通冠膠囊對急性心肌梗塞大鼠心室重構的影響

1、通冠膠囊對急性心肌梗塞大鼠心室重構的影響                      作者：陳伯鈞 蘇學旭 孟麗琴 高彥利 曾靖 李然 鄭佩芝 陳惠敏 【摘要】  目的探討通冠膠囊對急性心肌梗塞（AMI）大鼠心室重構的作用。方法結扎大鼠心臟左前降支（LAD）建立急性心肌梗塞模型，隨機分為假手術組(n6)、AMI對照組(n=8)、AMI卡托普利組(n=7)、AMI通冠膠囊

2、組(n=7)?？ㄍ衅绽M予卡托普利灌胃，通冠膠囊組予通冠膠囊溶劑灌胃，余2組均予等量生理鹽水，各組每周稱體重后調整劑量，灌藥持續(xù)4周。檢測體重、左心室重量、心臟重量、左室重量指數(shù)（左心室重/體重）、心臟重量指數(shù)（心臟重/體重）、血漿醛固酮（ALD）、心肌血管緊張素II（A-II）、心肌組織膠原等指標。結果結扎大鼠LAD對大鼠體重和心臟重量有一定影響，且對心臟重量影響更大，而服用卡托普利或通冠膠囊能夠減少這種影響，兩組之間影響力無統(tǒng)計學差異；結扎大鼠LAD能夠顯著升高心肌局部A-II和血漿ALD水平，卡托普利組和通冠組能明顯降低這兩項指標，且對于A-II，通冠膠囊組較卡托普利組降低更明顯，ALD

3、則在兩組之間無統(tǒng)計差異；通冠膠囊和卡托普利都可使梗塞區(qū)心肌細胞體積變小，心肌纖維排列整齊，膠原增生減少，但通冠膠囊作用較卡托普利更明顯。結論通冠膠囊能顯著改善大鼠心肌梗塞后心臟結構，減輕心臟擴大，降低心肌局部A- 、血漿ALD水平，抑制膠原增生并改善、膠原含量，從而提示其具有不依賴于卡托普利的獨立的改善心肌梗塞后心室重構的作用。 【關鍵詞】  通冠膠囊 心肌梗塞 心室重構 卡托普利 血管緊張素急性心肌梗塞（acute myocardial infarction AMI）是一種嚴重威脅人類健康和生命的疾病，心肌梗塞后心室重構可導致心律失常、心功能不全、室壁瘤或心臟破裂等后果，嚴重影響患

4、者的生活質量和生存率。因此，減緩或逆轉心室重構是防治心肌梗塞后嚴重并發(fā)癥的關鍵。目前中醫(yī)藥對心肌梗塞后左室重構的研究較少，本研究旨在探討通冠膠囊（主要成分為黃芪、丹參等，具有益氣、活血、寬胸、通絡之功效）對大鼠心肌梗塞后左室重構的影響。1  材料與方法1.1  動物  健康清潔級SD大鼠40只（雄性，體重150180 g）,由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供（合格證號0011122）。1.2  設備及儀器  多導聯(lián)生理記錄儀HOGO SACHS ELEKTRONIK 79232 March F.R. Germany，TKR-200C小動物呼吸機（

5、江西特力麻醉呼吸設備公司），天平（德國賽多利斯公司），SN-695B型放免測量儀（上海原子核所日環(huán)儀器廠）。1.3  試劑  ALD、A-試劑盒（批號070225，北京科關東雅生物技術有限公司），通冠膠囊（36粒/瓶，每粒0.5g，批號06092602,生產日期2006²09²26，廣州中醫(yī)藥大學第二附屬院內制劑），卡托普利（開搏通，上海施貴寶制藥有限公司），PBS溶液（NaCl 42.5 g，NaH2PO4·2H2O 1.5 g,Na2HPO4 14.5 g，三蒸水2 000 ml，使用前高壓消毒）。1.4  動物分組 

6、SD大鼠40只, AMI模型通過結扎大鼠左前降支(LAD)獲得，存活28只，隨機分為假手術組(n6)、AMI對照組(n=8)、AMI卡托普利組(n=7)、AMI通冠膠囊組(n=7)。卡托普利組予灌卡托普利（0.5 mg/100 g），通冠膠囊組灌予通冠膠囊溶劑（1 g/100 mg），余兩組均灌等量生理鹽水，各組每周稱體重后調整劑量，灌藥持續(xù)4周。1.5  模型制備  采用結扎大鼠冠脈LAD制備AMI模型。腹腔內注射10%水合氯醛（0.30.35 mg/ 100 g）實施麻醉，左胸前備皮3.5 cm×3.5 cm，暴露皮膚，安樂碘消毒2次。標準導聯(lián)方式皮下連接體表

