生物本科畢業(yè)論文

1、銀杏葉提取物EGB對CCl4肝損傷小鼠的MDA含量以及SOD活力的影響學(xué)生：杜改亮 指導(dǎo)教師 ：劉春卉 （太原師范學(xué)院生物系20061312班,學(xué)號：2006131201,山西太原030031） 摘要 目的：探討銀杏葉提取物EGB( 黃酮類) 對CCl4肝損傷小鼠以MDA含量及SOD活力的影響，生產(chǎn)出一種有效保護(hù)肝臟的藥物。方法：清潔級昆明種小鼠兼用，隨機(jī)分為空白對照組、吐溫對照組、模型對照組、聯(lián)苯雙酯陽性對照組、實驗組（銀杏葉提取物低濃度、銀杏葉提取物中濃度、銀杏葉提取物高濃度），用四氯化碳皮下注射法建立慢性肝損傷模型，分別用生理鹽水或藥物灌胃治療。檢測肝組織中脂質(zhì)過氧化物丙二醛（MDA）的

2、含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力并加以探討。結(jié)果：EGB能顯著升高CCl4所致急性肝損傷小鼠其SOD活力，并可顯著降低該模型小鼠肝組織中MDA的含量。結(jié)論：銀杏葉提取物( 黃酮類)對此模型小鼠的肝損傷具有顯著的保護(hù)作用，可能與降低、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)以及抗自由基損傷有關(guān).關(guān)鍵詞 銀杏葉提取物; CCl4肝損傷小鼠; MDA含量；SOD活力 近幾年來由于大量有害物質(zhì)的產(chǎn)生，人們可能在不經(jīng)意間，接觸大量有害物質(zhì)，例如CCL4, CCL4致急性中毒性肝炎、肝中毒四氯化碳進(jìn)入肝細(xì)胞后，使線粒體膜的脂質(zhì)溶解，從而影響線粒體的結(jié)構(gòu)和功能，使酶蛋白質(zhì)的合成減少，造成酶的破壞，因而影響代謝功能和能量的合成

3、，致死。新觀點認(rèn)為細(xì)胞壞死的關(guān)鍵是由于四氯化碳抑制了細(xì)胞膜上鈣泵活性，大量鈣離子內(nèi)流，堆積于細(xì)胞內(nèi)的結(jié)果。此種動物模型可觀察到急性肝炎的糖、脂肪、胞色素等方面的代謝障礙、肝解毒功能障礙，磺溴酚納滯留血清，轉(zhuǎn)氨酶明顯升高，迅速出現(xiàn)營養(yǎng)不良、肝脂肪化變性及壞死等形態(tài)學(xué)變化。肝小葉中央壞死和肝細(xì)胞脂肪變性是其主要病變。有一種陽性藥聯(lián)苯雙酯，它是一種治療肝炎的降酶藥物，即可減輕因CCL4所致的肝臟損害，對CCL4 所致的肝臟微粒體脂質(zhì)過氧化，CCL4代謝為CO有抑制作用，對肝臟具有保護(hù)作用，雖治療肝臟的藥物很多，但效果不是很好。近幾年國內(nèi)外學(xué)者對銀杏葉藥理進(jìn)行了大量的研究，銀杏（Ginkgo bilo

4、ba）系銀杏科銀杏屬落葉喬木，為中生代孑遺的稀有物種，被稱為被子植物的“活化石”是我國特有植物。20世紀(jì)以來，發(fā)現(xiàn)其主要藥用成分為黃酮類和萜內(nèi)酯類化合物。藥理試驗表明銀杏黃酮類化合物有使冠狀血管及其他血管擴(kuò)張的作用。銀杏黃酮有抗自由基、抑制脂質(zhì)過氧化作用。可直接清除02一、.OH一，捕捉脂化自由基、脂氧自由基和烷自由基等，通過對這些自由基起一種氫原子供用而終止自由基連鎖反應(yīng)鏈，從而阻止和抑制氧自由基反應(yīng)和脂質(zhì)過氧化的病理性加劇，減輕氧自由基和脂質(zhì)過氧化損傷。推測EGB對肝損傷也有保護(hù)作用。本實驗就是通過設(shè)計一系列的對比實驗，研究EGB是否確實有此作用。 1材料與方法1.1實驗材料藥物.1銀杏葉

