第34講　微生物的培養(yǎng)和利用

1、.生物技術(shù)理論第34講微生物的培養(yǎng)和利用考試說(shuō)明 1.微生物的別離和培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)與探究才能。2.某種微生物數(shù)量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)與探究才能。3.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用實(shí)驗(yàn)與探究才能。4.微生物在其他方面的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)與探究才能。考點(diǎn)一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 1.培養(yǎng)基1概念:人們按照微生物對(duì)的不同需求,配制出供其生長(zhǎng)繁殖的。2營(yíng)養(yǎng)成分:水、無(wú)機(jī)鹽四類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及的要求。3類型:培養(yǎng)基含凝固劑,培養(yǎng)基不含凝固劑。 2.無(wú)菌技術(shù)1目的:獲得。2關(guān)鍵:防止的入侵。3無(wú)菌技術(shù)的主要方法及適用對(duì)象連線 措施 操作對(duì)象 主要方法ya消毒b.滅菌.培養(yǎng)基.接種環(huán).操作者雙手.培養(yǎng)皿.

2、無(wú)菌室.牛奶灼燒滅菌干熱滅菌巴氏消毒紫外線消毒化學(xué)消毒高壓蒸汽滅菌 3.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1步驟:計(jì)算溶化倒平板。2倒平板的過(guò)程在火焰旁右手拿錐形瓶,左手。右手拿錐形瓶,使錐形瓶的瓶口迅速通過(guò)。左手將培養(yǎng)皿翻開(kāi)一條縫隙,右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上。待平板冷卻凝固后,將平板放置,使皿蓋在下、皿底在上。 4.純化大腸桿菌1原理:在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成細(xì)胞,使其長(zhǎng)成單個(gè)的菌落,這個(gè)菌落就是純化的細(xì)菌菌落。圖11-34-12平板劃線法圖11-34-1中:通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基外表的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的外表。3稀釋涂布平板法圖11-34-1中:將菌液進(jìn)展一

3、系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到的外表,進(jìn)展培養(yǎng)。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時(shí),即可獲得單個(gè)細(xì)菌形成的。 5.菌種的保藏1對(duì)于頻繁使用的菌種,可以采用法。2對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種,可以采用法。 1.消毒和滅菌的區(qū)別條件結(jié)果消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體外表或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物不包括芽孢和孢子滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子 2.兩種純化細(xì)菌的方法的比較比較工程平板劃線法稀釋涂布平板法關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基外表連續(xù)劃線一系列的梯度稀釋涂布平板操作優(yōu)點(diǎn)可以根據(jù)菌落的特點(diǎn)獲得某種微生物的單細(xì)胞菌落既可以獲得單細(xì)胞菌落,又能對(duì)微生物計(jì)數(shù)缺點(diǎn)不能

4、對(duì)微生物計(jì)數(shù)操作復(fù)雜,需要涂布多個(gè)平板適用范圍適用于好氧菌適用于厭氧菌和兼性厭氧菌 3.平板劃線操作3個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)1灼燒接種環(huán)之后,要冷卻后再進(jìn)展接種,以免溫度太高殺死菌種。2劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。3劃線用力要大小適當(dāng),防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。1.2019廣東韶關(guān)一模 為了調(diào)查北江河中細(xì)菌的污染情況,某研究性學(xué)習(xí)小組同學(xué)進(jìn)展了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計(jì)數(shù)。請(qǐng)答復(fù)與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問(wèn)題。1實(shí)驗(yàn)中制備的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的部分成分列表如下:成分牛肉膏蛋白胨NaCl蒸餾水含量0.5 g1 g0.5 g100 mL表中各成分含量的比例確定的原那么是。2對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)展滅

5、菌,通常采用的方法是。為了使培養(yǎng)基到達(dá)良好的滅菌效果,一般在壓力為100 kPa,溫度為的條件下,維持1530 min。3為了更好地對(duì)細(xì)菌計(jì)數(shù),一般采用的接種方法是,該方法的操作是將菌液進(jìn)展一系列的,然后再分別到瓊脂固體培養(yǎng)基的外表。4接種后放在恒溫箱培養(yǎng)一段時(shí)間后,為保證結(jié)果準(zhǔn)確,選擇菌落數(shù)在的平板進(jìn)展計(jì)數(shù)。該組同學(xué)在菌落計(jì)數(shù)時(shí)發(fā)現(xiàn),統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比實(shí)際數(shù)目要低,可能的原因是。2.2019福建漳州三模 如圖11-34-2為微生物的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)和純化醋酸菌的部分操作步驟。請(qǐng)答復(fù)以下問(wèn)題:圖11-34-21是制備培養(yǎng)基時(shí)中的主要操作,該操作需使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰,目的是通過(guò),防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)

