抗病毒多肽疫苗臨床研究現(xiàn)狀.docx

1、專題綜述抗病毒多肽疫苗臨床研究現(xiàn)狀薛冰肖長義葉紅（三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院，宜昌443002）中國圖書分類號R392.1文獻標識碼A文章編號自20世紀80年代Stnihmaier等"人發(fā)現(xiàn)口蹄疫病侏（FMDV）的146154及200213氨基酸肽段含免疫學(xué)位點，從而找到了一種新型疫苗，即肽疫苗。多肽疫苗安全性好，不具備傳染疾病的危險，具有高度的特異性，價格低廉，易于保存和應(yīng)用，且隨著分子免疫學(xué)、分子生物學(xué)和現(xiàn)代生物工程技術(shù)的發(fā)展，近年來成為疫苗研究的熱點。目前匕百種肽得到發(fā)展，數(shù)十種肽疫苗已進行臨床試驗階段。主要集中在人類免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒和人乳頭瘤病毒3種抗病毒多肽疫苗研究方面。1

2、HIV（Humanimmunodeficiencyvirus）多肽疫苗的研究現(xiàn)況艾滋病繼續(xù)在全球蔓延，根據(jù)UNAIDS/WHO2007年最新統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，僅2007年即新增250萬感染者，約210萬成年人和兒童因HIV感染而死亡。教育和行為規(guī)范是控制H1V流行的重要因素，同時H1V疫苗的研發(fā)亦成為當(dāng)下迫切需要盡管對于HIV疫苗的研究L1經(jīng)過去20多年，目前還沒有一種應(yīng)用于臨床，但臨床前試驗已取得巨大進展。雖然抗HIV免疫保護的具體相關(guān)因素還沒有確定，多數(shù)專家均認為布效的HIV疫苗應(yīng)該引發(fā)體液和細胞免疫應(yīng)答。HIV肽疫苗具有引發(fā)CD4和CD8,細胞免疫應(yīng)答的能力，在復(fù)合抗原或抗原混合物的外表面顯

3、露的肽可能誘發(fā)亞優(yōu)勢表位應(yīng)答，HIV基因的肽代表區(qū)也已經(jīng)被確定。HIV-1基質(zhì)蛋白pl7（matrixproteinp!7）與病毒復(fù)制有關(guān)，其不同的免疫調(diào)制性質(zhì)與病毒發(fā)病機制本文受國家H然科學(xué)基金項目（3O77OUM）、湖北省只生廳資助（No.鄂衛(wèi)科【2006197號JX3B32）及湖北省教育廳垂大課題資助（No.鄂教科：20074號7200713002） 湖北省宜昌市中心人民醫(yī)院，宜昌443000作者簡介：牌冰（1982年-）,女.在讀碩上.主要從事腫痛免疫學(xué)方面研究,E-mail：2011lxuebing163.cum;通訊作者及指導(dǎo)教師：fl長義（1958年-）,男，教授，博土生導(dǎo)師，主

4、要從審病霍感染與免疫學(xué)方面的研究Kiaochyclgu.cdu.5。1000-484X（2009）1MO5O-Q5有關(guān)，是H1V-1中和抗體的靶位,pl7抗體的水平高低與AIDS的進展緩急有關(guān)。事實上已經(jīng)顯示pl7在體外可加強HIV-1的復(fù)制，負性調(diào)節(jié)CD4+T細胞,NK細胞，樹突狀細胞，單核細胞的激活、分化及增殖。最近還發(fā)現(xiàn)在HIV-1感染者血清中可以檢測到P17,a持續(xù)存在于病人的淋巴結(jié)中。因此，HIV-1基質(zhì)蛋白pl7成為抗艾滋病治療性疫苗的候選抗原。FiorentiniS等合成了針對HIV-1p!7的多肽，用這個由20個氨基酸（SGGELDRWEKIRL-RPGGKKK）組成的合成肽（

