實驗四果蠅的形態(tài)和生活史（設(shè)計型實驗）觀察

1、實驗四實驗四 果蠅的形態(tài)和果蠅的形態(tài)和生活史生活史( (設(shè)計型實驗設(shè)計型實驗) )觀察觀察 一、實驗?zāi)康模阂?、實驗?zāi)康模?三、實驗材料：三、實驗材料：四、操作步驟：四、操作步驟：五、結(jié)果分析：五、結(jié)果分析：二、實驗原理：二、實驗原理：一、實驗?zāi)康模阂?、實驗?zāi)康模?. 掌握培養(yǎng)果蠅的基本程序;2. 了解果蠅生活史中各個階段的發(fā)育時間及形態(tài)特征;3. 區(qū)別黑腹果蠅幾種常見突變型的主要性狀 4. 觀察不同果蠅種類的生活史。二、實驗原理：二、實驗原理： 果蠅(Fruit fly)為雙翅目昆蟲,全世界約有4000種左右,其中,黑 蝮 果 蠅 ( D r o s o p h i l a melanogas

2、ter)由于容易飼養(yǎng)、繁殖力強(qiáng)、世代周期短以及眾多的突變性狀,成為遺傳學(xué)研究的極好材料和超級模式生物,為遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展作出了巨大的貢獻(xiàn),推動了人類基因結(jié)構(gòu)和功能的研究。果蠅的優(yōu)點：形體小，生長迅速，繁殖率高，飼養(yǎng)方便，世代周期短（12天可繁殖一代），突變性狀多，染色體數(shù)目少，基因組小，實驗處理方便，容易重復(fù)實驗，便于觀察和分析。三、實驗材料：三、實驗材料：解剖鏡 培養(yǎng)瓶 粘貼標(biāo)簽 麻醉瓶 裝有乙醚的滴瓶 滴管 解劑針或毛刷 70%的酒精 麻醉皿（鋪有吸水紙的玻璃皿） 黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)野生型(紅眼、灰身、長翅、直剛毛); 未知果蠅1; 未知果蠅

3、2; 未知果蠅3;未知果蠅4 四、操作步驟：四、操作步驟：I. 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制: 目前，已經(jīng)發(fā)展了多種果蠅的培養(yǎng)基?？赡苁褂米詈唵畏奖愕氖恰翱焖倥囵B(yǎng)基”只需加水就可以配成可使用的培養(yǎng)基，不需加熱，不過，一些工作者建議加5滴5%的丙酸以防霉菌，盡管方便，但大量使用時會顯得非常昂貴。 Demerec 和 kanfmann的果蠅指南有一些不同的培養(yǎng)基配方，另一個有用的培養(yǎng)基要?dú)w功于加利福利亞技術(shù)研究所的C.B .Bridges ,它的配料如下:20g瓊脂 200g玉米粉145ml 蔗糖汁 (Karo Syrup)或紅糖145ml糖密(Brer Rabbit Molasses )2400ml

4、 蒸餾水4.5g Dowicil-200溶于15ml蒸餾水四、操作步驟：四、操作步驟：方案方案1 首先加熱溶解瓊脂于1000ml蒸餾水中，然后再加入1000ml蒸餾水。小心地將混合液加熱到沸騰。在加玉米粉之前，先將玉米粉溶于400ml未加熱的蒸餾水中（這樣做可以防止玉米粉在熱的瓊脂懸液中形成團(tuán)塊）。加玉米糊到混合液中，攪拌阻止培養(yǎng)基凝結(jié)，然后加入蔗糖汁和糖密，加熱15分鐘，融解Dowicil-200GF 15ml蒸餾水中，然后將其加入到主混合液中攪拌均勻。不要讓玉米粉沉淀。 將培養(yǎng)基倒入于凈的玻璃瓶。這些瓶子可以是各種型號的,但以4盎司的廣口瓶和半磅的牛奶瓶為佳。將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到大燒杯中，這樣便