6、基。2該純化醋酸菌的接種方法是。完成步驟的操作,接種共需要次灼燒處理。3純化的醋酸菌菌種將頻繁用于果醋消費(fèi),那么可以采用的方法保存菌種,但這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng),原因是。4將醋酸菌參加果酒中,乙醇可為醋酸菌的生命活動(dòng)提供,將溫度控制在,可以獲得較多果醋?？键c(diǎn)二土壤中分解尿素的細(xì)菌的別離與計(jì)數(shù) 1.挑選菌株1自然界中目的菌株挑選的根據(jù):根據(jù)它對(duì)的要求,到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。2實(shí)驗(yàn)室中微生物挑選的原理:人為提供有利于生長(zhǎng)的條件包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等,同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。3選擇培養(yǎng)基:允許特定種類的微生物生長(zhǎng),同時(shí)和其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。 2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目1常用方法:法。2統(tǒng)計(jì)根據(jù):

7、當(dāng)樣品的足夠高時(shí),培養(yǎng)基外表生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。3其他方法:還可利用計(jì)數(shù)。 3.設(shè)置對(duì)照設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,進(jìn)步實(shí)驗(yàn)結(jié)果的,例如為了排除培養(yǎng)基被雜菌污染的可能性,需以培養(yǎng)基培養(yǎng)作為空白對(duì)照。 4.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)工程內(nèi)容實(shí)驗(yàn)原理1能合成的細(xì)菌才能分解尿素2配制以為唯一氮源的培養(yǎng)基,可以生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣富含配制土壤溶液和制備培養(yǎng)基涂布平板與培養(yǎng)菌落鑒定1方法:在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中參加指示劑培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌2原理:細(xì)菌分解尿素的反響中,細(xì)菌合成脲酶將尿素分解

8、成了,其會(huì)使培養(yǎng)基中的增強(qiáng),pH升高 1.選擇培養(yǎng)基的作用原理1在培養(yǎng)基中參加某種化學(xué)物質(zhì),如參加青霉素可以別離出酵母菌和霉菌;參加高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。這里的參加是在滿足根本所需培養(yǎng)成分的根底上參加。2改變培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分,如缺乏氮源時(shí)可以別離出固氮微生物;以石油作為唯一碳源時(shí),可以別離出能消除石油污染的微生物。3改變微生物的培養(yǎng)條件,如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物。4通過(guò)某些特殊環(huán)境別離微生物,如在高鹽環(huán)境中可別離出耐鹽菌;在高溫環(huán)境中可別離得到耐高溫的微生物。 2.培養(yǎng)基的種類與應(yīng)用分類根據(jù)種類特點(diǎn)應(yīng)用物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)消費(fèi)半固體培養(yǎng)基加

9、凝固劑少觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、微生物的別離、鑒定固體培養(yǎng)基加凝固劑多微生物的別離、鑒定,活菌計(jì)數(shù)、保藏化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)工業(yè)消費(fèi)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成清楚確或用一定化學(xué)物質(zhì)配制分類、鑒定用處選擇培養(yǎng)基添加某物質(zhì),抑制雜菌生長(zhǎng),促進(jìn)所需微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)別離出特定微生物鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn),在培養(yǎng)基中參加某種指示劑鑒別微生物3.兩種計(jì)數(shù)方法的比較比較工程間接計(jì)數(shù)法稀釋涂布平板法直接計(jì)數(shù)法顯微計(jì)數(shù)法原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基外表生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌,通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微

10、鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量公式每克樣品中的菌落數(shù):CVM。C:某稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù);V:涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積mL;M:稀釋倍數(shù)每毫升原液所含細(xì)菌數(shù):每小格平均細(xì)菌數(shù)40010 000稀釋倍數(shù)缺點(diǎn)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落不能區(qū)分細(xì)胞死活結(jié)果比實(shí)際值偏小比實(shí)際值偏大【題組訓(xùn)練】1.2019南昌一模 下表為某微生物培養(yǎng)基的配方,請(qǐng)答復(fù)相關(guān)問(wèn)題:成分含量成分含量Na2HPO43 g尿素1.0 gK2HPO41 gC6H12O630 gMgSO47H2O0.5 g瓊脂15 gFeSO40.01 gH2O1000 mLNH4NO30.3 g1按物