5、提取物（黃銅類） 江蘇同源堂生物工程公司 批號：老師幫填一下 臨用時用0.1%吐溫80，蒸餾水配制成10mg/kg，40,mg/kg， 160 mg/kg低中高三個濃度。.2聯(lián)苯雙酯（15mg/丸） 浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠 批號：080603臨用時用蒸餾水配制成0.12%混懸液取80丸*15mg/丸=120mg （120mg100ml水=0.12%）.3 CCl4 北京化工廠提供 批號：080121 臨用前用大豆油制成0.1%的四氯化碳油溶液。試劑ALT試劑盒 批號：20100316；AST試劑盒 批號：20100317；SOD試劑盒 批號：20100317；MDA試劑盒 批號：201

6、00317，均為南京建成生物工程研究所生產(chǎn)?？偟鞍诇y定試劑盒 北京北化康泰臨床試劑有限公司 批號：20091028 1.1.3實驗動物小白鼠 清潔級昆明種兼用，體重24+2g，北京醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所提供，許可證號：SCXK（京）2004-00011.1.4 儀器.1 電子稱：ACS-A-JJ交直流電子計價秤，中航第一集團(tuán)太原航空儀表有限公司生產(chǎn)。.2 721分光光度計，上海第三分析儀器廠生產(chǎn)。.3.HH-60數(shù)顯恒溫攪拌水箱，蘇州威爾實驗用品有限公司生產(chǎn)。.4 FZQ-2型漩渦混合器，競速泰縣醫(yī)療器械廠.5 電子天平，BP310P德國賽多利斯生產(chǎn)。.6 離心機(jī)（KDC-1044低速離心機(jī)

7、），科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司生產(chǎn)。1.2 實驗分組與處理分組1.2.1.1 空白對照組1.2.1.2 0.1%吐溫對照組1.2.1.3 模型對照組1.2.1.4 聯(lián)苯雙酯陽性對照300mg/kg 1.2.1.5 銀杏葉提取物低濃度10mg/kg1.2.1.6 銀杏葉提取物中濃度40mg/kg1.2.1.7 銀杏葉提取物高濃度160mg/kg處理3月15日，隨即分為七組后，灌胃給藥（0.25ml/10g體重），空白對照組、模型組給予等量蒸餾水，吐溫對照組給予等量吐溫，連續(xù)灌胃七天，灌胃前稱一次體重，灌胃后第二天再次稱重，然后第四天三次稱重，稱重后，除空白對照組及吐溫對照組外，各組動物均腹腔

8、注射0.1%CCl4溶液10ml/kg（取CCl430µl30ml大豆油），第七天灌胃給藥后停食。16小時后解剖取出肝臟、脾。1.3稱肝臟、脾脫臼處死小鼠，剖取肝臟、脾稱重。1.4肝組織中脂質(zhì)過氧化指標(biāo)及抗氧化活性的測定 MDA 含量測定方式MDA 含量測定方式是在國內(nèi)外眾多測試方法的基礎(chǔ)上改進(jìn)的一種微量、快速、簡便、準(zhǔn)確、對操作人員健康無損害的測試方法。通過測試可反映出血清（漿）、乳汁等細(xì)胞外液、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞以及各種動植物的細(xì)胞水平及亞細(xì)胞水平的脂質(zhì)過氧化物的量。.1丙二醛（MDA）的測定意義：機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸（P

