分子生物學(xué)重點(diǎn)及試題

1、一、名詞解釋：轉(zhuǎn)錄: 是指以DNA為模板，在依賴于DNA的RNA聚和酶催化下，以4中NTP（ATP、CTP、GTP和UTP）為原料，合成RNA的過程。轉(zhuǎn)錄單位 (transcription unit): 從啟動子到終止子的序列 (轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn))。模板鏈（template strand）: 又稱反義鏈, 指與轉(zhuǎn)錄物互補(bǔ)的DNA鏈（極性方向35）。編碼鏈: 又稱有義鏈, 指不作模板的DNA單鏈（極性方向53）。hnRNA：核內(nèi)不均一RNA，是存在于真核細(xì)胞核中的不穩(wěn)定，大小不均一的一組高分子RNA的總稱。轉(zhuǎn)錄的極性：轉(zhuǎn)錄的效率與轉(zhuǎn)錄單位的位置有關(guān)。轉(zhuǎn)錄起始：RNA聚合酶與DNA轉(zhuǎn)錄啟動子結(jié)合形成有功

2、能的轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的過程。啟動子（Promoters）：指DNA分子上被RNA聚合酶、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子等識別并結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的區(qū)域。核心啟動子：RNA聚合酶能夠直接識別并結(jié)合的啟動子。RNA聚合酶：是催化以DNA為模板（template）、三磷酸核糖核苷為底物、通過磷酸二酯鍵而聚合的合成RNA的酶。C端結(jié)構(gòu)域(CTD)：RNApol的大亞基中有 C 末端結(jié)構(gòu)域。CTD中含一保守氨基酸序列的多個重復(fù)TyrSerpProThrpSerpProSerp C端重復(fù)七肽。沉默子（silencer）：沉默子能夠同反式因子結(jié)合從而阻斷增強(qiáng)子及反式激活因子作用并最終抑制該基因的轉(zhuǎn)錄活性的真核基因中的一種特

3、殊的序列。增強(qiáng)子(enhancer)：是一類正調(diào)控元件，能夠從轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的上游或下游數(shù)千個堿基處來激活轉(zhuǎn)錄。絕緣子（insulater）：阻斷增強(qiáng)子或沉默子的DNA序列。上游：轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游的序列，是調(diào)控區(qū)，與轉(zhuǎn)錄的方向相反。下游：轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)下游的區(qū)域，是編碼區(qū)，與轉(zhuǎn)錄的方向一致。轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)：1位點(diǎn)，RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，起始NTP多為ATP或GTP。轉(zhuǎn)錄泡：在轉(zhuǎn)錄時RNA聚合酶（RNAP）與DNA模板結(jié)合，會形成一個泡狀結(jié)構(gòu)，成為轉(zhuǎn)錄泡。轉(zhuǎn)錄壓制：指轉(zhuǎn)錄因子的過度表達(dá)，抑制受特異性調(diào)節(jié)基因的基本轉(zhuǎn)錄裝置，引起轉(zhuǎn)錄抑制。上游激活序列(UAS)：TATA框上游的保守序列稱為上游啟動子元件或上游

4、激活序列。鋅指結(jié)構(gòu)：在蛋白質(zhì)中，一小段保守的氨基酸序列（約23個氨基酸殘基）結(jié)合一個鋅離子而形成的一個相對獨(dú)立的功能域。終止子（terminator）：在轉(zhuǎn)錄的過程中，提供轉(zhuǎn)錄終止信號的RNA序列?？菇K止子：有的蛋白因子能作用于終止序列，減弱或取消終止子的作用，稱為抗終止作用，這種蛋白因子就稱為抗終止因子。/引起抗終止作用的蛋白質(zhì)。RNA加工：指新合成的前體RNA分子所經(jīng)歷的結(jié)構(gòu)和化學(xué)方面的修飾與成熟的過程。帽子結(jié)構(gòu)：在RNA鏈長度超過20-30nt之前，其5端經(jīng)化學(xué)修飾被加上了一個7-甲基鳥苷殘基，這種5末端的修飾稱為帽子結(jié)構(gòu)poly（A）尾巴：核內(nèi)不均一 RNA 和 mRNA 在其3-末端