11、理性質(zhì)劃分,該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基,無(wú)論配制何種培養(yǎng)基,在原料稱量、溶化之后都要先,然后分裝、包扎并滅菌,常用的滅菌方法是。2根據(jù)培養(yǎng)基的成分判斷,該培養(yǎng)基能否用于別離土壤中分解尿素的細(xì)菌?,原因是。3為檢測(cè)尿素分解菌是否存在,還應(yīng)參加,假如存在,將出現(xiàn)反響。4微生物常用的接種方法有。2.某研究小組從牛的瘤胃中采集樣本,進(jìn)展分解尿素的微生物的別離與計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)根本步驟如圖11-34-3所示。配制培養(yǎng)基滅菌、倒平板接種培養(yǎng)觀察、統(tǒng)計(jì)圖11-34-31分解尿素的微生物含有,因此,配制培養(yǎng)基時(shí)以尿素作為唯一氮源,尿素會(huì)被分解成,使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)。2配制培養(yǎng)基時(shí),需添加瓊脂,瓊脂起的作用;培養(yǎng)基中添加作為

12、指示劑,可使目的菌落的周?chē)a(chǎn)生紅色環(huán)帶。3對(duì)尿素溶液進(jìn)展滅菌的最適方法是滅菌。A.高壓蒸汽B.干熱C.添加抗生素D.過(guò)濾E.紫外線照射F.70%酒精浸泡4該小組在接種前,隨機(jī)取假設(shè)干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間,這樣做的目的是;然后將1 mL瘤胃樣液稀釋1000倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液;經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)平板的菌落數(shù)分別為49、47和45。據(jù)此可得出每升瘤胃樣液中分解尿素的微生物活菌數(shù)為個(gè),理論上,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往填“低“等或“高于接種的實(shí)際活菌數(shù)目。易錯(cuò)點(diǎn)撥“選擇菌落數(shù)在30300的平板的提醒1只得到1個(gè)菌落數(shù)在30300的平板是錯(cuò)誤的,原因是不符合實(shí)驗(yàn)的重復(fù)

13、原那么,易受到偶爾因素的影響。2得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)在30300的平板,也不一定正確,原因是假如不同平板間差異較大,如得到3個(gè)平板,菌落數(shù)分別為230、34、240,雖然菌落數(shù)均在“30300,但由于34與另外兩個(gè)平板差異較大,應(yīng)找出原因并重新實(shí)驗(yàn)?？键c(diǎn)三分解纖維素的微生物的別離 1.纖維素酶1纖維素酶是一種復(fù)合酶,一般認(rèn)為它至少包括、和三種組分。2作用:纖維素。 2.纖維素分解菌的挑選1方法:法。纖維素分解菌2原理:剛果紅纖維素紅色消失,出現(xiàn)。3培養(yǎng)基:以為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。4實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣:富含的環(huán)境選擇培養(yǎng):用培養(yǎng),以增加纖維素分解菌的濃度 :制備系列稀釋液涂布平板:將樣品涂布

14、到的培養(yǎng)基上 挑選產(chǎn)生的菌落 1.別離纖維素分解菌所用的兩種培養(yǎng)基比較別離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)中先用選擇培養(yǎng)基,再用鑒別培養(yǎng)基。1選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基,以纖維素為碳源和能源的微生物可以正常生長(zhǎng),而其他絕大多數(shù)微生物不能正常生長(zhǎng);因培養(yǎng)基中無(wú)凝固劑,故其為液體培養(yǎng)基,利用液體培養(yǎng)基能使?fàn)I養(yǎng)成分被充分消耗,以增加纖維素分解菌的濃度。2鑒別培養(yǎng)基含瓊脂,為固體培養(yǎng)基,細(xì)菌可在培養(yǎng)基上形成肉眼可見(jiàn)的菌落。剛果紅染色法應(yīng)用的就是鑒別培養(yǎng)基。 2.挑選微生物的兩個(gè)實(shí)例比較比較工程土壤中分解尿素的細(xì)菌的別離分解纖維素的微生物的別離方法利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)展選擇培養(yǎng)利用以纖維素為唯一碳源的選擇培