9、UFA），引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并因此形成脂質(zhì)過氧化物。如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羥基、羰基、氫過氧基可內(nèi)過氧基，以及新的氧自由基等。脂質(zhì)過氧化作用不公把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑，即非自由基性的脂類分解產(chǎn)物，而且通過鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng)，放大活性氧的作用。因此，初始的一個活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成，這些分解產(chǎn)物中，一些是無害的，另一些則能引起細(xì)胞代謝及功能障礙，甚至死亡。氧自由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸（PUFA）的過氧化引起細(xì)胞損傷，而且還能通過脂氫過氧化物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。因而測試MDA的量常常可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。MDA的測定常常與

10、SOD的測定相互配合，SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力，而MDA的高低又間接的反應(yīng)了機(jī)本細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，通過SOD與MDA的結(jié)果分析有助于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥理及工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展。.2MDA試劑盒測試原理：過氧化脂質(zhì)降狗解產(chǎn)物中的丙二醛（MDA）可與硫代巴比妥酸（TBA）縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532nm處有最大吸收峰。因底物為硫代巴比妥（TBA）所以此法稱TBA法。.3測試所需儀器設(shè)備可見光分光光度計，可調(diào)到95左右的恒溫水浴箱（或者鋁鍋內(nèi)放幾個去掉蓋子的易拉罐，將罐壁及底部穿數(shù)十個孔，以便水的進(jìn)入，用來代替水浴箱。），離心機(jī)。.4 100T試劑盒組成與配制試劑一：液體

11、20ml×1瓶，室溫保存。（天冷時會凝固，每次測試前適當(dāng)水浴加溫以加速溶解，直至透明方可應(yīng)用）。試劑二：液體12ml×1瓶，用時每瓶加340ml雙蒸水混勻，4冷藏（注意不要碰到皮膚上）。試劑三：粉劑×1支，用時將粉劑加入到90-100的熱雙蒸水60ml中，（在溶解過程中可適當(dāng)加熱），充分溶解后用雙蒸水補(bǔ)足至60ml再加冰醋酸60ml，混勻，配好的試劑避光冷藏。（冰醋酸自備注）標(biāo)準(zhǔn)品：10nmol/ml四乙氧基丙烷5ml×1瓶，4冷藏。測試盒冷藏至少可保存一年。注：冰醋酸又名乙酸，一般的醫(yī)藥公司、化劑公司均有售，要購AR級即分析純級的乙酸較好，乙酸含量為9

12、9%以上。.5 50T試劑盒組成與配制：.5.1試劑一：液體10ml×1瓶，室溫保存。（天冷時會凝固，每次測試前適當(dāng)水浴加溫以加速溶解，直至透明方可應(yīng)用）。.5.2試劑二：液體6ml×1瓶，用時每瓶加340ml雙蒸水混勻，4冷藏（注意不要碰到皮膚上）。.5.3試劑三：粉劑×1支，用時將粉劑加入到90-100的熱雙蒸水30ml中，（在溶解過程中可適當(dāng)加熱），充分溶解后用雙蒸水補(bǔ)足至30ml再加冰醋酸30ml，混勻，配好的試劑避光冷藏。（冰醋酸自備注）.5.4標(biāo)準(zhǔn)品：10nmol/ml四乙氧基丙烷5ml×1瓶，4冷藏。測試盒冷藏至少可保存一年。注：冰醋酸又名

13、乙酸，一般的醫(yī)藥公司、化劑公司均有售，要購AR級即分析純級的乙酸較好，乙酸含量為99%以上。.6規(guī)范操作方法：.6.1操作表：標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管10nmol/ml標(biāo)準(zhǔn)品（ml）0.1無水乙醇（ml）0.1測試樣品（ml）0.10.1試劑一（ml）0.10.1 混勻（搖動幾下試管架）試劑二（ml）3333試劑三（ml）11150%冰醋酸1旋渦混勻器混勻，試管口用保鮮膜扎緊，用針頭刺一小孔，95水?。ɑ蛴缅侀_蓋煮沸）40分鐘，取出后流水冷卻，然后3500-4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，（3000轉(zhuǎn)/分以下離心時間需延長，目的使沉淀完全）。取上清0.1ml，532nm處，1cm光徑，蒸

