乳豬原料檢測方法匯編-六和中心化驗室內部資料

1、 山東六和集團中心化驗室內部資料 第一部分 :乳豬料用原料檢測方法 山東六和集團技術部編輯2006-01-05目 錄1: 飼用玉米脂肪酸值的測定 3 2: 油脂碘價的測定 4 3: 油脂的酸價及過氧化值的測定 . 6 4: 魚粉中酸價的測定 . 8 5: 乳清粉中乳糖的測定 . 9 6: 油脂 TBA 值的測定方法 . 11 7: 嘔吐毒素 (DON的檢測 ELISA 法 . 13 8: 黃曲霉毒素的測定 ELISA 法 . 18 9: 魚粉中組胺的測定 . 22 10:揮發(fā)性鹽基氮的測定 (VBN . 24 11:飼料中免疫球蛋白 lgG 的測定 . 25 12:玉米副產品中二氧化硫殘留量的

2、測定 . . 29 13:魚粉中脲醛聚合物的鑒別 . 30 14:谷物中淀粉含量的測定 . 32 15:次粉中泥沙及礦物質的測定 . 35 16:鏡檢過程中的定性實驗 (魚粉、 肉骨粉、 玉米蛋白粉、 豆類蛋白粉、 大米蛋白粉 36 17:淀粉糊化度分析方法 . 39 18:大豆制品中尿素酶活性分析方法 (PH增值法 . 42 19:油脂定性試驗 . 43 20:乳糖測定附表 . 45一 . 飼用玉米脂肪酸值的測定1. 試劑:1.1 KOH乙醇標準溶液 C(KOH=0.01mol/L取 KOH 溶液 C(KOH=0.1mol/L 100ml,用乙醇(95%稀釋到 1 升,然后按 GB601標定

3、。1.2 酚酞指示劑:2g/l乙醇溶液1.3 無水乙醇2 步驟:將平均樣品按四分法制得約 80g 樣品粉碎, 過 0.45mm 孔徑篩 (40目 ,立即稱取 10g 樣品(精確到 0.01g ,于 150ml 具塞三角瓶內, 加 50ml 無水乙醇,加塞振動 10分鐘,過濾,并用無水乙醇洗 3次, 每次 15ml ,然后加酚酞 3滴,用 0.01mol/lKOH乙醇標準溶液滴定到 溶液呈微紅色,同時取 90ml 乙醇作空白。3計算 :脂肪酸值 (mgKOH/100g按下式計算(V-V 0×C ×56.1脂肪酸值 ×100m式中:V -樣品耗堿標準溶液的體積, ml

4、V 0空白耗堿標準溶液的體積, mlC -KOH 標準滴定溶液的濃度, mol/lm -樣品質量 ,g二、油脂碘價的測定1 試劑與溶液1.1 韋氏液的配制:稱取三氯化碘 7.9g 和純碘 8.7g 分別溶于冰乙酸 中,合并兩液,再用冰乙酸稀釋至 1L ,貯于棕色瓶內。 1.2 KI 溶液 150g/L1.3硫代硫酸鈉標液滴定溶液 C (NaS 2O 3 =0.1mol/L 1.4 三氯甲烷 CHCl 3 AR 2 步驟:按附表稱取試樣 (準確至 0.0002g 于干燥的碘量瓶中,加 20ml CHCl 3溶解試樣,加 25.00ml 韋氏液立即加塞,以 KI 溶液封口,搖勻 后, 在 20&#

5、177;5條件下, 置黑暗處 30min (碘價在 130以上時放置 1h , 到時立即加入 KI 溶液 20ml 和水 100ml, 用 C (NaS 2O 3 =0.1mol/L硫 代硫酸鈉標液滴定至淺黃色時,加入 1ml 5g/L淀粉指示劑,滴定至 蘭色消失。同樣條件做空白兩個,取平均值。 3 結果的表示和計算: 碘價按下式計算碘價 =(V 0-V 1×C ×0.1269m×100式中:V 1試樣消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積; mlV 2空白消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積; ml C -硫代硫酸鈉標準溶液的濃度; mol/L m -試樣的質量; g0.1269

6、與 1.00ml 硫代硫酸鈉標準溶液 (C(NaS 2O 3 =1.000mol/L的相當?shù)囊钥吮?示的碘的質量。 附表:碘價數(shù)值與試樣用量 三、油脂的酸價及過氧化值的測定 一 . 油脂的酸價的測定 :1 試劑與溶液1.1乙醚 -乙醇溶液(2+1配制時加入酚酞,并用堿調至中性1.2 NaOH標準滴定溶液 C (NaOH =0.1mol/L1.3酚酞指示劑 1g/L2 步驟將需用的錐形瓶烘干; 分別移取油脂上層、 中層、 下層液各 12ml置于烘干的錐形瓶中精密稱量。加入 50ml 乙醚 -乙醇溶液使其溶解, 可以微熱,加入酚酞指示劑 3-5滴 , 然后用 NaOH 標準溶液進行滴定 至粉紅色,

7、且 1分鐘不褪色為終點。同時做空白4計算 :酸價 (mgKOH/g按下式計算酸價 =C×(V-V0 ×56.1/m式中:C NaOH 標準溶液的濃度; mol/LV 消耗標準溶液的體積; mlm 樣品的重量; g56.1與 1.00mlC (NaOH =1.000mol/L相當?shù)囊?mg 表示的 KOH 的質量。 5說明 :酸價是指中和 1.0g 油脂所含游離脂肪酸所需 KOH 的毫克數(shù) , 同一 種油若酸價高,表明油脂因水解而產生更多的游離脂肪酸。二 . 油脂的過氧化值的測定1原理:油脂氧化過程產生過氧化物,與 KI 作用,生成游離碘,以淀粉 作指示劑,用硫代硫酸鈉標準溶

