生物藥物分析練習(xí)題考試題及詳細(xì)答案

1、生物藥物分析練習(xí)題一、名詞解釋：生物藥物分析：應(yīng)用微生物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、有機化學(xué)、數(shù)學(xué)、分析化學(xué)、生化工程等學(xué)科的理論及其技術(shù)成就，檢測和研究各種生物藥物質(zhì)量的一門綜合性學(xué)科。生物藥物：指的是生物體生命活動過程中產(chǎn)生的，或者通過生物技術(shù)加工的，用作疾病的診斷、預(yù)防、治療的初級和次級代謝產(chǎn)物，包括微生物藥物、基因工程藥物、動植物細(xì)胞組織制備的生化藥物。藥品標(biāo)準(zhǔn)：是指國家對藥品的質(zhì)量規(guī)格及其檢驗方法所做的技術(shù)規(guī)定，是藥品的生產(chǎn)、流通、使用及檢驗、監(jiān)督管理部門共同遵守的法定依據(jù)。藥典：一個國家記載藥品標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)格的法典，一般由國家藥品監(jiān)督管理局主持編撰頒布實施，具有法定約束力?；蚬?/p>

2、程藥物：是先確定對某種疾病有預(yù)防和治療作用的蛋白質(zhì)，然后將控制該蛋白質(zhì)合成過程的基因取出來，經(jīng)過一系列基因操作，最后將該基因放入可以大量產(chǎn)生的受體細(xì)胞中去，在受體細(xì)胞不斷繁殖的過程中，大規(guī)模生產(chǎn)預(yù)防和治療這些疾病的蛋白質(zhì)。藥物雜質(zhì)：藥物中存在的無治療作用或影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至對人體健康有害的物質(zhì)。面積歸一法：計算各雜質(zhì)峰面積及其總和，并求出占總峰面積的百分率以測定雜質(zhì)含量。內(nèi)消法：是指將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加到一定量的被分析樣品混合物中，然后對含有內(nèi)標(biāo)物的樣品進(jìn)行色譜分析，分別測定內(nèi)標(biāo)物和待測組分的峰面積及相對校正因子，按相應(yīng)公式和方法即可求得被測組分在樣品中的百分含量。外消法：

3、用已知不同含量的標(biāo)樣系列等量進(jìn)行分析，然后做出響應(yīng)信號與含量之間的關(guān)系曲線。定量分析樣品時，在測校正曲線相同條件下進(jìn)同等樣量的等測樣品，從色譜圖上測出峰高或峰面積，在從校正曲線查出樣品的含量。微生物限度檢查法：系指非規(guī)定滅菌制劑及其原、輔料受到微生物污染程度的一種檢查方法。放射性免疫測定法：利用免疫學(xué)上的抗原-抗體高度特異性反應(yīng)與放射性同位素測量技術(shù)的高度靈敏性相結(jié)合的超微量分析方法。酶免疫測定法：利用抗原和抗體的免疫學(xué)反應(yīng)和酶的高效催化作用來測定抗原或抗體含量的技術(shù)?？寡宓牡味让该飧偁幏ǎ悍歉偁幏ň喾ǎ菏侵覆恍枰獙⒔Y(jié)合的與游離的酶標(biāo)志物分離便可測定的方法。非均相法：是指抗原抗體反應(yīng)后，需

4、要將結(jié)合的與游離的酶標(biāo)志物分離才能測定的方法。酶的交聯(lián)液相酶免疫測定法酶分析：指利用酶作為分析工具來測定特定物質(zhì)量的方法。（P97）終點法：指借助酶反應(yīng)使被測物質(zhì)定量地進(jìn)行轉(zhuǎn)變，在轉(zhuǎn)化完成后，測定底物、產(chǎn)物或輔酶物質(zhì)等的變化量的方法。反應(yīng)速度法：是指通過測定酶促反應(yīng)速度對被測物質(zhì)進(jìn)行定量的方法。（P104）酶循環(huán)放大法：指利用底物的專一性，使微量的底物“增幅放大”以達(dá)到定量目的的方法。（P107）電泳：指帶電粒子或離子在電場作用下的定向移動，依據(jù)帶電粒子在電場的作用下遷移行為不同進(jìn)行分離的技術(shù)。（P111）電滲：液體的涌動現(xiàn)象。（P113）電泳遷移率：帶電粒子在單位電場強度下移動的泳動速度。S