5、的一個獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，由 AMP 殘基組成的長鏈。多聚腺苷化（polyadenylation）：添加 poly（A）到 RNA 分子上的過程。SD 序列：原核生物起始密碼子AUG上游7-12個核苷酸處一段可以與16SrRNA的3端反向互補(bǔ)保守區(qū)。選擇性剪接：一個hnRNA（pre-mRNA）轉(zhuǎn)錄本，通過外顯子的剪接、重組，產(chǎn)生多個成熟的mRNA的機(jī)制。組成性剪接：一個基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物通過剪接只能產(chǎn)生一種成熟的mRNA.它和選擇型剪接的區(qū)別是后者可以產(chǎn)生多種成熟mRNA。剪接體：在剪接過程中形成的剪接復(fù)合物稱為剪接體,剪接體的主要組成是蛋白質(zhì)和小分子的核RNA(snRNA)。復(fù)合物的沉降系數(shù)約為506

6、0S,它是在剪接過程的各個階段隨著snRNA的加入而形成的。RNA編輯：指由RNA水平的核苷酸改變所引起的密碼子發(fā)生變化的一種預(yù)定修飾，一種RNA編輯是以另一RNA為模板來修飾mRNA前體。內(nèi)含子：斷裂基因的非編碼區(qū)，可被轉(zhuǎn)錄，但在mRNA加工過程中被剪切掉。外顯子：斷裂基因中的編碼序列，在剪接后仍保存下來，并可在蛋白質(zhì)生物合成過程中被表達(dá)為蛋白質(zhì)。斷裂基因：真核生物結(jié)構(gòu)基因，由若干個編碼序列和非編碼序列互相間隔開但又連續(xù)鑲嵌而成，去除非編碼序列再連接后，可翻譯出由連續(xù)氨基酸組成的完整蛋白質(zhì)。啟動子的清理：當(dāng)開放的啟動子復(fù)合物足夠穩(wěn)定是，RNA聚合酶離開啟動子，釋放出亞基，核心酶空出啟動子位點(diǎn)

7、以進(jìn)行下一次轉(zhuǎn)錄起始。指導(dǎo)RNA：一類小RNA分子，其部分序列可與被編輯的RNA序列互補(bǔ)。二、 3類特異性轉(zhuǎn)錄因子：酸性功能域、富含Gln功能域、富含Pro功能域以3種方式發(fā)揮作用：改變DNA構(gòu)象 影響基本轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體裝置 影響其他調(diào)節(jié)因子的活性 RNA轉(zhuǎn)錄3個過程（起始、延伸、終止） 真核生物中有三種不同的RNA聚合酶，因此也有三種不同的啟動子：RNA pol啟動子、RNA pol啟動子、RNA pol啟動子。 說明RNApol全酶各個亞基的主要功能。（2） 亞基：轉(zhuǎn)錄起始時與核心酶結(jié)合成全酶，使全酶能識別啟動子的Sextama Box(35區(qū)，R位點(diǎn))、Pribnow Box（-10區(qū)，

8、B位點(diǎn)）,選擇并緊密與模板鏈發(fā)生特異性結(jié)合。不同的因子與核心酶結(jié)合，可識別不同的啟動子。全酶完成轉(zhuǎn)錄發(fā)動后，亞基離開全酶。可重復(fù)使用。（2）亞基：核心酶的組建因子 ，促使RNApol 與DNA模板鏈結(jié)合前端因子使模板DNA雙鏈解鏈為單鏈尾端因子使解鏈的單鏈DNA重新聚合為雙鏈（3）亞基：模板鏈結(jié)合位點(diǎn)，包含RNA/DNA雜交鏈結(jié)合位點(diǎn) 完成NMP之間的磷酸酯鍵的連接 編輯功能（排斥與模板鏈不互補(bǔ)的堿基） 與Rho （）因子競爭RNA 3end 構(gòu)成全酶后，因子含有兩個位點(diǎn)： 起始位點(diǎn)I（initiation site. Rifs）:對利福平敏感，該位點(diǎn)專一性地結(jié)合ATP或者GTP （需要高濃度