5、命名為AT20）結(jié)合載體蛋白鑰孔戚血藍素（KeyholeLimpetHemocyanin,KU1）共同免疫BALB/c鼠，產(chǎn)生抗AT20的中和抗體，抗體滴度超過1：25000,其可終止所有病毒蛋白的生物學(xué)活性。由于艾滋病肽疫苗面臨的主要挑戰(zhàn)是HIV-1株的多樣性，為了評估AT20-KLH作為廣譜候選疫苗的能力，F(xiàn)io廳miniS等從烏干達人HIV-1A和C亞型中抽取4例不同的重組體p!7蛋白（含AT20表位突變點），使用該肽疫苗進行效果評價。結(jié)果發(fā)現(xiàn)盡管AT20表位存在突變點，p】7依然能與其受體P17R結(jié)合，在1：50血清稀釋度檢測到相同的生物學(xué)活性。令人驚奇的是,AT20-KLH產(chǎn)生的抗體

6、既能識別線性表位（aa922之間），又能識別構(gòu)象表位。AT20-K1B的這些臨床前免疫研究數(shù)據(jù)為肽疫苗的I期臨床試驗提供了研究基礎(chǔ)。KranAM等使用Vacc-4x肽疫苗，基于HIV-1核心蛋白p24共有序列基礎(chǔ)上的四個水溶性肽（長度為2427個aa）組成，免疫40位HIV陽性患者。整個免疫過程中無一例發(fā)生嚴重不良反應(yīng)，患者在體力狀態(tài)、生命征象和安全參數(shù)方面均未改變。同時，體外誘導(dǎo)T細胞增殖試驗（16位病人未被免疫，作為陰性對照）:在12周，11位患者中9位（81%）檢測到Vacc-4x特異性增殖反應(yīng)；在26周，25位患者中20位（80%）持續(xù)存在特異性增殖反應(yīng)，而未免疫組16位中僅5位（31

7、%）產(chǎn)生弱的免疫應(yīng)答。該研究顯示了候選肽疫苗Vacc-4x在大多數(shù)病人中能安全誘導(dǎo)HIV相關(guān)性T細胞應(yīng)答。Nehete等用猴-人耳有抗原性的8個高度保守HIV-1被膜肽組成聯(lián)合肽疫苗(Peptide-cocktailvaccine),該疫苗通過FM0C固相法在肽合成儀上合成，純度超過95%,免疫印度起源掰猴，通過酶聯(lián)免疫吸附試撿檢測到特異性的IFN-y誘導(dǎo)細胞和T細胞增殖，啟動強的細胞免疫應(yīng)答。PialouxG等"仞用HIV六脂肽疫苗(threeNef,twoGag,andoneEnvlipopeplide)分別在0、3、6周免疫24位HIV-l感染者,23個患者中16個(70%)對

8、HIV-1肽中的至少一種產(chǎn)生CD4+T細胞增殖反應(yīng)，13個(57%)檢測到CD8+T細胞應(yīng)答,90%的患者對HIV-1肽中的至少一種獲得CD4和/或CD8反應(yīng)。HIV肽疫苗由于弱的免疫原性使其發(fā)展受限，尋求并確定HIV肽疫苗的最佳佐劑以增強免疫原性成為必要，如制備的細胞因子C4-V3HIV肽疫苗已確定能增強機體的體液免疫應(yīng)答此。同樣地，GM-CSF通過吸附巨噬細胞誘導(dǎo)其成熟，增強抗原遞呈作用來加強免疫應(yīng)答，同時具有增強乙肝疫苗和利什曼原蟲疫苗的應(yīng)答活性。在臨床試驗前研究中,GM-CSF與HIVDNA,病毒樣顆粒或活病毒體疫苗聯(lián)合，均顯示好的佐劑效果。Speannan等”對多表位肽(Multie

9、pitopepeptide,MEP)疫苗的免疫原性進行評估，這是HIV候選疫苗在人體上的首例研究。HIVCTL多表位肽(MEP)疫苗是由4個CTL多表位肽與油水相乳劑(RC529-SE),加或不加GM-CSF輔佐劑組成。這4種肽被指定為A、B、C和J,范圍在aa2747之間。2004至2005年美國的7個區(qū)96位受試者參與了本試驗，年齡在18-50歲之間。分別在。天、28天、84天給予3種劑句:組，其中40位接種CTLMEP/RC529-SE,40位接種CTLMEP/RC529-SE+GM-CSF,16位給予生理鹽水作為控制組，追蹤隨訪15個月。第一次免疫后2周應(yīng)答率較低，CTLMEP/RC5

