液相基本術(shù)語及操作

1、液相色譜檢測1儀器的基本常識及術(shù)語1.1 儀器結(jié)構(gòu)：液相色譜儀主要包括泵、進樣器、色譜柱、檢測器；1.2 儀器分類：液相色譜儀屬于精密儀器中的色譜儀器；按照分為離機制，吸附、分配、離子交換、親和色譜，體積排阻色譜；按照流動相與固定相的極性，分為正相色譜法和反相色譜法；1.2.2高效液相色譜法的應用范圍 ：高效液相色譜法適用于高沸點不易揮發(fā)、受熱不穩(wěn)定易分解、分子量大的，不同極性的有機化合物，生物活性物質(zhì)和多種天然產(chǎn)物，合成的和天然的高分子化合物等。1.3 儀器檢定：液相色譜儀檢定周期為1年，在兩次檢定間期內(nèi)進行一 次期間核查，也可以根據(jù)情況增加核查次數(shù)；1.4 維護保養(yǎng)：對于液相維護方式主要是

2、周維護和日維護，其中周維 護包括聯(lián)機系統(tǒng)及中工作站軟件維護、數(shù)據(jù)庫整理備份、檢測器自檢、維護單向閥、溶劑砂芯濾頭、進樣器、電機泵檢查維護、溶劑瓶清洗等；日維護包括環(huán)境溫度、環(huán)境濕度、色譜柱溫度、壓力流速、進樣 口是否潔凈、進液處的砂芯過濾頭是否潔凈、流動相交換時是否有沉 淀；1.5 色譜法的常用基本術(shù)語基線：在色譜操作條件下，沒有被測組分通過鑒定器時，記錄器所記錄 的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基線.死時間，保留時間及校正保留時間：從進樣到惰性氣體峰由現(xiàn)極大值的時間稱為死時間，以td表示.從進樣到由現(xiàn)色譜峰最高值所需的時間稱保留時間，以tr表示.保留時間與死時間之差稱校正保留時間.以V球示.死

3、體積，保留體積與校正保留體積：死時間與載氣平均流速的乘積稱為 死體積，以V昧示，載氣平均流速以Fc表示,Vd=tdxFc.保留時間與載氣 平均流速的乘積稱保留體積，以Vr表示,Vr=trxFc峰面積：流由曲線(色譜峰)與基線構(gòu)成之面積稱峰面積，用A表示.拖尾因子：是反映峰對稱性的指標，計算公式：拖尾因子T =W0.05h/2d1 (其中W0.05h為5%隼高處的峰寬，di為峰頂點至峰前沿之 間的距離)。峰高與半峰寬：由色譜峰的濃度極大點向時間座標引垂線與基線相交 點間的高度稱為峰高，一般以h表示.色譜峰高一半處的寬為半峰寬 一般以x1/2表示；1.7色譜檢測的特性(1)靈敏度高；(2)線性范圍

4、寬；(3)分離度與柱效、選擇因子、容量因子、分析時間的關(guān)系：(4)分離度與柱效的平方根成正比，選擇因子一定時，增加柱效；(5)分配系數(shù)與分配比都是與組分及固定相的熱力學性質(zhì)有關(guān)的常數(shù)，隨分離柱溫度、柱壓的改變而變化：一般通過改變固定相和流動 相的性質(zhì)和組成或降低柱溫，可增大選擇因子；(6)增大選擇因子的最有效方法是選擇合適的固定液。對于液相色譜,改變流動相的組成，可以有效控制k;2儀器的操作規(guī)程2.1 日立液相設(shè)備 L-2000/2400操作規(guī) 程2.1.1 使用環(huán)境環(huán)境溫度：4C-55C；相對濕度：小于95%RH2.1.2 使用前準備檢查所用溶液(如流動相，乙睛等)是否足夠。檢查線路是否連接

5、正常。2.1.3 設(shè)備操作方法具體操作如下：(1)依次開啟泵開關(guān)，檢測器開關(guān)，自動進樣器開關(guān)，柱溫箱開關(guān)；(2)打開軟件，點擊“ i ”按鈕，由現(xiàn)聯(lián)機界面，點擊initialize ”【酬？?.明 按鈕，當文本框由現(xiàn)文字時， 表示聯(lián)機成功;(3)檢查所用方法是否符合要求。如不符合，進行設(shè)置；(4)開泵。檢測具體操作如下：(1)建立所需樣品盒；(2)點擊檢測按鈕，選擇剛建立的樣品盒；(3)首先進行走基線；(4)當基線走平時，點擊系列樣品檢測按鈕，進行標樣，樣品檢測;(5)當標樣檢測結(jié)果由來時，打開結(jié)果窗口，選擇所需標樣結(jié)果，點擊 “ Recalculate'ri:'k ?lkju

