水解度指標(biāo)測(cè)定

1、精品文檔水解度的測(cè)定方法一：(苛三酮比色法)(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制定：1、20四/ml甘氨酸：2mg甘氨酸定容到100ml容量瓶中。2、苛三酮顯示劑：水合苛三酮0.5g,果糖0.3g,磷酸氫二鈉11.2g,磷酸二氫鉀6g,定容到100mL稍熱溶解，避過(guò)低溫保存1周。3、40%乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作試管012345678待測(cè)樣品標(biāo)?mml0.000.71.00.5蒸儲(chǔ)水ml2.001.901.801.701.601.501.401.301.001.5苛三酮顯示1111111111齊1Jml40%乙醇ml5搖勻，沸水浴5515min5,用冷水迅速冷卻至室溫555555日安(

2、酸g0246810121420?OD(570nm)因甘氨酸的分子量為：75.07,換算成-NH工的pmH數(shù)的AC關(guān)系:可編輯水解度計(jì)算公式：DH=Jt】OO%力wr水好液-也線(xiàn)即_則/則）_原料蛋白質(zhì)中游離一NH_5.95N（mglmL）%（|加/8）xlOO%所以米樵蛋白的小二73477N-水解液蛋白含量（凱氏定氮）F-米糠蛋白換算系數(shù)5.95方法二：采用甲醛滴定法。水解度（）=（水解后生成的氨基氮的量/樣品中總氮含量）x100%（1）粗蛋白含量的測(cè)定：采用凱氏定氮法。（2）氨基氮的測(cè)定氨基酸含有氨基和竣基，具有兩性，加入甲醛與氨基酸中的氨基作用，可消除其堿性，使竣基顯示出酸性，用氫氧化鈉標(biāo)

3、準(zhǔn)溶液滴定，即可對(duì)氨基酸進(jìn)行定量。1、酚吹指示劑：0.5g酚吹溶于100ml50%的乙醇中2、中性甲醛溶液：甲醛溶液（3637%,分析純）50ml,加入0.5%的酚猷指示劑約3ml,滴加0.1mol/LNaOH,使溶液顯微粉色，儲(chǔ)存于棕色瓶中，臨用前配制。具體方法如下：分別吸取2mL不同水解度的水解液于燒杯中加蒸儲(chǔ)水5mL,向燒杯中加入5滴酚吹指示劑，混合后加中性甲醛溶液2.0ml再混合，用0.1mol/LNaOH滴定顯微粉色。同時(shí)取同濃度但未水解的蛋白液2mL做空白實(shí)驗(yàn)。-5,、V-VnxNx14.008氨基胤含量（nig/niL）=10式中：V樣品耗用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù)；V0空白耗用氫

4、氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù)；N氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液摩爾濃度；14.0081mL濃度為1.000mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于氮的質(zhì)量（mg）。方法三：226水解度的測(cè)定采用pHS悟t滴定法網(wǎng)到1根倨多肽在不同pH的條件卜,解離狀態(tài)不匹當(dāng)pH值恒定時(shí)酶水解蛋白后形成的H由接基,自由氨基或?；釟埢鶖?shù)】不等;當(dāng)在堿性條件下水解時(shí)，器放的氨基酸使溶液pH值明顯卜曲用桶堿液將其滴定回起始pH值,可以知道蛋白質(zhì)的肽健斷裂的情況，根據(jù)消耗的減量計(jì)算水解度DH值.水解度=（水解的肽鍵數(shù)/總肽鍵數(shù)）kIW%計(jì)算公式，DH二修聃囚由尼/（trMpH應(yīng)）x100%2-2公式中:片詢(xún)?nèi)旱味ㄏ牡膲A體積（niL）Ng亞：滴

5、定消耗的堿當(dāng)星浪段（inol/L）Mp：參加蛋白水解的蛋白總量（g）H如：每克蛋白中肽健的克當(dāng)量數(shù)（92nnnol；g）cl；3H基酸的平均解離度（50C時(shí)，pK=7J10.09）卡1薩嗎（+0阻M）pK=7.8+24OO*(298-T)/298TT-2n3.15-lI：反應(yīng)環(huán)境的溫度(nC)pH:反應(yīng)起pH值2.33水解度（DH）的測(cè)定蛋白質(zhì)的水解程度常以雄臼質(zhì)中的肽健被斷裂的白分率來(lái)表示.常見(jiàn)的水解度泅定和監(jiān)控的方法卜:要fTpH-鼾at法X加一N箱en.】編6）、=硝基笨玻酸法、甲醛滴定法、=31乙酸沉淀法等.由于pH-期t法具仃操作簡(jiǎn)單，連域測(cè)定的優(yōu).點(diǎn),并且當(dāng)pH大于6時(shí)，水解過(guò)程中

6、加入喊的用斷裂的肚鍵的腔鼠仃定量的關(guān)系a因此，本研究采用該法來(lái)檢測(cè)大蛋門(mén)的水解魔u/?/（%）=X100包#式中h單位質(zhì)及貴白質(zhì)中被水解的肽鍵的gCniniolg1）：H消耗的堿液體根，mL;一一堿液的濃度.inol/L：1/ct校1E系數(shù)（堿性蛋白的1觸=】OIL也底物中蚩白質(zhì)的含審:，象h底物中,更I!:中的收證總政.mniM/!，大米黃已取a40，（Hamada.?000）氮溶指數(shù)測(cè)定（TCA-NSI）可以通過(guò)檢測(cè)其氮溶解指數(shù)來(lái)初步判定小肽或寡肽含量。NSI（%）=（N1/N0）*100N0=總氮N1=可溶性氮（用三氯乙酸一何溶性氮測(cè)定法）三氯乙酸（TCA）是一種蛋白質(zhì)沉淀劑，它可以沉淀蛋白質(zhì)和較長(zhǎng)的肽段?？梢员蝗纫宜岢恋淼碾亩嗡淖钌侔被釟埢鶖?shù)與底物的種類(lèi)有關(guān)，就特定的底物而言，三氯乙酸氮溶解指數(shù)可以定性反映蛋白質(zhì)的分解情況，溶解指數(shù)越高，表明較短肽段含量越高。三氯乙酸氮溶指數(shù)（TCANSI）測(cè)定方法：將20ml10%三氯乙酸（T