傳染病學-綜合實驗報告

1、華南農業(yè)大學實驗報告實驗項目名稱： 細菌性疾病的微生物學診斷及防治 所屬課程名稱： 獸醫(yī)傳染病學實驗A 學生姓名： 學號： 2011 專業(yè)年級： 歷史文化旅游（獸醫(yī)第二專業(yè)）成績： 1 實驗目的 觀察細菌性疾病的臨床癥狀和病理解剖變化掌握細菌性疾病的微生物學診斷方法及防治措施2 實驗材料和方法2.1 實驗材料實驗動物 、血清瓊脂平板、營養(yǎng)肉湯 ，酒精燈、生化發(fā)酵管。藥敏試紙、剪刀、鑷子等2.2 實驗方法2.2.1 臨床癥狀觀察 觀察動物的精神狀態(tài)、皮膚、被毛、糞便、體溫等情況 2.2.2 病理剖檢變化 觀察動物各臟器的病理變化，包括心、肺、肝、脾、腎、腸、淋巴結等?？从袥]有出血、壞死等病變2.

2、2.3實驗室診斷細菌分離培養(yǎng) 無菌取病兔病變組織，如肺、肝、脾或體液、分泌物及局部病灶的滲出液，接種血清營養(yǎng)瓊脂或麥康凱瓊脂，將培養(yǎng)皿標記后置于37溫箱，培養(yǎng)24小時后觀察結果。 涂片、染色、鏡檢 對于液體病料，可用無菌接種環(huán)取一環(huán)液體病料在載玻片上涂抹成適當大小的薄層即可；對于實質臟器，可用鑷子夾持病變組織，然后用滅菌剪刀剪取一小塊，夾出后將其新鮮切面在載玻片上壓印即成觸片。革蘭氏染色法染色：1.涂片經火焰固定，加1液（結晶紫溶液）染1-2分鐘，用清水沖去染液；2.加第2液（碘液）染1-2分鐘，水洗；3.加第3液（脫色液），不時搖動玻片約10-30秒，至無紫色脫落為止，水洗；4.加第4液（復

3、染液），染1分鐘，水洗；5.干后油鏡鏡檢。結果判斷：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。（注意：1.嚴格掌握脫色時間，革蘭氏陽性菌脫色時間過長易誤認為革蘭氏陰性菌，脫色時間過短，革蘭氏陰性菌易誤認為革蘭氏陽性菌；2.選用18至24小時菌齡的細菌為宜，如細菌太老，由于菌體死亡或自溶，常使革蘭陽性反應轉顯為革蘭陰性反應。生化試驗將細菌的24h純培養(yǎng)物分別接種到各種生化培養(yǎng)基內，37培養(yǎng)24h，觀察結果并記錄。 巴氏桿菌生化特性 葡萄糖   乳糖 蔗糖 甘露醇 果糖 鼠李糖 棉子糖 衛(wèi)柔醇 運動力 麥康凱瓊脂 硝酸鹽還原 靛基質 氧化酶 脲酶 大腸桿菌生化特性 葡萄糖   乳

4、糖 蔗糖 甘露醇 麥芽糖 運動力 脲酶 枸櫞酸鹽利用 硫化氫 MR VP 硝酸鹽還原 靛基質 動物試驗 將病料磨碎，用生理鹽水稀釋成1:10的懸液（或用分離細菌的肉湯培養(yǎng)物），接種小白鼠0.1-0.2ml，18-72小時死亡后取心、肝、肺等涂片鏡檢,并接種培養(yǎng)基進行分離培養(yǎng)。根據(jù)細菌形態(tài)、染色、培養(yǎng)等特性加以鑒定,必要時進行生化鑒定。2.2.4 藥敏試驗（1）用接種環(huán)挑取菌落45個，接種于肉湯培養(yǎng)基中，37培養(yǎng)過夜。（2）用無菌棉拭子蘸取上述肉湯培養(yǎng)液，在管壁上擠壓，除去多余的液體，用棉拭子涂滿瓊脂表面，蓋好平皿，在室溫下干燥5min，待平板表面稍干即可放置含藥紙片。（3） 用滅菌鑷子以無菌操

