《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之

1、農(nóng)殘檢測常用方法技術(shù)要點農(nóng)殘檢測常用方法技術(shù)要點卞紅正卞紅正安徽省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心安徽省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗測試中心（合肥）農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗測試中心（合肥）農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)系列之農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)系列之主要內(nèi)容速測方法3準確定性定量檢測法4當前常用檢測方法2前言1以前農(nóng)殘檢測方法的頒布：國家標準化管理委員會頒布國家標準國家標準化管理委員會頒布國家標準（GBGB）; ;農(nóng)業(yè)部頒布行業(yè)標準農(nóng)業(yè)部頒布行業(yè)標準（NYNY）; ;國家進出口商品檢驗檢疫總局頒布行業(yè)標準，編號國家進出口商品檢驗檢疫總局頒布行業(yè)標準，編號為為SNSN。已頒布標準截至截

2、至目前，已頒布的農(nóng)產(chǎn)品和食品農(nóng)藥殘留檢測方法目前，已頒布的農(nóng)產(chǎn)品和食品農(nóng)藥殘留檢測方法標準共有標準共有39390 0多多個個。其中其中：國家標準國家標準9292個個，農(nóng)業(yè)行業(yè)標農(nóng)業(yè)行業(yè)標準準3535個個，商檢行業(yè)商檢行業(yè)標準約標準約270270個。個。前 言 根據(jù)根據(jù)20092009年年6 6月月1 1日實施的中華人民共和國食品安日實施的中華人民共和國食品安全法第二十一條和第二十二條的規(guī)定，今后凡涉全法第二十一條和第二十二條的規(guī)定，今后凡涉及食品安全的標準（八個方面），統(tǒng)一由及食品安全的標準（八個方面），統(tǒng)一由國務(wù)院國務(wù)院衛(wèi)衛(wèi)生行政部門部制定和頒布生行政部門部制定和頒布，國務(wù)院標準化行政部門，

3、國務(wù)院標準化行政部門提供國家標準編號提供國家標準編號 。 對現(xiàn)行的食用農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全標準、食品衛(wèi)生標準、對現(xiàn)行的食用農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全標準、食品衛(wèi)生標準、食品質(zhì)量標準和有關(guān)食品的行業(yè)標準中強制執(zhí)行的食品質(zhì)量標準和有關(guān)食品的行業(yè)標準中強制執(zhí)行的標準予以整合，統(tǒng)一公布為食品安全國家標準。標準予以整合，統(tǒng)一公布為食品安全國家標準。 農(nóng)殘檢測方法標準全部統(tǒng)一為農(nóng)殘檢測方法標準全部統(tǒng)一為食品安全食品安全國家標準。國家標準。前 言1.速測方法GB/T 5009.199-2003蔬蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測類農(nóng)藥殘留量的快速檢測NY/T 448-2001蔬菜蔬菜上有機磷

4、和氨基甲酸上有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測方法測方法一、當前常用檢測方法NY/T 761-2008蔬菜和水果中有機磷、蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定藥多殘留的測定QuEChERS Method（美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)（美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究服務(wù)中心）修訂方法研究服務(wù)中心）修訂方法NY/T 761-2008 、GB/T 19648-2006水果和蔬菜水果和蔬菜中中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留的測定種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留的測定 氣相色譜氣相色譜-質(zhì)譜法質(zhì)譜法、GB/T 20769-2008水果和蔬菜中水果和蔬菜中4

5、50種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜液相色譜-串串聯(lián)質(zhì)譜法聯(lián)質(zhì)譜法等方法糅合在一起的實施細則等方法糅合在一起的實施細則2.準確定性定量檢測法一、當前常用檢測方法二、速測方法1快速檢測程序試樣試樣檢測檢測 陰性陰性陽性陽性復(fù)測（兩次以上）復(fù)測（兩次以上）陰性陰性陽性陽性根據(jù)市場根據(jù)市場規(guī)定處理規(guī)定處理 準確定量準確定量定性定性分析分析二、速測方法GB/T 5009.199-2003NY/T 448-2001適用范圍圍 蔬菜（蔥蒜、蘿蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭茭白、蘑蘑菇菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質(zhì)質(zhì)，易導(dǎo)導(dǎo)致假陽陽性；葉綠綠素高的也會會干擾擾，這兩類這兩