9、的ATP或GTP） 延伸位點(diǎn)E（elongation site RifR）:對利福平不敏感，對NTP沒有專一性的選擇，從而保證了RNA鏈的延伸 （4） 亞基：促進(jìn)RNA聚合酶與非模板鏈結(jié)合。 RNA聚合酶核心酶4個功能位點(diǎn)：非模板鏈結(jié)合位點(diǎn)、模板鏈結(jié)合位點(diǎn)、雙鏈DNA解旋位點(diǎn)、雙鏈DNA重繞位點(diǎn) 原核生物啟動子結(jié)構(gòu)及各部分功能。答：啟動子由兩個部分組成：上游部分：上游控制因子（UCE）：CAP-cAMP的結(jié)合位點(diǎn) CAP：降解物基因活化蛋白 cAMP：環(huán)腺苷酸（cAMP）的受體蛋白下游部分：核心啟動子（core promoter） ：35 區(qū)（ RNApol識別位點(diǎn)，R site） 、 10區(qū)

10、（ RNApol結(jié)合位點(diǎn)，B site）、轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)（+1位點(diǎn)，I site） Sextama 盒：-35區(qū)序列（TTGACA），位于復(fù)制起點(diǎn)上游35區(qū)處的6核苷酸序列，能直接被RNA聚合酶全酶中的因子識別并結(jié)合。 Pribnow 盒：-10區(qū)序列（TATAAT），位于-10區(qū)處的6核苷酸序列，能使RNA聚合酶識別DNA雙鏈中的模板鏈，確保轉(zhuǎn)錄的鏈和方向無誤。 真核生物啟動子 RNApol：負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄rRNA順式作用元件：UPE（上游啟動子元件）、Core promoter（核心啟動子元件） 反式作用因子：UBF（上游啟動子元件結(jié)合因子）、SL1（選擇性因子） RNApol：負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄hnRNA（m

11、RNA 前體，核不均一RNA）、部分snRNA（核內(nèi)小分子 RNA ）順式作用元件：+1區(qū)、-30區(qū)、-70區(qū)、-90區(qū)（Cap site、TATA-box、CAAT-box、GC island）反式作用因子：TFA、TFB、TFD、TFE、TFF、TFH RNApol：負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄5S rRNA、tRNA的前體、Alu序列和部分 snRNA 順式作用元件：內(nèi)部啟動子（A box、B box）內(nèi)部啟動子（A box、B box）反式作用因子：內(nèi)部啟動子（TFC、TFB）內(nèi)部啟動子（TFA、TFC、TFB）（TFC：輔助TFB TFB：定位因子，結(jié)合到A-box上游）在 UBF 與DNA結(jié)合后，SL

12、1方可結(jié)合上來，它類似原核生物RNA聚合酶中的因子，確保RNA聚合酶正確定位在起始點(diǎn)上。UBF 與RNA聚合酶相互作用可識別不同來源的模板，但SL1 具有種屬特異性。TFA ： TFA 在一行上有9個鋅指，他們會插入到5S rRNA 基因內(nèi)部啟動子的每一面的大溝中，這就使特異的氨基酸能夠與特異的堿基接觸并相互作用，形成致密的 protein-DNA 復(fù)合物。啟動子上游元件（USE）：GC島（GGGCGG）:嚴(yán)格控制RNA的轉(zhuǎn)錄啟動CAAT盒（GGC(T)CAATCT）：決定啟動子起始轉(zhuǎn)錄的效率，增強(qiáng)啟動子的強(qiáng)度 試比較原核和真核細(xì)胞的mRNA的異同.原核生物原核生物mRNA 的半衰期短。許多原

13、核生物mRNA以多順反子形式存在。其5端無帽子結(jié)構(gòu)，3端沒有或只有較短的poly(A)。 原核細(xì)胞mRNA（包括病毒）有時可以編碼幾個多肽。 原核生物常以AUG（有時GUG，甚至UUG）作為起始密碼子真核生物：其5端存在帽子結(jié)構(gòu)。 絕大多數(shù)真核生物mRNA具有poly(A)尾巴。 其RNA最多只能編碼一個多肽。 真核生物幾乎永遠(yuǎn)以AUG為起始密碼子。 剪接分支位點(diǎn)核苷酸是腺嘌呤核糖核苷酸 RNA鏈合成的特點(diǎn)：1.RNA是按53方向合成2.以DNA雙鏈中的反義鏈（模板鏈）為模板3.以4種三磷酸核苷（NTPs）為原料4.根據(jù)堿基配對原則5.各核苷酸間通過形成磷酸二酯鍵相連6.不需要引物7.合成的R

