試劑作用-匯總

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上試劑 1.DTT二硫蘇糖醇（Dithiothreitol，簡稱為DTT）是一種小分子有機還原劑，化學(xué)式為C4H10O2S2。其還原狀態(tài)下為線性分子，被氧化后變?yōu)榘牧h(huán)狀結(jié)構(gòu)。二硫蘇糖醇的名字衍生自蘇糖（一種四碳單糖）。DTT的為二硫赤糖醇（DTE），即DTT的C3-。二硫蘇糖醇 分子結(jié)構(gòu)式DTT的還原力受pH值的影響，只在pH值大于7的情況下能夠發(fā)揮。這是因為只有脫去的鹽負(fù)離子（-S）才具有反應(yīng)活性，硫醇（-SH）則沒有；而巰基的pKa一般為8.3 2.TrisTris為，在25下，它的為8.1；根據(jù)緩沖理論，Tris緩沖液的有效緩沖范圍在7.0到9.2之間。T

2、ris堿的水溶液pH在10.5左右，一般加入以調(diào)節(jié)pH值至所需值，即可獲得該pH值的緩沖液。但同時應(yīng)注意溫度對于Tris的pKa的影響。由于Tris緩沖液為弱堿性溶液，DNA在這樣的溶液中會被去質(zhì)子化，從而提高其。人們常常在Tris鹽酸緩沖液中加入制成“TE緩沖液”，TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲存。如果將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成，則獲得“”（Tris/Acetate/EDTA），而換成則獲得“TBE緩沖液”（Tris/Borate/EDTA）。這兩種緩沖液通常用于核酸實驗中Tris常用作生物緩沖液，常配成pH值為6.8，7.4，8.0，8.8。其pH值隨溫度變化很大。一般來說，溫度每升高一度

3、，PH值下降0.03。1M Tris-HCl 6.8和1.5M Tris-HCl 8.8是最常用的試劑。而由Tris配成的TAE，TBE等是DNA電泳最常用的試劑，TE（pH8.0）主要用于溶解DNA。（TE為 Tris加EDTA合稱。）3.Edta可螯合金屬離子，減弱dnase活性（DNase I活性依賴于鈣離子，并能被或二價錳離子激活。存在條件下，DNase I可隨機剪切雙鏈DNA的任意位點；二價錳離子存在條件下，DNase I可在同一位點剪切DNA雙鏈，形成，或1-2個核苷酸突出的粘末端。輔因子：Ca2+活化劑：Mg2+抑制劑：EDTA (可逆的)4.SdsSDS是一種已知的能夠使的去污

4、劑。它用于確定蛋白分子量的。它也可以用于核酸抽提操作中破壞細(xì)胞及裂解（核酸：蛋白復(fù)合物）。在較高溫度下，破壞蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，使DNA釋放出來。5.DAPIDAPI 為一種，可以穿透細(xì)胞膜與中的雙鏈DNA結(jié)合而發(fā)揮標(biāo)記的作用，可以產(chǎn)生比DAPI自身強20多倍的熒光，和EB相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。6.Strep-tag技術(shù)開發(fā)的原理是眾所周知的生物素（biotin）和抗生物素蛋白鏈菌素（streptavidin）之間的結(jié)合反應(yīng)。為了將這種牢固的相互作用用于蛋白質(zhì)純化用途，研究者們發(fā)現(xiàn)需要一個肽，該肽與重組蛋白質(zhì)融合后，能夠結(jié)合在streptavidin的生物素結(jié)合口袋，從而

5、作為純化tag。最后研究者們成功設(shè)計出一個只由8個氨基酸(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)構(gòu)成的短序列并稱之為Strep-tag IIThe Strep-tag is a synthetic  consisting of eight  (-).  This peptide sequence exhibits intrinsic affinity towards Strep-Tactin, a specifically engineered  7.HA標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個HA (流感病毒血

6、凝素，influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目標(biāo)蛋白。HA標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞類型，相應(yīng)的HA標(biāo)簽抗體也被廣泛應(yīng)用。HA 標(biāo)簽抗體能特異識別C末端或N末端帶有HA標(biāo)簽(HA-tagged)的融合蛋白，也可以用于檢測和HA tag融合表達蛋白的表達、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測HA tag融合表達蛋白等。8loading buffer 中文名字叫上樣,6*的緩沖液中可以顯示兩條帶，前面的紫蘭色的條帶是，在0.6%、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中，溴酚蘭的遷移率分別與1Kb、0.6Kb、0

7、.2Kb和0.15Kb的雙鏈線性DNA片段大致相同；后面的蘭色條帶是二甲苯青，它在1%和1.4%瓊脂糖中電泳時，其遷移速率分別與2Kb和1.6Kb的雙鏈線性DNA大致相似。而對于PAGE膠他們的遷移速率也分別不同。loading buffer的功能主要有兩個。第一，里邊的指示劑和二甲苯氰FF起到指示的作用，顯示電泳的進程，以便我們適時終止電泳；第二，里邊的成分甘油可以加大樣品密度，使樣品密度大于TAE，從而沉降到點樣孔中，防止樣品飄出點樣孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都會寫明。SDS主要是促使變性，因為沒有除盡的聚合酶會結(jié)合在DNA雙鏈上影響它的。細(xì)胞裂解后的裂解液，加load

8、ing 100加熱，也是為了中止酶促反應(yīng)，防止提取的。6×loading buffer 一般配置：30mM EDTA36%(v/v) Glycerol0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF0.05%(w/v) Bromophenol Blue主要用于DNA電泳9BrdU5-溴脫氧尿嘧啶核苷可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加入，而后利用抗Brdu單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細(xì)胞。同時結(jié)合其它細(xì)胞標(biāo)記物，雙重染色，可判斷的種類，增殖速度，對研究細(xì)胞動力學(xué)有重要意義。10LB培養(yǎng)基液態(tài)根據(jù)（J.薩姆D.W.拉塞爾著）配制每升培養(yǎng)基,應(yīng)該在950

9、ml去離子水中加入:10g5gNaCl 10g搖動容器直至溶質(zhì)溶解.用5mol/LNaOH調(diào)pH至7.0.用去離子水定容至1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.固態(tài)LB固體培養(yǎng)基1L和液體一樣，加10g15g瓊脂粉，一定要在溫度降下之前加好抗生素，并且倒好板1.配制：100mlLB培養(yǎng)基加入11.5g瓊脂粉2.抗生素的加入：高壓滅菌后，將融化的LB固體培養(yǎng)基置于55的水浴中，待培養(yǎng)基溫度降到55時（手可觸摸）加入抗生素，以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效，并充分搖勻。3.倒板：一般15ml-20ml倒1個板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后，打開蓋子，在紫外下照10-15分鐘。4.保存：用封口膠封邊，并倒置放于4保存，一個月內(nèi)使用。ph值需要控制在7.411.胰