6、leit進行重新計算，然后點擊“Calibration ” k?li'brei?為進行定標;(6)當樣品結(jié)果由來時，打開結(jié)果窗口，選擇所需樣品結(jié)果，點擊“ Recalculate ” 'ri:'k? Ikjuleit進行重新計算，然后點擊 “ ModifyReport " 'm?difai, ri'p ?:t,由現(xiàn)結(jié)果報告，即可查看樣品具體結(jié)果。2.1.4 更換流動相具體操作如下：(1)當流動相快不夠時或異常時，及時更換流動相；(2)先把泵關(guān)閉，將流動相入口放入新流動相中；(3)將泵閥逆時針旋轉(zhuǎn)，進行排氣。大約3分鐘后，關(guān)閉排氣功能；(4)排氣

7、完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵；(5) 走基線，當基線走平時，開始做標樣，做樣。2.1.5 關(guān)機具體操作如下：(1)先把泵關(guān)閉，將流動相入口更換為超純水；(2)將泵閥逆時針旋轉(zhuǎn)，進行排氣。大約3分鐘后，關(guān)閉排氣功能；(3)排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵；(4)用超純水沖洗管路大約20分鐘；(5)把泵關(guān)閉，將超純水更換為 100%ff醇或100叱睛；(6)將泵閥逆時針旋轉(zhuǎn)，進行排氣。大約3分鐘后，關(guān)閉排氣功能；(7)排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵；(8)用100%P醇或100叱睛沖洗管路大約30分鐘；(9)關(guān)泵，關(guān)液相軟件，關(guān)泵開關(guān)，檢測器開關(guān)，自動進樣器開關(guān)，柱溫箱開關(guān)。2

8、.1.6 維護保養(yǎng)、注意事項(1)進行旬維護檢查工作，主要檢查事項：軟件是否正常、溫度、 清洗、進樣器、泵單元；(2)每次測量前進行標樣檢測，斜率達到99.99%要求才能檢測樣品，測完樣品及時清理。(3)按要求進行每天2個小時以上的清洗。2.2 Waters 高效液相色譜-2695/24892.2.1 開機自檢具體操作如下：(1)打開 Alliance ?'lai ?ns 2695 和 2489 的電源開關(guān)至 ON (1) 的位置，儀器開始進行自檢；(2)儀器將進行大約5分鐘的自檢過程，待儀器自我測試完畢后， 由現(xiàn)以下畫面，畫面上方的狀態(tài)顯示區(qū)會由現(xiàn)“Idle ” 'aidl狀

9、態(tài)，表示開機測試正常。2.2.2 流動相有機溶劑要求用色譜純(進口名牌最好)，水或緩沖鹽溶液要用超 純水(電阻率：18.2MQ),每48小時制備新鮮的水相流動相 ，尤其是100% 含水流動相使用時間不超過兩天。6根管子都在液面以下。溶劑的位置必須高于溶劑混合閥(Gradient Proportioning Valve) 。 'greidi?nt pr?'p?:?ni? v? Iv清洗柱塞密封墊(Seal Wash) si：i w?的溶液：含5% 10%P醇的 超純水。洗針液(Needle Wash) 'ni:d ?l w?: 50%P醇：50%K (該比例僅適 用于反相

10、試驗)。注：以上溶劑或溶液均需用0.45以m勺膜過濾并超聲脫氣1分鐘， 用潔凈的玻璃容器盛放，避免污染，同時玻璃容器應用超純水來清洗而 不能用自來水。2.2.3 灌注柱塞密封清洗清洗操作步驟：(1)回到 Menifmenju: 畫面，選擇 Diag ;(2)確定Seal Washsi：iw ?的管路放在正確的位置；(3)按 Prime Seal Wash praim si：i w ?,再按 Start ,直到清洗溶 劑流由泵桿密封圈沖洗廢液管，按Halt ; h?：lt(4)按 Close。注意：密封圈清洗(Seal wash) si：l w ?溶劑，在反相液相色譜中 可使用 Water/ M

11、eOHmethyl alcohol 甲醇=90/10 或 Water/Acetonitrile ? sit ?u'naitril乙月青=95/5(根據(jù)實際需要使用不同溶劑)。2.2.4 灌注針頭清洗操作步驟：回到Mainmein的畫面，選擇Diag ,選擇Prime praim Ndl Wash設(shè)定值為30秒，若想要多清洗幾次時，請按 Start Again 。清洗溶劑：50%勺甲醇溶液注意：若上述清洗溶劑無法避免進樣時的交叉污染，使用較強的 溶劑系統(tǒng)來進行清洗操作。2.2.5 打開真空脫氣機如液相儀管路干，可進行使用，如管路不干則按照以下步驟進行 操作：按 “ Menu/Status

12、 ” 'steit ?s鍵，進入 Status (1) 畫面；利用方 向鍵將光標移至“ Degasser” di：g? s?位置，按Enter ;利用上下鍵選 擇模式為ON注意：在開啟除氣裝置時，要確認所有溶劑管路都充滿溶劑；若 沒有溶劑時請執(zhí)行溶劑的Dry Prime drai praim操作。2.2.6 執(zhí)行干灌注確定流動相溶劑的管子放在正確的位置，檢測器(Detector 皿怕9？)廢液管及定量環(huán)(Sample Loop lu：p)的廢液管是否放置于適當 的廢液容器中。搖動溶劑瓶內(nèi)的過濾器(Solvent Filter) 's ?iv?nt 'filt ?,防止氣

