革蘭氏染色實驗報告結果及分析

1、革蘭氏染色實驗報告結果及分析一、目的：在細胞發(fā)放之前，利用標準的革蘭氏染色法對即將發(fā)放的細胞懸液進行檢測，判斷細胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。二、原理：通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯致密，故遇乙醇脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此通過

2、乙醇脫色后仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。三、實驗用品準備：滅菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul滅菌移液吸頭、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸頭、接種環(huán)、酒精燈、打火機、革蘭氏染色液、吸水紙、顯微鏡、香柏油、擦鏡紙、計時器四、操作：1涂片：取滅過菌的載玻片于實驗臺上，用移液槍吸取10ul待檢樣品滴在載玻片的中央，用燒紅冷卻后的接種環(huán)將液滴涂布成一均勻的薄層，涂布面不宜過大。2干燥：將標本面向上，手持載玻片一端的兩側，小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標本烤枯而變形。3固定：固定常常利

3、用高溫，手持載玻片的一端，標本向上，在酒精燈火焰處盡快的來回通過2-3次，共約2-3秒種，并不時以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺過燙為宜（不超過60），放置待冷后，進行染色。4初染：在涂片薄膜上滴加草酸銨結晶紫1-2滴，使染色液覆蓋涂片，染色約1min。5水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。6媒染：用100-1000ul移液槍吸取約300ul碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆蓋涂片，染色約1min。7水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。8脫色：斜置載玻片，滴加95%乙醇脫色，至流出的乙醇不現紫色為止，大約需時20-30S，隨即水洗。9復染：在涂片薄膜上滴加沙黃染液1-2滴，使染色液覆蓋涂片，染色約1min。10水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。11干燥、觀察：用吸水紙吸掉水滴，待標本片干后置顯微鏡下，用低倍鏡觀察，發(fā)現目的物后滴一滴浸油在玻片上，用油鏡觀察細菌的形態(tài)及顏色，紫色的是革蘭氏陽性菌，紅色的是革蘭氏陰性菌。五、清場：1.實驗結束后，將顯微鏡