10、29-SE組7.5%,CTLMEP/RC529-SE+CM-CSF組7.9%。第三次免疫后2周兩組均達到92%,98天時達100%。98天時在不加GM-CSF組和加GM-CSF組中CTLMEP特異性抗體應(yīng)答中位數(shù)分別是8569和16324,具有統(tǒng)計學(xué)差異。2 HCV(HepatitisCvirus)多肽疫苗的研究現(xiàn)況目前全世界估計有1.7億人感染HCV(HepatitisCvims),每年新增感染人數(shù)達300400萬,持續(xù)的HCV感染最終導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化和肝癌，嚴重危害人類健康，近年來針對HCV合成的疫苗尤其肽類疫苗取得的發(fā)展與效果，顯示其可以成為解決HCV感染的良好途徑。Yutani等I

11、"：對12名HCVlb(+)的患者免疫接種HCVlb衍生肽，評價肽疫苗的安全性和免疫應(yīng)答效果。4個疫苗候選肽接種于HLA-A24(+)患者，誘導(dǎo)產(chǎn)生CTL和體液免疫應(yīng)答。這4種不同的合成肽是從HCVlb的高度保守區(qū)獲得的：蛋白E1衍生肽，位于aa213221(El213221,VYEAADM1M);蛋白E2衍生肽，位于aa488496(E2488496,HYAPRPCGI);非結(jié)構(gòu)區(qū)3衍生肽，位于aa1081090(NS31081-1090,VYHGAGSKTL)及非結(jié)構(gòu)區(qū)5A衍生肽，位于aa21322140(NS5A21321 140,RYAPACKPL)o皮下注射肽，24小時后皮

12、膚硬結(jié)5mm或紅斑10mm作為陽性對照，用HIV肽作為陰性對照。每兩周一次注入患者腹部皮下,一個周期接種7次，所有12名患者至少接種2個周期，分析肽的安全性和免疫原性。整個研究過程沒有發(fā)現(xiàn)嚴重的細胞毒性反應(yīng)，肽疫苗接種劑量與癥狀起始和持續(xù)時間沒有相關(guān)性，患者對該疫苗具有極好的耐受性。接種0.3mgJmg和3mg肽觀察到分別有1/4J/4和3/4的患者對肽產(chǎn)生了特異性的CTL反應(yīng)；相應(yīng)地，檢測到有0/4、3/4、3/4的患者IgG抗體滴度增強，即劑量越大，免疫效果越強，為劑量依賴性。這一結(jié)果為進一步臨床研究提供了很大支持。由于HCV感染T細胞反應(yīng)微弱，且被膜抗體在慢性感染患者和動物試驗中不能產(chǎn)生

13、相應(yīng)的中和反應(yīng),F1M等設(shè)想建立由表位特異性CD8+CTLs和CD4+反應(yīng)所致的抗HCV免疫應(yīng)答效果會更佳,若使用特征性表位包括大部分HLA-A2限制性表位的疫苗也將更具優(yōu)勢,基于上述假設(shè)合成的IC41肽疫苗便具有這一特性oIC41包含至少4個HLA-A2限制性CTL表位及3個高度泛宿主性的CD4輔助T細胞表位,以多聚-L精氨酸作為IC41佐劑。在一組隨機的、安慰劑控制下的試羚中，對128位HLA-A2陽性健康志愿者給予4次皮下注射,7個不同劑tto結(jié)果顯示IC41安全，具有極好的耐受性，輕度到中度的局部注射反應(yīng)是暫時的，旦所有劑量組對IC41均能誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答。檢測CD4*T細胞增

14、殖反應(yīng)，接種0.5mgIC41+多聚精氨酸，應(yīng)答率達8%-25%;接種2.5mgIC41+多聚精氨酸,應(yīng)答率達25%-42%;接種5mg1C41+多聚精氨酸，應(yīng)答率約50%。檢測CD8+T細胞增殖反應(yīng)，接種0.5mgIC41+多聚精氨酸，應(yīng)答率約8%;接種2.5mgIC41+多聚精氨酸，應(yīng)答率約25%;接種5mgIC4】+多聚精氨酸，有超過40%的志愿者產(chǎn)生CD8+免疫應(yīng)答。即接種劑凰越高,免疫應(yīng)答越強c同樣地，在健康志愿者中已安全誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性的能分泌干擾素y(IHVy)的CD4*和CD8T細胞。KladeCS等采用雙自法，隨機抽取60名對經(jīng)典治療無效或治療后復(fù)發(fā)的HLA-A2陽性的慢性丙肝