13、 泡附著在過濾器的外表面。將空的針筒插入抽液閥(Prime/Vent value) 中，以逆時針的方向 旋轉(zhuǎn)3圈。按 “Menu/Status ” 'steit ?s鍵，進入 Status(1)畫面，按 “ Direct Function ” di'rekt 'f ?k?n功能鍵，選擇 Dry Prime ,按 Enter。按下面使用的溶劑開啟閥門(例如：Open A),然后將針筒向外拉， 抽由510mL溶劑并完全抽由溶劑管子內(nèi)的氣泡，完成后關(guān)閉 Prime/Vent 閥門。在 “Enter a duration ” dju'rei ?n中輸入 3 分鐘,按 “

14、 Continue ” 鍵，泵即以3.0mL/min的流速進行清洗(Purge)?？芍貜蜕蟽蓚€步驟，將所要使用的流動相溶劑Dry Prime。2.2.7 執(zhí)行濕灌注按“Menu/Status ”鍵，進入Status(1)畫面，利用方向鍵將光標 移至 “ Composition ” k?mp?'zi?n字段，將欲 Wet Prime 的溶劑輸入 100%按 “Direct Function ” di'rekt 'f ?k?n 功能鍵，選擇 Wet Prime, 按 Enter。Wet Prime 的原設(shè)定值，一般為 Flow Rate:7.5mL/min , Time:

15、3.0min ,然后按下“ OK鍵，泵即開始進行 Wet Prime操作。重復上述的步驟直到所有溶劑Wet Prime進行完畢。2.2.8 設(shè)定流動相平衡色譜柱按“Menu/Status ” 鍵，進入Status (1) 畫面，利用方向鍵將光 標移至“ Composition ” k?mp ?'zi ?n字段，利用儀器面板右側(cè)的數(shù)字 鍵設(shè)置試驗要求的溶劑組成比例，此時會在原溶劑比例表的下方由現(xiàn) 新編輯溶劑比例表(New Composition)。設(shè)定好新的溶劑組成比例后，按“Change Comp” t?eind ? k?mp功能鍵(改變?nèi)軇┙M成比例change composition

16、),此設(shè)定的溶劑組成 比例即為當前的比例。利用方向鍵將光標移至“ Flow” fi?u字段，利用儀器面板右側(cè)的 數(shù)字鍵設(shè)定流速，此時儀器即設(shè)定的溶劑組成比例和流速來平衡色譜 柱。特別提示：對于常規(guī)的反相色譜試驗至少要用30倍柱體積來平衡，而對于離子對色譜的平衡可能需要多達500柱體積的流動相來平衡。2.2.9 沖洗進樣器溶齊U管理系統(tǒng)的前處理 (Prime the solvent management system) 要求如下：(1)改變?nèi)軇?2)發(fā)現(xiàn)注射針頭內(nèi)有氣泡；(3)每天開機的時候。沖洗進樣器執(zhí)行步驟：(1)按“Menu/Status ”鍵，進入Status(1)畫面，在設(shè)定溶劑的畫

17、 面中設(shè)定適當?shù)牧魉倥c溶劑比例；(2) 按 “ Direct Function ” di'rekt 'f?k?n鍵，選擇 Purge Injector p?:d? in'd ?ekt ?, 按 Enter ;(3)輸入Sample Loop體積清洗的倍數(shù)(原定值為6倍)，按Enter ;(4)壓縮測試(Compression Check)請先不需要測試，設(shè)定完成后 按OK2.2.10 放入樣品盤打開計算機，運行Empowerim'pau ?軟件，選擇存放數(shù)據(jù)文件的Project ,運行 Run Samples;按 Develop Methodsdi've

18、l ?p'me e?d按鈕, 建立方法；按Monitor 'm?nit?按鈕，觀察基線，待基線平穩(wěn)，可準備 進樣。2.2.11 關(guān)機首先關(guān)閉檢測器電源；在 2695溶劑槽中換上適當?shù)那逑慈軇?，?洗系統(tǒng)約60分鐘(針對離子對試驗，建議 50叱睛：50% 1mL/min流速 沖洗色譜柱2小時以上)；按2695面板Diag鍵，選擇Prime SealWash , 清洗泵頭約1分鐘；再選擇 Prime NdlWash ,清洗進樣針12次；按 Menu/Status 鍵進入手動控制模式，按 Direct Function di'rekt 'f ?k?n 鍵，選擇Purg