15、養(yǎng)基進(jìn)展選擇培養(yǎng)續(xù)表比較工程土壤中分解尿素的細(xì)菌的別離分解纖維素的微生物的別離原理分解尿素的細(xì)菌可以合成脲酶,故能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素,可以分解纖維素的微生物具有更多的生存時(shí)機(jī)而大量繁殖鑒定在培養(yǎng)基中參加酚紅指示劑,指示劑變紅說(shuō)明尿素被分解,從而說(shuō)明菌落中的細(xì)菌為分解尿素的細(xì)菌剛果紅染色法,菌落周?chē)霈F(xiàn)紅色消失的透明圈,該菌落為分解纖維素的微生物的菌落1.2019成都一診 牛的食物主要是草莖類,其中含有大量的纖維素。牛胃內(nèi)的微生物在幫助消化和利用植物纖維素方面起了決定性的作用。答復(fù)以下問(wèn)題:1纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì),組成纖維素的單體為。牛胃中某

16、些微生物可以產(chǎn)生纖維素酶,這種酶是一種復(fù)合酶,其中的能使纖維素分解成纖維二糖。 2實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)牛胃內(nèi)的微生物,別離得到高純度纖維素分解菌的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是。為防止周?chē)h(huán)境中微生物的污染,實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在附近進(jìn)展;倒平板用的培養(yǎng)皿需要保持枯燥,可以采用法進(jìn)展滅菌。3為了從牛胃的食糜中別離出纖維素分解菌,配制的選擇培養(yǎng)基要以為唯一碳源。挑選纖維素分解菌時(shí),常用的剛果紅染色法有兩種,一種是先培養(yǎng)微生物,再參加剛果紅進(jìn)展顏色反響,另一種是。在涂布平板時(shí)滴加到培養(yǎng)基外表的菌懸液量不宜過(guò)多,原因是。2.2019河北石家莊二模 為了別離和純化高效分解石油的細(xì)菌,科研人員利用被石油污染過(guò)的土壤進(jìn)展如圖11-34-4所示的

17、實(shí)驗(yàn)。圖11-34-41配制好的培養(yǎng)基通常使用法滅菌。步驟與步驟中培養(yǎng)基成分相比,最大的區(qū)別是。2同學(xué)A進(jìn)展步驟的操作,其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學(xué)的接種方法是,出現(xiàn)圖乙結(jié)果可能的失誤操作是。3同學(xué)B也按照同學(xué)A的接種方法進(jìn)展了步驟的操作:將1 mL樣品稀釋100倍,在3個(gè)平板上分別接入0.1 mL稀釋液;經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為56、58和57。據(jù)此可得出每升樣品中的活菌數(shù)為個(gè)。4步驟需要振蕩培養(yǎng),原因是5步驟后取樣測(cè)定石油含量的目的是。歷年真題明考向1.2019全國(guó)卷 某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用。答復(fù)以下問(wèn)題:1有些細(xì)菌能分

18、解尿素,有些細(xì)菌那么不能,原因是前者能產(chǎn)生。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源,原因是但可用葡萄糖作為碳源,進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是答出兩點(diǎn)即可。2為了挑選可分解尿素的細(xì)菌,在配制培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)選擇填“尿素“NH4NO3或“尿素+NH4NO3作為氮源,不選擇其他兩組的原因是3用來(lái)挑選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4,其作用有答出兩點(diǎn)即可。2.2019江蘇卷 苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中,對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備根據(jù)圖11-34-5操作步驟,從處理廢水的活性污泥中別離挑選酚降解高效菌株。請(qǐng)答復(fù)以下問(wèn)題: 圖11-34-51酚降解菌富集培養(yǎng)基含

19、有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水,其中可作為碳源的有。2將采集到的樣品接種培養(yǎng),苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸,以到達(dá)富集酚降解菌的目的。假設(shè)上圖平板中菌落過(guò)于密集,應(yīng)進(jìn)一步,以便于菌落計(jì)數(shù)與別離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還必須添加。3圖11-34-6為連續(xù)劃線法示意圖,在圖中填圖中序號(hào)區(qū)域更易獲得單菌落。 圖11-34-64采用比色測(cè)定法使用苯酚顯色劑檢測(cè)降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)展顯色反響,下表中15號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為管號(hào)123456苯酚濃度mg/L1 假如廢水為50 mg/L 苯酚溶液,降解后約有21%的苯酚殘留,那么需將殘留液稀