8、液滴定。2試劑與溶液2.1三氯甲烷冰乙酸的混合液(4+62.2硫代硫酸鈉標準滴定溶液 C (Na 2S 2O 3 =0.01mol/L2.3淀粉指示液 10g/L2.4碘化鉀 KI AR3 步驟:稱取 2- 3g(準確到 0.0002g 混勻的樣品,置于 250ml 烘干的碘 量瓶中,加入 30ml 三氯甲烷冰乙酸(4+6的混合液,使樣品完全 溶解,加入約 2g 的碘化鉀,緊密塞好瓶塞,并輕輕振搖 30秒鐘,然 后在暗處放置 3分鐘,取出加 100ml 水,搖勻,立即用的硫代硫酸鈉 標準溶 (C(Na 2S 2O 3 =0.01mol/L液滴定至淡黃色時,加 1ml 淀粉指 示液(10g/L

9、,繼續(xù)滴定至蘭色消失為終點,同樣條件做空白。 4計算:過氧化值(I 2%按下式計算過氧化值(I 2% =(V 1-V 0×C ×0.1269×100/m式中: V1 -樣品消耗硫代硫酸鈉的體積; mlV 0 -空白消耗硫代硫酸鈉的體積; mlC -硫代硫酸鈉標準溶液的濃度; mol/Lm -樣品的重量; g0.1269與 1.00mlC (Na 2 S2O3=1.000mol/L相當?shù)囊钥吮淼?I2的質量 g5 過氧化值二種單位的換算 :meq/kg = I2 % * 78.9四、魚粉中酸價的測定1 試劑與溶液1.1乙醚 -乙醇溶液(2+1配制時加入酚酞,并用堿調

10、至中性 1.2 NaOH標準滴定溶液 C (NaOH =0.05mol/L 1.3酚酞指示劑 1g/L 2 步驟稱取 23g (準確到 0.0002g 魚粉于干燥帶塞的三角瓶中,加 40ml 乙醚與乙醇(2+1混合溶液,在振蕩器上振搖 30min ,干過濾 于 150ml 三角瓶中, 并用少量乙醚乙醇溶液洗滌三角瓶三次, 加 3滴 的酚酞, 用氫氧化鈉標準溶液 C(NaOH =0.05mol/L滴定至粉紅色, 半 分鐘內不褪色為終點,同樣條件做空白。 3 結果的表示和計算: 酸價(mgKOH/g按下式計算酸價(mgKOH/g = 56.1×C ×(V-V 0m 式中:C N

11、aOH 標準滴定溶液的濃度; mol/L V 魚粉消耗標準溶液的體積; ml V 0空白消耗標準溶液的體積; ml m 魚粉樣品的質量; g56.1與 1.00mlNaOH 標準滴定溶液 C(NaOH =1.000mol/L相當?shù)囊?mg 表示的 KOH 的質量。 mg五、乳清粉中乳糖的測定1 試劑與溶液1.1酒石酸銅甲液:34.639gCuSO 4溶于水,加入 0.5ml 濃 H 2SO 4,稀釋 到 500ml 。酒石酸銅乙液:173g 酒石酸鉀鈉,加 50gNaOH ,稀釋到 500ml 。 1.2 氫氧化鈉溶液 c(NaOH= 1mol/L1.3硫酸鐵溶液 50g/L1.4高錳酸鉀標準

12、滴定溶液 c (1/5 KMnO 4 =0.1mol/L2 步驟 :稱 2g 樣品(準確到 0.0002g 于 200ml 燒杯中,加 50ml 水,電 爐加熱到 80,加酒石酸銅甲液 10ml ,加 NaOH (1mol/L 5ml ,攪 拌后放置到室溫,用水定容于 250ml 容量瓶中,搖勻,靜止 1h 后干 過濾。吸取濾液 25.00ml 于三角瓶中,加 25ml 酒石酸銅甲液,再加 25ml 酒石酸銅乙液, 在電爐上加熱并煮沸 2min (要保證在 3min 內煮 沸 , 取下過濾, 并用水洗滌沉淀 45次, 之后將濾紙及沉淀物 (Cu 2O 一起放入三角瓶中,加入硫酸鐵(50g/L

13、25ml ,再加 25ml 水,用玻 璃棒攪拌并微熱到看不到 Cu 2O 的紅色為止,然后用高錳酸鉀標準滴 定溶液 (c (1/5 KMnO 4 =0.1mol/L的標準溶液滴定到呈微紅色為終點。 同樣條件做空白3結果的表示和計算 :乳糖含量按下式計算a Cu 2O=(V-V 0×C ×71.54b 由 Cu 2O 的質量查表求乳糖的質量 m 乳 :c 樣品中乳糖的含量 :乳糖 %=m 乳 /m樣 ×100 式中:m 乳 樣品中乳糖的質量; gm 樣 -樣品的質量;V -樣品消耗 KMnO 4的體積; ml V 0 -空白消耗 KMnO 4的體積; ml 71.5

14、4常數(shù);C -KMnO 4標準溶液的濃度, mol/L六、油脂 TBA 值的測定方法1原理油脂受到光、熱、空氣中氧的作用,發(fā)生酸敗反應,分解出醛、 酸之類的化合物。 丙二醛就是分解產物的一種, 它能與硫代巴比妥酸 (TBA作用生成粉紅色化合物,在 532nm 波長處有吸收高峰,利用此 性質即能測出丙二醛含量,從而推導出油脂酸敗的程度。2試劑2.1硫代巴比妥酸 (TBA水溶液:準確稱取 TBA 0.288g溶于水中,并 稀釋至 100ml (如 TBA 不易溶解,可加熱至全溶澄清,然后稀釋至100ml ,相當于 0.02mol/L;2.2 三氯乙酸混合液:準確稱取三氯乙酸(分析純 7.5g 及

15、0.1g EDTA ,用水溶解,稀釋至 100.00ml ;2.3 氯仿(分析純 ;2.4 丙二醛標準溶液:稱取 0.315g 1, 1, 3, 3-四乙氧基丙烷,溶 解后稀釋至 1000.00ml ,此溶液每 ml 相當于丙二醛 100g ,置于冰 箱內保存。準確吸取 10ml ,稀釋至 100.00ml ,此溶液每 ml 相當于丙 二醛 10微克 (g ,備用。3操作步驟3.1標準曲線的繪制準確吸取每 ml 相當于丙二醛 10g 的標準溶液 0.0、 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5、 0.6ml 置于納氏比色管中,加水至總體積為 5ml ,加入 5ml TBA 溶液,然后按