14、餾水調(diào)零，測各管的吸光度值。.6.2參考取樣量：血清（漿）取0.1-0.2ml。低密度脂蛋白懸液取0.1-0.2ml。食油取0.03ml,肝組織、心肌、肌肉組織、螺旋藻等，取5%或10%勻漿0.1-0.2ml較好。.6.3規(guī)范操作方法標(biāo)準(zhǔn)管吸光度：當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為0.1ml時，則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去標(biāo)準(zhǔn)空白管的吸光度為0.065-0.070。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為0.2ml時，則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去標(biāo)準(zhǔn)空白管的吸光度為0.130-0.140。.6.4規(guī)范操作方法及簡便操作方法中，若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度太低，可以將水浴時間40分鐘延長至80分鐘，但您的同一課題中MDA的檢測都必須延長至80分鐘，以免造成批間差異

15、。.5計算公式：血清（漿）中MDA含量計算公式：血清（漿）中MDA含量 測定管吸光度-測定空白管吸光度 （nmol/ml） = -×標(biāo)準(zhǔn)品濃度 × 樣本測定前 標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度 （10nmol/ml） 稀釋倍數(shù)組織中MDA含量計算公式： 測定管吸光度-測定空白管吸光度 組織中MDA含量 = ×標(biāo)準(zhǔn)品濃度 ÷ 蛋白含量 （nmol/mgprot） 標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度 （10nmol/ml） （mgprot/ml）nmol/mgprot為納摩爾/毫克蛋白取上清100µl,測定MDA含量。1.4.2 SOD活力的測定方法.1

16、 100管試劑盒的組成與配制：.1.1試劑一：貯備液：10ml×1瓶（天冷時或放冰箱會有部分結(jié)晶析出，需熱水浴溶解后再用）； 試劑一應(yīng)用液的配制：用時每瓶加蒸餾水稀釋至100ml，4保存6個月。.1.2試劑二：液體10ml×1瓶，4保存6個月。.1.3試劑三：液體10ml×1瓶，4保存6個月。.1.4試劑四：液體350ul×2支，4保存不可冷凍；4號稀釋液10ml×1瓶，4保存6個月。 用時兩者按1：14稀釋，需多少配多少。配好的試劑四4保存，不可冷凍。 注：所用吸嘴為一次性吸嘴。.1.5試劑五：粉劑×1支，用時加70-80熱雙蒸水7

17、5ml溶解后備用，若加熱過程中水分 蒸發(fā)減少，此時必須用蒸餾水補(bǔ)充至75ml，配好后試劑避光4冷藏6個月。.1.6試劑六：粉劑×1支，用時加蒸餾水75ml溶解后備用，配好后試劑避光4避光冷藏3 個月。顯色劑的配制：按試劑五：試劑六：冰乙酸=3：3：2的體積比配顯色劑，4避光冷藏3個月。.2 50管試劑盒的組成與配制：.2.1試劑一：貯備液：5ml×1瓶（天冷時或放冰箱會有部分析出，需熱水浴溶解后再用）； 試劑一應(yīng)用液的配制：用時加蒸餾水稀釋至50ml，4保存6個月。.2.2試劑二：液體5ml×1瓶，4-10保存6個月。.2.3試劑三：液體5ml×1瓶，4

18、-10保存6個月。.2.4試劑四：液體350ul×1支，4保存，不可冷凍；4號稀釋液5ml×1瓶，4保存6個月。 用時二者按1：14稀釋，需多少配多少。配好的試劑四4保存，不可冷凍。 注：所用吸嘴為一次性吸嘴。.2.5試劑五：粉劑×1支，用時加70-80蒸餾水37.5ml溶解后備用，若加熱過程中水分 蒸發(fā)減少，此時必須用蒸餾水補(bǔ)充至37.5ml，配好后的試劑避光4冷藏保存6 個月。.2.6試劑六：粉劑×1支，用時加蒸餾水37.5ml溶解后備用，配好后試劑避光4冷藏保存6 個月。顯色劑的配制：按試劑五：試劑六：冰乙酸=3：3：2的體積比配顯色劑，4避光冷藏