14、NA帶有于DNA編碼鏈相同的序列 真核生物RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄起始TFD因子對TATA盒的識別，TFA與TFD和其中的TBP結(jié)合，增強(qiáng)并穩(wěn)定TFD與TATA盒的結(jié)合，形成“前轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體（TIC）”（TFD因子:TATA盒結(jié)合蛋白TBP、至少8個TBP輔助因子TAF）隨后TFB作為TFD和RNA聚合酶的橋梁因子，富集高濃度RNA聚合酶到啟動子周圍，TFF和TFH使DNA解螺旋后有助于RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄與移動。形成“基本轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體（TIC）”TFH的激酶活性使RBPA型的CTD發(fā)生高頻的磷酸化，轉(zhuǎn)換為O型的高轉(zhuǎn)錄活性的RNA聚合酶。形成“完全的轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體（TIC）”RNA聚合酶在啟動轉(zhuǎn)錄前

15、清理轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體后，僅與TFF因子一起完成轉(zhuǎn)錄的延伸（TFD：對增強(qiáng)子和沉默子作出反應(yīng)） 原核生物與真核生物啟動子的主要差別？原核生物 TTGACA - TATAAT-起始位點(diǎn) -35 -10真核生物 增強(qiáng)子-GC -CAAT-TATAA5mGpp起始位點(diǎn) -110 -70 -25 增強(qiáng)子的組織和細(xì)胞學(xué)表達(dá)特性：（1） 遠(yuǎn)距離作用（2） 增強(qiáng)子的位置無需固定，可在受其調(diào)控基因的上游、下游、或內(nèi)部。（3） 一個增強(qiáng)子可以包含一個以上能夠被轉(zhuǎn)錄激活子識別的元件。 沉默子：可以在遠(yuǎn)距離調(diào)控轉(zhuǎn)錄 （至少 1 kb 以外）?？梢允谷旧|(zhì)卷曲成濃縮的難以接近的非活性的形式。與組蛋白的去乙酰化有

16、關(guān)。 沉默子是一種通過延伸DNA的異染色質(zhì)化而影響染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，形成高密度的異染色質(zhì)，從而關(guān)閉轉(zhuǎn)錄的DNA 元件。 絕緣子：是一段具有特化染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的區(qū)域，能夠阻斷增強(qiáng)子和沉默子對靶基因的作用效應(yīng)。當(dāng)絕緣子位于增強(qiáng)子和啟動子之間時，可以阻斷增強(qiáng)子上的激活子與下游基本轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的結(jié)合，從而阻止增強(qiáng)子對啟動子的表達(dá)效應(yīng)。當(dāng)絕緣子位于沉默子和啟動子之間時，可以提供一道屏障墻，阻止沉默子的異染色質(zhì)化區(qū)域的延伸，從而阻斷沉默子對下游靶基因的失活效應(yīng)。 終止子：1） 一種是依賴因子(factor)的轉(zhuǎn)錄終止子2）一種是不依賴因子的轉(zhuǎn)錄終止子 帽子結(jié)構(gòu)的功能保護(hù)mRNA，防止降解。將mRNA轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞核。增強(qiáng)

17、mRNA的可譯性。帽子結(jié)構(gòu)是pre-mRNA正確剪切所必需。與某些RNA病毒的正鏈RNA的合成有關(guān)，搶奪宿主mRNA的帽子5端完整的帽子結(jié)構(gòu)將有利于第一個內(nèi)含子的剪切。 poly（A）尾巴的作用：穩(wěn)定mRNA，防止降解。促進(jìn)mRNA的翻譯。在拼接和mRNA向核外運(yùn)輸?shù)倪^程中發(fā)揮作用。 多腺苷酸化的意義：參與新生RNA從DNA/RNA/RNA聚合酶三聯(lián)體復(fù)合物中的釋放與轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)既能促進(jìn)轉(zhuǎn)錄終止，也能防止mRNA“早熟”參與前體的3端內(nèi)含子的去除穩(wěn)定mRNA影響翻譯效率 mRNA的降解： mRNA作為合成蛋白質(zhì)的模板，在完成任務(wù)后，就到達(dá)細(xì)胞的一定部位死亡。細(xì)胞對于mRNA的命運(yùn)具有空間控制作用。