5、作取出含有不同抗生素紙片貼在涂有細菌的培養(yǎng)基表面。將平皿置于37恒溫箱培養(yǎng)1618h，觀察結果。（4） 結果判定：觀察含藥紙片周圍有無抑菌環(huán)，量取其直徑（包括紙片直徑）大小，按抑菌環(huán)直徑的大小報告敏感、中度敏感和耐藥3 實驗結果及診斷結果、本次實驗動物為兔子。在攻毒一個周過后死亡，攻毒前生命體征各項均正常。病理解剖結果可看到心、肝、脾以及淋巴結充血、出血；喉頭、氣管、腸道黏膜有出血點。3.1涂片鏡檢無菌取病兔心肺實質器官抹片檢查時沒看到明顯的細菌，經瑞氏染色后鏡檢，可看到細菌呈兩極著色，周邊有淡紅色的莢膜的短小桿菌。3.2細菌分離培養(yǎng) 無菌取病免的肺接種于鮮血瓊脂平板和麥康凱平板上，37度培養(yǎng)

6、，結果麥康凱平板上無任何菌落，而鮮血瓊脂平板上有許多淡灰色、圓形濕潤、露珠樣的小菌落，且周圍不溶血。還有一些取菌落作瑞氏染色，鏡檢?？煽吹皆摼鸀閮蓸O濃染，兩端鈍圓、有莢膜的短桿菌，還有一些紫色的葡萄樣的菌。紫色的菌可判斷為葡萄球菌。經肉湯培養(yǎng)以及瓊脂培養(yǎng)基多次分離純培養(yǎng)后，可分離菌株。3.3生化試驗 葡萄糖   乳糖 蔗糖 甘露醇 果糖 鼠李糖 棉子糖 衛(wèi)柔醇 運動力 麥康凱瓊脂 硝酸鹽還原 靛基質 氧化酶 脲酶 3.4藥敏試驗藥物抑菌圈直徑（cm）敏感度頭孢唑啉2.2耐藥環(huán)丙沙星3.3耐藥阿米卡星1.9耐藥氧氟沙星3.2耐藥氯霉素3.3耐藥鏈霉素2.0耐藥諾氟沙星3.0耐藥3.5小

7、鼠感染試驗取親分離的菌株鈍培養(yǎng)，制成細菌鈍培養(yǎng)液，接種小鼠，腹腔注射9ml，24h后死亡。解剖的病理變化與免子相同。4 綜合防治措施對于在大規(guī)模養(yǎng)殖的養(yǎng)殖場，主要有以下幾點防治措施 建立無多殺性巴氏桿菌種兔群 堅持自繁自養(yǎng)原則，不從疫區(qū)引種或購買商品兔，引種兔進要嚴格檢疫并隔離觀察30天，經檢查無異常癥狀時方可入群。 加強飼養(yǎng)管理，增強機體的搞病能力 消除一切應激因素。 搞好清潔衛(wèi)生和定期涉消毒，減少疫病感染機會 藥物預防可在每50kg飼料中加8-10g乙醇，混合飼喂 嚴禁其他動物出入兔場，定期滅蚊蟲，減少傳染源 ，切斷傳播途徑 治療可用阿莫西林鈉，10-15mg/kg 肌注；或鏈霉素0.5-1IU/KG,2次/d 肌注5 實驗體會或小結1. 本次實驗持續(xù)做了幾個周的細菌性培養(yǎng)，從最開始的練習兔子的耳緣靜脈采血、皮下、皮內、腹腔注射、肌肉注射，到真正的實驗細菌攻毒，細菌的分離培養(yǎng)、小鼠回歸試驗等多個繁雜的步驟過后，了解了特定病原在動物體內的整個發(fā)病過程，以及發(fā)病原因進行了詳細的探究的探究。2. 在實驗中，我們不僅進一步加強了動手操作的能力，也意識到團隊的重要性。作為一名第二專業(yè)的學生，我更加能體會到在交流過程中同學們給予的幫助和指導；也更能體會在實驗過程中的教育意義。3. 在本次整個實驗操作過程