15、患者,分成5組，觀察IC4I、單純HCV肽疫苗、單純多聚精氨酸免疫后的反應(yīng)差別。結(jié)果發(fā)現(xiàn)1C41耐受性好，無藥物依賴性。在IC41疫苗組中T細胞增殖達67%,相較于單純用肽疫苗的17%的明顯增高；lEN-y酶聯(lián)免疫試驗其應(yīng)答率為42%。研究表明HCV肽疫苗IC41對慢性丙肝患者能誘導(dǎo)產(chǎn)生有效的特異性Ihl/Tcl應(yīng)答。ChuaBY等m通過Cl)4+T輔助細胞表位(序列為KLIPNASUENCTKAEL)經(jīng)一個賴氨酸殘基插入結(jié)合CD8+T細胞表位(來自流感病毒A基質(zhì)蛋白aa5866,Gni；FVFTL)合成一種脂肽。這種含二棕桐酰硫甘油半胱氨酸類脂的脂肽(它是樹突狀細胞表面Toll樣受體2的配體

16、)，能誘導(dǎo)產(chǎn)生有效的CD8*T細胞應(yīng)答.在健康人群與HCV感染者中均能活化DC并分泌IM2P70，活化CD8*T細胞產(chǎn)生IFN-yo這種脂肽疫苗可通過誘導(dǎo)抗HCVCD8*T細胞應(yīng)答來清除慢性患者體內(nèi)的病毒。2 HPV(Humanpapillomavirus)多肽疫苗的研究現(xiàn)況宮頸癌在婦女常見腫瘤中位列第二，約80%出現(xiàn)在發(fā)展中國家。每年約25萬婦女死于宮頸癌，新增病例50萬。近年來，HPV多肽疫苗無論在動物試羚還是臨床試驗中都取得令人鼓舞的進展。Daftarian等使用脂質(zhì)體抗原呈遞系統(tǒng)(Vacci-Max,VM)對一個肽疫苗進行臨床前試驗。該肽疫苗是將HPV16E7aa4957肽IUHYNI

17、VTF(R9F)(包含一個CTL表位)與通用輔助T細胞表位(PADRE)融合，結(jié)合佐劑CpG或脂質(zhì)體。此肽被指定為假陽性(Falsepositive,FP),疫苗使用劑量為50網(wǎng)/單劑鼠。將50xI05個表達HPV的C3腫瘤細胞接種C57BI/6鼠.4、5、6、9、14天后給予皮下注射FP-CpG-VM疫苗。所有接種了該疫苗的鼠在試驗終止時第130天均無腫瘤生K,經(jīng)細胞毒性分析,酶聯(lián)免疫斑點試驗和INF-y檢測均顯示產(chǎn)生了針對選擇性CTL表位的特異性免疫應(yīng)答。同樣的方法，接種6OX1O5個HPV腫痛細胞,4個月后測定細胞毒性，發(fā)現(xiàn)只有接受FP-CpG-VM疫苗的小鼠脾細胞具有溶解活性。這些結(jié)果

18、顯示該疫苗對表達腫瘤的HPVE7蛋白能產(chǎn)生強而持久的特異性免疫應(yīng)答。不僅在動物模型，將HPV肽疫苗應(yīng)用于人體試驗依然產(chǎn)生積極的效果。有證據(jù)表明抗L1抗體能有效識別宮頸損傷和正常宮頸。U用uiza等人發(fā)現(xiàn)位于L1表面暴露區(qū)的肽18283(55PNNNK1LVTKV-SGLQYRVFR74)和18294(284LYIKGSGSTANIASSNYFP1300)能與來自宮頸損傷病人血清中的抗體發(fā)生特異性的中和反應(yīng)。使用這兩個肽與165名正常婦女血清和148名有宮頸損傷或官頸癌患者的血清發(fā)生反應(yīng)，經(jīng)ELISA方法進行結(jié)果分析。不到3.6%的正常婦女血清能識別此兩肽；相反.91%96%的官頸上皮內(nèi)瘤變(C