19、e Injector p?:d? in'd ?ekt?,沖洗進樣器(針對離子對試 驗，建議設(shè)定50叱睛：50臥的溶劑來沖洗進樣器)；降低流速至0, 待系統(tǒng)壓力回零后，關(guān)閉 2695電源，關(guān)閉計算機及顯示器電源。2.3 島津LC-20AT液相色譜儀操作規(guī)程2.3.1 準備工作在開機之前，根據(jù)所做樣品的方法要求，準備好所用流動相,標樣及樣品。流動相抽濾后超聲脫氣15分鐘，標樣和樣品0.45um膜過濾。打開 LC-20Ax 2SETS,CTO-10ASvp SPD-M20A版 RF-10AXL）電源， 待自檢通過。打開SCL-10Avp電源，檢查開機屏幕應顯示各單元，如果某單元 沒有顯示，則

20、不能控制該單元，需按 團鍵取消屏幕Fixed標志即可顯 示并控制該單元。否則檢查通訊設(shè)置。 一打開計算機電源或重新啟動計算機，待正常進入 WINX臊作系統(tǒng)。排空操作：打開LC-20AT泵排空閥（逆時針180度以上），按Purge 鍵，泵開始排空運行。檢查流動相入口 Teflon管路沒有氣泡后，再按|Purge|鍵停止排空。壓力調(diào)零：如果 purge時，壓力不為零,需要進行壓力調(diào)零，按LC-20ATvp泵Func|鍵選擇|CONTRO歐,按FUNC直至屏幕顯示 *ml ZERO AD顧,按Enter 1鍵,再按CE鍵，即完成調(diào)零。然后關(guān)緊排空 閥（順時針旋緊）。在計算機中雙擊 LC SOLUTI

21、ONS標,進入工作站。再雙擊 Operation 6 Analysis 1 4進入實時分析窗口 （根據(jù)不同 的檢測器選擇）。在開機畫面中，User ID 選中Admin,不需輸入 Password,點擊 OK（可聽到蜂鳴一聲），在下面操作中 AS B表示在A菜單下選擇B,以 此類推。選中口表示在口中打，號。在左側(cè)助手欄給由了引導順序操作的圖標，自上而下順序執(zhí)行即 可（可以跳過執(zhí)行）：（1）System configuration系統(tǒng)配置（第一次安裝或更換檢測器時配置，通常跳過不操作）；（2）System Check編輯儀器檢查參數(shù):并且RUN運行檢查。通常不操作（跳過）；（3）點擊Data a

22、cquisition進入采集數(shù)據(jù)編輯方法界面點擊 Instrument Parameter進入儀器參數(shù)設(shè)置界面:選中Normal（通用簡單）或Advanced（高級詳細）項，分別設(shè)定Pumps 泵參數(shù), Oven 柱箱參數(shù), Detecter 檢測器參數(shù), Controller 系統(tǒng)控制器參數(shù)，Time Program時間程序參數(shù)等。儀器配置不同，控一 制單元項的數(shù)目多少示而一;Pumps泵參數(shù)：Mode控制方式，F(xiàn)low流速，B, C, DConc各 項濃度，P Max最大壓力；Oven柱箱參數(shù):Oven設(shè)定溫度，T Max最大保護溫度；Detecter 檢測器參數(shù)：Cell設(shè)定池溫。Wav

23、elength設(shè)定波 長；Controller系統(tǒng)控制器參數(shù);Data acquisition 選中 Acquisition Time后，設(shè)置分析時 間，等等；LC Time Prog時間程序參數(shù):編輯泵梯度洗脫程序，也可以 控制柱箱，檢測器等等；(4)點擊 Method 6 Data Analysis Parameter 編輯積分參數(shù):設(shè)置 Width峰寬,Slope斜率，Min Area最小峰面積等等。新建方法推薦 使缺省值，待分析完樣品后再設(shè)置此項參數(shù)，得到優(yōu)化的色譜數(shù)據(jù)結(jié) 果后，將參數(shù)保存在當前方法中；(5)保存方法：點擊 File 6 Save Method as如圖:起文件名* 叵

24、后，該方法即作為當前運行的方法一；(6)下載方法：點擊 Down Load鍵，向儀器傳送參數(shù)。2.3.2 運行方法點擊如圖圖標(Instrument On/Off 系統(tǒng) 開/關(guān))系統(tǒng)開始運行，檢查各單元參數(shù)應與方法設(shè)定一致。等待系統(tǒng)平衡。一般情況下，由于流動相不同，交換平衡時間不定?？梢杂^察Detecter檢測器吸收變 化，如果吸收值穩(wěn)定不變，即認為接近平衡，可以調(diào)零等待，確認不變后，準備進樣分析?？梢酝ㄟ^改變衰減或予覽基線觀察基線變化，待 基線平穩(wěn)(初始化顯示時與橫軸平行)，準備進樣操作。2.3.4 進樣分析如下：(1)單針進樣分析：如圖點擊 Single Start 圖標:由現(xiàn)如下采樣 對