5、于倒液。每支瓶子大約盛裝1英寸深的培養(yǎng)基。注意不要讓培養(yǎng)基貼著瓶頸流入。 四、操作步驟：四、操作步驟： 在培養(yǎng)基中插入消毒過的吸水紙，使用的紙大約1英寸寬，插入后確保低于瓶頸0.5英寸。這為幼蟲化蛹提供了一個干燥的場所。用紗布包裹的棉花作瓶塞，也可以用泡沫塑料作瓶塞 。 瓶子塞好后，在高壓滅菌鍋中20鎊壓力消毒20分鐘。其它處理果蠅的用品也可同時消毒。 加熱后冷卻時，水蒸汽會在瓶內(nèi)冷凝。為了使水分蒸發(fā)，應(yīng)將試劑瓶置放在通風(fēng)良好的房間48小時。在放入果蠅前，應(yīng)先加入少量干燥的酵母菌，這種酵母會成長作為果蠅幼蟲的食物。四、操作步驟：四、操作步驟：方案方案2 先將苯甲酸溶入5ml 95% 酒精中溶解

6、備用,同時取適量水將玉米粉調(diào)成糊狀放置; 將瓊脂放入總量1/4水中加熱溶解于60保溫,再將余下的水倒入玉米糊中加熱煮熟,加入紅糖煮透倒入瓊脂溶液充分混合,去火,蓋上蓋悶10min,待培養(yǎng)基冷卻至60時如入苯甲酸,倒入培養(yǎng)瓶(培養(yǎng)瓶事先在120干熱滅菌1h)蓋上瓶塞,放置一天后使用。 四、操作步驟：四、操作步驟：. 黑腹果蠅的發(fā)育及生活史觀察黑腹果蠅的發(fā)育及生活史觀察 果蠅的卵產(chǎn)在培養(yǎng)基的表面或附近管壁上，孵化一天后，產(chǎn)生微小的白色幼蟲，它們以酵母細(xì)胞為食。幼蟲要7天的時間長大。然后它們爬到瓶壁上或吸水紙上化蛹。蛹化3天后，成蟲出現(xiàn)。在25,整個生活周期的完成約需10天(圖3.1)四、操作步驟：

7、四、操作步驟：生活周期四、操作步驟：四、操作步驟：. 果蠅處理果蠅處理 1.滴幾滴乙醚在麻醉瓶內(nèi)的吸水紙上。 2.輕搖培養(yǎng)瓶這樣果蠅會掉在瓶底。 3.移走培養(yǎng)瓶的瓶塞，迅速對準(zhǔn)麻醉瓶瓶口，將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)，使果蠅進(jìn)入麻醉瓶。 4.在它們停止移動后再麻醉30秒。如果要進(jìn)行進(jìn)一步的雜交實驗，注意不要過度麻醉。如果在麻醉瓶里停留的時間過長，則果蠅會死亡。過度麻醉的果蠅翅膀外展45 5.將果蠅移到干凈的瓷板上觀察，35英寸的瓷板是最好的。四、操作步驟四、操作步驟： 6.在1025的解剖鏡下觀測麻醉的果蠅，使用軟刷或解剖針去除解剖臺周圍的果蠅。 7.如果實驗沒有完成，而果蠅復(fù)活了，可以滴幾滴乙醚于玻璃皿里的

8、濾紙上，覆蓋在解剖臺上果蠅上，幾秒鐘后移開。 8.如果不需要進(jìn)一步觀察，可以丟棄在廢料瓶里。麻醉的果蠅若要用于進(jìn)一步雜交，則須放在干凈的小燒杯或干燥的培養(yǎng)皿中以待恢復(fù)。四、操作步驟：四、操作步驟：. 性別鑒定性別鑒定 在放大鏡下觀察果蠅的外生殖特征是區(qū)分果蠅性別的最好方式。只有雄性果蠅第一對腳的跗節(jié)前端表面有黑色鬃毛流蘇。由圖3.2，3.3, 3.4展示的以下特征，也可用于雌雄鑒別。 1. 大?。捍菩酝ǔ€頭大一些 2. 形狀：雄性果蠅末端鈍圓，而雌性尖而突出。雄性果蠅的腹部是相當(dāng)窄的圓筒。而雌性果蠅則顯得膨脹，看上去是卵圓形的。剛化蛹而出的成蠅細(xì)而長，性別特征并不明顯。 3. 顏色：雄性果蠅