19、ervicalintraepithelialneoplasia,CIN】CINIII)或?qū)m頸癌患者血清能識別這兩個肽。這些數(shù)據(jù)顯示患者血清中的抗肽18283和18294抗體與HK-HPV存在密切相關(guān)，并且發(fā)現(xiàn)識別癌前期和宮頸癌的敏感性達92%97%,特異度達89%95%,且特異性免疫應(yīng)答效果比病毒樣顆粒更強例。由這兩個肽所制備的抗體對于展開大規(guī)模的宮頸癌篩查可能具有重要意義。Sarkar等根據(jù)兩性分子結(jié)構(gòu)和相關(guān)T細胞表位從HPV16E6和E7蛋白中選擇7個E6肽序列和8個E7肽序列，通過固相法合成肽，用這些肽去免疫患者，對免疫效果進行評價。研究對象共69人，分為4組：1組6人，為正常組,CIN

20、(-)/HPV(-);2組31人，C【N(+)/HPV(+)；3組和4組均為CIN(+)/HPV(+),在參與實驗之前6個月進行了CIN消融或切除手術(shù),3組22人,為未復(fù)發(fā)組Reeur(-),4組10人，組織學(xué)再發(fā)CIN,Recur(+)。結(jié)果顯示使用單一肽，第1組無一例，第2組31人中5例產(chǎn)生單核細胞增殖反應(yīng)，第3組的大多數(shù)病人對所有7個E6肽和7/8E7肽產(chǎn)生增殖應(yīng)答.刺激指數(shù)(Stimulationindex,SI)N3.0,第4組10人中4例產(chǎn)生增殖應(yīng)答；而使用合成肽，第3組64%的患者對E6合成肽產(chǎn)生增殖應(yīng)答,82%的患者對E7合成肽產(chǎn)生增殖應(yīng)答,86%對E6或E7合成肽中的至少一種

21、產(chǎn)生明顯增殖反應(yīng)，而第4組無1例對E6/E7產(chǎn)生增殖反應(yīng)。這些結(jié)果顯示引發(fā)的特異性細胞免疫應(yīng)答對宮頸癌治療后無復(fù)發(fā)患者具有重大意義c因此這些肽對CIN痊愈患者獲得保護性免疫起到指示劑的作用，極具潛力設(shè)計成CIN相關(guān)的HPV預(yù)防性和治療性免疫試劑C徐道華等基于表位設(shè)計疫苗(Epitope-basevaccinedesign,EBVD)的技術(shù)路線，以HPVE7抗原86-93表位為基礎(chǔ)，合成了CTL、Th和脂類分子組合的模擬多肽抗原Pl(TLGrVCPI),同時合成了CTL、Th表位組合的模擬抗原肽P2(TLGIVCPI)科單純CTL表位肽P3(TLGIVCPI)的兩個對照多肽。以負載表位肽T2細胞

22、為靶細胞，P1、P2及P3肽均誘導(dǎo)出較強的CTL活性，其中乂以P1的效應(yīng)最強，而以未負載表位肽的T2細胞為靶細胞，Pl、P2及的肽所誘導(dǎo)的CTL對其特異性溶破率均小于10%o此外,P1、P2及P3經(jīng)體外誘導(dǎo)產(chǎn)生的CTL,均能殺傷Caski細胞。ELISA測量值顯示,P1、P2及P3肽均誘導(dǎo)PBMC分泌IEN-y,其中又以P1的效應(yīng)最強。以負載表位肽的JurkalA2.1/K1)為靶細胞，結(jié)果表明P1誘導(dǎo)出了較強的CTL活性，在E/T=100:1時，靶細胞特異性溶破率為65.0%；P2也誘導(dǎo)出rCTL活性，在E/T=100：1時，靶細胞特異性溶破率為35.5%；P3誘導(dǎo)的CTL對靶細胞基本無特異