6、類可整株取樣樣） 適用葉菜(除韭菜)、果菜、豆菜、瓜菜、根菜(除蘿蘿卜、茭茭白等)方法速測測卡法(紙紙片法)和酶抑制率法(分光光度法)酶抑制率法(分光光度法)波長長412nm4103nm酶乙酰酰膽堿酯堿酯酶（用pH8磷酸緩緩沖液溶解）（3min吸光度變變化值值0.3，4冰箱保存不超過過4天）丁酰酰膽堿酯堿酯酶（用pH8磷酸緩緩沖液溶解）3min吸光度變變化值值0.40.8之間間底物硫代乙酰酰膽堿堿（蒸餾餾水溶解，4冰箱保存不超過過2周）碘碘化硫代丁酰酰膽堿堿（BTCI）（用pH8磷酸緩緩沖液溶解）顯顯色劑劑二硫代二硝基苯苯甲酸（DTNB）+碳碳酸氫鈉氫鈉緩緩沖液溶液，4冰箱保存二硫代二硝基苯苯

7、甲酸（DTNB）緩緩沖液溶解步驟驟取表面干凈凈的蔬菜或瓜果，葉菜類類取葉片部分，瓜果取表皮帶帶肉，剪成1cm左右見見方碎片。取樣樣1g置于小燒燒杯內(nèi)內(nèi)，加入5mL緩緩沖溶液，振蕩蕩1-2min，倒出并靜并靜置3-5分鐘鐘；于小試試管內(nèi)內(nèi)分別別加入2.5mL樣樣本提取液、100uL酶液、100uL顯顯色劑劑，搖勻搖勻后于37放置15min以上，加入100uL底物，應(yīng)應(yīng)立即倒入儀儀器比色皿中，記錄記錄3min吸光度變變化值值。取2g切碎的樣樣本（非葉菜類類取4g）放入提取瓶內(nèi)瓶內(nèi)，加入20mL緩緩沖液，振蕩蕩1-2min，倒出并靜并靜置3-5分鐘鐘；于小試試管內(nèi)內(nèi)分別別加入50uL酶液、3mL樣樣

8、本提取液、50uL顯顯色劑劑，于37-38下放置30min后分別別加入50uL底物，倒入比色皿中，用儀儀器測測定。結(jié)結(jié)果抑制率50%：陽陽性（陽陽性樣樣品需要重復(fù)檢測復(fù)檢測2次以上，若不合格, 用色譜譜、質(zhì)譜質(zhì)譜等進進一步定性定量分析）抑制率70%：陽陽性（陽陽性樣樣品應(yīng)應(yīng)有2次以上的重復(fù)檢測復(fù)檢測，若不合格, 用色譜譜、質(zhì)譜質(zhì)譜等進進一步定性定量分析）備備注1、當溫當溫度低于37時時，酶反應(yīng)應(yīng)速度放慢，加入酶液和顯顯色劑劑后反應(yīng)時間應(yīng)時間應(yīng)該應(yīng)該延長長，延長時間長時間的確定，應(yīng)應(yīng)以空白對對照測試測試3min吸光度變變化值值0.3方可進進行下一步操作。2、3min吸光度變變化值值0.3原因：酶

9、的活性不夠夠；酶的活性太低。3、樣樣品檢測檢測放置時間與時間與空白的時間應(yīng)該時間應(yīng)該一致。1、樣樣品檢測檢測放置時間與時間與空白的時間應(yīng)該時間應(yīng)該一致。2、丁酰酰膽堿酯堿酯酶對樂對樂果、甲基對對硫磷、毒死蜱蜱、二嗪嗪磷等農(nóng)藥農(nóng)藥不太靈靈敏，檢檢出濃濃度均在10mg/kg以上。二、速測方法2結(jié)果計算抑制率（抑制率（% %）= = 抑制率：酶被抑制的程度抑制率：酶被抑制的程度A Ac c 對照組對照組3min 3min 后與后與3min 3min 前吸光值之差前吸光值之差; ; A A 樣本樣本3min 3min 后與后與3min 3min 前吸光值之差。前吸光值之差。100cscAAA二、速測方

10、法3注意事項20112011年首屆全省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)人員大比武現(xiàn)場操作年首屆全省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)人員大比武現(xiàn)場操作評分細評分細則（農(nóng)殘速測類）則（農(nóng)殘速測類） (2011(2011年年) )中對中對取樣部位、處理方法取樣部位、處理方法等等內(nèi)容進行詳細內(nèi)容進行詳細的分項打分，這些打分項都是平時檢測中需要注意的地方。的分項打分，這些打分項都是平時檢測中需要注意的地方。適用范圍：蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番適用范圍：蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質(zhì)，易導(dǎo)致假陽性；葉綠素高的也會干擾，茄含有抑制酶的植物次生物質(zhì)，易導(dǎo)致假陽