16、樣品測定步驟進行,測得光密度繪制標準曲 線。3.2樣品測定:準確稱取融化均勻的油脂樣品 30.0g , 置于 100ml 具塞三角瓶內, 加入 20.0ml 三氯乙酸混合液,振搖半小時(保持油脂融溶狀態(tài),如 冷結可在 70水浴上略微加熱使之融化后繼續(xù)振搖用雙層濾紙過 濾,除去油脂。濾液重復用雙層濾紙過濾一次。準確移取上述濾液 5.0ml 置于 25ml 比色管內,加入 5.0 mlTBA溶液,混勻,加塞,置于 90水浴內保溫 40min ,取出,冷卻 1h , 移入小試管內, 離心 5min , 上清液傾入 25ml 納氏比色管中, 加入 5.0ml 氯仿,搖勻,靜置,分層,吸出上清液于 53

17、2nm 波長比色,對照標準 曲線得到微克數(shù)(同時作空白試驗 。4 計算丙二醛含量(mg/kg按下式計算丙二醛含量(mg/kg =m C 520式中 :C -從標準曲線查得丙二醛的微克數(shù) (ugm-樣品質量(g 七 、 嘔吐毒素 (DON的檢測 ELISA 法測試前請仔細閱讀本說明在 2 8冷藏不要凍結1. 簡介 DON毒素脫氧瓜萎鐮菌醇(DON , 是單端孢菌素烯烴中的一種,它通常是 由生長在谷類物品(如小麥、玉米、大麥和秣草霉菌鐮紅菌素生成 的。脫氧瓜萎鐮菌醇的毒性效應包括:嘔吐、不想進食、胃腸炎、腹 瀉、免疫抑制和血液病。研究表明豬對脫氧瓜萎鐮菌醇很敏感。 當脫氧瓜萎鐮菌醇含量 1ppm

18、時,它們就拒絕進食。其毒性也會對其他物種產生毒性效應, 各種物種對脫氧瓜萎鐮菌醇的敏感性各不相同。 研究表明脫氧瓜萎鐮 菌醇會使已加工食物發(fā)生問題, 包括使可吃的谷類制品產生臭味、 對 生面團質量產生負面影響。 因此, 精確測定可能含有脫氧瓜萎鐮菌醇 的食物和食品就現(xiàn)得十分重要。 FDA (美國食品和藥品管理局已經 制定了脫氧瓜萎鐮菌醇含量的強制標準。美國食品藥物管理局已經頒布的 DON 毒素建議限量如下: 2. 方法原理本測試盒的測試原理是一種競爭性的直接酶聯(lián)免疫吸附劑測試 方法(ELISA ,可準確檢測出樣品中 ppm 級的 DON 毒素。樣品和標準控制液中游離的 DON 毒素與軛合物中的

19、 DON 毒素競爭抗體結合位置。 清洗后,加入底物,底物與軛合物反應出現(xiàn)蘭色,蘭色越深表明 DON 毒素越少。 將其置于微型孔閱讀器中可讀出透光度, 以控制標準液的 透光度作標準曲線,將樣品的透光度與標準曲線比較計算出樣品中 DON 毒素的準確濃度。3. 貯存要求本試劑盒存放在 28時,可以一直使用到標簽上注明的到期日期。 4. 試劑與儀器4.1已提供的材料1. 48個包被了抗體的孔。2. 48個紅色標記的混合孔。3. 5瓶 1.5ml 濃度為 0、 0.25、 0.5、 1、 3 ppmDON 毒素控制標準液 (黃色標 簽 。4. 1瓶 DON 毒素 -HRP 軛合物溶液 (蘭色標簽 。5.

20、 1瓶 24ml 底物溶液 (綠色標簽 。4.2需要但未提供的材料1 提取材料:a. 蒸餾水或去離子水。b. 100ml 量筒c. 150ml 的具塞三角瓶d. 濾紙e. 樣品收集具塞試管f. 漏斗2. 粉碎機3. 稱量為 525克的秤4. 帶 450nm 濾光片的微型孔閱讀器5. 200l 移液器6. 200l 吸咀7. 紙巾或等效的吸水材料8. 計時器9. 防水記號筆10. 洗瓶11. 移液器用的試劑槽12. 蒸餾水或去離子水13.C (1/2H 2SO 4 =1mol/L的硫酸終止液5. 注意事項1. 本測試盒不使用時應在 28下存放。2. 不要使用過期的測試盒。3. 不要把不同測試盒中

21、的試劑混合使用。4. 遵守正確的移液技術,包括取液前先用該液潤洗一次。5. 放置時間與本說明不一致時,可能會出現(xiàn)錯誤的結果。6. 測試盒應先恢復到室溫狀態(tài) (1830 后才開始使用。7. 避免測試盒在室溫下長時間放置。8. 不要使測試盒凍結。9. 待測樣品的 pH 值應為 68。酸堿過大的樣品應進行調整。應將包括樣 品提取液在內的所有廢液和實驗器皿進行處理(如同已被 DON 毒素污染 一樣 。應始終穿戴手套和其它防護服。10. 為了避免交叉污染,每個樣品應使用清潔的吸咀和玻璃器皿,并在樣品 之間徹底清洗所有的玻璃器皿。6. 程序性的提示底物:底物隨時可用,底物為清亮的淺蘭色,如果變成了深蘭,則