19、3個月。.3總超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的測定.3.1操作總SOD（T-SOD）活力的測定：試劑（ml）測定管對照管試劑一(ml)1.01.0樣品(ml)0.05蒸餾水(ml)0.05試劑二(ml)0.10.1試劑三(ml)0.10.1試劑四(ml)0.10.1 用旋渦混勻器充分混勻，置37恒溫水浴40分鐘顯色劑(ml)22混勻，室溫放置10分鐘，于波長550nm處，1cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零，比色。.3.2計算：.3.2.1血清（漿）、心肌灌流液、腎透析液、細(xì)胞培養(yǎng)液等總SOD活力計算：(1)定義：每亳升反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時所對應(yīng)的SOD量為一個SOD活力單位（U）。(2)

20、血清（漿）、心肌灌流液、腎透析液、細(xì)胞培養(yǎng)液等總SOD活力計算公式： 總SOD活力= 對照管吸光度-測定管吸光度 反應(yīng)體系的 樣本測試前的 （U/ml） -÷50%× 稀釋倍數(shù) × 稀釋倍數(shù) 對照管吸光度 .3.2.2組織勻漿中總SOD活力計算：(1)定義：每毫克組織蛋白在1ml反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時所對應(yīng)的SOD量為一個SOD活力單位（U）。(2)計算公式：組織勻漿中SOD活力 對照管吸光度-測定管吸光度 反應(yīng)液總體積 （U/ml） = -÷50%×-÷組織中蛋白含量 對照管吸光度 取樣量 （mgprot/ml）取100mg

21、肝臟加1ml生理鹽水，研制勻漿，離心3000轉(zhuǎn)，20分鐘，取上清30µl，測定SOD的活力；2結(jié)果2.1體重、肝重及脾重組別大號編號體重（g)3.16體重（g)3.18體重（g)3.21肝重（g）脾重(g)空白對照112525250.964 0.064 221718220.741 0.093 332727310.991 0.121 442424260.970 0.102 551517190.646 0.055 662526261.020 0.068 712628290.874 0.099 822326291.067 0.116 933132341.256 0.195 10425293

22、31.250 0.154 1152831331.190 0.113 吐溫對照 1212626291.077 0.098 1322524250.858 0.106 1431618210.735 0.061 1542324240.865 0.080 1651618200.767 0.081 1762123260.908 0.053 18723201913133351.420 0.126 2022226271.116 0.150 2133033361.383 0.092 2252931331.126 0.089 2312525261.007 0.106 2422224250.990 0.038 模型

23、對照2532324240.898 0.112 2642728301.070 0.130 2752424240.905 0.052 2862123251.195 0.214 2913033361.439 0.142 3022829291.129 0.054 3132931341.492 0.172 3242426271.034 0.075 3352728291.377 0.126 3412324251.078 0.097 3522524261.095 0.167 陽性對照3631921220.911 0.055 3742223220.806 0.048 3852223220.833 0.045

24、3912528301.144 0.122 4022829311.798 0.092 4132830311.428 0.199 4243033341.270 0.129 4352729301.414 0.133 4412423240.831 0.145 4522525250.977 0.114 銀低4632426270.820 0.082 4742524271.004 0.081 4852425270.911 0.085 4962726271.142 0.099 5012729301.134 0.098 5122426281.052 0.084 5232729291.162 0.073 5342

25、425261.176 0.142 5452527281.208 0.081 5512324230.884 0.044 5622124260.972 0.098 銀中 5732526261.126 0.156 5842323240.824 0.073 5952325261.039 0.107 6013031321.251 0.101 6122930301.195 0.101 6232425261.120 0.087 6342628291.094 0.109 6453030321.087 0.111 6562528301.129 0.093 6612527271.140 0.194 6722319