5、DS-PAGE向樣品加入還原劑和過量SDSSDS是陰離子去垢劑，是蛋白質(zhì)變性解聚，并與蛋白質(zhì)結(jié)合成帶強負(fù)電荷的復(fù)合物，掩蓋了蛋白質(zhì)之間原有電荷的差異，是各種蛋白質(zhì)的電荷/質(zhì)量比值都相同，因而在聚丙酰胺凝膠中電泳時遷移速率主要取決于蛋白質(zhì)分子大小。是分析蛋白質(zhì)和多肽、測定其分子量等常用的方法。梯度聚丙稀酰胺凝膠電泳比移值：色譜法中原點到斑點中心的距離與原點到溶劑前沿的距離的比值。等電聚焦：利用蛋白質(zhì)分子或其他兩性分子等電點的不同，在一個穩(wěn)定的、連續(xù)的、線性的pH梯度中進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離的一種電泳方法。（P126）兩性載體色譜法：指借助物質(zhì)在兩相間分配原理的不同，而使混合物中各組分分離的技術(shù)。（P1

6、31）邊緣效應(yīng)：指板層中部斑點的Rf值小于兩側(cè)斑點的Rf值的現(xiàn)象。（P137）放射性比度：單位質(zhì)量或單位體積的放射性物質(zhì)的放射性活度。分離度：用以判斷分離物質(zhì)在色譜柱中的分離情況，常用為柱的總分離效能指標(biāo)。托尾因子：是通過計算5%竄高處峰寬與峰頂點至前沿的距離比來評價峰形的參數(shù)，目的是為了保證色譜分離效果和測量精度，常用T來表示。牛津單位：在標(biāo)準(zhǔn)情況下，能完全抑制50mL肉湯培養(yǎng)液中的金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株生長的青霉素最低含量為一個牛津單位。（P159）稀釋單位：指能完全抑制1mL肉湯培養(yǎng)液中大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株生長的最低含量。重量單位：指以抗生素的生物活性部分的重量作為效價單位。（P160）旋光

7、性：當(dāng)光通過含有某種物質(zhì)的溶液時，使經(jīng)過此物質(zhì)的偏振光平面發(fā)生旋轉(zhuǎn)的現(xiàn)象。比旋度：指偏振光通過長1dm且每1ml含旋光物質(zhì)1g的溶液，在一定額波長和溫度下的旋光度。稀釋法比濁法瓊脂擴散法（管碟法）生物檢定：指利用藥物對生物體所引起的藥理作用來測定藥物的生物活性或效價的一種方法。（P210）容量分析法：依據(jù)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)試劑溶液與被測定的一定量供試品藥物完全作用所消耗的標(biāo)準(zhǔn)試劑的體積，來計算被測定藥物中有效物質(zhì)含量的方法。（224）直接滴定法：是用標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定被測物質(zhì)的一種方法。（P224）逆滴定法:指加入定量且過量的滴定劑使之與待測物質(zhì)反應(yīng)，然后用另外的試劑滴定過量的滴定劑，進(jìn)而對待測物質(zhì)

8、進(jìn)行定量的方法。維生素：指一類維持人體正常生理代謝功能所必需的低分子有機化合物。（p237電位滴定法：指在滴定過程中通過測量電位變化以確定滴定終點的方法?；瘜W(xué)聚合117光聚合：利用光照加速化合物單位體之間共價鏈接的現(xiàn)象。微分比容：當(dāng)加入1g干物質(zhì)于無限大體積的溶劑中時，溶液的體積增量?？寥磻?yīng)：雙縮月尿反應(yīng)：雙縮月尿在堿性溶液中與銅離子結(jié)合生成復(fù)雜的紫紅色化合物。（p277）等電點：在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，所帶凈電荷為零，呈電中性，此時溶液的pH稱為該氨基酸的等電點。福林酚法：利用蛋白質(zhì)與福林酚試劑反應(yīng)后形成的化合物可在750nm波長處測定其吸光度，以

9、測定蛋白質(zhì)含量的分析方法。蛋白質(zhì)換算系數(shù)：指含有1g氮的蛋白質(zhì)重量，一般為6.25.甲醛滴定法：依據(jù)一分子氨基酸與兩分子甲醛反應(yīng)生成一個氫離子，在用已知濃度氫氧化鈉滴定氫離子以確定氨基酸含量的方法。非水滴定法：在冰醋酸中用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定測定氨基酸含量的方法。酶：是一種生物來源的特殊化學(xué)催化劑，即生物催化劑。是由生物細(xì)胞產(chǎn)生的具有催化能力的蛋白質(zhì)。酶的高效性：酶催化較一般催化反應(yīng)速度高1051013.酶的絕對專一性：即一種酶僅能催化一種底物的生化反應(yīng)。如月尿酶只能催化尿素降解成氨和碳酸鹽，即使是尿素衍生物也不能被月尿酶水解。酶的相對專一性：即一種酶僅能催化相應(yīng)的某一類化合物或具有某種化學(xué)鍵的