22、棄去。使 用時,只倒出所需量到試劑槽中, 未用完的不要再倒回試劑瓶中。 不使用時應蓋 住試劑槽,以避免光的照射。7. 操作步驟7.1樣品制備和提取1. 待測樣品應按公認的采樣技術采集。 樣品應磨碎并充分混合后再提 取。測試前,將樣品在 28存放。2. 將 30ml 硫酸緩緩注入 1000ml 水中,冷卻搖勻,配成的硫酸 (C (1/2H 2SO 4 =1mol/L終止液。3. 取 1份代表性樣品。研磨樣品至至少有 75%的樣品通過 20目的篩 子,顆粒尺寸大約相當于細的速溶咖啡。4. 將 10克研磨過的樣品加入 50ml 水或去離子水中,用手或震蕩器 劇烈混合 15分鐘。5. 將靜置 2-3分

23、鐘,使一些物質沉淀下來。6. 用濾紙過濾出至少 5ml 的提取液。收集該濾液即為樣品的待測液。7.2測試程序測試前應將所有的試劑恢復至室溫(1830 。1. 從箔包中取紅色標記的混合孔,放在孔架上。2. 取同樣數(shù)量的包被了抗體的孔。 把暫不使用的孔放回到箔包中, 并 重新密封,以保護抗體。在帶子的一端標上“ 1” ,然后放到孔架上, 將有標記的一端放在左邊。不要在孔的里面和底部寫標記。3. 在使用之前搖動試劑瓶,混合每種試劑。4. 從蘭色標簽的瓶內吸取 100l 軛合物加到每個紅色標記的混合孔 內。5. 每次使用新吸咀,吸取 100l 控制標準溶液和樣品液按下列順序 加到紅色標記的混合孔內6.

24、 用移液器吸入、排出 3次使孔內溶液徹底混合,吸取 100l 加 到相應的包被了抗體的孔內, 在平的表面上將板前后滑動確保充分混 合 1020秒鐘,不要濺出試劑, 混合后于室溫下 (1830 放置 5分鐘 。棄去紅色標記孔。7. 倒掉包被了抗體孔內的溶液。 在每個孔內加滿蒸餾水或去離子水, 再倒出,如此重復 5次,將板朝下,在吸水材料上拍擊以去除所有的 水滴。8.從綠色標簽試劑瓶中倒出所需量的試劑到綠色試劑槽中。9.用移液器和新吸咀,吸取 100l 底物加到每個孔內,在平的表面 上將板前后滑動確保充分混合 1020秒鐘。10. 混合后放置 2.5分鐘 。11.從試劑瓶中倒出所需量的硫酸 (C

25、(1/2H 2SO 4 =1mol/L終止液到試 劑槽中。12.吸取 100l 終止液加到每個孔內,在平的表面上將板前后滑動 確保充分混合。13. 用干凈的布擦凈板底, 將板置于微型孔閱讀器于 450nm 濾光片下 讀數(shù)。由于氣泡會影響結果,應削除溶液中氣泡。應在加入紅色終止 劑后 20分鐘內完成讀數(shù)。14.用 Log/logit軟件計算結果。8. 特性參數(shù)檢出限:0.1 ppm(10次陰性樣品的平均值加 2倍標準偏差 。定量檢測限:0.25 ppm(以標準曲線的最低濃度點表示 。定量范圍:0.25-2.5 ppm(大于 2.5 ppm 時 , 見樣品制備和提取程序 八、黃曲霉毒素的測定 EL

26、ISA 法測試前請仔細閱讀本說明在 2 8冷藏不要凍結1. 簡介 黃曲霉毒素黃曲霉毒素是一種劇毒且致癌的物質, 它是由黃曲霉菌和寄生曲霉菌 A 的某 些菌株產生的。黃曲霉毒素有四種類型:B1, B2, G1和 G2。黃曲霉毒素 B1是毒 性最大且最常有的。最容易產生黃曲霉毒素污染的物質是谷物、花生、棉子、高 梁和大多數(shù)的樹果。動物食入過量黃曲霉毒素的影響從慢性健康直到死亡, 已經證明黃曲霉毒素 能引起肝損壞或癌癥、降低奶和蛋的產出、免疫抑制和干擾再生效率。美國食品藥物管理局已經規(guī)定了食品和飼料中最大黃曲霉毒素限量。因此, 準確測定黃曲霉毒素的含量, 對于監(jiān)測可能發(fā)生黃曲霉毒素污染的食品和飼料的

27、 質量來說,是非常重要的。測試程序包括仔細的采樣、化學提取、衛(wèi)生學評價和 定量分析。 2. 方法原理本 測 試 盒 的 測 試 原 理是 一 種 競 爭 性 的 直 接酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 劑 測 試 方 法 (ELISA , 可準確檢測出樣品中 ppb 級的黃曲霉毒素。 樣品和標準控制液中游離 的黃曲霉毒素與軛合物中的黃曲霉毒素競爭抗體結合位置。清洗后,加入底物, 底物與軛合物反應出現(xiàn)蘭色, 蘭色越深表明黃曲霉毒素越少。 將其置于微型孔閱 讀器中可讀出透光度, 以控制標準液的透光度作標準曲線, 將樣品的透光度與標 準曲線比較計算出樣品中黃曲霉毒素的準確濃度。3. 貯存要求本試劑盒存放在 2

28、8時,可以一直使用到標簽上注明的到期日期。 4. 試劑與儀器4.1提供的材料4.2需要但未提供的材料a. 70%甲醇溶液b. 100ml 量筒c. 150ml 的具塞三角瓶d. 濾紙e. 樣品收集具塞試管f. 漏斗5. 注意事項5.1 甲醇易燃, 其容器應密閉并遠離熱、 火花、 明火和煙。 如果吞下或吸入蒸氣, 它是有毒的。應避免與皮膚接觸。5.2 本測試盒不使用時應在 28下存放。5.3 不要使用過期的測試盒。5.4 不要把不同測試盒中的試劑混合使用。5.5 遵守正確的移液技術,包括取液前先用該液潤洗一次。5.6 放置時間與本說明不一致時,可能會出現(xiàn)錯誤的結果。5.7 測試盒應先恢復到室溫狀

