生化實(shí)驗(yàn)_蛋白定量分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、蛋白定量分析實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)一雙縮月尿法測(cè)定蛋白質(zhì)含量 一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆针p縮月尿法定量測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。二.實(shí)驗(yàn)原理在堿性溶液中，具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物 （如蛋白質(zhì)）可與Cu2+ 結(jié)合生成紫色化合物（雙縮月尿反應(yīng)），顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，故可用 比色法測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度。在一定條件下，未知樣品的溶液與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液 同時(shí)反應(yīng)，并于520nm下比色，可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出未知樣品 的蛋白質(zhì)濃度。三.實(shí)驗(yàn)儀器及試劑容量瓶、試管、試管架、恒溫水浴槽、吸量管、分光光度計(jì)、比色皿試劑：標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白溶液10mg/ml雙縮月尿試劑：溶解2.5g CuSO4 5H2O于100

2、ml水中，加熱溶解，取灑石酸鈉10g、碘化鉀5g,溶于500ml水中，再加5mol/L NaOH溶液 300ml混合，倒入硫酸銅溶液，加水至1000ml小鼠肝臟蛋白原漿四.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（1）取小試管7支，編號(hào)，按下表注入溶液試劑（ml）管號(hào)1234567標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液0.10.30.50.70.9一原漿0.1生理鹽水0.90.70.50.30.11.00.9雙縮月尿試劑4.04.04.04.04.04.04.0(2)混勻后,于37c水浴中保溫15min ,在520nm波長(zhǎng)下比色,以第6管調(diào)零點(diǎn)，測(cè)得各管的吸光度值為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)的克數(shù)為橫坐標(biāo)，繪成曲線。(3)按表中第七管的數(shù)據(jù)加入溶液，在37 c

3、水浴中放置15min ,測(cè)其吸光度，根據(jù)吸光度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線即得出每100ml小鼠肝臟蛋白原漿溶液中蛋白質(zhì)的克數(shù)。五.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄及結(jié)果分析管號(hào)123457吸光度0.0690.2380.3900.5280.6590.107繪制曲線如下：10.659y = 0.0741x + 0.0051 ,0.5280.50.3900.4由圖可知 ， 當(dāng)吸光度為 0.107 時(shí)， 相對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)克數(shù)為 1.38 mg ， 則100ml 小鼠肝臟蛋白原漿液中蛋白質(zhì)克數(shù)為 1.38 g 。實(shí)驗(yàn)二 考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆湛捡R斯亮藍(lán)法定量測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理和方法 ； 熟悉紫外分光光度計(jì)的使用 。二

4、 實(shí)驗(yàn)原理考馬斯亮藍(lán)在游離狀態(tài)下呈紅色當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色在一定白質(zhì)濃度范圍內(nèi),結(jié)合物在595 nm波長(zhǎng)下有最大吸收峰,測(cè)其光的吸收量即可得結(jié)合蛋白質(zhì)的量。三.實(shí)驗(yàn)儀器及試劑儀器：分光光度計(jì)，試管，吸量管，比色皿試劑：考馬斯亮藍(lán)試劑：考馬斯亮藍(lán)G-250 100mg溶于50 ml 95%乙醇中,加入100ml 85%磷酸,用蒸儲(chǔ)水稀釋至1000 ml。標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液500卜g/ml50倍稀釋后的小鼠肝臟蛋白原漿四.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)取試管三支，按下表操作：試劑(ml)空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣品管生理鹽水0.1-標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液-0.1-樣品-0.1考馬斯亮藍(lán)試劑5.05.05.0(2)混勻，室溫放置5min

5、 ,在波長(zhǎng)595nm處調(diào)零，測(cè)定各管吸光度值五.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄及結(jié)果分析測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)管與樣品管的吸光度分別為0.418 , 0.222則 樣品中蛋白質(zhì)的含量 pg/ml=(0.222/0.418) X 500=265.6仙g/ml則 稀釋前小鼠肝臟蛋白原4中蛋白質(zhì)的含量為 13.3mg/ml。實(shí)驗(yàn)三紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆兆贤馕辗ǘ繙y(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理和方法；熟悉紫外分光光度計(jì)的使用。二.實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)分子中含有酪氨酸、色氨酸，使蛋白質(zhì)具有吸收紫外線的性質(zhì)，吸 收高峰在280nm波長(zhǎng)處。在此波長(zhǎng)范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值與其含量呈 正比關(guān)系，可用作定量測(cè)定。三.實(shí)驗(yàn)儀器與試

6、劑試劑：標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液1mg/ml30倍稀釋后的小鼠肝臟蛋白原漿儀器：紫外分光光度計(jì)，吸量管，試管，比色皿四.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容280nm的光吸收法(1)取試管7支，按下表操作：試劑(ml)管號(hào)1234567標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液0.51.01.52.02.5-原漿1.0生理鹽水3.53.02.52.01.54.03.0(2)混勻后，在石英比色皿中,用紫外分光光度計(jì),以第6管調(diào)零，在280nm下測(cè)定各管吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 五.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄及結(jié)果分析123457吸光度0.1490.2670.3230.4760.5700.236蛋白質(zhì)濃度mg/ml繪制曲線如下：由圖可知，當(dāng)吸光度為0.236時(shí)，相對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)濃度為0.243 mg/ml ,則6,5/,32 o o o o O 度