10、物質(zhì)的變化，如脂肪水解酶能分解脂肪，蛋白質(zhì)水解酶分解蛋白質(zhì)，a-淀粉酶可水解淀粉，這些酶不能相互調(diào)換。酶的立體結(jié)構(gòu)專一性：及底物有立體異構(gòu)體時，酶只能以其中之一作為底物。酶的活力：酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。酶的活力單位：酶的活性單位（U）是酶活性高低的一種度量，用U/g或U/ml表示。酶的比活力：酶的比活力是指每毫克酶蛋白所含有的酶活力。用U/mg表示。恒比活力：多肽生長因子：（1976年）定義：細(xì)胞生長因子是指在體內(nèi)和體外對動物細(xì)胞或機體的生長有促進(jìn)作用的物質(zhì)，它們不是營養(yǎng)成分，主要由多肽構(gòu)成，故稱多肽生長因子。按現(xiàn)在細(xì)胞因子的作用性質(zhì)進(jìn)行定義：多肽調(diào)節(jié)因子實際上是一系列存在于機體內(nèi)的，對機

11、體有很強效應(yīng)的細(xì)胞調(diào)節(jié)因子。肽圖分析：肽圖分析可作為與天然產(chǎn)品或參考品作精密比較的手段。與氨基酸成分和序列分析合并研究，可作為蛋白質(zhì)的精確鑒別。同種產(chǎn)品不同批次的肽圖的一致性是工藝穩(wěn)定性的驗證指標(biāo)。蛋白質(zhì)免疫印記法：將等電聚焦電泳后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素紙上。免疫印跡的基本原理是借助聚丙酰胺凝膠技術(shù)，將生物活性物質(zhì)高效分離，再與固相免疫學(xué)方法相結(jié)合。細(xì)胞病變抑制法：該法主要用于干擾素的效價測定，采用CPE卬制為基礎(chǔ)的抑制微量測定法。H5TdR摻入法：通過比較待測樣品與標(biāo)準(zhǔn)品之間對檢測細(xì)胞促增殖能力的強弱來確定待測樣品的活性。微量酶檢測法(MTT：通過比較待測樣品刺激檢測細(xì)胞增殖能力的強弱來確

12、定樣品的活性。生物制品：生物制品系指以天然或人工改造的微生物、寄生蟲、生物毒素或生物組織及其代謝產(chǎn)物等為起始原料，采用生物學(xué)、分子生物學(xué)或生物化學(xué)、生物工程等相應(yīng)技術(shù)制成，并以相應(yīng)分析技術(shù)控制其中間產(chǎn)物和成品質(zhì)量的生物活性制品，可用于某些疾病的預(yù)防、治療和診斷。異煙腫法：管體激素C3上酮基及其某些其他位置上的酮基都能與常用的厥基試驗如異煙腫、2,4-二硝基苯腫及氨基月尿等縮合反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)，在一定波長下可比色，作為含量測定的依據(jù)，異煙腫是目前使用較廣泛的一種。激素：由內(nèi)分泌細(xì)胞所產(chǎn)生的微量化學(xué)信息分子，這些物質(zhì)通過擴散或被血液轉(zhuǎn)運到作用細(xì)胞或器官，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞或器官的代謝，并有反饋性地調(diào)節(jié)機

13、制以適應(yīng)機體內(nèi)環(huán)境的變化，也有協(xié)調(diào)體內(nèi)各部分之間相互聯(lián)系的作用。保護(hù)指數(shù)：動物經(jīng)抗原免疫后，其耐受活菌或活毒攻擊相當(dāng)于未免疫動物所耐受量的倍數(shù)。抗毒素單位：一個抗毒素單位定義為將抗毒素與一個L+量(致死限量，指與一個國際單位抗毒素混合后在一定時間殺死一只規(guī)定體重動物的最小毒素量)的毒素作用后，注射小鼠仍能使該小鼠在96h左右才死亡的最小抗毒素量。絮狀單位：一個絮狀單位定義為能與一個單位抗毒素首先發(fā)生絮狀沉淀反應(yīng)的類毒素或毒素的量。二、問答題1、生物藥物分析的基本任務(wù)有哪四個方面？答：(1)藥檢，包括原料藥和制劑的檢驗。(2)進(jìn)行生產(chǎn)過程質(zhì)量控制。(3)進(jìn)行運輸儲存質(zhì)量控制。(4)進(jìn)行臨床分析。