29、態(tài) (1830 后才開始使用。5.8 避免測試盒在室溫下長時間放置。5.9 不要使測試盒凍結。5.10應將包括樣品提取液在內的所有廢液和實驗器皿進行處理(如同已被黃曲 霉毒素污染一樣 。應始終穿戴手套和其它防護服。5.11為了避免交叉污染,每個樣品應使用清潔的吸咀和玻璃器皿,并在樣品之 間徹底清洗所有的玻璃器皿。5.12待測樣品的 pH 值應為 68。酸堿過大的樣品應進行調整。關于 pH 值的調 整,請與 Neogen 代表或技術服務部門聯(lián)系。6. 程序性的提示K-蘭底物隨時可用,底物為清亮的淺蘭色,如果變成了深蘭,則棄去。使用 時, 只倒出所需量到試劑槽中, 未用完的不要再倒回試劑瓶中。 不

30、使用時應蓋住 試劑槽,以避免光的照射。7. 操作步驟7.1樣品制備和提取待測樣品應按公認的采樣技術采集。 樣品應磨碎并充分混合后再提取。 測試 前,將樣品在 28存放。按以下程序進行:1 將 7份分析級甲醇與 3份蒸餾水或去離子水混合配成 70%的甲醇溶液。2 將 30ml 硫酸緩緩注入 1000ml 水中, 冷卻搖勻, 配成硫酸 (C(1/2H 2 SO4=1mol/L的終止液。3取 1份代表性樣品。研磨樣品至至少有 75%的樣品通過 20目的篩子,顆粒尺 寸大約相當于細的速溶咖啡。4把 5克研磨過的樣品加入到 25ml 70%的甲醇中,然后用力搖動 15分鐘。 5用濾紙過濾出至少 5ml

31、的提取液。該濾液即為樣品的待測液。6該待測液即可用于測試。7.2測試程序測試前應將所有的試劑恢復至室溫(1830 。1. 從箔包中取紅色標記混合孔,放在孔架上。2. 取同樣數(shù)量的包被了抗體的孔。把暫不使用的孔放回到箔包中,并重新密封, 以保護抗體。3. 在使用之前搖動試劑瓶,混合每種試劑。4. 從蘭色標簽瓶內吸取 100l 軛合物加到每個紅色標記的混合孔內。 棄去吸咀。5. 每次使用新吸咀,吸取 100l 控制標準溶液和樣品液按下列順序加到紅色標 記的混合孔內6. 用移液器吸入、排出 3次使孔內溶液徹底混合,吸取 100l 加到相應的包被 了抗體的孔內,在平的表面上將板前后滑動確保充分混合 1

32、020秒鐘,不要濺 出試劑, 混合后于室溫下 (1830 放置 2分鐘 。7. 倒掉包被了抗體孔內的溶液。 在每個孔內加滿蒸餾水或去離子水, 再倒掉, 如 此重復 5次,將板朝下,在吸水材料上拍擊以去除所有的水滴。8. 從綠色試劑瓶中倒出所需量的試劑到試劑槽中。9. 用移液器和新吸咀,吸取 100l 底物加到每個孔內,在平的表面上將板前后 滑動確保充分混合 1020秒鐘。10. 混合后放置 1.5分鐘 。11. 從試劑瓶中倒出所需量的硫酸 (C(1/2H 2 SO4=1mol/L終止液到試劑槽中。12. 用移液器吸取 100l 終止液加到每個孔內, 在平的表面上將板前后滑動確保 充分混合。13

33、. 用干凈的布擦凈板底,將板置于微型孔閱讀器于 450nm 濾光片下讀數(shù)。由于 氣泡會影響結果,應削除溶液中氣泡。應在加入終止液后 20分鐘內完成讀數(shù)。 14. 用 Log/logit軟件計算結果。8. 特性參數(shù)檢出限:2ppb(10次陰性樣品的平均值加 2倍標準偏差 。 定量檢測限:5ppb(以標準曲線的最低濃度點表示 。 定量范圍:5-50 ppb(大于 50 ppb時應稀釋 九 、 魚粉中組胺的測定原理簡介 :魚粉中組胺用三氯乙酸提取,之后調 PH=9,將游離的組胺用正戊 醇提取出,之后再用 HCl 反萃取,用偶氮試劑顯色。組胺 +三氯乙酸鹽 (溶于水 -PH=9-組胺 (溶于正戊醇 -

34、HCl-正戊醇 (組 胺溶于稀 HCl 1試劑與溶液1.1偶氮試劑的配制甲液:稱取 0.5g 對硝基苯胺,加 5ml 鹽酸(1+1溶解,再加水釋到 200ml ,置 冰箱中(28度保存。乙液:亞硝酸鈉溶液 5g/l,臨用現(xiàn)配甲液 5ml 、乙液 40ml 混合后立刻使用。1. 2三氯乙酸 100 g/L1.3氫氧化鈉 250g/L1.4鹽酸 1mol/L1.5正戊醇 分析純1. 6碳酸氫鈉溶液 50g/L1.7磷酸組胺(Sigma 公司步驟2.1樣品處理稱取 1-3克魚粉于具塞三角瓶內, 加入 25.0ml 三氯乙酸 (100g/L 每隔 30分鐘搖動一次, 提取 3小時, 過濾, 取濾液 2

35、.00ml 或 1.00ml 于 15ml 試管內,加氫氧化鈉(250g/L 5滴,振蕩一下,再加 5ml 正戊醇振蕩 2分鐘,靜止分層(如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象可滴加 2-3滴無水 乙醇 ,用移液槍小心吸取上清液(正戊醇層于 50ml 分液漏斗內, 下層沉淀再下層沉淀再分別用正戊醇 5ml 、 3ml 、 3ml 反萃取 3次。將 正戊醇全部收集到 50ml 分液漏內 , 分別用鹽酸 (1mol/L6 ml、 6 ml、3 ml反萃取 3次 , 收集水相(下層于 20ml 刻度試管內,用水定容 至刻度 (20.00ml,搖勻,吸取 1.00ml (或 2.00ml 鹽酸提取液于 10 ml 比色管中,