23、性殺傷作用c但以未負載表位肽的Ju&atA2.1/Kb為靶細胞,P1、P2及P3肽所誘導(dǎo)的CTL對其特異性溶破率均小于10%。ELISA法測定多肽誘導(dǎo)小鼠脾細胞IFN-y的分泌，結(jié)果表明P1及P2肽均能誘導(dǎo)PBMC分泌IFN-y,其中乂以P1的效應(yīng)更強；而P3并不能誘導(dǎo)PBMC分泌IFN-yo以上結(jié)果表明將CTL表位同Th表位及脂類分子構(gòu)建的多肽可顯著提高CTL表位肽的免疫原性，且P1誘導(dǎo)抗原特異性CTL效應(yīng)顯著高于P2和P3。4抗病毒多肽疫苗佐劑理想的多肽疫苗免疫原性強，能激活抗原發(fā)生特異性細胞免疫和體液免疫應(yīng)答，有效殺傷腫瘤細胞而對正常細胞無毒害作用。但是普通多肽抗原因其表位單一、

24、分子量小易降解等原因而致免疫原性弱，只能激發(fā)低水平的CTL反應(yīng)，不能獲得理想的抗腫瘤效果，通過使用佐劑可幫助解決免疫原性弱的缺陷。過去艾滋病疫苗評估組(AIDSVaccineEvaluationGroup,AVEG)對接種C4-V3HIV多表位肽疫苗加不完全弗氏佐劑的效果進行評估，結(jié)果由于在凡位受試者身上產(chǎn)生無法接受的局部注射不良反應(yīng)，包括疼痛，無菌膿腫，流感樣疾病而被迫終止'。Spear-manP等!在H1V肽疫苗CTLMEP/RC529-SE的安全性檢測方面密切監(jiān)測,發(fā)現(xiàn)局部反應(yīng)輕度且短暫。接種部位輕度疼痛和壓痛是最常見的不良反應(yīng)，MEP/RC529-SE組為65%,MEP/RC5

25、29-SE+GM-CSF組為58%,控制組為6%。在MEP/RC529-SE紐中有1例產(chǎn)生抑郁,MEP/RC529-SE+GM-CSF組中疲勞/抑郁、頭疼/抑郁、過敏反應(yīng)各1例，但沒有任何受試者因此終止試驗，也沒有發(fā)現(xiàn)GM-CSF在局部注射部位的嚴重不良反應(yīng)。受試者對HCV肽疫苗IC41加佐劑多聚精氨酸具有極好的耐受性,考慮與免疫接種有關(guān)，局部癥狀是最常見的,2例發(fā)生淋巴結(jié)病,2例出現(xiàn)皮疹。在IC41組96個受試者中6%的人對多聚精氨酸呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，隨免疫接種次數(shù)增多對多聚精氨酸的陽性應(yīng)答會增加，但多聚精氨酸抗體存在是暫時的，沒有出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)，也無一例退出該試驗。以誘導(dǎo)產(chǎn)生有效T細胞免疫應(yīng)答抗

26、腫瘤為目的的HPV肽疫苗還未應(yīng)用于臨床，需要尋求新的最佳佐劑來增強肽疫苗的免疫效果。ToninsI等日：將神經(jīng)節(jié)糖昔融入奈瑟均屬腦膜炎外膜蛋白夏合物中，形成非常小的蛋白脂質(zhì)體(Verysmallsizeproteolipo-sog,VSSP),即為一種新型佐劑。用HPV16E7派生的最小單位CTL肽(RAHYNIVTF)與VSSP聯(lián)合免疫小鼠，可使腫瘤發(fā)生退變，生存期延長，誘導(dǎo)E7特異性CD8+T細胞應(yīng)答。5結(jié)語雖然抗腫瘤多肽疫苗研究取得巨大進展，具有廣泛的應(yīng)用前景,但由于存在一些問題，如人工合成多肽疫苗免疫原性欠佳，受HLA表型限制，在一些臨床研究中免疫應(yīng)答和臨床反應(yīng)不一致，病毒的高突變率等

27、,限制了多肽疫苗的臨床應(yīng)用，還需要進一步的研究和完善，以便更好地應(yīng)用于臨床。6參考文獻AdamKHvKaadcn0R.Slrohfnaieric.Isolationofimumunizingcyanogmbnxnkie-pqidesoffoot-and-muuthdiseasevirusLJ.BiochcmBiophyResCummun,I978;84(3):677-683.1 PiniA,Fai(*ianiC,BracciLHal.BranchedpeptidesasthcrapcuticsLJ.CurrPnxcinPqxSci,2008;9(5)：468-477.2 JohnstonMLF

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