25、話框；(2)編輯樣品參數(shù)：Sample ID樣品信息,Method Name方法文件 名，Data Path 數(shù)據(jù)存儲路徑，Data Name數(shù)據(jù)文件名，Vial樣品瓶 號(無)，Tray#架號(無),Injection 進樣量等;(3)點擊OK后,開始進樣操作(重復單針進樣，重復執(zhí)行第 7 步驟即可支 );(4)每個樣到時間分析結(jié)束，根據(jù)方法中的積分參數(shù)，所有色譜數(shù)據(jù)會自動進行積分處理。2.3.5 報告予覽和打印。點擊Top返回上級引導操作欄。點擊Post Run Analysis 進入數(shù)據(jù)后處理界面：點擊report進入報告界面：點擊report format進 入格式界面：調(diào)入報告格式文

26、件也可以自己編輯報告格式，然后點擊 Data打開數(shù)據(jù)文件，將左側(cè)數(shù)據(jù)文件拖入右側(cè)報告欄即可。關(guān)于報告 格式，可以通過內(nèi)容選擇圖標，在報告中確定位置后，添加即可。右 鍵功能很強大，用戶可以參考說明書靈活使用。選擇快捷圖標的預覽 或打印圖標執(zhí)行報告預覽或打印。2.3.6 關(guān)機步驟如下：(1)更換洗液清洗流路系統(tǒng)(如用緩沖液，先用水清洗1小時，再用有機溶劑清洗30分鐘以上)，最后用有機溶劑封存；(2)清洗結(jié)束后 停止系統(tǒng)運行，在LC SOLUTION工作站中，按Instrument on/off鍵即停止所有單元工作;(3)退由LC SOLUTION可聽至U蜂鳴一聲)，再完全退由；(4)關(guān)系統(tǒng)控制器

27、SCL-10Avp電源開關(guān)；(5)關(guān)主機 SPD-M20A(或 RF-10AXL)檢測器，LC-20AT 泵， CTO-10ASv也箱電源開關(guān)。2.3.7 清洗流路系統(tǒng)要求如果使用緩沖液，先用水更換緩沖液，清洗 1小時，然后更換甲 醇清洗40分鐘；如果使用有機溶劑(水)，直接更換甲醇清洗 40分鐘 即可。2.4 安捷倫高效液相色譜操作規(guī)程2.4.1 開機打開計算機，進入 Windows XP(或 Windows 2000)畫面，并運行 Bootp Server 程序。打開1100 /1200LC 各模塊電源。待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online 圖標，化學工 作站自動

28、與 1100LC/1200LC。從“ View”菜單中選擇“ Method and Run control ”畫面，單擊” View”菜單中的 "ShowTop Toolbar ", "Showstatus toolbar :"System diagram "，" Sampling diagram " 使其命令前有"一標志，來調(diào)用 所需的界面。把流動相放入溶劑瓶中。打開Purge閥。單擊Pump圖標，由現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊 Setup pump選項，進 入泵編輯畫面。設(shè) Flow : 5ml/min ,單擊 OK單

29、擊Pump圖標，由現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊 Pump control選項， 選中On,單擊OK則系統(tǒng)開始 Purge ,直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入 口）無氣泡為止，切換通道繼續(xù) Purge,直到所有要用通道無氣泡為止。單擊Pump圖標，由現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊 Pump Control選項， 選中Off,單擊 Ok關(guān)泵，關(guān)閉 Purge valve。單擊Pump圖標，由現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊 Setup pump選項，進 入 Pum陶輯畫面，設(shè) Flow: 1.0mL/min 。單擊泵下面的瓶圖標，輸入溶劑的實際體積和瓶體積，也可輸入 停泵的體積，單擊Ok。2.4.2 關(guān)機關(guān)機前，用100%勺水沖洗系

30、統(tǒng)20分鐘，然后用有機溶劑沖洗系 統(tǒng)10分鐘（如ACN）,然后關(guān)泵（適于反相色譜柱，正相色譜柱用適當 的溶劑沖洗）。退由化學工作站，及其它窗口，關(guān)閉計算機（用shut down 關(guān)）。關(guān)掉 Agilent 1100/1200電源開關(guān)2.5 C8柱修復操作規(guī)程2.5.1 目的為節(jié)約檢測成本，同時統(tǒng)一操作方法，特制定本作業(yè)指導書。2.5.2 適用范圍本標準適用于愛杰爾、天津蘭博生產(chǎn)的C昭修復方法（其它廠家可以嘗試使用）。C/使用一段時間后，會由現(xiàn)柱壓高、峰變形問題， 大部分的原因為C昭污染，通過對污染C8ft柱頭過濾網(wǎng)進行超聲清洗， 然后再生，解決問題。2.5.3 工具、試劑2個扳手，1把鈍剪刀。