36、加入碳酸氫鈉溶液(50g/L 3.0ml 搖勻,振蕩下加 入偶氮試劑 3.0ml ,用水定容到刻度,室溫下顯色 10min ,用 1cm 比 色皿于 480nm 下測定吸光度。2.2標準曲線稱取磷酸組胺樣品(Sigma 公司 2.7671mg ,置于 100ml 容量瓶 內,用水溶解并定容到刻度,此液組胺含量為 10ug/ml,分別取此標 液 0.00、 1.00、 2.00、 4.00、 6.00ml 于 5支 10ml 比色管內,各加鹽 酸(1mol/L 1.0ml ,振蕩,用水定容到刻度,搖勻后放置 10min (室 溫下 ,用 1cm 比色皿于 480nm 下測吸光值。參比液:試劑空白

37、3計算魚粉中組胺按下式計算公式: 實例 :魚粉 2.3455,取三氯乙酸提取液 1.00ml ,吸光度 A=0.257標準曲線 :A=0.012380*C+0.01310計算 : C =(A-0.0131/0.012380=19.70ug組胺 =(19.70*100/(2.3455/25*(1.0/15*1000=315mg/100g=3150ppm應用:進口白魚粉:組胺 <10mg/100g(1-5mg/100g進口水產級蒸汽魚粉 <100mg/100g(50mg/100g優(yōu)質國產魚粉 <150mg/100g(50-150mg/100g新鮮度差的魚粉 (國產 , 進口 組胺

38、 200340mg/100g用于乳豬料的魚粉 組胺 <100mg/100g十 、 揮發(fā)性鹽基氮的測定 (VBN原理簡介 :蛋白質分解時,氨基酸脫胺基生成氨,氨基酸脫羧基生成胺,氨 與胺 (揮發(fā)性的胺 在堿液 (氧化鎂 中被蒸發(fā)出來, 用硼酸吸收, 用標準鹽酸反滴 定,測出其含量。1試劑與溶液1.1氧化鎂溶液 10g/L2. 步 驟稱取 5-10g 樣品于 250ml 具塞三角瓶內, 加入 100.0ml 水, 振蕩 30min ,過濾,取慮液 10.00ml ,按粗蛋白蒸餾操作,但加入的堿為 氧化鎂溶液(10g/L 7-10ml 。3. 計算:揮發(fā)性鹽基氮(VBN (mg/100g按下式

39、計算VBN (mg/100g = C(V-V 0 *14/m*(10/100 *100 實例 :魚粉樣品 8.6706g , V HCl =0.0200mol/L V=3.93ml V0=0.15ml VBN=0.0200*14* (3.93-0.15/8.6706*(10/100*100 =122.1mg/100g應用 :新鮮度好的魚粉 VBN<100mg/100g(40-80 mg/100g新鮮度差的魚粉 VBN>150mg/100g(180-350 mg/100g乳豬料魚粉 VBN<100mg/100g十一 、 飼料中免疫球蛋白 lgG 的測定 (高效液相色譜法 1 范

40、圍本標準規(guī)定了用高效液相色譜法儀測定飼料中免疫球蛋白 IgG 含量的方法本標準適用配合飼料、濃縮飼料、含 Ig 的飼料原料(包括血漿 蛋白粉、雞蛋粉等中免疫球蛋白 IgG 的測定本方法檢出限:當取樣 1g ,稀釋至 25ml ,進樣量 20ul ,檢出濃 度為 0.2mg/ml2 原理根據(jù)高效親和色譜的原理,在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白 IgG 與配基連接, 在 PH2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免疫球蛋白 IgG 。 3 試劑除非另有說明, 在分析中僅使用確認為分析純的試劑, 水為去離 子水或相當純度的水,應符合 CB/T6682三級用水的規(guī)定3.1磷酸二氫鉀3.2 磷酸氫二鉀3.3流動相

41、A :PH6.5, 0.05mol/L磷酸鹽緩沖液3.4流動相 B :PH2.5, 0.05mol/L甘氨酸鹽酸緩沖液3.5 IgG儲備標準液:稱取 IgG 標準品(Sigma 公司 0.0100g ,用流動相 A (3.3溶 解并定容至 10ml ,搖勻,濃度為 1.0mg/ml3.6 IgG工作標準溶液:取 IgG 標準儲備液,用流動相 A (3.3稀釋成含 IgG 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0mg/ml的標準系列。臨用時配制。4 儀器和設備4.1 實驗室常用儀器設備4.2 PH計4.3超純水裝置4.4勻漿機4.5高效液相色譜儀:具紫外檢測器和梯度洗脫裝置5 試樣制備按

42、GB/T14699飼料采樣,選取飼料樣品至少 500g ,四分法縮減 至少 100g , 磨碎, 通過 0.28 um(80目 孔篩, 混勻, 裝入密閉容器中, 避光低溫保存?zhèn)溆谩? 分析步驟6.1試樣處理:稱取一定量試樣(精確至 0.0001 ,配合飼料、濃縮飼料時,稱 取試樣 25g;血漿蛋白粉稱取試樣 0.1g ;雞蛋粉稱取試樣 0.5g ,于 茄形瓶中,準確加入 25ml 流動相 A (3.3 ,用勻漿機勻漿 5分鐘, 取溶液 10ml 于離心管中, 以 3500 r/min離心 10min , 通過 0.45um 微 孔濾膜后進樣6.2 測定:色譜柱:Pharmacia HI-Tra

43、p Protein G柱, 1 ml波長:280nm進樣量:20ul梯度洗脫見表 1表 1 6.2. 3測定先用 5倍柱體積的重蒸餾水或去離子水洗柱,再用 10倍柱體積 流動相 A (3.3平衡柱,按洗脫程序進行洗脫。分別取 6.1試樣處理液和 3.6標準工作液進行測定,以色譜峰面積積 分值做單點或多點校準定量。7 結果計算7.1試樣中 IgG 含量 (g/100g按下式計算:P 1×V ×c ×V st ×100P st ×m ×Vi ×V 1×100式(1中:-試樣中 IgG 含量, g/100g;=Vst 標

