紅細(xì)胞膜NaK－ATPase活性與慢性胃炎中醫(yī)辨證分型關(guān)系的研究

1、    紅細(xì)胞膜NaKATPase活性與慢性胃炎中醫(yī)辨證分型關(guān)系的研究        提要測(cè)定了102例慢性胃炎病人和30例正常人基礎(chǔ)和胰島素刺激后紅細(xì)胞膜NaKATPase活力、紅細(xì)胞ATP含量及24 h 尿17OHCS排出量，結(jié)果表明：脾胃濕熱膜NaKATPase活力和細(xì)胞內(nèi)能量代謝亢進(jìn)；脾胃氣虛膜NaKATPase數(shù)量有一定程度減少，細(xì)胞內(nèi)能量代謝在應(yīng)激情況下有所減退；脾腎氣虛不論基礎(chǔ)或應(yīng)激情況下膜NaKATPase活力均明顯減退，細(xì)胞內(nèi)能量代謝嚴(yán)重低下，已經(jīng)失去代償功

2、能。尿17OHCS與NaKATPase和ATP存在正相關(guān)，因而從細(xì)胞和分子水平證明“腎”對(duì)“脾胃”的影響。主題詞胃炎分類(lèi)辨證分型紅細(xì)胞膜酶學(xué)Na（）K（）轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶代謝 紅細(xì)胞膜NaKATPase是推動(dòng)細(xì)胞內(nèi)外Na、K作跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)體系中的一個(gè)重要酶類(lèi)，它與其它膜ATPase一道共同完成細(xì)胞內(nèi)外離子轉(zhuǎn)運(yùn)、交換，旨在保持細(xì)胞內(nèi)正常離子濃度。Lubin.M和Cahnin.F1研究表明細(xì)胞內(nèi)K是RNA和蛋白質(zhì)合成代謝的要素之一，因此細(xì)胞內(nèi)正常離子濃度是細(xì)胞正常生理功能的重要條件；本文對(duì)102例慢性胃炎病人和30例正常人進(jìn)行了基礎(chǔ)和胰島素刺激后紅細(xì)胞膜NaKATPase活力、紅細(xì)胞內(nèi)ATP含量及24 h

3、 尿17OHCS排出量測(cè)定。另外還初步完成了12例慢性胃炎病人胃粘膜和紅細(xì)胞膜NaKATPase的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下。1臨床資料1.1一般資料102例慢性胃炎病人選自福建省第二人民醫(yī)院脾胃專(zhuān)科門(mén)診和住院病人，其中男44例，女58例；平均年齡42.90±10.24歲；所有病人均經(jīng)胃鏡和胃粘膜組織活檢確診，無(wú)合并心肺、腎臟等疾病，中醫(yī)證型系參照中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則2，3結(jié)合臨床癥狀并經(jīng)治療驗(yàn)證而確定。1.2辨證標(biāo)準(zhǔn)脾胃濕熱：舌苔黃膩，胃脘、胸脘或脘腹悶、脹、痛；口苦而粘；食欲不振，舌質(zhì)紅或淡紅、體胖齒??；口渴不喜飲或喜熱飲；脈濡緩或濡數(shù)；大便溏。脾胃氣虛：食欲 減退，

4、大便溏泄，食后脘脹；消瘦，體倦乏力，頭暈，神疲懶言；舌淡胖有齒痕，脈虛無(wú)力；口淡，嘔吐，腹痛綿綿，喜溫喜按，腸鳴，虛胖，面色萎黃，唇淡氣短，排便無(wú)力，白帶清稀，浮腫，咳痰多清稀，失眠，小便清長(zhǎng)。脾腎氣虛：除脾虛諸癥外，兼見(jiàn)腰膝?軟，眩暈耳鳴，夜尿多。2實(shí)驗(yàn)方法2.1紅細(xì)胞膜NaKATPase試劑盒購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)研究所，酶活力測(cè)定方法系根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)，稍作改進(jìn)。2.2紅細(xì)胞ATP 含量測(cè)定系參考李玉奎4、趙中辛56，每份肝素抗凝血分置兩管，每管2 ml，第1管加40 IU胰島素，為胰島素刺激管；第2管不加胰島素為基礎(chǔ)管，兩管同時(shí)置37保溫1 h，然后分別測(cè)定紅細(xì)胞膜NaKATPase活

5、力和紅細(xì)胞ATP含量，保溫過(guò)程中每隔5 min 振搖試管1次。2.424 h尿17OHCS測(cè)定法采用L.Kornal改良的PoterSilber顯色法7。含量單位 mol24h。3結(jié)果3.1酶促反應(yīng)時(shí)間以30min為宜，酶活力單位：在37條件下每mg膜蛋白所含 NaKATPase水解ATP產(chǎn)生 1 mol磷為1個(gè)單位，即1 mol Pi/mg膜 Proteinh。各生化實(shí)驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1和表2。     n基礎(chǔ)NaKATPase胰島素刺激后NaKATPase基礎(chǔ)ATP胰島素刺激后ATP 24h尿 17OHCS（mol24h）正 常 組301.19&#

6、177;0.401.61±0.490.18±0.060.23±0.0821.58±5.71脾胃濕熱321.50±0.471.99±0.500.19±0.060.27±0.0920.69±6.29脾胃氣虛301.19±0.491.43±0.420.18±0.090.20±0.1317.20±5.49脾腎氣虛401.09±0.850.87±0.750.07±0.040.07±0.0412.81±5.21