20、釋填序號(hào):51020倍后,再進(jìn)展比色。3.2019全國(guó)卷 空氣中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板搜集教室空氣中的微生物,以理解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下:配制培養(yǎng)基成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O; 制作無(wú)菌平板; 設(shè)置空白對(duì)照組和假設(shè)干實(shí)驗(yàn)組,進(jìn)展相關(guān)操作; 將各組平板置于37 恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間,統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。答復(fù)以下問(wèn)題:1該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于。假設(shè)要完成步驟,該培養(yǎng)基中的成分X通常是。2步驟中,實(shí)驗(yàn)組的操作是3假設(shè)在某次調(diào)查中,某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)/平板,而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)

21、了6個(gè)菌落,這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了現(xiàn)象。假設(shè)將30即36-6個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的平均值,該做法填“正確或“不正確。4.2019全國(guó)卷 某同學(xué)用新穎的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料別離純化乳酸菌。別離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明,乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣。答復(fù)以下問(wèn)題:1別離純化乳酸菌時(shí),首先需要用對(duì)泡菜濾液進(jìn)展梯度稀釋,進(jìn)展梯度稀釋的理由是。2推測(cè)在別離純化所用的培養(yǎng)基中參加碳酸鈣的作用有和。別離純化時(shí)應(yīng)挑選出的菌落作為候選菌。3乳酸菌在-20 長(zhǎng)期保存時(shí),菌液中常需要參加一定量的填“蒸餾水“甘油或“碳酸鈣。第34講微生物的培養(yǎng)和利用考點(diǎn)一【知識(shí)梳理】1.1營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)

22、養(yǎng)基質(zhì)2碳源氮源pH氧氣3固體液體2.1純潔培養(yǎng)物2外來(lái)雜菌3a-a-a-b-b-b-3.1稱量滅菌2拔出棉塞火焰培養(yǎng)皿的皿蓋倒過(guò)來(lái)4.1單個(gè)2A連續(xù)劃線3B瓊脂固體培養(yǎng)基菌落5.1臨時(shí)保藏2甘油管藏【題組訓(xùn)練】1.1根據(jù)所培養(yǎng)微生物對(duì)各營(yíng)養(yǎng)成分的需求量或比例 2高壓蒸汽滅菌1213稀釋涂布平板法梯度稀釋涂布430300某些菌落可能是由兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起形成的解析 1培養(yǎng)基配制的過(guò)程中,成分含量的比例確定的原那么是根據(jù)所培養(yǎng)微生物對(duì)各營(yíng)養(yǎng)成分的需求量或比例。2對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)展滅菌,通常采用的方法是高壓蒸汽滅菌,即將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),為到達(dá)良好的滅菌效果,一般在壓力為1

23、00 kPa,溫度為121 的條件下,維持1530 min。3為了更好地對(duì)細(xì)菌計(jì)數(shù),一般采用的接種方法是稀釋涂布平板法,該方法的操作是將菌液進(jìn)展一系列的梯度稀釋,然后再分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的外表。4接種后放在恒溫箱培養(yǎng)一段時(shí)間后,為保證結(jié)果準(zhǔn)確,選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)展計(jì)數(shù)。由于某些菌落可能是由兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起形成的,因此統(tǒng)計(jì)的菌落比實(shí)際數(shù)目要低。2.1倒平板滅菌2平板劃線法63臨時(shí)保藏菌種容易被污染或產(chǎn)生變異4能量3035解析 1是制備培養(yǎng)基時(shí)倒平板中的主要操作,該操作需使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰,目的是通過(guò)滅菌,防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。2根據(jù)圖可知,該純化醋酸菌的接種方法