44、準工作液進樣體積, ul ;P st 試樣峰面積值;Vi -試樣進樣體積; ul ;V -試樣體積, ml ;m -稱取試樣的質量, g ;7.2 平行測定結果用算術平行值表示,保留小數(shù)點后兩位有效數(shù)字。8 重復性在重復性條件下獲得的兩次獨立測試結果的測定值的絕對差值 不得超過算術平均值的 15%。十二 、 玉米副產品中二氧化硫殘留量的測定 方法 1:GB/T5009.34-1996方法 2:稱取樣品 10g 于三角燒瓶內 , 加入少量水 (約 10ml, 加入 20ml 濃鹽 酸 ,5g 鋅粉 , 瓶口用乙酸鉛試紙扎緊 , 放在沸水浴上加熱 , 若瓶中變黑則 含 SO 2 , 標準樣品可用無

45、水亞硫酸鈉 (Na2SO 3 代替 , 同上操作 , 根據(jù)黑班 的大小 , 確認含量 .方法 3:稱樣品 20g 于具塞三角瓶內 , 準確加入 100ml 水 , 振蕩 5分鐘 , 靜止 待瓶內液體澄清后 , 準確吸取上清液 20ml, 置于 250ml 碘量瓶內 , 加入 1mol/L NaCl 25ml, 振蕩 2分鐘 , 靜止 10分鐘 , 然后加入硫酸 (1+310ml,邊 加 邊 振 蕩 , 之 后 加 淀 粉 (10g/l1ml,用 碘 標 準 滴 定 溶 液 (C(1/2I 2=0.1mol/L滴定到溶液呈蘭色 , 同時作空白試驗 .SO 2 % =C×(V-V0 &#

46、215;0.032/(m×1/5×100十三 、 魚粉中脲醛聚合物的鑒別 1原理脲醛聚合物在濃硫酸的作用下分解成甲醛與氨,甲醛與變色酸 (鉻變酸 ,1.8 二羥基萘 3.6二磺酸的濃硫酸溶液一起微熱,形 成一種紫色 紫紅色化合物2試驗部分試劑與儀器立體顯微鏡(160倍可連續(xù)變焦,帶光源眼科鑷子燒杯 50 ml變色酸 2g/L稱取變色酸 0.2g 于 200ml 干燥的燒杯中,加入 100ml 濃硫酸, 電爐上微熱 (50-60 2min 并攪拌使之溶解,冷卻后,移入 120ml 棕 色滴瓶內。試驗步驟取約 3g 試樣于燒杯中,用石油醚(或乙醚脫脂,吹干溶劑后 將樣品移至培養(yǎng)

47、皿內,在體視鏡下(放大倍數(shù)為 10 20倍將白色 或淺黃色易碎的無定形固體可疑物,用眼科鑷子小心夾取數(shù)粒于 50ml 干燥燒杯內,再將燒杯放到體視鏡下,確認可疑物已移放到燒 杯內, 然后滴加 0.5 1ml 變色酸, 并把燒杯放在電爐上微熱 1 2min , 如溶液變成紫色(或紫紅色 ,則樣品中含有脲醛聚合物“蛋白精” 。 3結果與討論反應的干擾情況和檢出限量變色酸的濃硫酸溶液對乙醛、丙醛、丁醛、異丁醛、異戊醛、庚 醛、巴豆醛、水合氯醛、乙二醛及芳香族醛類物均無此反應,與甘油 醛、糠醛、阿拉伯糖、果糖及蔗糖反應顯黃色,其它糖類、丙酮及羧 酸類都不與變色酸的濃硫酸溶液發(fā)生反應。此方法的檢出限量為

48、 0.05mg (脲醛聚合物 加熱溫度滴加變色酸的濃硫酸溶液后,加熱的溫度應在 150 以下,溫 度過高部分“蛋白精”被炭化成黑色,影響判斷。夾取可疑物時應注意的問題由于 “蛋白精” 的粒度很小, 而且易碎, 雖然在體視鏡下看到了, 鑷子也夾到了,但在轉移到燒杯的過程中易丟失,因此,在夾取了數(shù) 粒后, 要將燒杯放到體視鏡下確認可疑物已放到燒杯中, 并輕輕振動 燒杯或用探針撥動可疑物, 使之集中在燒杯底部的某個點上, 滴加變 色酸時要對準此點。依據(jù)氨基酸總量來判斷是否摻有“蛋白精”通常根據(jù)魚粉氨基酸總量明顯偏低(小于粗蛋白質的 85% ,而 水溶性非蛋白氮 (NPN為陰性來判斷魚粉中有脲醛聚合物

49、“蛋白精” , 這并不能說明樣品中一定含有脲醛聚合物“蛋白精” ,只能證實含有 難溶性的非蛋白氮 (NPN。3.5 此方法也適用于肉骨粉、 玉米蛋白粉、 豆類蛋白粉、 大米蛋白粉 中蛋白精的檢測十四 、 谷物中淀粉含量的測定1 試劑與溶液1.1 酒石酸銅甲液 (菲林甲液 :34.639gCuSO 4溶于水,加入 0.5ml 濃 H 2SO 4,稀釋到 500ml 。1.2 酒石酸銅乙液 (菲林乙液 :173g 酒石酸鉀鈉,加 50gNaOH ,稀 釋到 500ml 。 1.2 氫氧化鈉溶液 c(NaOH= 1mol/L1.3 硫酸鐵溶液 50g/L1.4 高錳酸鉀標準滴定溶液 c (1/5 K

