乳與乳制品非常規(guī)理化指標(biāo)檢驗維生素AE的檢測

1、YLNB 5.101. 范圍用液相色譜法測定各種嬰幼兒配方食品和乳粉中的維生素 A、E。2. 方法提要樣品中脂溶性維生素在皂化過程中與脂肪分離，經(jīng)（用）乙醚萃取后，用高壓液相色譜，紫外檢測器定量測定。3. 試劑所有試劑，如未注明規(guī)格，均指分析純；所有實驗用水， 如未注明其他要求，均指三級水。3. 1乙醚：脫醛3. 2甲醇：色譜純3. 3異丙醇：色譜純3. 4無水乙醇：色譜純3. 5無水乙醇：分析純3. 6氫氧化鉀溶液：質(zhì)量體積比為 500g/L3. 7抗壞血酸：100g/L3. 8無水硫酸鈉：分析純3. 9維生素A、E標(biāo)準(zhǔn)溶液3. 9 . 1維生素A標(biāo)準(zhǔn)貯備液，取適量維生素 A醋酸酯同5.2處

2、理。3. 9. 2維生素E標(biāo)準(zhǔn)貯備液，含維生素 E400g/mL的乙醇 （3.4 ）溶液。稱取40mg勺a -生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。稱取40mg勺8 -生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。稱取40mg勺丫 -生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。3. 9. 3維生素A E標(biāo)準(zhǔn)工作液。量取1mLL隹生素A標(biāo)準(zhǔn)貯備液（3.9.1 ）和2.5mL維生素E 標(biāo)準(zhǔn)貯備液（3.9.2 ）于100mL容量瓶中，用乙醇（3.4 ）溶 解，0.45卩m濾膜過濾，濾液作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。按照下表中的波長在紫外分光光度計上測定吸收值，并 按公式（

3、1）和表中系數(shù)計算濃度。標(biāo)樣波長（nm）系數(shù)（S）維生素A (IU/ml)3253.33/1835a -生育酚（卩g/ml）294718 -生育酚（卩g/ml）29891.2Y -生育酚（卩29892.8g/ml）A 10000SC（IU/ml 或 口 g/ml）=公式（1）式中：C標(biāo)樣濃度，IU/ml或p, g/mlA在紫外分光光度計上測得的吸光值S系數(shù)4. 儀器及器材常用實驗室儀器及：4. 1圓底燒瓶：250mL。4. 2分液漏斗：500mL。4. 3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。4. 4搖床水浴鍋。4. 5高壓液相色譜儀：具有可變波長的紫外檢測器、數(shù)據(jù) 處理系統(tǒng)或記錄儀。4. 6紫外分光光度計。5. 方法

4、5. 1樣品處理精確稱取5.0000g樣品（液態(tài)奶20ml），置于250mL磨口 三角瓶中，用水潤濕。5. 2測定液的制備皂化：于上述處理的樣品中加入 50mL乙醇溶液（3.5 ）, 充分混勻后加15mL氫氧化鉀溶液（3.6 ），再加入5ml抗壞血 酸溶液（3.7 ），在90C水浴鍋中連續(xù)回流30min后，立刻冷 卻到室溫。5. 2 . 2轉(zhuǎn)移：將皂化液定量轉(zhuǎn)移到500ml分液漏斗中，用少量水分幾次沖洗磨口三角瓶，洗滌液并入分液漏斗中。5. 2. 3萃?。河谏鲜龇忠郝┒分?，加入 100ml乙醚（3.1 ）, 蓋好瓶塞，倒置分液漏斗并劇烈振搖1min，在振搖過程中，注意釋放瓶內(nèi)壓力。靜置分層，將

5、水相放入另一500ml分液漏斗中。重復(fù)上述萃取過程，合并醚液到第一個分液漏斗中。 用蒸餾水洗該醚液至中性（用 pH試紙測定），通過無水硫酸 鈉過濾干燥，在50C水浴和氮氣流下，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸至 近干（絕不允許蒸干）,取下，用氮氣吹干，用無水乙醇（3.4 ） 定量轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，定容，0.45卩m濾膜過濾，濾液 作為樣品溶液。5. 3測定5. 3. 1維生素A和E的測定5. 3. 1. 1儀器條件色譜柱：C18 , 250mn¥ 4.6mm, OD柱或具等同性能的色 譜柱。流動相：甲醇：水（98 : 2 ）。流速：1.0mL/min 。靈敏度：0.005AU/MV。波長：維生素A, 325nm 維生素E, 290nm。5. 3. 1. 2注射20卩L維生素A、E標(biāo)樣（3.9.3 ）和20卩L樣 品溶液（5.2.3 ），得到標(biāo)樣和樣品溶液中維生素 A和E的峰 面積。6. 結(jié)果計算樣品中維生素 A（ IU/100g）= As Csd v I。Asdx m樣品中維生素 E（ mg /100g） = As Csd v 100Asd>< m式中：m樣品的質(zhì)量， g；A樣品中維生素A或E的峰面積（或峰高）；Ad標(biāo)樣中維生素A或 E的峰面積（或峰高）；Csd標(biāo)樣中維生素 A或 E的濃度