毒 9 。D e Sm it 等報(bào)道利用CSFV E 2 蛋白亞單位疫苗在人工授 精前后 1 次或 2 次免疫母豬, 人工授精后 6 周中等毒力和豬瘟的雙重保護(hù) 17 。 腺病毒是另一個(gè)用得較多活病毒載體。H amm ond等 2000 年構(gòu)建了CSFV W eyb ridge 株 gp 55 (E 2) 基因 重組腺病毒( rPAV ) , 免疫豬能抵抗強(qiáng)毒攻擊, 且攻毒 后無任何臨床癥狀, 剖檢無任何病理變化 18 。隨后在 2001 年又對(duì)此重組腺病毒疫苗免疫途徑進(jìn)行了試驗(yàn),豬瘟病毒攻毒, 攻毒后

19、 5 周剖殺, 結(jié)果 1 次免疫豬攻毒 結(jié)果免疫及攻毒途徑均為皮下接種組免疫豬能抵抗強(qiáng) 后 1ö9 母豬所產(chǎn)胎兒可分離到病毒, 而 2 次免疫豬則接 毒攻擊, 免疫接種途徑皮下和口服、攻毒途徑口服的接 毒后母豬所產(chǎn)胎兒均未分離到病毒 10 。目前CSFV 亞 種組保護(hù)率為 60% ; 皮下接種免疫豬 60% 的豬在攻毒 單位疫苗已有商品化產(chǎn)品, Zieg ler 等報(bào)道利用“Po rcilis 前有中和抗體, 而口服接種免疫豬攻毒前均無中和抗趙耘等: 豬瘟疫苗研究進(jìn)展41體 19 。4豬瘟標(biāo)記疫苗4. 1豬瘟亞單位標(biāo)記疫苗實(shí)際上就是豬瘟病毒 E 2、E 2 B öC 區(qū)或

20、E 2 A 區(qū)亞 單位疫苗, 與亞單位疫苗不同之處在于同時(shí)建立了相應(yīng)備了 2 株E ( rn s) 基因突變株, F lc22 突變株是在E ( rn s)內(nèi)缺失了 66 個(gè)氨基酸, F lc23 突變株只包括 E ( rn s) 最 C 端和最N 端氨基酸, 缺失了 215 個(gè)氨基酸。以此突變 株免疫豬能低抗強(qiáng)毒B rescia 株的致死性感染 27 。隨 后, de Sm it (2001) 等報(bào)道構(gòu)建了 2 株C 株E 2 基因突變的區(qū)別疫苗接種豬和自然感染豬的診斷方法, 目前所建株 F lc9 和F lc11。其中F lc9 突變株是將C 株E 2 基因C端由BVDV 5250 株同源

21、部分替代, F lc11 突變株是將C立的診斷方法多是以豬瘟病毒 E 0 基因表達(dá)蛋白為抗株E 0 基因被BVDV 同源基因替代。將 2 個(gè)突變株一次原, 結(jié)果疫苗接種豬不會(huì)產(chǎn)生針對(duì) E 0 的抗體, 而自然免疫接種敏感豬, 免疫 1 2 周后用強(qiáng)毒B rescia 株或感染豬則產(chǎn)生針對(duì) E 0 的抗體, 從而達(dá)到區(qū)別診斷的目的。V an R i jn 等早在 1999 年在實(shí)驗(yàn)室利用桿狀病毒表B eh ring 株攻擊, 結(jié)果均能提供較好的臨床保護(hù) 28 。另達(dá)了CSFV E 2 (不包括跨膜區(qū))、E 2 的A 區(qū)及 E 2 的B外, van Genn ip (2002) 等報(bào)道制備了 3

22、株C 株 E 2 基因C 區(qū)制成亞單位標(biāo)記疫苗, 結(jié)果均能使免疫豬產(chǎn)生抵抗突變株 F lc4、F lc47 及F lc48。其中F lc4 缺失E 2 基因BC 區(qū)693 746 aa, F lc47 缺失 E 2 基因A 區(qū) 800 864 20 強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)。隨后,M oo rm ann 等報(bào)道以CSFVaa, F lc48 缺失整個(gè) E 2 基因 689 1 062 aa。以此3 個(gè)突E 2 亞單位標(biāo)記疫苗 1 次鼻內(nèi)接種免疫豬, 結(jié)果免后 3周及 6個(gè)月攻毒免疫豬不表現(xiàn)臨床癥狀, 不散毒; 免后 變株皮內(nèi)接種免疫豬, 結(jié)果 F lc4 能完全保護(hù)CSFV 強(qiáng)1,;2 周毒致死性攻擊,

