細(xì)胞毒篩選方法

1、方MTTW1,原理：MTT被活細(xì)胞線粒體水解酶還原為不溶性FMZ,而死細(xì)胞沒(méi)有這種能力。沉積在活細(xì)胞內(nèi)的FMZ用DMSO溶解后，溶液顏色與活細(xì)胞數(shù)量成正比。妨2,方法：將稀釋后的細(xì)胞懸液接種于96孔板上，每孔加80dL細(xì)胞懸液，在37°C、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1天后每孔加入20dL待測(cè)樣品，繼續(xù)培養(yǎng)1天后每孔加入5mg/mLMTT20L,在37°C培養(yǎng)4小時(shí)，每孔加入DMSO100L,15分鐘后用酶標(biāo)儀在595NM波長(zhǎng)下測(cè)各孔OD值，計(jì)算得出樣品濃度IC50以及發(fā)酵液稀釋倍數(shù)ID50。輻MTT0.5g溶解在100mLPBS溶液，終濃度為5mg/mL蔗SRB芾1,原理：

2、SRB是一種蛋白質(zhì)結(jié)合染料，能使使活細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)染色。其顏色變化與活細(xì)胞蛋白質(zhì)成正比。莆2,方法：將稀釋后的細(xì)胞懸液接種于96孔板上，每孔加80dL細(xì)胞懸液，在37°C、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1天后每孔加入20dL待測(cè)樣品。繼續(xù)培養(yǎng)2天，終止培養(yǎng)，每孔加10%TCA（三氯乙酸）100L,4c條件固定lh。用蒸儲(chǔ)水沖洗5遍，自然晾干后每孔加入4mg/mLSRB溶液，室溫下染色15min,棄上清，用1%乙酸沖洗5遍以去除非特異性結(jié)合的染料。每孔加入100L10mMTris溶液，在492NM波長(zhǎng)下測(cè)OD值,并計(jì)算抑制率。肄SRB溶解在1%乙酸，終濃度為4mg/mL蔓染料排斥法妍1,原

3、理：細(xì)胞在損傷或死亡時(shí)，某些染料能穿透變性的細(xì)胞膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色。而活細(xì)胞能阻止此類染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。以此鑒別活細(xì)胞和死細(xì)胞。蝴2,方法：將稀釋后的細(xì)胞懸液接種于96孔板上，每孔加80dL細(xì)胞懸液，在37°C、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1天后每孔加入20dL待測(cè)樣品，繼續(xù)培養(yǎng)2天后消化，用0.4%（w/v）臺(tái)盼藍(lán)染液（終濃度為0.04%）染色3min,滴在計(jì)數(shù)板上，人工計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞和計(jì)算抑制率。螃抑制微管蛋白聚合的化合物篩選方法蔓1,原理：微管骨架蛋白有一個(gè)很重要的特性，即在溫度37C,蛋白濃度大于10M,聿PH值為6.9左右，有Mg2+、GTP的情況下，微管蛋

4、白能夠在體外自組裝成絲狀微管，此過(guò)程可導(dǎo)致體系的吸光度變化，用此指標(biāo)可檢測(cè)微管聚合是否受到抑制。菱2,方法：96孔板中加入5dl的待測(cè)樣品和5“的10%DMSO為溶劑對(duì)照，50“的測(cè)試用緩沖液，37c孵育5min。350nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，連續(xù)30分鐘記錄OD（每2分鐘一次），實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取3次實(shí)驗(yàn)的平均值作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果。蒂試劑:PIPES;氯化鎂；EGTA;丙三醇；GTP;高純度微管蛋白；DMSO。測(cè)試用緩沖液：80mMPEPIS,2mMMgCl2,o.5mMEGTA,20%甘油，l科MGTP,l.5mg/ml99%微管蛋白，1%DMSO（pH為6.9）。4保存僅供個(gè)人用于學(xué)習(xí)、研究；不得用于商業(yè)用途Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse.Nurfurdenpers?nlichenfurStudien,Forschung,zukommerziellenZweckenverwendetwerden.Pourl'etudeetlarechercheuniquementddesfinspersonnelles;pasddesfinscommerciales.tojibkoAJiajiiOAeakpTOpwenojib3y肛3i