26、200.924 0.122 銀高 6832827271.081 0.141 6942427270.925 0.089 7052324240.921 0.102 7113032341.393 0.149 7222526291.281 0.120 7332225281.170 0.128 7442224251.376 0.097 7552629291.207 0.115 7662628301.366 0.138 2.2小鼠肝組織中MDA含量的變化性別組別劑量MDA(nmol·mg protein-1)雌空白2.71±0.15吐溫0.1%Tween-802.05±1.1

27、5模型6.12±2.83,*陽性藥30 mg·kg-13.14±1.32GP10 mg·kg-11.89±0.8340 mg·kg-11.88±1.29160 mg·kg-11.44±0.50雄空白1.85±0.49吐溫0.1%Tween-801.87±0.48模型3.05±1.85陽性藥30 mg·kg-12.54±1.39GP10 mg·kg-11.82±0.2440 mg·kg-11.27±0.32160 mg

28、·kg-12.32±1.13EGB對CCl4致急性肝損傷小鼠肝脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的影響(n=5)Effect of GP on lipid peroxidation (MDA) of hepatic tissue in mice with CCl4-induced injuries. (n=5)注：為與空白對照組比較P<0.05；為與空白對照組比較P<0.01；*為與溶劑對照組比較P<0.05；*為與溶劑對照組比較P<0.01；為與CCl4模型組比較P<0.05; 為與CCl4模型組比較P<0.01;2.3肝組織中MDA含量的變化的結(jié)果分析結(jié)

29、果顯示：雌性小鼠模型組與空白組相比較，模型組小鼠肝組織中MDA含量非常顯著上升(P <0.01)。模型組與吐溫對照組相比較，模型組小鼠肝組織中MDA含量非常顯著上升(P <0.01)。 陽性組與模型組相比較，陽性組小鼠肝組織中MDA含量顯著下降 (P <0.05)。低中高濃度的EGB與模型組相比較，EGB組小鼠肝組織中MDA含量非常顯著下降 (P <0.01)。雄性小鼠模型組與空白組相比較，模型組小鼠肝組織中MDA含量無顯著差異。模型組與吐溫對照組相比較，模型組小鼠肝組織中MDA含量無顯著差異。 陽性組與空白組相比較，模型組小鼠肝組織中MDA含量無顯著差異。低中高濃度的

30、EGB與模型組相比較，低高濃度的EGB組小鼠肝組織中MDA含量無顯著差異，中濃度EGB組小鼠肝組織中MDA含量顯著下降 (P <0.0)。2.4小鼠肝組織中SOD活力的變化性別組別劑量SOD(U·mg protein-1)雌空白330.57±26.79溶劑0.1%Tween-80298.19±47.63模型213.05±7.85,*陽性藥30 mg·kg-1292.99±50.11GP10 mg·kg-1318.35±60.6340 mg·kg-1329.14±28.77160 mg

31、83;kg-1377.93±36.99雄空白303.94±20.93溶劑0.1%Tween-80291.11±22.50模型272.63±34.92陽性藥30 mg·kg-1318.65±53.09GP10 mg·kg-1321.85±84.0040 mg·kg-1336.68±11.66160 mg·kg-1409.64±25.21EGB對CCl4致急性肝損傷小鼠抗氧化活性的影響(n=5)Effect of GP on antioxidation activity of h

32、epatic tissue in mice with CCl4-induced injuries. (n=5)注：為與空白對照組比較P<0.05；為與空白對照組比較P<0.01；*為與溶劑對照組比較P<0.05；*為與溶劑對照組比較P<0.01；為與CCl4模型組比較P<0.05; 為與CCl4模型組比較P<0.01;2.5肝組織中SOD活力的變化的結(jié)果分析結(jié)果顯示：雌性小鼠模型組與空白組相比較，模型組小鼠肝組織中SOD活性非常顯著降低 (P <0.01)。模型組與吐溫對照組相比較，模型組小鼠肝組織中SOD活性非常顯著降低 (P <0.01)。