9、尾部著色較雌性的要深得多。在雄性果蠅腹部整個腹節(jié)都是深黑色的，而雌性果蠅只有尖部是黑色的。 4.性梳：只有雄性果蠅第一對腳的跗節(jié)表面有一小綹黑色流蘇，稱為性梳。 雌蠅雄蠅體形較大體形較小腹部橢圓型末端稍尖腹部末端鈍圓腹部背面5條黑紋腹部背面3條黑紋，最后一條延伸至腹面成一黑斑無性梳第一對足第一跗節(jié)有性梳四、操作步驟：四、操作步驟：. 性別鑒定性別鑒定四、操作步驟：四、操作步驟：圖3.2 黑腹果蠅的雌雄成體, :雄性果蠅(左)通常小于雌性果蠅(右)。雄性果蠅末端鈍圓且著色深。在雄性果蠅放大的前腿上，可以看到性梳，這是雌性果蠅所沒有的。四、操作步驟：四、操作步驟：圖3.3雄果蠅左前腿,左、中: 示

10、基節(jié)基部的性梳,右:雌性無性梳,TA:跗節(jié)圖3.4 果蠅腹面觀, 左: 雄性,可見外生殖器處由左右生殖弓構(gòu)成的抱雌器; 右: 雌性的外生殖比較簡單。成體果蠅成體果蠅雌雄性別(2)成體果蠅雌雄性別的辨別四、操作步驟：四、操作步驟：. 野生型與突變型的基因標(biāo)記方法野生型與突變型的基因標(biāo)記方法: 這里談到的方案，對于研究果蠅是必不可少的。各種品系含有的突變基因必須是在實驗室經(jīng)過鑒定了的，這些果蠅的特征能夠真實遺傳即產(chǎn)生的后代在外貌上與父母是相一致的。當(dāng)然，新的遺傳變異自發(fā)突變確實發(fā)生。果蠅有一些易辨別的區(qū)別是十分有用的，那些用來鑒定區(qū)分果蠅攜帶的突變基因的名稱、標(biāo)記是研究人員想出來的，并形成了規(guī)范,

11、通過一些表示某一基因的符號來確定果蠅的品系特征給研究工作帶來極大方便，表型正常的果蠅稱為野生型，+號通常表示野生型帶有某一基因，小寫字母通常表示突變的等位基因，一個大寫字母通常表示顯性基因。例如,標(biāo)記e代表黑檀體隱性基因,而e+(+e或E)代表它的野生型灰體的顯性基因。身體為灰色，是野生型，B是控制棒眼的顯性突變基因，而B+ (+B 或b)則表示野生型的隱性等位基因，黑檀體果蠅的純合體用ee表示，而野生型純合體則表示為e+e+。四、操作步驟：四、操作步驟：一些常見的突變性狀：眼色突變四、操作步驟：四、操作步驟：一些常見的突變性狀：眼色突變四、操作步驟：四、操作步驟：一些常見的突變性狀： 眼形突變一些常見的突變性狀：翅形突變黑身(上)黃體(下)勺翅及平衡棒(下圖)缺刻翅(右圖)四、操作步驟：四、操作步驟：一些常見的突變性狀：小翅、殘翅四、操作步驟：四、操作步驟：五、結(jié)果分析：五、結(jié)果分析：1. 觀察并記錄野生果蠅的特征，按遺傳學(xué)規(guī)范對每一特征做遺傳標(biāo)記,在合適的地方寫上加號，表示正常性狀的特征。然后仔細(xì)觀察所給的幾種未知品系，記錄下他們的特征