14、2、中國藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分為哪幾種？答：藥典、部頒標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)。3、2000年版中國藥典的內(nèi)容分為幾部分？答：兩部。一部收載中藥材，中藥成方制劑。第二部收載化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品等。4、生物藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的特征是什么？答：權(quán)威性、科學(xué)性、進(jìn)展性。5、試述生物藥物檢驗工作的基本內(nèi)容？答：1、學(xué)習(xí)分析生物藥物的若干方法及新技術(shù)。2、生物藥物測定及藥品檢驗。3、體內(nèi)藥物分析4、生物藥品制品的標(biāo)準(zhǔn)制定。6、一般雜質(zhì)檢查遵循的原則是什么？費休法測水分的基本原理是什么？在平板菌落計數(shù)法中向培養(yǎng)基中加入TTC的原理是什么？如何鑒別大腸桿菌、沙門菌、綠膿桿菌？答：1、平行操作原則，包括儀器的配對性及供試管與對

15、照管的同步操作。2、原理：利用碘氧化二氧化硫時需要一定量的水分參加反應(yīng)，總反應(yīng)式H2O+I2+SO2+3C5H5N+CH3OH2c5H5N-HI+C5H5N-HSO4CH33、細(xì)菌體內(nèi)含有多種脫氫酶，進(jìn)行氧化作用時釋放出電子和氫離子，遇TTC指示劑菌落呈紅色。在培養(yǎng)基中加入適量TTC,既可限制細(xì)菌蔓延生長又便于計數(shù)。7、放射性免疫測定法中競爭法與非競爭法的原理分別是什么？抗血清的質(zhì)量檢定分為哪三個方面？影響抗體產(chǎn)生的因素是什么？答：競爭法：標(biāo)記抗原Ag+Ab-Ag+Ab/AgAb+Ag-FT(多)則待測抗原"B惻待測抗原J。非競爭法：Ag+Ab(過量)一AgAb+Ab+-F(Ab+)

16、惻AgB(AgA6)cpm1則AgK抗血清的質(zhì)量檢定分為親和力、特異性、滴度。影響抗體產(chǎn)生的因素：佐劑、劑量、免疫競爭。8、在酶免疫測定法中競爭法與非競爭法的原理分別是什么？它們分別有哪些類型？在酶免測定法中胰島素測定實例。答：競爭法：將待檢抗原和酶標(biāo)抗原與相應(yīng)固相抗體競爭結(jié)合，標(biāo)本中抗原越多，與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原越少，與底物反應(yīng)生成的顏色越淺，因此根據(jù)顏色深淺可定量測定。1、固相法2、雙抗體法3、均相醇免疫測定4、酶免疫制劑免疫測定。非競爭法：1、雙抗體夾心法2、免疫酶測定法9、酶免疫測定法中實驗條件的建立包括哪五個過程？答：包被、洗滌、加待測物、溫育、檢測。10、在酶免疫分析中終點法的

17、條件和應(yīng)注意的問題分別是什么？答：條件：1、要有專一地作用該被測物質(zhì)的酶。2、能夠確定使這種酶反應(yīng)接近進(jìn)行完全的條件。3、反應(yīng)中底物的減少，產(chǎn)物的增加、輔酶物質(zhì)的改變等可以借助某種簡便的方法進(jìn)行測定。注意問題：1、酶的底物特異性2、反應(yīng)的平衡3、反應(yīng)液4、反應(yīng)產(chǎn)物的抑制。11、酶法分析有哪三種方法？答：終點法，反應(yīng)速度法、循環(huán)放大法。12、如何在一個比色杯中同時定量丙酮酸、磷酸烯醇式丙酮酸和D2一磷酸甘油酸？答：對于丙酮酸、磷酸烯醇式丙酮酸和D-2-磷酸甘油酸共存的混合液來說，用乳酸脫氫酶作用時，由于乳酸脫氫酶反應(yīng)定量地向右方進(jìn)行，因此根據(jù)340nm吸收度的減少便可以容易地算出丙酮酸含量。如像