11、性；葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣）這兩類可整株取樣） ；農(nóng)藥：有機磷和氨基甲酸酯類。；農(nóng)藥：有機磷和氨基甲酸酯類。所有操作步驟順序、加液量、處理時間一定要嚴格按標準執(zhí)行。所有操作步驟順序、加液量、處理時間一定要嚴格按標準執(zhí)行。建議使用同一批比色皿，不同批次的比色皿對結(jié)果可能存在影響。一建議使用同一批比色皿，不同批次的比色皿對結(jié)果可能存在影響。一批上機樣品同時檢測，共用一個對照。批上機樣品同時檢測，共用一個對照。 檢測前一定要檢查酶液活性（檢測前一定要檢查酶液活性（3min3min吸光度變化值吸光度變化值0.30.3）；酶液反復(fù)）；酶液反復(fù)解凍最多不超過兩次解凍最多不超過兩次, ,否則會

12、影響酶活性。否則會影響酶活性。二、速測方法4如何看待農(nóng)殘快速測定方法n 何為快速檢測方法？ 指檢測速度相對較快、便于現(xiàn)場篩查的檢測方法。其主要適合于定性和半定量測定，檢測準確度相對要差一些。n 法律地位 中華人民共和國農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法第三十六條規(guī)定“采用國務(wù)院農(nóng)業(yè)行政主管部門會同有關(guān)部門認定的快速檢測方法進行農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督抽查檢測，被抽查人對檢測結(jié)果有異議的，可以自收到檢測結(jié)果時起四小時內(nèi)申請復(fù)檢。復(fù)檢不得采用快速檢測方法。” 二、速測方法5農(nóng)殘速測與色譜、質(zhì)譜等方法的結(jié)果比較n 時間時間：從：從20052005年至年至20072007年。年。n 項目項目：農(nóng)業(yè)部開展的省份間農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全

13、例行監(jiān)測互查。：農(nóng)業(yè)部開展的省份間農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全例行監(jiān)測互查。n 要求要求：承擔任務(wù)的：承擔任務(wù)的3737個部級中心分別用農(nóng)殘速測進行初步篩查，并把所有樣個部級中心分別用農(nóng)殘速測進行初步篩查，并把所有樣品用品用NY/T 761NY/T 761等方法進行色譜、質(zhì)譜定量檢測。等方法進行色譜、質(zhì)譜定量檢測。n 目的目的：想驗證速測與色譜檢測的相關(guān)性，如果有相關(guān)性，就可以先用速測初：想驗證速測與色譜檢測的相關(guān)性，如果有相關(guān)性，就可以先用速測初步篩查，然后把陽性（超標的）樣品再用色譜等方法準確定量，那樣可以大大步篩查，然后把陽性（超標的）樣品再用色譜等方法準確定量，那樣可以大大減少工作量。減少工作量。n

14、 結(jié)論結(jié)論：速測結(jié)果和色譜等定量檢測結(jié)果幾乎沒有任何相關(guān)性。說白了就是速：速測結(jié)果和色譜等定量檢測結(jié)果幾乎沒有任何相關(guān)性。說白了就是速測超標的，色譜檢測不出來，速測不超標的，色譜可能會超標。因為沒有什么測超標的，色譜檢測不出來，速測不超標的，色譜可能會超標。因為沒有什么相關(guān)性，農(nóng)業(yè)部在省部級檢測中心這個層級最終導(dǎo)致放棄速測方法。相關(guān)性，農(nóng)業(yè)部在省部級檢測中心這個層級最終導(dǎo)致放棄速測方法。所以，速測僅僅是法律認可的一項工作，不要較真，如被檢方有異議，更所以，速測僅僅是法律認可的一項工作，不要較真，如被檢方有異議，更不能拿速測陽性結(jié)果進行處罰和仲裁。不能拿速測陽性結(jié)果進行處罰和仲裁。二、速測方法6