7、心電圖，行術前心電圖檢查并記錄。連接呼吸機，行經(jīng)口氣管插管，調節(jié)呼吸機參數(shù)，頻率為90次/min，保證有效通氣量為1.0 ml/(g·min)。左胸前3、4肋間隙依次剪破皮膚、胸膜，分離胸大肌、胸小肌，避免損傷內乳動脈和肺臟，暴露心臟，上推胸腺，剪開心包。觀察冠脈分布，于左心耳肺動脈圓錐左緣處粉紅色動脈下12 mm處，用無創(chuàng)縫合針引80縫合線穿過，并結扎第1道線，觀察結扎環(huán)下心肌顏色變?yōu)樯n白，心電圖示ST段抬高表示成功，再結扎第2道線。迅速清理胸腔內淤血，鼓肺，層層縫合胸膜、胸肌、皮膚。術中密切觀察大鼠生命體征，術后注意暖箱保暖。假手術組不結扎冠脈，余同上述操作。1.6 

8、檢測指標   體重、左心室重量、心臟重量、左室重量指數(shù)（左心室重/體重）、心臟重量指數(shù)（心臟重/體重）、血漿醛固酮（ALD）、心肌血管緊張素II（A-），心肌組織膠原。1.7  檢測標本的采集  將各組大鼠麻醉后，稱重，常規(guī)消毒，然后沿腹正中線剪開腹腔，腹主動脈取血2 ml置肝素管中，離心取血漿2 ml，于20冰箱保存，待測血漿醛固酮（ALD）；隨即取出心臟先用濾紙將心臟拭干，用電子天平稱取心臟重量，然后將左心室分離，稱取其重量，沿左心室冠狀面直徑最大處剪取2 mm厚度心?。üＨ麉^(qū)）置于10甲醛固定、保存待查心肌膠原含量，將剩余心肌去除左右心耳并大血管后

9、稱重，剪碎，與PBS液一起置于研磨器中，在低溫環(huán)境下研磨，將研磨液置于離心管中，在4環(huán)境下，10 000 r/min離心，取上清液1.5 ml于EP管中低溫（20）保存，待測心肌局部血管緊張素（A-）。1.8  統(tǒng)計學處理   所有計量資料均采用t檢驗，均由SPSS13.0軟件包處理，以P<0.05表示有顯著統(tǒng)計意義。2  結果2.1  4周后AMI大鼠心臟重量、左心室重量、心臟重量指數(shù)、左心室重量指數(shù)的變化  4周后AMI對照組、卡托普利組和通冠膠囊組大鼠體重均較假手術組減輕(P<0.01)；卡托普利組和通冠膠囊組體重分

10、別與AMI對照組比較，均重于后者，兩組均有顯著統(tǒng)計意義(P<0.01)；卡托普利組和通冠膠囊組比較無統(tǒng)計意義(P>0.05)。心臟重量、左心室重量、心臟重量指數(shù)和左心室重量指數(shù)等各項指標，AMI對照組、卡托普利組和通冠膠囊組均高于假手術組，比較有顯著統(tǒng)計意義(P<0.01)；其中，卡托普利組和通冠膠囊組分別與AMI對照組比較，卡托普利組和通冠膠囊組均低于后者(P<0.01)；卡托普利組和通冠膠囊組比較，無統(tǒng)計意義(P>0.05)。提示結扎大鼠LAD對大鼠體重和心臟重量有一定影響，且對心臟重量影響更大；而服用卡托普利或通冠膠囊能夠減少這種影響，兩組之間影響力無統(tǒng)計差

11、異。見表1。表1  4周后大鼠體重、心臟重量指數(shù)、左心室重量指數(shù)的變化（略）與假手術組比較，*P<0.01；與AMI對照組比較，#P<0.01；與卡托普利組比較，P0.012.2  心肌局部血管緊張素(A-)、血漿醛固酮(ALD)的變化4周后檢測大鼠A-II、ALD，對照組、卡托普利組和通冠膠囊組與假手術組比較有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)；卡托普利組和通冠組分別與對照組比較，兩組均有顯著統(tǒng)計意義(P<0.01)；通冠組與卡托普利組A-II含量比較有顯著統(tǒng)計意義(P<0.01)；通冠組與卡托普利組ALD含量比較，無統(tǒng)計意義(P>0.05

12、)。提示結扎大鼠LAD能夠顯著升高心肌局部A-II和血漿ALD水平，卡托普利組和通冠組能明顯降低這兩項指標，通冠膠囊組降低A-II的作用較卡托普利組更明顯，ALD則在兩組之間無統(tǒng)計差異。見表2。1         表2  4周后大鼠A-II、ALD變化（略）與假手術組比較，*P0.01；與AMI對照組比較，#P0.01，與卡托普利組比較，P0.012.3  心肌膠原的表達  心肌VG、HE染色圖片見圖18。圖1  假手術組4周后大鼠心肌VG染色（略）  &

13、#160;    圖2  假手術組4周后大鼠心肌HE染色（略）圖3  對照組4周后大鼠心肌VG染色（略）       圖4  對照組4周后大鼠心肌HE染色（略）圖5  卡托普利組4周后大鼠心肌VG染色（略）       圖6  卡托普利組4周后大鼠心肌HE染色（略）圖7  通冠膠囊組4周后大鼠心肌VG染色（略）    