23、 而 F lc47 及 F lc48 只能對(duì)強(qiáng)毒致死性攻ö周攻毒免疫豬死亡散毒 能使哨兵豬感染 免后ö攻毒免疫豬部分散毒, 不能使哨兵豬感染; 同時(shí)以此疫苗進(jìn)行了懷孕母豬的免疫, 結(jié)果 1 次免疫 1ö9 母豬發(fā)生 垂直傳播, 而 2 次免疫則無 21 。de Sm it 等利用 E 2 亞單 位標(biāo)記疫苗 1 次免疫豬得到了相似的結(jié)果, 免疫期可長(zhǎng) 達(dá) 13 個(gè)月, 但免后 13 個(gè)月攻毒 1ö4 免疫豬攻毒時(shí)中和 抗體陰性, 攻毒后死亡 22 。利用 E 2 蛋白標(biāo)記疫苗 1 次擊提供部分保護(hù)。同時(shí)利用F lc23 進(jìn)行了不同接種途徑 的篩選試驗(yàn), 結(jié)

24、果皮內(nèi)接種能完全保護(hù)免疫豬對(duì)CSFV強(qiáng)毒致死性攻擊, 而肌肉接種和鼻內(nèi)接種只能對(duì)強(qiáng)毒致 死性攻擊提供部分保護(hù) 29 。5豬瘟核酸疫苗用豬瘟病毒 E 2 蛋白基因的表達(dá)載體直接作為免免疫哺乳仔豬U t ten tha l 等的結(jié)果與M oo rm ann 等的疫動(dòng)物的DNA 疫苗是近年來豬瘟病毒免疫研究的熱結(jié)果相似, 免后 21 d 及 14 d 攻毒組免疫豬不表現(xiàn)臨床點(diǎn)領(lǐng)域, DNA 疫苗可以誘導(dǎo)體液免疫, 又可誘導(dǎo)細(xì)胞免癥狀, 但可傳播病毒給哨兵豬, 其中 25% 免疫后 21 d 攻疫。M a rkow ska D an iel 等報(bào)道CSFV DNA 疫苗免疫豬毒免疫豬可從白細(xì)胞中分離到

25、病毒, 而免疫后 14 d 攻后能完全保護(hù)強(qiáng)毒攻擊, 但攻毒后有 2 d 體溫高達(dá)毒 50% 的免疫豬可從白細(xì)胞中分離到病毒; 免疫后 1040 以上, 同時(shí) T、B 淋巴細(xì)胞活性輕微增強(qiáng)。國內(nèi)部d 及 7 d 攻毒免疫豬均可分離到病毒, 其中免疫后 10 d分專家也通過初步田間試驗(yàn), 證實(shí)其有較好的免疫攻毒及 7 d 攻毒免疫豬出現(xiàn)慢性感染的分別為 5% 和力 30 。王寧(1999 年) 等報(bào)道構(gòu)建了含有豬瘟病毒石門30% , 致死率分別為 20% 和 20% 80% 23 。而利用 E 2株囊膜糖蛋白(E 2) 基因的重組真核表達(dá)質(zhì)粒pRCSE 2。亞單位標(biāo)記疫苗 2 次免疫懷孕母豬D

26、ew u lf 的結(jié)果與將pRCSE 2 和空載體pRC 免疫小鼠, EL ISA 檢測(cè)結(jié)果öö2M oo rm ann 的結(jié)果不同, 免后 10 d 攻毒, 3 8 懷孕母豬表明: 僅 pRCSE 2 免疫鼠可以產(chǎn)生豬瘟病毒的特異抗可發(fā)生垂直傳播, 造成胎兒感染 24 。目前豬瘟亞單位標(biāo)體。周鵬程(2000 年) 等報(bào)道構(gòu)建了表達(dá)CSFV E 2 蛋白記疫苗也有商品化的產(chǎn)品, A h ren s 等報(bào)道利用CSFV的重組質(zhì)粒p cE 2, 用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將p cE 2 導(dǎo)入 co s 7標(biāo)記疫苗 Po rcilis Pest i 免疫母豬, 免疫次數(shù)為 2 次, 免細(xì)胞進(jìn)