18、這種反應(yīng)液中再加入丙酮酸激酶，使丙酮激酶反應(yīng)與乳酸脫氫酶反應(yīng)成偶聯(lián)反應(yīng)，則NADH的減少和磷酸烯醇式丙酮酸量成正比。如果進(jìn)一步向該反應(yīng)系統(tǒng)中加烯醇化酶，使烯醇化酶反應(yīng)與丙酮激酶及乳酸脫氫酶偶聯(lián)，那么此時NADKA與D-2磷酸甘油酸的量成正比例。這樣在一個比色杯內(nèi)就能依次進(jìn)行丙酮酸、磷酸烯醇式丙酮酸和D-2-磷酸甘油酸的定量。13、如何在樣品中同時測定葡萄糖和果糖？如何進(jìn)行G-1-P的定量測定？14、酶循環(huán)放大法的基本原理和注意事項分別是什么？酶循環(huán)放大法特點是什么？答：基本原理：酶循環(huán)放大法是一種超微量分析方法，本分析法分為三步，第一步，轉(zhuǎn)換反應(yīng)：以試樣中的待測組分為底物，經(jīng)特異性反應(yīng)生成與待

19、測組分相當(dāng)?shù)亩垦h(huán)底物。第二步，循環(huán)反應(yīng)：生成的循環(huán)底物反復(fù)參加由兩個酶反應(yīng)組成的耦連反應(yīng)，所得產(chǎn)物量為循環(huán)底物的若干倍。第三步，指示反應(yīng)：采用酶法測定反應(yīng)產(chǎn)物。由反應(yīng)產(chǎn)物量及循環(huán)次數(shù)，計算出循環(huán)底物量，再推算試樣中待測組分的量。注意事項：1、NAD酸性穩(wěn)定，堿性條件下23分鐘被破壞，NADHW之相反。2、在循環(huán)反應(yīng)中除循環(huán)底物外，其他物質(zhì)是過量的。3、用對照實驗，用已知NADHt循環(huán)次數(shù)n。特點：1、靈敏度高，能測定出10的負(fù)18次方摩爾物質(zhì)。2、特異性高3、循環(huán)效率高，2萬次每小時。4、測定物質(zhì)靈活。15、電泳法的基本原理是什么？影響電泳遷移率的因素有哪些？答：原理：依據(jù)帶帶電粒子在電場

20、作用下遷移行為的不同進(jìn)行分離的方法。因素：顆粒性質(zhì)、電場強度，溶液性質(zhì)、電滲、焦耳熱、篩孔16、聚丙烯酰胺凝膠的制備方法有拿兩種？它們的催化劑、加速劑是什么？答：化學(xué)聚合：催化劑，過硫酸錢或過硫酸鉀。加速劑：脂肪族叔胺光聚合：催化劑：核黃素。加速劑：TEMED17、聚丙烯酰胺凝膠電泳的基本原理是什么？聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)分為不連續(xù)電泳和連續(xù)電泳。不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳建立在區(qū)帶電泳院里的基礎(chǔ)上滿意孔徑大小不同的聚丙烯酰胺凝膠作為支持物，采用電泳基質(zhì)的不連續(xù)體系（即凝膠層、緩沖液離子成分、ph及電位梯度均不連續(xù)），使樣品在不連續(xù)的兩相間集聚濃縮成很薄的起始區(qū)帶，然后進(jìn)行電泳。18、SDS-PAG

21、E勺基本原理是什么？答：在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進(jìn)SDS（十二烷基硫酸鈉），SDS會與變性的多肽，并使蛋白帶負(fù)電荷，由于多肽結(jié)合SDS的量幾乎總是與多肽的分子量成正比而與其序列無關(guān)，因此SDS多肽復(fù)合物在丙稀酰胺凝膠電泳中的遷移率只與多肽的大小有關(guān)，在達(dá)到飽和的狀態(tài)下，每克多肽可與1.4g去污劑結(jié)合。當(dāng)分子量在15KD到200KD之間時，蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對數(shù)呈線性關(guān)系，符合下式：logMW=K-bX式中：MW為分子量，X為遷移率，k、b均為常數(shù)，若將已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的遷移率對分子量對數(shù)作圖，可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，未知蛋白質(zhì)在相同條件下進(jìn)行電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得