7、0;    注：與正常組比較P0.01，P0.001與基礎(chǔ)比較P0.05，P0.01和P0.001 表2各項(xiàng)生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果相關(guān)分析基礎(chǔ)NaKATPase 刺激后NaKATPase24h尿17OHCSrPrPrP基礎(chǔ)ATP0.22710.050.32570.01刺激后ATP0.44810.010.48230.0124h尿 17OHCS0.24480.050.39390.01     注：正常人30例慢性胃炎病人102例，總例數(shù)132例12例慢性胃炎病人基礎(chǔ)胃粘膜NaKATPase活力與紅細(xì)胞膜NaKATPase活力呈正相關(guān)（

8、r0.6878，P0.05）；胰島素刺激后兩者之間r0.7689，P0.05。 4討論本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明：慢性胃炎脾胃濕熱證病人基礎(chǔ)紅細(xì)胞膜NaKATPase活力比正常人明顯提高，這是機(jī)體對(duì)濕熱致病因素和各種內(nèi)源性調(diào)節(jié)因素作出的一種代謝性效應(yīng)；酶活力提高必然增加細(xì)胞內(nèi)ATP消耗，從所測(cè)ATP含量數(shù)值，該組紅細(xì)胞基礎(chǔ)ATP仍略高于正常水平，表明脾胃濕熱證基礎(chǔ)酶活力和基礎(chǔ)能量代謝呈代償性提高；尿17OHCS測(cè)定結(jié)果表明這組病人下丘腦腺垂體腎上腺皮質(zhì)軸功能保持正常水平。脾胃氣虛基礎(chǔ)酶活力和基礎(chǔ)ATP含量與正常值相同，但比脾胃濕熱明顯降低，說(shuō)明脾胃氣虛組織細(xì)胞代謝對(duì)外源性病理刺激和各種內(nèi)源性調(diào)節(jié)作用的效

9、應(yīng)有所下降，尿17OHCS測(cè)定結(jié)果提示慢性胃炎脾胃氣虛證病人下丘腦腺垂體腎上腺皮質(zhì)軸功能比正常人和脾胃濕熱證病人明顯減退。脾腎氣虛，基礎(chǔ)酶活力較正常和脾胃氣虛呈下降趨勢(shì)，比濕熱證明顯降低，該組基礎(chǔ)紅細(xì)胞ATP含量不及正常和其他兩組的1/2，表明脾腎氣虛酶活力已明顯失代償，細(xì)胞內(nèi)合成ATP能力降低相當(dāng)嚴(yán)重，尿17-OHCS測(cè)定結(jié)果說(shuō)明該證型病人下丘腦腺垂體腎上腺皮質(zhì)軸功能?chē)?yán)重減退。胰島素刺激能明顯提高正常人、脾胃濕熱病人紅細(xì)胞膜NaKATPase活力，細(xì)胞內(nèi)ATP含量也明顯增加，同時(shí)濕熱組酶活力明顯高于正常組，說(shuō)明脾胃濕熱細(xì)胞膜NaKATPase和細(xì)胞內(nèi)能量代謝對(duì)胰島素刺激效應(yīng)比正常人明顯亢進(jìn)；

10、脾胃氣虛酶活力在胰島素刺激后雖然也明顯高于基礎(chǔ)酶活力，但比濕熱組明顯降低，比正常組也有所下降，胰島素刺激后ATP含量比基礎(chǔ)量未能明顯增加，但比濕熱組明顯降低，比正常組有所下降；說(shuō)明脾胃氣虛細(xì)胞膜NaKATPase活性和細(xì)胞內(nèi)能量代謝對(duì)胰島素刺激效應(yīng)已經(jīng)有所下降；脾腎氣虛胰島素刺激后酶活力和細(xì)胞內(nèi)ATP含量均明顯低于其他各組，同時(shí)與自身基礎(chǔ)數(shù)值沒(méi)有變化，進(jìn)一步證明脾腎氣虛組織細(xì)胞代謝功能已完全失去代償能力。本文研究結(jié)果說(shuō)明脾胃濕熱證病人基礎(chǔ)NaKATPase活性代償性增高及對(duì)胰島素刺激作用的效應(yīng)主要是通過(guò)提高酶分子的轉(zhuǎn)換率和增加細(xì)胞內(nèi)的能量代謝來(lái)實(shí)現(xiàn)的；脾胃氣虛由于腎上腺皮質(zhì)功能有所減退，提示膜NaKATPase在數(shù)量上有一定程度減少，細(xì)胞內(nèi)能量代謝尤其在應(yīng)激情況下有所減退，表現(xiàn)在酶分子不論在基礎(chǔ)狀態(tài)下的代償能力還是對(duì)胰島素刺激作用的效應(yīng)方面都明顯低于濕熱證病人；脾腎氣虛由于腎上腺皮質(zhì)功能?chē)?yán)重受損，導(dǎo)致紅細(xì)胞膜NaKATPase數(shù)量進(jìn)一步明顯減少，細(xì)胞內(nèi)能量代謝嚴(yán)重低下，提示該組病人在基礎(chǔ)狀態(tài)下酶分子的轉(zhuǎn)換率已達(dá)最高程度，所以對(duì)胰島素刺激呈陰性反應(yīng)，說(shuō)明腎上腺皮質(zhì)激素對(duì)NaKAT