33、陽性組與模型組相比較，陽性組小鼠肝組織中SOD活性顯著升高 (P <0.05)。低中高濃度的EGB與模型組相比較，EGB組小鼠肝組織中SOD活性非常顯著升高(P <0.0)。雄性小鼠模型組與空白組相比較，模型組小鼠肝組織中SOD活性無顯著差異。模型組與吐溫對照組相比較，模型組小鼠肝組織中SOD活性無顯著差異。 陽性組與空白組相比較，陽性組小鼠肝組織中SOD活性無顯著差異。低中高濃度的EGB與模型組相比較，低中濃度的EGB組小鼠肝組織中無SOD活性顯著差異，高濃度EGB組小鼠肝組織中SOD活性非常顯著升高(P <0.0)。2.5綜合分析得出結(jié)果聯(lián)苯雙酯陽性藥是一種治療肝炎的降酶

34、藥物，即可減輕因CCL4所致的肝臟損害，對CCL4 所致的肝臟微粒體脂質(zhì)過氧化，CCL4代謝為CO有抑制作用，降低MDA的含量，升高SOD活性。對雌性小鼠來說，低中高濃度的EGB，能非常顯著降低CCl4肝損傷小鼠的MDA的含量，提高CCl4肝損傷小鼠的SOD活性。對雄性小鼠來說，中濃度EGB能顯著降低CCl4肝損傷小鼠的MDA的含量，高濃度EGB非常顯著提高CCl4肝損傷小鼠的SOD活性。說明對雌性小鼠來說，低中高濃度的EGB比聯(lián)苯雙酯陽性藥的效果顯著，具有保護(hù)肝臟的作用。對雄性小鼠來說，中高濃度的EGB比聯(lián)苯雙酯陽性藥的效果顯著，具有保護(hù)肝臟的作用。3討論本實驗得出：對雌性小鼠來說，低中高濃

35、度的EGB比聯(lián)苯雙酯陽性藥的效果顯著，具有保護(hù)肝臟的作用。對雄性小鼠來說，中高濃度的EGB比聯(lián)苯雙酯陽性藥的效果顯著，具有保護(hù)肝臟的作用?？赡蹺GB對雌、雄性小數(shù)的治療效果是一樣的，可能由于某些原因?qū)е虏煌?，需要進(jìn)一步研究。我們發(fā)現(xiàn), EGB的藥理作用銀杏(GinkgobilobaL)是我國特產(chǎn)的古代孑遺植物之一，中醫(yī)藥中常用銀杏種子。近年來，銀杏葉標(biāo)準(zhǔn)提取物在歐洲被用作藥物，在美國被用作食物添加劑而在世界范圍內(nèi)被廣泛應(yīng)用。我國的銀杏葉制劑于二十世紀(jì)七十年代應(yīng)用于臨床， EGB是富含生物類黃酮的植物提取物，有抗氧化和基因調(diào)控作用。銀杏葉中所含化學(xué)成分相當(dāng)復(fù)雜，包括黃酮類、菇類、生物堿、多糖、酚

36、類和氨基酸等。黃酮類和菇類酷是發(fā)揮其獨特藥理活性的有效成分，且是銀杏葉及其中間品和植物藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化的重要依據(jù)，其余70%成分為藥效不明顯或非藥物部分。本實驗所采用的銀杏葉提取物中含總黃酮類物質(zhì)>24%，含菇內(nèi)酷>6%，符合EGB的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。研究發(fā)現(xiàn)，本實驗在CCL4腹腔注射同時給予小鼠按EGB10mg/kg、40mg/kg、160mg/kg灌胃，對CCL4腹腔注射引起的肝損傷有保護(hù)作用，可使肝組織中丙二醛(malondiadehyde，MDA)含量降低，SOD活力升高，且EGB對肝損傷的保護(hù)作用與劑量正相關(guān)。EGB應(yīng)用安全，長期應(yīng)用未見明顯副作用。較單純給予CCL4腹腔注射的小