22、分子量。19、影響SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合的因素有哪些？（1）溶液中SDSII體的濃度（2）樣品緩沖液的離子強度（3）二硫鍵是否完全被還原20、梯度聚丙烯酰胺凝膠的基本原理是什么？蛋白質(zhì)染色的方法有哪五種？原理：凝膠濃度由小變大，膠的孔徑由大變小，在電泳開始時，由于凝膠孔徑大，沒有分子篩效應(yīng)，此時電泳的遷移率與被分離的物質(zhì)所帶電荷、形狀、分子量大小相關(guān)，隨著電泳的進(jìn)行，孔徑越來越小，由分子篩效應(yīng)產(chǎn)生的阻力越來越大，當(dāng)阻力足以阻擋被分離物質(zhì)向前移動時，被分離物質(zhì)停留在相應(yīng)孔徑的凝膠中，此時只有分子篩效應(yīng)，無電荷效應(yīng)。所以物質(zhì)分子的最后分離是依據(jù)分子篩效應(yīng)分開，蛋白質(zhì)的相對遷移率在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)分子

23、量的對數(shù)成線性關(guān)系。方法：1、氨基黑10B法2、考馬斯亮藍(lán)R250法3、考馬斯亮藍(lán)G250法4、1-苯胺基-8-奈磺酸5、銀染色法21、色譜法的基本原理是什么？紙色譜的影響因素有哪些？原理：混合物中各組分在兩相間進(jìn)行分配，其中一組是不動的，稱為固定相；另一相是攜帶混合物流過固定相的，稱為流動相。當(dāng)流動相中所含的混合物經(jīng)過固定相時，就會與固定相發(fā)生作用，由于混合物中各組分在結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上存在差異，他們與固定相發(fā)生作用的大小、強弱就有差異，因此，在同一條件下，不同組分在固定相中滯留時間不同，從而按先后不用次序從固定相中流出而得到分離。影響因素：（1）物質(zhì)極性的影響（2）溶劑的影響（3）ph的影響（4

24、）濾紙的影響（5）溫度和時間的影響22、HPLC的基本原理是什么？HPLC的色譜類型有哪幾種？原理：HPLC的流動相和固定相都是液體。流動相與固定相之間應(yīng)互不相溶，有一個明顯的分界面。當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行多次分配。從而使流出時間不同，進(jìn)而達(dá)到分離。類型：正相色譜、反相色譜、離子交換色譜、凝膠色譜23、氣相色譜的基本原理和類型分別是什么？原理：原理：混合物的分離依據(jù)色譜柱的性質(zhì)和相關(guān)的保留或固定相的性質(zhì)。利用被測物質(zhì)各組分在不同兩相間分配系數(shù)的微小差異，當(dāng)兩相做相對運動時，這些物質(zhì)在兩相之間進(jìn)行反復(fù)多次的分配，使原來只有微小的性質(zhì)差異產(chǎn)生很大的效果，而使不同組分得到分離。類型：氣-

25、固色譜法、氣-液色譜法24、抗生素的鑒別常用方法有哪三類？物理方法、化學(xué)方法、生物學(xué)方法25、怎樣進(jìn)行抗生素類藥物的鑒別？抗生素類藥物的鑒別包括抗生素及其衍生物的鑒別。前者是鑒別抗生素的種屬，后者是鑒別抗生素是屬何種鹽類、脂類、復(fù)合物等。常用的鑒別方法有物理方法、化學(xué)方法、生物學(xué)方法。物理方法有紫外光吸收圖譜、紅外光吸收圖譜、色譜分析及溶解度等?；瘜W(xué)方法常用的有功能基團(tuán)反應(yīng)、特異性的橙色反應(yīng)等。生物學(xué)方法利用特異的酶反應(yīng)，如用青霉素在一定條件下水解青霉素，使其喪失抗菌活性，以此鑒別青霉素。26、如何鑒別氨基糖昔類抗生素？（1）呈色反應(yīng)：苛三酮反應(yīng)、坂口反應(yīng)、糖類試劑反應(yīng)、埃爾松-摩根反應(yīng)、麥芽

26、酚反應(yīng)（2）薄層色譜27、測定青霉素中過敏原青霉曝嚏衍生物的原理是什么？氧化汞與青霉曝口坐衍生物形成penamaldate衍生物，H!生物在285nm處有吸收峰?？上韧ㄟ^凝膠過濾分離青梅曝陛衍生物，以磷酸鹽緩沖液位對照品，測定285nm處的吸收度，再與以青霉曝陛正丙胺為標(biāo)準(zhǔn)品所做的標(biāo)準(zhǔn)曲線作為對比，即可定量。28、抗生素的效價微生物測定方法有哪三種？管碟法測定生抗素的效價基本原理是什么？方法：稀釋法、比濁法、瓊脂擴散法原理：管碟法測定生抗素的效價基本原理：利用抗生素在攤布特定試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)擴散，形成含一定濃度的球型區(qū)，抑制了試驗菌的繁殖，通過透明瓊脂培養(yǎng)基，可觀察到透明的抑菌圈；并且在一