27、行瞬時(shí)表達(dá), 用針對(duì) E 2 蛋白的特異性單抗以間疫間隔為 4 周, 首免后 35 d 所有免疫豬 E 2 中和抗體水接免疫熒光法檢測(cè), 結(jié)果證實(shí)小鼠免疫后 2 周和 4 周抗平為 5. 0 7.5 log (2) , 首免后 126 d 低毒力毒株攻毒,體陽性, 同時(shí)中和實(shí)驗(yàn)也證實(shí)免疫后中和抗體也陽性。免疫組2 10豬在攻毒后第5天出現(xiàn)中等程度白細(xì)胞數(shù), 隨著獸醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)及分子生物學(xué)的發(fā)展, 豬總之2減少, 所有豬均不表現(xiàn)臨床癥狀, 血中及鼻拭子中不能 瘟疫苗的研究將向著免疫效果更好、區(qū)別診斷方法更精 分離到病毒, 9ö10 免疫母豬所產(chǎn)仔豬未發(fā)生感染, 血 確、更簡(jiǎn)便的方向發(fā)展

28、, 為豬瘟最終控制和消滅奠定基 樣、淋巴結(jié)和骨髓病毒檢測(cè)陰性 25 。D ep ner 等報(bào)道分別 礎(chǔ)。利用拜爾公司的B ayovac CSF 標(biāo)記疫苗(疫苗A ) 及英 參考文獻(xiàn):特威公司的 Po rcilic Pest i 標(biāo)記疫苗(疫苗B ) 免疫(妊娠25 周及 46 周) 懷孕母豬, 免疫次數(shù)分別為 1 次和 2 次, 14 d 后強(qiáng)毒攻擊, 結(jié)果母豬抵御強(qiáng)毒攻擊無論1 次免疫 還是 2 次免疫疫苗A 好于疫苗B , 其抗體水平明顯高于 疫苗B。4. 2豬瘟C 株突變株標(biāo)記疫苗是對(duì)豬瘟兔化弱毒進(jìn)行改造, 使其缺失或替換某一 段基因, 而其免疫原性不改變, 缺失或替換的基因所表 達(dá)的蛋

29、白則可作為診斷抗原, 從而達(dá)到疫苗接種豬和自 然感染豬相區(qū)別。目前所研究的豬瘟C 株突變株標(biāo)記 疫苗多是對(duì)豬瘟兔化弱毒進(jìn)行 E 2 或 E 0 基因的部分缺 失、全缺失或替換。W id jo joa tm od jo (2000) 等報(bào)道利用 豬瘟C 株感染性克隆在 SK 6c26 細(xì)胞系上連續(xù)傳代制 1 謝慶閣, 翟中和. 畜禽重大疫病免疫防制研究進(jìn)展M . 北京: 中國農(nóng)業(yè)科技出版社, 1996: 64 92. 2 Chenu t G,Sain tilan AF , Bu rger C , et al.O ral imm un isation ofsw ine w itha classic

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32、svoo rt G, et al.Glycop ro teis E1 ofH u lst M MW estra D F2222242動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展2004 年第 25 卷第 1 期(總第 129 期)hog cho lera viru s exp ressed in in sect cells p ro tects sw ine fromhogC lassical sw ine fever J . V accine, 2000, 18 (11 12) : 1040 1050.cho lera J .Jou rnal of V iro logy, 1993, 67: 5435 5442. 19 H

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35、inan t p ro tein of the classical sw ine fever viru s fo r imm un izam arker vaccine and accom p anying sero log ical d iagno stic test bo thtion of an im alsJ . V op r V iru so l, 2000, 45 (2) : 36 41.based on envelop g lycop ro tein E2 of classical sw ine fever viru s 9 Boum a A , de Sm it A J , D

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38、a A , de K lu ijver E P , et al. D u ration of the p rofever viru s after sing le o r doub le vaccination w ith an E2 subun ittection of E2 subun it m arker vaccine again st classical sw ine fevervaccineJ . V et Q , 2000, 22 (2after a sing le vaccination J . V et M icrob io l, 2001, 78 ( 4 ): 30723)

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