31、乙睛（色譜純）、異丙醇（色譜純）。2.5.4 修復過程（1）將故障C昭柱頭處擰開用2個扳手將C8±兩柱頭擰開，取下兩端柱頭。用鈍的剪刀夾住塑料封口，取下塑料封口，過濾網(wǎng)就在封口處。觀察C8i內(nèi)填料是否有污染，如有污染，用干凈的濾紙輕輕擦掉污染物。注意：只能擦去表 面一層填料，兩端端口圖1: C8ft不能太多，否則會損壞柱子。兩端端口內(nèi)有過濾網(wǎng)圖2: C8ft內(nèi)部塑料封口，內(nèi)有過濾網(wǎng)（2）對兩端柱頭進行超聲清洗 （或者對另一支舊C8i的后端柱頭進行 清洗，并代替此C昭前端柱頭）準備小燒杯，倒入10叱睛，然后將第一步取由的兩端柱頭(包括過濾網(wǎng))放入燒杯，超聲半小時；然后將10叱睛更換為1

32、00叱睛超聲 半小時；最后將100叱睛更換為超純水，超聲半小時?；蛘邔⒁郧坝?過的舊C8i的后端柱頭卸下，進行清洗，并代替此C8i的前端柱頭。圖3:對端口，塑料封口，過濾網(wǎng)進行超聲清洗(3)安裝柱子將過濾網(wǎng)放入塑料封口處，安裝塑料封口，用扳手擰緊柱子。(4)連接柱子，進行再生然后將C8柱裝到液相色譜儀，等基線走平后，進標品。觀察峰形、 柱壓等是否正常，如果正常則可以不進行此步驟，否則進行再生：(1)用10叱睛沖洗30分鐘，流速為 0.6ml/min。(2)用100叱睛沖洗2 小時。流速為 1.0mlmin。(3)用100%丙醇沖洗 2小時。流速為 0.5mlmin。(4)用100叱睛沖洗 2小

33、時。流速為 1.0mlmin。(5)用 10叱睛沖洗30分鐘，流速為0.6ml/min ,然后換上流動相，然后走 流動相，等基線走平后，進標品。(5)驗證修復效果 驗證方法 (1)觀察柱壓，柱壓正常。 (2)觀察標品由峰情況，峰形良好。(3)進行回收率驗證，回收率達到85%-105%通過以上方面，說明修復成功，此C8柱可以繼續(xù)進行使用。(6)注意事項拆裝C8柱注意事項清洗手，防止污染柱子內(nèi)部拆裝柱子時，防止柱頭部螺紋變形2.5.5 連接C8柱與液相色譜儀注意事項連接C8柱入口與液相色譜儀，打開泵，使 C8柱由口流由液體, 沖5分鐘，連接C8柱與液相色譜儀檢測器端。 防止有異物流入檢測池。 3色

34、譜檢測的項目和關(guān)鍵控制點3.1樣品檢驗流程圖核實檢驗計劃(1)核實檢驗計劃認真核實檢驗計劃，明確檢驗項目和批次， 核實可以開展的項目(2)樣品接收經(jīng)相關(guān)檢驗人員對送檢信息及樣品的符合性確認后在送檢單上簽 宇，檢驗人員即可進行樣品的檢驗。(3)樣品確認注意檢查樣品規(guī)格、型號、商標、批次等級內(nèi)容是否清楚，狀態(tài) 是否完好、變質(zhì)、污染等。如發(fā)現(xiàn)有任何問題，要詢問送檢單位。(4)記錄樣品信息將樣品名稱、批次、送樣日期等信息完整的記錄到帶有編碼的原始記錄上，要盡可能的保證信息的完整性，和可追溯性。(4)樣品前處理按照相應的檢驗方法進行處理，并做好記錄。(5)上機檢測樣品待儀器平衡完畢后，裝滿洗瓶內(nèi)的清洗溶

35、劑(清洗溶劑要當天用 當天配置)，根據(jù)作業(yè)指導書或者國標，走標準曲線或者單點，上機即 可。(6)記錄檢驗結(jié)果儀器走完樣品后，根據(jù)峰的保留時間定性，峰面積定量，如實記錄檢驗結(jié)果于原始記錄中， 原始記錄按方法要求進行實際記錄檢測值。(7)核實由具結(jié)果對于外部樣品的檢測，記錄好檢驗結(jié)果后，核實無誤后即可由具 檢驗結(jié)果。(8)核實檢驗計劃對于內(nèi)部樣品的檢測，輸入結(jié)果前需再次核實檢驗計劃，保證沒 有漏檢后方可輸入檢驗結(jié)果。(9)輸入 unliab打開unliab系統(tǒng)，選擇正確的樣品類型和業(yè)務類型，創(chuàng)建樣品， 創(chuàng)建完畢后如實填寫 unliab系統(tǒng)中的信息卡，正確分配檢測項目，輸 入結(jié)果。結(jié)果報由時，檢測結(jié)