27、定的抗生素濃度范圍內(nèi)，對數(shù)濃度（劑量）與抑菌圈面積或直徑成正比。方法設(shè)計是在同樣條件下將已知效價的標(biāo)準(zhǔn)品溶液與未知效價的供試品溶液的劑量反應(yīng)（抑菌圈）進(jìn)行比較；當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品和供試品是屬于同一性質(zhì)的抗生素時，標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液，對一定試驗菌所得的劑量反應(yīng)曲線，在一定劑量范圍內(nèi)應(yīng)相互平行。根據(jù)以上原理，可設(shè)計為一劑量法、二劑量法及三劑量法等，從而可以較為準(zhǔn)確地測定供試品的效價。29、試述管碟法中影響抗生素抑菌圈形狀的因素及控制？1、稀釋抗生素用的緩沖液的ph值、鹽濃度的影響2、制備瓊脂培養(yǎng)基菌層，加菌時培養(yǎng)基溫度的影響3、測試用的器材洗凈度的影響4、雙碟培養(yǎng)溫度的影響5、其他操作的影響30、試述管

28、碟法中影響抗生素抑菌圈清晰度的因素及控制？1、實驗菌的特性與數(shù)量2、培養(yǎng)基的原材料品種與質(zhì)量3、調(diào)節(jié)培養(yǎng)基ph值或增加鹽濃度可使抑菌圈清晰4、不適當(dāng)延長雙碟的培養(yǎng)時間31、量反應(yīng)平行法測定生抗素的效價的實驗設(shè)計類型有哪些？隨機設(shè)計、隨機區(qū)組設(shè)計、拉平方設(shè)計、交叉設(shè)計32、簡述量反應(yīng)平行法實驗結(jié)果的可靠性分析？實驗結(jié)果的可靠性是以方差分析法測驗，測驗多組均數(shù)之間的差別是否顯著。抗生素效價測定中，存在有S（標(biāo)準(zhǔn)差）和T的差別，直線及平行線關(guān)系，劑量間和雙碟間的關(guān)系。通過統(tǒng)計以上各組均數(shù)間的方差，以試品間、回歸、劑間（列）、蝶間（行）等的方差與誤差項（S平方）的比值（稱F值），來確定各自差異的顯著性

29、程度和實驗結(jié)果的可靠性，因此F值（F值=該項方差/誤差項）可作為觀察實驗顯著性程度的一個指標(biāo)。計算出的F值，可通過F值表得知計算F值是處于P>0.05、P<0.05、還是P<0.01。一般差別顯著意義的表示法，常用：P<0.05,差別有顯著意義；P<0.05,差別有非常顯著意義；P>0.01,差別無顯著意義。33、抗生素類藥物的含量測定的物理化學(xué)方法有哪幾種類型？1、容量法：酸堿滴定法、碘量法2、光譜學(xué)測定法：旋光法、紫外分光光度法、比色法3、色譜測定法：洗脫法、直接測量法、生物自顯法4、高效液相色譜法34、容量分析法分為哪幾種類型？光譜分析法又分為哪幾種類

30、型？容量法：酸堿滴定法、碘量法光譜學(xué)測定法：旋光法、紫外分光光度法、比色法35、在抗生素的色譜分析中洗脫法哪三個步驟？答：斑點定位、洗脫、測量。36、維生素C的從哪三個方面進(jìn)行鑒別？答：利用還原性、利用糖類的性質(zhì)、紫外分光光度法。37、維生素C的含量測定方法有哪些？其基本原理分別是什么？答：1、容量分析法（碘量法，2,6-二氯口引味酚法，NBS滴定法，比色法，紫外紫外分光光度法）38、如何進(jìn)行的維生素C中鐵和銅鹽檢查？鐵鹽檢查：取本品5.0g兩份，分別置25ml量瓶中，一份中加入0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（B）,另一份中加入標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液（精密稱取硫酸鐵鏤863

31、mg置1000ml量瓶中，力口1mol/L硫酸溶液25ml,加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml,置100ml量瓶中，力口水稀釋至刻度，搖勻）1.0ml,加0.1mol/ml硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液（A）。照原子吸收分光光度法，在248.3nm波長處分別測定，應(yīng)符合規(guī)定。銅鹽檢查：取本品2.0g兩份，分別置25ml量瓶中，一份中加入0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（B）,另一份中加入標(biāo)準(zhǔn)銅溶液（精密稱取硫酸鐵鏤393mg，置1000ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml,置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻）1.0ml,加0.