18、過程：真核細(xì)胞中mRNA降解的前奏是先去掉polyA尾，然后觸發(fā)了5帽子的去除，最后導(dǎo)致mRNA被一種外切酶從53降解。Ccr4p是一種去掉mRNA的polyA尾巴的酶，而去帽酶則位于P小體內(nèi) 第一類內(nèi)含子剪接的機(jī)制：剪接活性由35s rRNA自身催化（auto-catalysis）完成，剪接過程不需任何酶類與能量的參與。剪接反應(yīng)只要求鳥苷酸的3-OH。一處的磷酸酯鍵轉(zhuǎn)化為另一處新的磷酸酯鍵，不需以分解高能前體物（NTP）為代價而形成新的磷酸酯鍵，破壞的磷酸酯鍵與形成的磷酸酯鍵總是相等。這類內(nèi)含子的剪接包括三次轉(zhuǎn)酯反應(yīng) 第一次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)由游離的G發(fā)動，G的3-OH攻擊內(nèi)含子的5末端，產(chǎn)生G-內(nèi)含

19、子和外顯子游離的3-OH末端。 第二次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)由上一個外顯子的3-OH攻擊另一個外顯子，并與之相連，同時釋放線狀的內(nèi)含子。游離的線狀內(nèi)含子發(fā)生第三次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)而形成環(huán)狀。 RNA編輯（RNA Editing）的生物學(xué)意義形成/刪除AUG, UAA, UAG, UGA改變codon信息擴(kuò)大編碼的遺傳信息量mRNA editing 較大程度地改變了DNA的遺傳信息，使該基因的DNA序列僅是一串簡略意義模糊的序列（abbreviated ）或稱為隱秘基因、模糊基因 真核生物mRNA5端帽子結(jié)構(gòu)與3尾巴結(jié)構(gòu)的主要功能5端“帽子”結(jié)構(gòu)的功能：穩(wěn)定mRNA的一級結(jié)構(gòu)，防止mRNA被5-核酸外切酶所水解；為m

20、RNA識別核糖體提供信號，使 mRNA 較快地與核糖體結(jié)合，以提高mRNA對蛋白質(zhì)的合成效率。3端polyA尾巴結(jié)構(gòu)的功能：有助于mRNA從細(xì)胞核向細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移；與保護(hù)mRNA的穩(wěn)定性和維持mRNA的二級結(jié)構(gòu)有關(guān)；對蛋白質(zhì)的合成速度有影響。三、 1、轉(zhuǎn)錄是以DNA一條鏈為模板的RNA的酶促合成。我們把模板鏈稱為有意鏈。2、數(shù)個生化反應(yīng)可由核酶催化，這種具有催化功能的RNA可以剪切自身或其它的RNA分子，或者完成連接或自身剪接反應(yīng)。3.hnRNA與mRNA之間的差別主要有兩點(diǎn)大小、 翻譯功能。4.mRNA在轉(zhuǎn)錄開始后不久就與核糖體結(jié)合，形成NAP顆粒這種顆粒排列于mRNA分子上，呈串珠狀，就像核小

21、體一樣。5、原始轉(zhuǎn)錄物的一些序列被 修飾 ， 叫做RNA編輯。6. 真核生物mRNA的5'-帽子結(jié)構(gòu)是m7GpppXpYp, 其3'末端有PolyA結(jié)構(gòu)。7. 原核生物DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶的核心酶的組成是亞基、亞基、亞基、亞基。8. 真核生物RNA聚合酶III負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄tRNA、5S rRNA、Alu序列和部分snRNA 。9. 在轉(zhuǎn)錄過程中RNA聚合酶全酶的因子負(fù)責(zé)識別啟動子的Sextama Box(35區(qū)),并通過與模板鏈結(jié)合,核心酶負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄起始和延伸。10.將TATA區(qū)上游的保守序列稱為CAAT盒 。11.真核生物的加工過程中，5端加上帽子結(jié)構(gòu)，在3端加上多腺苷酸尾巴，