15、為什么采用農(nóng)殘快速檢測法 （非官方解釋最實在的理解） 鮮活農(nóng)產(chǎn)品不宜長時間保存，快速檢測方法克服了當前所有準確定量方法（色譜、質(zhì)譜方法等）檢測周期過長的問題。【時限性考慮時限性考慮】 我國研究院所和各地市針對特殊樣品，采用酶抑制法取得了與準確定量方法（色譜、質(zhì)譜方法等）一致性結(jié)果?！舅^的科學(xué)依據(jù)所謂的科學(xué)依據(jù)】 快速檢測方法是經(jīng)過農(nóng)業(yè)部會同有關(guān)部門認定發(fā)布的，經(jīng)法律認可的方法，具有權(quán)威性和統(tǒng)一性（不過可靠性談不上不過可靠性談不上）?！痉梢罁?jù)法律依據(jù)】 快速檢測方法所需設(shè)備簡單，易掌握，平時運營成本相對較低，選用該法主要是從我國從業(yè)人員素質(zhì)、經(jīng)濟狀況的國情出發(fā)來考慮的（不可能要求大家都去買質(zhì)

16、譜、色譜等設(shè)備）?！痉椒ń?jīng)濟性、操控性方法經(jīng)濟性、操控性】 明知快速檢測方法準確度不高，選用該法，主要是在縣級、鄉(xiāng)鎮(zhèn)等一級進行普及，讓經(jīng)營戶、老百姓發(fā)現(xiàn)有人在抓農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全，更主要的是起到震懾作用?！菊饝刈饔谜饝刈饔谩俊景咐亢幽鲜∴嵵菔修r(nóng)殘快速檢測網(wǎng)絡(luò)【案例】河南省鄭州市農(nóng)殘快速檢測網(wǎng)絡(luò)三、準確定性定量檢測法1基本步驟：u檢測前工作準備檢測前工作準備u提取提取u凈化凈化、濃縮定容、濃縮定容u標準溶液配制和測定標準溶液配制和測定u結(jié)果計算結(jié)果計算三、準確定性定量檢測法2提取條件的優(yōu)化：uQuEChERSQuEChERS方法選擇方法選擇單一單一乙腈為提取溶劑乙腈為提取溶劑。u含水量低或含糖量高

17、的樣品應(yīng)加入一定量的水后再含水量低或含糖量高的樣品應(yīng)加入一定量的水后再進行提取，以提高提取效率。進行提取，以提高提取效率。u乙腈對乙腈對N N- -三鹵甲硫基殺菌劑類農(nóng)藥，具有降解作用，三鹵甲硫基殺菌劑類農(nóng)藥，具有降解作用，如克菌丹、抑菌靈等；通過加入如克菌丹、抑菌靈等；通過加入1%1%的醋酸，調(diào)節(jié)的醋酸，調(diào)節(jié)pHpH值，值，能夠抑制上述農(nóng)藥的分解。能夠抑制上述農(nóng)藥的分解。三、準確定性定量檢測法3鹽析：u鹽析鹽析劑種類：氯化鈉、醋酸鈉和硫酸銨等；劑種類：氯化鈉、醋酸鈉和硫酸銨等；u鹽析劑能與水結(jié)合使游離水分子減少，減少了農(nóng)藥鹽析劑能與水結(jié)合使游離水分子減少，減少了農(nóng)藥在水相中的溶解度；在水相中

18、的溶解度；u鹽析劑能減少有機溶劑在水中的溶解度；鹽析劑能減少有機溶劑在水中的溶解度；u鹽析劑能使水相的比重增大，有助于分離。鹽析劑能使水相的比重增大，有助于分離。三、準確定性定量檢測法4脫水劑的選擇：u無無水硫酸鎂吸水能力比無水硫酸鈉高水硫酸鎂吸水能力比無水硫酸鈉高3 3倍倍。u無無水硫酸鎂吸水的同時也放熱，促進農(nóng)藥的萃取。水硫酸鎂吸水的同時也放熱，促進農(nóng)藥的萃取。無機鹽無機鹽加入量（加入量（g）乙腈中的水分乙腈中的水分（加入前，（加入前，%）乙腈中的水分乙腈中的水分（加入后，（加入后，%）NaCl2g / 27mL276.0Na2SO40.8g / 4mL63.9MgSO40.8g / 4m