36、果在檢由限以下時，均報未檢由；檢測 結(jié)果在檢由限以上時，報實測值。如檢驗處均使用程序輸單，則要求各崗位的輸單密碼不能外漏；結(jié)果輸入后不允許隨意改動，如需修改則上報直屬領(lǐng)導同意后則進行修改，其他人員無權(quán)修改；所有過程檢驗結(jié)果均在由具結(jié)果的當班下班前提交系統(tǒng)或輸入固定文件夾中；按照規(guī)定的程序進入預定的表格，不允許輸入的內(nèi)容和文件名稱 不對應、存在相同或能引起誤解的名稱，不能保證儲存的唯一性。檢驗報告儲存要求：如使用Unilab系統(tǒng)由具結(jié)果，由于起系統(tǒng)有 自動保存功能，故不需要對其進行下載保存，其他電子版檢驗報告要 求每半年進行備份刻盤一次。3.2 三聚匐胺檢測原理：試樣用三氯乙酸溶液-乙酸鉛提取，

37、經(jīng)陽離子固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜法測定，外標法定量。三聚匐胺檢驗方法流程圖： 接樣-稱量樣品-加 0.1%三氯乙酸50ml 一加0叱酸鉛2ml超聲20min一離心10min (8000r/min )一過混合型陽離子交換柱一凈化一氮吹一20卿醇溶液定容 1ml - 0.45um過濾上機。3.2.1 稱量樣品：嚴格按照天平的使用規(guī)程操作即可。具體如下：天平使用前檢查：(1)準備使用天平時觀察周圍是否存在震動的情況，如果存在應在震動結(jié)束后再稱取樣品。(2)檢查天平的使用環(huán)境是否符合溫度1030C、濕度2585%的要求，水平泡是否處于中央位置。打開天平，待天平完成自檢顯示“0.0000 ”時，

38、可以使用。(4)對于過冷、過熱和含有揮發(fā)性及腐蝕性的物體，不可放入天平內(nèi)稱量，被測物不得超過天平最大的負載。3.2.2 稱量(1)將被測物放在稱盤中央，待顯示器左側(cè)邊的標志熄滅后，該數(shù)字即為被稱物的質(zhì)量；(2)如稱量需盛放物質(zhì)，先稱量容器，按TAR鍵，顯示為零即去皮，再置被稱物質(zhì)于容器中，這時顯示的是被稱物的凈重； 每次稱量時都應將天平門關(guān)閉，稱量樣品過程中，避免由現(xiàn)抽拉抽 屜、人員走動、倚靠實驗臺等對結(jié)果有影響的動作;(4)稱量完畢后關(guān)閉天平開關(guān)，但不必斷掉電源；(5)稱樣時所使用的離心管等要編號與樣品一一對應，并且記錄下樣品的質(zhì)量；3.2.3 加藥品3.2.3.1 加入藥品時注意要邊加邊搖

39、，讓藥品與樣品充分接觸，使粉末狀樣品充分的溶解在藥品中o3.2.4 超聲處理：超聲樣品時執(zhí)行超聲波操作規(guī)程即可。具體如下：3.2.4.1 工作前準備：(1)檢查電源連接線是否有破損，電源插頭是否插入220V的三芯電源插座并連接牢固；(2)檢查清洗槽是否有異物； 檢查排水閥門是否關(guān)閉；3.2.4.2 超聲處理：(1)樣品在超聲時要求超聲波清洗機中的液面一定要高于樣品的液面；(2)時間控制符合要求；(3)樣品超聲處理完成后，關(guān)閉電源開關(guān)，將槽內(nèi)水放凈，并將機體擦洗干凈；斷開電源，讓機體自然散熱 ；3.2.5 離心樣品：樣品離心時執(zhí)行離心機的操作規(guī)程即可。如下：(1)檢查電源及數(shù)據(jù)線連接是否牢固，打

40、開儀器電源，設(shè)定所需溫度 ； 待溫度達到設(shè)定溫度時，打開儀器上蓋，將需離心的樣品對稱放入離心機內(nèi)，關(guān)閉儀器上蓋，設(shè)定轉(zhuǎn)速，設(shè)定運轉(zhuǎn)時間，點擊開始離心； 離心結(jié)束后將樣品取由，如暫時不使用，需將儀器上蓋蓋好，如長 時間不使用，需將腔體內(nèi)冷凝水清理后，關(guān)閉儀器電源3.2.6 過混合型陽離子交換柱樣品離心時準備好所需要的陽離子小柱和試管并一一編號。離心結(jié)束后活化陽離子小柱、上樣、淋洗等。整個萃取過程要求銜接緊密不可以使小柱干燥，并且每一種液體按要求控制流速在1ml/min左右；3.2.7 氮吹：執(zhí)行氮吹儀操作規(guī)程即可，具體如下：3.2.7.1 用前檢查(1)檢查電源線路是否正常；檢查氮氣連接管路是否