50、MnO 4 =0.1mol/L1.5 乙醇溶液 85% v/v1.6 HCl 1+1 和 1+3NaOH 溶液 40%乙酸鉛溶液 20%硫酸鈉 10%2 步驟 :稱取樣品(粉碎過 40目篩 2.05.0g ,準確至 0.0002g ,置于 放有慢速濾紙的漏斗中,用 30ml 乙醚分三次洗去樣品中脂肪,再用 150ml 85%乙醇溶液分數(shù)次洗滌殘渣,以除去可溶性糖類物質,濾干 乙醇溶液, 將濾紙連同殘渣一并轉移至 250ml 錐形瓶中, 加 100ml 水, 加 30ml (1+1 HCl ,在沸水浴上回流 2h ,回流完畢后,立即在流水 中冷卻,待樣品水解液冷卻完全后,加 3滴甲基紅指示劑,先

51、用 40%NaOH溶液調至黃色,再用 (1+3的 HCl 調至水解液剛變紅色為宜, 使水解液的 PH 值約為 5,然后加 20ml 20%的乙酸鉛溶液,搖勻,放 置 10min ,再加 20ml 10%的硫酸鈉溶液,搖勻后,將全部溶液及殘渣 轉入 500ml 容量瓶中, 用水洗滌錐形瓶, 洗液合并于容量瓶中, 定容, 搖勻,過濾,棄去初濾液 20ml ,濾液供測定用。吸取 25.00ml 濾液于三角瓶中, 加 25ml 菲林甲液, 再加 25ml 菲 林乙液,在電爐上加熱 (在 3min 內煮沸 并煮沸 2min ,取下過濾,并 用水洗滌沉淀 45次,之后將濾紙及沉淀物一起放入三角瓶內,加 入

52、硫酸鐵(50g/L 25ml ,再加 25ml 水,用玻璃棒攪拌到看不到 Cu 2O 的紅色為止,然后用高錳酸鉀標準溶液 C(1/5KMnO4 =0.1mol/L滴 定到呈微紅色 30s 不褪色為終點。同樣條件做空白。3計算 :以質量百分含量表示的淀粉含量按下式計算:(1 C u 20=(V-V 0×C ×71.54(2 用 Cu 20的質量查表求轉化糖的質量:淀粉含量 % =轉化糖×0.9m×25.00/250.0×100式中: V -樣品消耗 KMnO 4的體積; ml V 0空白消耗 KMnO 4的體積; ml , m -試樣的質量 ,g

53、十五 、 次粉中泥沙及礦物質的測定 1 步驟:稱取 20g 樣品(準確至 0.1g 于 250ml 干燥的分液漏斗中,加 約 100ml 的四氯化碳,振蕩幾分鐘,靜止 0.5h 以上,小心地將下層 沉淀物放出到已在 105烘至恒重的小燒杯中,水浴上蒸干溶劑后, 放到 105烘箱內烘 0.5h ,取出,冷卻,稱重。2 沉淀物分析(定性如沉淀物為白色、灰白色物質,且不溶于鹽酸,則為滑石粉;反 之,沉淀溶于鹽酸,并放出大量的氣泡,則為石粉。如沉淀物外觀如泥砂狀物質,則沉淀為混入或摻入的泥砂。 如沉淀外觀很白,并有熒光性,則沉淀物為增白劑。3 計算:沉淀物 % = m 2-m 1m×100

54、式中:m 2烘后沉淀物+燒杯的質量; gm 1燒杯的質量; gm 樣品的質量; g說明 :此方法也適用于豆粕、棉粕及菜粕中泥砂的測定 。十六 、 魚粉、肉骨粉、玉米蛋白粉、豆類蛋白粉、大米蛋白粉 鏡檢過程中的定性實驗定性檢查A . 摻入植物類物質 (如小麥麩、 稻谷粉、 豆類蛋白粉和大米蛋白粉 試劑:碘 -碘化鉀溶液配制:稱 1g 的碘及 5g 碘化鉀于燒杯內,加 100ml 水攪拌 2分鐘,待 溶解后將其移入 120ml 棕色的滴瓶內。步驟:取約 5g 樣品放在燒杯內,加約 70ml 水,在電爐上煮沸,取下 靜止 2分鐘, 滴加碘-碘化鉀溶液1ml , 如溶液變成藍色則摻 入植物性的物質。B

55、. 摻入尿素試劑:(1生黃豆粉 :將大豆磨成粉末(注意 :防止粉碎中升溫 (2酚紅 :1g/L。 稱取酚紅 (苯酚紅 0.1g 溶于 100ml 乙醇中。 步驟:取約 0.5g 魚粉樣品,于 50ml 比色管內,再加約 0.1-0.2g 生黃豆粉, 3-5滴酚紅, 40ml 水,塞好塞子,搖動 30秒,靜止, 如溶液變成紅色,則樣品中摻入尿素。C. 摻入銨鹽類物質(氨化銨,碳酸氫銨試劑 (130%氫氧化鈉溶液 : 稱30g 氫氧化鈉加70ml 水。 (2 PH 試紙步驟:取魚粉 3-5g 于 100ml 燒杯內,表皿內側沾一條濕的 PH 試紙, 向燒杯內加約 5-10ml 氫氧化鈉,將表皿迅速

56、蓋上,如試紙迅速變藍,則含銨鹽。D. 摻入蛋白精(脲醛聚合物試劑 :變色酸 (0.1%硫酸溶液 稱取 0.1g 變色酸于干燥的燒杯內, 加 入 100 ml濃硫酸,電爐上加熱到(70-80 ,待溶解后,降 溫,移入 120 ml棕色的滴瓶內。步驟 : 將可疑物從顯微鏡下夾出數(shù)粒于干燥的小燒杯內, 滴加約 1 ml 變色酸,電爐上加熱到剛剛產生微煙,取下,加入 20 -30ml水,如變成紫色,則樣品中有蛋白精。E. 摻入植物性物質(含大量粗纖維類物質:如鋸末、稻草、麥芽根 試劑 :(1 間苯三酚 2%:稱間苯三酚 2 g,加 100 95%乙醇,溶解后 放入棕色滴瓶內。(2 濃鹽酸 36% 分析純試劑步驟:稱 1-2g 魚粉于培養(yǎng)皿內, 滴加間苯三酚使樣品濕潤, 放置 5-10分鐘后,滴加濃鹽酸約 0.5ml ,放置