19、L60.6三、準確定性定量檢測法5凈化劑的選擇：uPSAPSA提供伯氨基和仲氨基，相比氨基更能去除基質(zhì)提供伯氨基和仲氨基，相比氨基更能去除基質(zhì)干擾；主要干擾；主要用來用來消除各種有機酸、色素以及一些糖和脂肪酸消除各種有機酸、色素以及一些糖和脂肪酸。為了。為了減少儀減少儀器的維護，往往在器的維護，往往在PSAPSA的基礎(chǔ)上加的基礎(chǔ)上加C18C18凈化。凈化。uPSAPSA可去除可去除9090以上的脂肪酸和以上的脂肪酸和5050左右的左右的色素。色素。uGCBGCB可去除可去除9090以上的色素，但對脂肪酸的凈化能力僅有以上的色素，但對脂肪酸的凈化能力僅有1010左右。對于一些含色素高的樣品，將兩

20、者聯(lián)合左右。對于一些含色素高的樣品，將兩者聯(lián)合使用。使用。但用量要但用量要適當適當，否則會，否則會吸附一些平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥，影響回收率，如六氯吸附一些平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥，影響回收率，如六氯苯、百菌清等。苯、百菌清等。凈化劑凈化劑去雜種類去雜種類PSAPSA糖、有機酸、色素等糖、有機酸、色素等C18C18油脂、非極性干擾物等油脂、非極性干擾物等GCBGCB色素、甾醇、非極性干擾物等色素、甾醇、非極性干擾物等方法1：NY/T 761-2008 方法名稱及來源：方法名稱及來源：蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘

21、留檢測方法NY/T 761-2008NY/T 761-2008。 農(nóng)藥種類和個數(shù)：農(nóng)藥種類和個數(shù)：有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥藥等共等共104種。種。 使用儀器：使用儀器：GC、LC。 檢測步驟：檢測步驟：依次依次5mL丙酮丙酮+正己烷正己烷(10+90), 5mL正己烷預(yù)淋正己烷預(yù)淋4 mL甲醇甲醇二氯甲烷二氯甲烷(1+99)預(yù)淋預(yù)淋方法1：NY/T 761-2008方法方法2：NY/T 761、GB/T 19648和和GB/T 20769等綜合法方法名稱及來源：方法名稱及來源： NY/T 761-2008NY/T 761-2008、

22、GB/T 19648-2006GB/T 19648-2006和和GB/T 20769-GB/T 20769-20082008等，其中以等，其中以GB/T 19648-2006GB/T 19648-2006為主。為主。農(nóng)藥種類和個數(shù)：農(nóng)藥種類和個數(shù)： 有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯類和有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯類和苯并咪唑類農(nóng)藥等苯并咪唑類農(nóng)藥等800800多種。多種。使用儀器：使用儀器： GCGC、LCLC、GC-MS/MSGC-MS/MS和和LC-MS/MSLC-MS/MS。 檢測步驟：檢測步驟：5mL乙腈乙腈+甲苯預(yù)淋甲苯預(yù)淋剩余約剩余約20mL乙腈乙腈+甲苯分甲苯分次

23、或次或1次倒入次倒入，淋洗小柱，淋洗小柱洗脫液用量洗脫液用量約為約為25mL25mL方法方法2：NY/T 761、GB/T 19648和和GB/T 20769等綜合法方法方法2：NY/T 761、GB/T 19648和和GB/T 20769等綜合法方法方法2：NY/T 761、GB/T 19648和和GB/T 20769等綜合法方法方法2：NY/T 761、GB/T 19648和和GB/T 20769等綜合法方法方法3：優(yōu)化后的：優(yōu)化后的QuEChERS Method方法名稱及來源：方法名稱及來源： 在美國農(nóng)業(yè)部的在美國農(nóng)業(yè)部的QuEChERSQuEChERS Method Method基礎(chǔ)上

24、做了基礎(chǔ)上做了優(yōu)化和調(diào)整。優(yōu)化和調(diào)整。 農(nóng)藥種類：農(nóng)藥種類： 有機磷，有機氯，氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農(nóng)有機磷，有機氯，氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥等多殘留檢測。藥等多殘留檢測。使用儀器：使用儀器： GC-MS/MS GC-MS/MS、LC/MS/MSLC/MS/MS。方法方法3：優(yōu)化后的：優(yōu)化后的QuEChERS Method原理原理： 與固相萃取與固相萃取(SPE)(SPE)相似，都是利用吸附劑填料與相似，都是利用吸附劑填料與基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，吸附雜質(zhì)從而達到除雜凈化基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，吸附雜質(zhì)從而達到除雜凈化的目的。的目的。優(yōu)點優(yōu)點： 回收率高，對大量極性及揮發(fā)性的農(nóng)藥品種的回收率高，對大量極性及揮發(fā)性的農(nóng)藥品種的回收率大于回收率大于