14、   圖8  通冠膠囊組4周后大鼠心肌HE染色（略）    圖12顯示心肌細胞排列整齊，未見炎性細胞浸潤，未見明顯膠原增生；由圖34可見梗塞區(qū)心肌細胞壞死，為廣泛膠原纖維所代替，非梗塞區(qū)心肌細胞肥大，排列紊亂，間質膠原增生；由圖56可見，與AMI對照組比較，心肌細胞體積減小，心肌纖維排列相對整齊，膠原有所減輕；由圖78可見，與AMI對照組比較，心肌細胞體積變小，心肌纖維排列相對整齊，膠原有所減輕。與卡托普利組比較，心肌細胞排列略見紊亂。3  討論    急性心肌梗塞后心室重構指心肌梗塞

15、后心室大小、結構、形態(tài)以及心臟功能的變化過程，主要包括心肌梗塞區(qū)膨出、非梗塞區(qū)心肌肥大、室壁增厚、心肌間質纖維化，最終導致整個心室進行性擴張、失去正常的心腔形態(tài)、心臟收縮功能減低。    心室重構的發(fā)生原因目前研究較多的是腎素血管緊張素系統(tǒng) (renin angiotensin system，RAS)。在心肌梗塞后RASS激活，出現(xiàn)血管緊張素轉換酶、血管緊張素原mRNA和血管緊張素受體的上調，血管緊張素(A-)能通過多種機制導致心室重構，包括促進心肌細胞蛋白合成、心肌成纖維細胞中DNA合成及細胞凋亡。醛固酮具有不依賴A-的獨立作用，特別是在心肌和血管重塑功能方面1

16、，心肌細胞、心臟成纖維細胞、內皮細胞具有高親和力的醛固酮受體，醛固酮與之結合后促進心臟細胞的I型和型膠原基因表達，使膠原合成增加，對心肌小節(jié)的數(shù)量排列及心肌細胞直徑大小等產生影響，心肌間質和部分血管周圍膠原聚集，促進心肌間質纖維化，造成心室重塑和動脈內膜、中膜組織增厚、平滑肌纖維增生2。大量研究發(fā)現(xiàn)炎癥與AMI后心室重構有關，且抗炎可以減輕心室重構3。心室重構還與梗塞部位、室壁應力和血液供需比相關，也有研究表明，細胞凋亡致心肌的丟失可能對進行性左室擴張和心肌細胞的肥大有作用。    本研究之所以選卡托普利作為對照組，是因為近年來幾個大規(guī)模、多中心、雙盲對照的臨床研

17、究如SAVE試驗、AIRE試驗、TRACE試驗等都證實ACEI能緩解和消除心衰癥狀，改善血液動力學與左室功能，提高運動耐量，改善生活質量，減緩和逆轉心室重塑，從而減少心衰發(fā)病率和病死率，目前卡托普利已成為臨床公認且有效的防治心室重構的藥物。    本研究證實通冠膠囊與卡托普利對急性心梗大鼠體重和心臟重量有一定影響，且對心臟重量影響更大，兩組之間影響力無統(tǒng)計差異，二者能顯著降低AMI大鼠心肌局部A-II和血漿ALD水平，通冠膠囊組對A-II的降低作用較卡托普利組更明顯，對ALD的影響兩組之間無統(tǒng)計差異，通冠膠囊和卡托普利都可使梗塞區(qū)心肌細胞體積變小，心肌纖維排列整齊

18、，膠原增生減少，但通冠膠囊作用較卡托普利更明顯。表明通冠膠囊能顯著改善大鼠心肌梗塞后心臟結構，減輕心臟擴大，降低心肌局部A-、血漿ALD水平，抑制膠原增生并改善、型膠原含量，從而提示其具有不依賴于卡托普利的獨立的改善心肌梗塞后心室重構的作用。    急性心肌梗塞屬中醫(yī)的“真心痛”范疇，其根本病機就是“本虛標實”。本虛中以氣虛為基礎，標實則以血瘀多見。通冠膠囊是我院自行研制的中成藥，由黃芪、丹參等藥物組成，具有益氣、活血、寬胸、通絡的功效，曾治宇等4通過實驗證實黃芪可以降低大鼠心肌梗塞后血漿和心臟血管緊張素及血漿醛固酮的濃度并降低非梗塞區(qū)左室心肌型及型膠原的比值。藥理研究顯示丹參可以使自發(fā)性高血壓大鼠的左心室質量指數(shù)、心肌細胞的直徑和面積以及心肌組織膠原比例、血管周圍膠原面積和管腔面積比例顯著降低5，同時也可降低心室、型膠原6，逆轉由A-引起的心臟成纖維細胞的增殖和、型膠原基因的表達水平7，從而逆轉心室重構的發(fā)生。陳伯鈞等8通過臨床觀察，發(fā)現(xiàn)通冠膠囊可有效地降低LVEDVI 和LVESVI，升高E/A和LVEF，從而抑制AMI后舒張末內徑的擴大，改善心室局部運動障礙和整體左室功能的作用?！尽?#160; 1 顧復生.醛固酮對心力衰竭的有害作用與醛固酮(受體)拮抗劑J.循環(huán)雜志，2002，17（4）：264.2 Weber KT，Bri