24、是平板劃線法。平板劃線時(shí),每次劃線前都要進(jìn)展灼燒,最后一次劃線完畢也要進(jìn)展灼燒,因此共需要6次灼燒處理。3純化的醋酸菌菌種將頻繁用于果醋消費(fèi),那么可以采用臨時(shí)保藏的方法保存菌種,但這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng),原因是菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。4將醋酸菌參加果酒中,乙醇可為醋酸菌的生命活動(dòng)提供能量;果醋發(fā)酵的適宜溫度是3035 ?？键c(diǎn)二【知識(shí)梳理】1.1生存環(huán)境2目的菌株3抑制阻止2.1稀釋涂布平板2稀釋度活菌3顯微鏡直接3.非測(cè)試因素可信度未接種的4.脲酶尿素有機(jī)質(zhì)系列稀釋計(jì)數(shù)酚紅氨堿性【題組訓(xùn)練】1.1固體調(diào)pH高壓蒸汽滅菌2不能培養(yǎng)基中含有NH4NO3,尿素不是唯一氮源3酚紅紅色4平板劃線法、稀

25、釋涂布平板法和稀釋混合平板法解析 微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽,此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求,對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō),含C、N的化合物既是碳源,也是氮源,即有些化合物作為營(yíng)養(yǎng)要素成分時(shí)并不是起單一方向的作用。1分析題中表格可知,該培養(yǎng)基中參加瓊脂作為凝固劑,因此屬于固體培養(yǎng)基,不管何種培養(yǎng)基,在各成分都溶化后分裝前,要先調(diào)整pH,培養(yǎng)基常用的滅菌方法為高壓蒸汽滅菌。2根據(jù)培養(yǎng)基的成分判斷,該培養(yǎng)基中含有NH4NO3,尿素不是唯一氮源,因此該培養(yǎng)基不能用于別離土壤中分解尿素的細(xì)菌。3為檢測(cè)尿素分解菌的存在與否,在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基中參加酚紅指示劑,

26、假如存在尿素分解菌,那么指示劑將變紅色。4微生物常用的接種方法有平板劃線法、稀釋涂布平板法和稀釋混合平板法。2.1脲酶或分解尿素的酶氨或NH32凝固劑酚紅3D4檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格4.7108低解析 常用的滅菌方法:高壓蒸汽滅菌法適用于一般培養(yǎng)基和玻璃器皿滅菌;干熱滅菌適用于需要保持枯燥的玻璃器皿的滅菌,凡帶有橡膠的物品和培養(yǎng)基都不能進(jìn)展干熱滅菌;無(wú)菌室、緩沖間和接種箱常用紫外線進(jìn)展空氣滅菌;微生物接種時(shí)的金屬接種工具和試管口可以用灼燒滅菌;煮沸滅菌通常不能徹底殺滅一些生物的孢子和芽孢,一般適用于餐具和不耐高溫的食品等的消毒。1分解尿素的酶是脲酶,所以分解尿素的微生物含有脲酶。尿素含有C

27、、H、O、N元素,其水解產(chǎn)物是二氧化碳、水和氨氣,氨氣使的培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)。2瓊脂是凝固劑,使培養(yǎng)基呈固態(tài);培養(yǎng)基中的堿性物質(zhì)可以與酚酞反響產(chǎn)生紅色環(huán)帶。3對(duì)尿素溶液進(jìn)展滅菌的最適方法是過(guò)濾滅菌。4空白平板的作用是檢測(cè)培養(yǎng)基平板是否合格,根據(jù)題干提供的數(shù)據(jù)進(jìn)展計(jì)算,每升瘤胃樣液中分解尿素的微生物活菌數(shù)為49+47+4531000101000=4.7108個(gè)。由于菌種可能重疊,所以統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往低于接種的實(shí)際活菌數(shù)目?？键c(diǎn)三【知識(shí)梳理】1.1C1酶CX酶葡萄糖苷酶2纖維二糖葡萄糖2.1剛果紅染色2紅色復(fù)合物透明圈3纖維素4纖維素選擇培養(yǎng)基梯度稀釋鑒別纖維素分解菌透明圈【題組訓(xùn)練】1.1葡萄糖C

28、1酶、CX酶 2防止外來(lái)雜菌的入侵酒精燈火焰干熱滅菌3纖維素在倒平板時(shí)就參加剛果紅培養(yǎng)基外表的菌懸液過(guò)多會(huì)導(dǎo)致菌體堆積,影響別離效果解析 1纖維素是一種多糖,其根本組成單位是葡萄糖;纖維素酶是一種復(fù)合酶,其中C1酶、CX酶能使纖維素分解成纖維二糖。2微生物別離和培養(yǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是防止外來(lái)雜菌的入侵;為防止周?chē)h(huán)境中微生物的污染,實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)展;倒平板用的培養(yǎng)皿需要保持枯燥,可以采用干熱滅菌法進(jìn)展滅菌。3為了別離出纖維素分解菌,配制的選擇培養(yǎng)基要以纖維素為唯一碳源。挑選纖維素分解菌時(shí),常用的剛果紅染色法有兩種,一種是先培養(yǎng)微生物,再參加剛果紅進(jìn)展顏色反響,另一種是在倒平板時(shí)就參加剛