41、正常；檢測氮吹針是否清潔，并進行必要的清潔工作；3.2.7.2 使用(1)連接電源，打開氮吹儀開關(guān)，調(diào)節(jié)溫度，準備升溫；(2)將針頭放置好，調(diào)節(jié)氮氣流路暢通。 將氮氣開關(guān)打開，使用調(diào)壓閥調(diào)節(jié)氮氣流速適合；待溫度和壓力達到檢驗要求，則放置樣品；(4)調(diào)節(jié)針頭位置(距離液面1-2cm),使氮氣開始吹干樣品；(5)樣品吹干后，關(guān)閉氮氣。關(guān)閉氮吹儀開關(guān)，取下電源插頭；(6)取生樣品；3.2.7.3 注意事項(1)注意保持氮吹儀清潔，氮氣管路一定要連接緊密； 三聚匐胺要求氮吹的溫度是50±5 (C),并且吹針要用甲醇擦拭干凈，防止樣品間交叉污染，氮氣流量以液面有輕微的波動即可，不 可以吹的液面

42、飛濺。并且所使用的試管是玻璃的，在氮吹時小心不要發(fā)生強烈得磕碰，以免碰碎試管；3.2.8 濃縮完全的吹干后用所需的溶液 1毫升定容，漩渦1分鐘，過相應的 0.22um或0.45um針頭過濾器（針頭過濾器分水系和有機系 ）緩慢地過 濾樣品到已經(jīng)一一編號的進樣瓶中準備上機。3.2.9 上機儀器參考條件：流動相：離子對緩沖鹽：乙睛 =90:10流速：1.0ml/min柱溫：40 C檢測器：紫外檢測器。波長240nm進樣量：20ul備注：以上儀器條件是參考條件，在實際操作過程中可以根據(jù)樣品特性和儀器狀態(tài)做適當調(diào)整；3.2.10 此方法的檢由限 2mg/kg3.3 山梨酸、苯甲酸3.3.1 山梨酸、苯甲

43、酸檢測原理：去除試樣中脂肪和蛋白質(zhì)，甲醇稀釋，過濾后，采用反相液相色譜法奮力測定。3.3.2 方法檢測流程圖：稱量樣品一加入 0.1M氫氧化鈉溶液25ml一超 聲水溶15min一調(diào)節(jié)PH到8一分別先后加入2ml亞鐵匐化鉀溶液和乙 酸鋅溶液一劇烈振搖，靜止15min一用甲醇定容，靜止15min一過0.45um濾膜過濾取清液上機3.3.3 色譜參考條件：色譜柱：C18,250mm*4.6mm 5um流動相：甲醇：磷酸鹽緩沖溶液 =1:9流速：1.2ml/min檢測波長：227nm柱溫：室溫進樣量：10ul3.3.4 山梨酸、苯甲酸檢由限1mg/kg3.4 安賽蜜、糖精鈉3.4.1 安賽蜜、糖精鈉檢

44、測原理：樣品中安賽蜜、糖精鈉經(jīng)高效液相 反相柱C18分離后，以保留時間定性，峰高或峰面積定量。3.4.2 方法流程圖：稱量樣品一加入氫氧化鈉溶液25ml一超聲15min一調(diào)節(jié)PH到8 (用0.5mol/l的硫酸)一分別先后加入 2ml亞鐵匐化 鉀和乙酸鋅溶液一振搖靜止 15min一加入40ml甲醇一定容到100ml 靜止15min-0.45um有機濾膜取清液過濾上機檢測。3.4.3 儀器參考條件：柱溫箱：30-40 C紫外檢測器：230nm進樣量：20ul和10ul色譜柱：C18 或 C8 (250*4.6mm,5um)流速：1.0ml/min 備注：以上儀器條件是參考條件，在實際操作過程中可

45、以根據(jù)樣品特 性和儀器狀態(tài)做適當調(diào)整。3.4.4 安賽蜜、糖精鈉的檢由限 3mg/kg3.5 對羥基苯甲酸乙丙酯3.5.1 對羥基苯甲酸酯類檢測原理：試樣用甲醇超聲波提取，取上清液過濾，以高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，外標法定量。3.5.2 依據(jù) DB37/T1100-20083.5.3 方法檢測流程圖：稱取樣品于 25ml比色管一加入15ml甲醇一 漩渦2min超聲10min一用甲醇定容至 25ml靜止分層，取上清液經(jīng) 0.2um有機濾膜過濾上機檢測。3.5.4 儀器條件：色譜柱：C18柱，250*4.6nm流動相：甲醇：0.02mol/l乙酸鏤溶液=60:40流速：1.0ml/m

46、in柱溫：35 C進樣體積：10ul檢測波長掃描范圍：210nm-400nm 定量波長 256nm3.5.5 本方法檢由限為 1mg/kg3.6 山梨酸、苯甲酸、安賽蜜、糖精鈉、對羥基苯甲酸乙丙酯的前處理很相似，注意事項統(tǒng)一為：3.6.1 超聲時液面應高于樣品的液面。3.6.2 亞鐵匐化鉀和乙酸鋅的位置不能調(diào)換。3.6.3 用力振搖。3.7 食品中合成著色劑的測定3.7.1 食品中合成著色劑的測定原理：食品中人工合成著色劑用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，根據(jù)保留時間定性和與峰面積比較進行定量。3.7.2 檢測方法流程圖：樣品稱取20.0g-40.0g 于100ml燒杯中一加檸檬酸溶液調(diào)PH到6-加