分子標(biāo)記——SRAP

1、分子標(biāo)記分子標(biāo)記SRAPSRAP報(bào)告人：xxx 一、SRAP標(biāo)記的概念： SRAP是一種基于PCR的新型標(biāo)記，由美國(guó)加州大學(xué)作物系Li和Quiros博士提出的序列相關(guān)擴(kuò)增多態(tài)性（sequence-related amplifiedpolymorphism,SRAP)。可用一對(duì)引物，但所用引物是在SSR的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)的，是一種無(wú)需任何序列信息即可直接PCR擴(kuò)增的新型分子標(biāo)記技術(shù)，具有簡(jiǎn)便、高共顯性、重復(fù)性、易于分離條帶及測(cè)序等優(yōu)點(diǎn)。二、SRAP標(biāo)記的原理： SRAP標(biāo)記原理是利用基因外顯子里G、C含量豐富，而啟動(dòng)子和內(nèi)含子里A、T含量豐富的特點(diǎn)設(shè)計(jì)兩套引物，對(duì)開(kāi)放閱讀框架進(jìn)行擴(kuò)增。該標(biāo)記具有簡(jiǎn)便、

2、穩(wěn)定、產(chǎn)率高、便于克隆目標(biāo)片段的特點(diǎn)，并已被應(yīng)用于圖譜構(gòu)建、性狀的標(biāo)記和遺傳多樣性分析。三、SRAP標(biāo)記中引物的設(shè)計(jì)與選擇： SRAP分子標(biāo)記的獨(dú)特之處在于引物的設(shè)計(jì)。SRAP引物是基于外顯子含GC而啟動(dòng)子、內(nèi)含子富含AT的特點(diǎn)設(shè)計(jì)的。利用在不同個(gè)體中外顯子的相對(duì)保守性及內(nèi)含子和啟動(dòng)子的可變性，通過(guò)正反引物的組合搭配擴(kuò)增出基于內(nèi)含子與外顯子的SRAP多態(tài)性標(biāo)記。 我們本次實(shí)驗(yàn)主要在于引物的篩選，分別用來(lái)自不同地區(qū)的各DNA樣品從現(xiàn)有引物中篩選出合適的引物。四、SRAP標(biāo)記25ul體系的組成： 水： 12ul 10*PCR taq buffer: 2.5ul Mg離子： 2.5ul dNTP:

3、2ul Me: 1ul Em: 1ul Taq 酶： 3ul 模板DNA： 1ul25ul體系引物五、SRAP標(biāo)記擴(kuò)增程序： 六、瓊脂糖凝膠電泳： SRAP擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增產(chǎn)物用2%的瓊脂糖凝膠電泳分析多態(tài)性。 DNA分子在瓊脂糖中泳動(dòng)時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，在分子篩作用下，分子大小和構(gòu)象不同的核酸分子泳動(dòng)率出現(xiàn)較大差異，從而分離核酸片段檢測(cè)其大小。核酸分子中嵌入熒光染料（EB）后，在紫外燈下可觀察到核酸片段所在的位置。瓊脂糖凝膠電泳設(shè)備： DNA瓊脂糖凝膠電泳膠圖展示：膠圖展示：條帶不穩(wěn)現(xiàn)象電泳時(shí)注意事項(xiàng)：1、凝膠一定要加熱溶解完全，均勻；2、一般情況下，梳子越薄而長(zhǎng)，條帶越好看；3、上樣量不宜過(guò)多，會(huì)造成條帶的相互擠壓；4、如果點(diǎn)樣孔多余，將樣點(diǎn)到中間，盡量避免邊緣效應(yīng)，中間電場(chǎng)比較均勻；5、做膠的緩沖液和跑膠的緩沖液濃度應(yīng)該一致；6、加樣時(shí)不要太快，讓其自然沉底，均勻