29、果紅。在涂布平板時(shí)滴加到培養(yǎng)基外表的菌懸液量不宜過(guò)多,原因是培養(yǎng)基外表的菌懸液過(guò)多會(huì)導(dǎo)致菌體堆積,影響別離效果。2.1高壓蒸汽滅菌步驟培養(yǎng)基中石油是唯一碳源2稀釋涂布平板法涂布不均勻35.71074進(jìn)步培養(yǎng)液中溶解氧的含量,通過(guò)振蕩可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,進(jìn)步營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率5挑選出分解石油才能最強(qiáng)的細(xì)菌解析 1配制好的培養(yǎng)基通常使用高壓蒸汽滅菌法滅菌。步驟與步驟中培養(yǎng)基成分相比,最大的區(qū)別是步驟培養(yǎng)基中石油是唯一碳源。2同學(xué)A進(jìn)展步驟的操作,其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如題圖乙所示。該同學(xué)的接種方法是稀釋涂布平板法,出現(xiàn)圖乙結(jié)果可能的失誤操作是涂布不均勻。3同學(xué)B也按照同學(xué)A的接種方法進(jìn)

30、展了步驟的操作:將1 mL樣品稀釋100倍,在3個(gè)平板上分別接入0.1 mL稀釋液;經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為56、58和57。據(jù)此可得出每升樣品中的活菌數(shù)為56+58+5730.11000100=5.7107個(gè)。4步驟需要振蕩培養(yǎng),原因是進(jìn)步培養(yǎng)液中溶解氧的含量,通過(guò)振蕩可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,進(jìn)步營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率。5步驟后取樣測(cè)定石油含量的目的是挑選出分解石油才能最強(qiáng)的細(xì)菌。歷年真題明考向1.1脲酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物,不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量,為其他有機(jī)物的合成提供原料2尿素其他兩組都含有NH4NO3,能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用

31、NH4NO3,不能起到挑選作用3為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng),作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定解析 1催化尿素分解的酶為脲酶。分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物,不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物。進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量,葡萄糖的代謝中間產(chǎn)物可以作為合成其他有機(jī)物的原料。2能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3,假如培養(yǎng)基中含有NH4NO3,那么不能起到挑選作用。3培養(yǎng)基中的KH2PO4和Na2HPO4可以為微生物生長(zhǎng)提供鈉離子、鉀離子等,其還可以作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定。2.1蛋白胨、苯酚2增加稀釋涂布凝固劑340、0.2、0.4、0.6、0.8解析

32、 1蛋白胨、苯酚都可以作為碳源。2為了挑選酚降解菌,苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加。假設(shè)平板中菌落過(guò)于密集,說(shuō)明濃度太大,為方便菌落計(jì)數(shù)與別離,應(yīng)進(jìn)一步稀釋涂布。平板培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基,制備時(shí)必須添加凝固劑。3連續(xù)劃線法中在劃線的末尾區(qū)域菌種濃度最小,更易獲得單菌落。41號(hào)比色管作對(duì)照,苯酚濃度為0,16號(hào)比色管苯酚濃度由0逐漸增加到1 mg/L,且有梯度,所以15號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為0、0.2、0.4、0.6、0.8 mg/L。廢水為50 mg/L苯酚溶液,降解后約有21%的苯酚殘留,那么需將殘留液稀釋20倍后,再進(jìn)展比色。3.1牛肉膏、蛋白胨瓊脂2將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上,開(kāi)蓋暴露一段時(shí)間3污染不正確解析 此題考察微生物的培養(yǎng)與計(jì)數(shù),主要考察學(xué)生的識(shí)記、理解與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)才能。1培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨中都含有蛋白質(zhì),可作為氮源。用于計(jì)數(shù)的培養(yǎng)基應(yīng)為固體培養(yǎng)基,需參加瓊