32、1mol/ml硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液（A）。照原子吸收分光光度法，在324.8nm波長處分別測定，應(yīng)符合規(guī)定。39、如何判定純DNARNA?答：用紫外分光光度法測定A260/A280來判定。純DNA勺比值應(yīng)為1.8,純RNA為2.0。40、喋吟類藥物如何進(jìn)行鑒別？答：1、戊糖的鑒別2、喋吟的鑒別3、磷酸的的鑒別4、特征吸收光譜5、熔點鑒別41、喋吟類藥物的含量測定方法有哪兩種？答：1、紫外分光光度法2、先經(jīng)前處理（如層析或電泳得到樣品的斑點，然后剪下），再測定。42、氨基酸的生產(chǎn)制備方法有哪四種？答：水解法，發(fā)酵法，酶轉(zhuǎn)化法，化學(xué)合成法。43、氨基酸的.氨基和.竣基分別有

33、哪些主要反應(yīng)？答：a-氨基：氨基酸與亞硝酸反應(yīng)、氨基酸的氨基與酰基化試劑、煌基化反應(yīng)、與甲醛反應(yīng)a-竣基：成鹽、成酯、成酰氯、成酰胺44、氨基酸的a-氨基和a-竣基同時參與的反應(yīng)有哪些？答：與苛三酮反應(yīng)、成肽反應(yīng)45、氨基酸的R基團(tuán)特殊反應(yīng)有哪些？答：1、絡(luò)氨酸的酚基反應(yīng)2、組氨酸的側(cè)鏈咪陛基于重氮苯磺酸反應(yīng)形成紅棕色化合物3、精氨酸的側(cè)鏈月瓜基在硼酸鈉緩沖液中與1,2-環(huán)己二酮反應(yīng)，生成縮合物4、色氨酸的側(cè)鏈口引喋基在溫和條件下被N-澳代琥珀酰亞胺氧化5、半胱氨酸的疏基能打開乙撐亞胺的環(huán)，生成的側(cè)鏈帶正電荷。46、怎樣進(jìn)行AA的鑒別？答：旋光性、紅外光譜、紫外吸收、紙層析、苛三酮反應(yīng)47、從

34、哪幾個方面鑒別蛋白質(zhì)？答：顏色反應(yīng)、福林酚反應(yīng)或雙縮月尿反應(yīng)、紫外吸收。48、苛三酮反應(yīng)測AA有哪三種方法？答：Yem滋、Rosen法、Hydrindantin法。49、AA的含量測定有哪五種方法？其中非水滴定法的原理和種類分別是什么？答：苛三酮反應(yīng)法、甲醛滴定法、非水滴定法、電泳法、色譜法、原理：即溶劑的區(qū)分效應(yīng)，本來在水溶液中不能滴定的弱酸或弱堿，如果選擇適當(dāng)?shù)娜軇┦蛊鋸姸仍黾樱瑒t可以順利滴定氨基酸有氨基和竣基，在水中呈中性，在冰醋酸中就顯出堿性，因此可用高氯酸等強酸進(jìn)行滴定。種類：直接滴定法、回滴法。50、胰島素的效價測定有哪三種方法？答：兔血糖法、小鼠血糖下降法，小鼠驚厥法51、簡述酶的特性。答：1、酶是高效催化劑2、酶對底物的結(jié)構(gòu)具有嚴(yán)格的選擇性3、酶催化反應(yīng)的反應(yīng)條件溫和4、酶的催化活性在生物體內(nèi)受到多種因素的調(diào)節(jié)。52、酶與底物復(fù)合物促進(jìn)反應(yīng)速度的原因是什么？答：1、定向作用與底物濃縮2、酶使底物分子變形3、酸堿催化4、共價催化53、米氏方程是什么？其中Ks與Km的意義分別是什么？求取Vn和Km的方法有哪兩種方法？答:即二Ks反目值稱為米氏常數(shù)。方法：Lineweaver-Burk 作圖法，Langmuir作par54、影響酶催化速度的因素有哪些？答：底物濃度、酶濃度、抑制劑、激活劑、溫度、pH值和離子強度55、酶除蛋白質(zhì)的鑒別常用方法以外，還有哪三種鑒別方法