37、鼠明顯減輕。目前,研究發(fā)現(xiàn)幾乎所有的臨床和實驗性慢性肝病中均發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激存在,且常伴有抗氧化能力降低,如過氧化脂質(zhì)積聚,抗氧化酶活性下降,因此,脂質(zhì)過氧化被認(rèn)為是發(fā)生肝臟炎性損傷的主要原因，而抗氧化劑治療可預(yù)防(減輕) 這種癥狀。本實驗中CCl4誘導(dǎo)的慢性肝損傷小鼠肝組織中SOD活性明顯降低,MDA 含量明顯升高,但銀杏葉提取物( 黃酮類) 預(yù)防組SOD活性明顯升高,MDA 含量明顯降低,說明銀杏葉提取物( 黃酮類)對肝臟的保護(hù)作用可能與其抗氧化性有關(guān)。銀杏葉提取物( 黃酮類)中的主要成分是黃酮甙,其母核中含有還原性羥基功能基團(tuán),捕捉脂質(zhì)過氧自由基、脂氧自由基和烷自由基等,通過對這些自由基起一

38、種氫原子供體的作用而終止自由基連鎖反應(yīng)鏈,從而阻止和抑制氧自由基反應(yīng)和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的病理性加劇,減輕氧自由基和脂質(zhì)過氧化損傷。結(jié)合本文結(jié)果,我們認(rèn)為銀杏葉提取物( 黃酮類)是一個很有前景的保肝藥物,值得進(jìn)一步深入研究開發(fā)。結(jié)論1.小鼠以CCL4腹腔注射1周，肝組織中MDA含量升高，SOD活力下降，同時改善肝功能。2.連續(xù)使用EGB對肝功能和肝臟結(jié)構(gòu)無明顯影響;3.EGB可抑制CCL4腹腔注射所致的細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化，EGB長期應(yīng)用可能提高大鼠肝臟抗氧化功能;參考文獻(xiàn):1徐書云，廣如濂，陳修.藥理實驗方法學(xué).人民衛(wèi)生出版社,2002年1月第三版:1347.2于文濤等. 銀杏葉提取物預(yù)防大鼠酒精性

39、肝損傷的機(jī)制研究.學(xué)術(shù)期刊營養(yǎng)學(xué)報. 2005年2期.3陳梁，朱錦善，任建平. 柴胡疏肝散對四氯化碳所致大鼠急性肝損傷的防治作用.學(xué)術(shù)期刊中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志.2004年1期.4李素婷等.  黃芩莖葉總黃酮對CCL4小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用.學(xué)術(shù)期刊 承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報.2003年4期.5劉彤云等. 雷竹筍汁對四氯化碳致大鼠急性肝損傷的防治作用.學(xué)術(shù)期刊醫(yī)藥導(dǎo)報.2004年2期.  6馮端浩等. 四氯化碳致肝損傷對小鼠血清TNF- IL-6的影響.學(xué)術(shù)期刊解放軍藥學(xué)學(xué)報. 2004年4 期. 7潘京一等. 葛根-紅景天口服液對四氯化碳誘發(fā)急性肝損傷的保護(hù)作用.

40、學(xué)術(shù)期刊上海預(yù)防醫(yī)學(xué).2004年5期. 8L oguercio C , Federico A. Oxidative st ress in vi ral and alcoholic hepatitis J . Free Radic Biol Med , 2003 ,34 (1) :1 - 10.9 Na ghii MR. Sulf ur mustard int oxication , oxidative st ress , and antioxidants J . Mil Med , 2002 ,167 (7) :573 - 575.10盧忠明. 銀杏葉提取物藥理作用的生理基礎(chǔ)及其臨床

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45、Name Du Gailiang Supervisors Liu ChunhuiAbstract Objective: To investigate the Ginkgo biloba extract EGB (flavonoids) on CCl4 liver injury in mice with MDA content and SOD activity were to protect the liver to produce an effective drug. Methods: Kunming mice of clean grade altogether randomly divided into control group, Twain control group, model control group, DDB group, experimental group (low con