22、后者由RNA末端腺苷轉(zhuǎn)移酶催化。如果轉(zhuǎn)錄的基因不連續(xù)，那么， 一定要被切除，并通過剪接，將外顯子連在一起。12.每個鋅指的C-末端形成一個-螺旋，在DNA大溝的轉(zhuǎn)折處與DNA結(jié)合。有鋅參與時才具備轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性。13.GAL4 蛋白是參與半乳糖代謝的一套基因表達(dá)的正調(diào)節(jié)因子。GAL4能夠識別這些基因上游激活序列。14.LexA 蛋白是原核生物的阻遏物，在大腸桿菌細(xì)胞中，結(jié)合在lexA 操縱子上，能夠阻止下游基因的表達(dá)。 LexA 蛋白無轉(zhuǎn)錄激活域，因為LexA 蛋白無轉(zhuǎn)錄激活功能。15.激活域的功能是將RNA 聚合酶募集到啟動子處，讓結(jié)構(gòu)基因開始表達(dá)。16.未甲基化帽子的底物在剪切時，可以被S-

23、腺苷酸-同型半胱氨酸抑制，此物質(zhì)也是帽子甲基化過程的抑制劑。17.AAUAAA 基序在pre-mRNA 多腺苷化位點(diǎn)上游 20 nt 處。多聚腺苷化的能力取決于一致序列的保守性。18.多聚腺苷酸化涉及前體mRNA的切割和在切割位點(diǎn)的多聚腺苷酸化兩個過程。19.16S rRNA的3端即非常保守，又高度自我互補(bǔ)，能形成發(fā)卡式結(jié)構(gòu)。這正好說明了序列配對是動態(tài)的，可變的。20. L19 是剪切下來的內(nèi)含子，L19 可以促進(jìn)RNA 重排，作為 RNA 異構(gòu)酶； 具有酶的基本共性 21.在gRNA 的5-末端，錨定序列能夠引導(dǎo)gRNA到達(dá)mRNA將被編輯的區(qū)域。四、 簡述轉(zhuǎn)錄的基本過程?答：模板識別：RN

24、A聚合酶與DNA雙鏈啟動子相互作用并與之相結(jié)合。 轉(zhuǎn)錄起始 轉(zhuǎn)錄延伸：RNA聚合酶釋放因子離開啟動子，核心酶沿模板DNA鏈移動并使新生RNA鏈不斷伸長。（TFS 刺激延伸；TFS 負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的矯正） 轉(zhuǎn)錄終止：當(dāng)RNA鏈延伸到轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)時，RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯鍵，RNA-DNA雜合物分離，轉(zhuǎn)錄泡瓦解，DNA恢復(fù)成雙鏈狀態(tài)，而RNA聚合酶和RNA鏈都被從模板上釋放出來。 說明poly(A)在分子生物學(xué)實驗中的應(yīng)用價值。a) 可將 oligo (dT) 與載體相連，從總體RNA中分離純化mRNAb) 用寡聚dT（oligo (dT)）為引物，反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA Euk.mRNA帽

25、子的種類。帽子0（Cap-0） m7GpppXpYp-（共有）m7G N7甲基鳥苷帽子1（Cap-1） m7GpppXmpYp-第一個核苷酸的 2-O 位上產(chǎn)生甲基化 （A N6 位甲基化）帽子2 （Cap-2） m7GpppXmpYmp第二個核苷酸的 2-O 位上產(chǎn)生甲基化（A、G、C、U） 真核生物mRNA前體內(nèi)含子剪接的信號序列特征是什么？mRNA前體中內(nèi)含子的兩端邊界存在共同的序列，這些序列可能是產(chǎn)生mRNA前體剪接的信號。多數(shù)細(xì)胞核mRNA前體中內(nèi)含子的5邊界序列為GU，3邊界為AG。 I型內(nèi)含子發(fā)生改變后，可以產(chǎn)生其他酶的活性嗎?如果可以，是哪些活性?這意味著I型內(nèi)含子的催化中心有

26、什么特點(diǎn)？ 答：可以。這些活性包括：RNA聚合酶、內(nèi)切核酸酶、磷酸酶、連接酶的活性。將I 型內(nèi)含子轉(zhuǎn)變成這些酶的能力表明它能結(jié)合于RNA的糖磷酸骨架并能催化在它前后的幾個不同反應(yīng)。 轉(zhuǎn)錄涉及模板鏈和編碼鏈的分離，解釋在轉(zhuǎn)錄中單鏈DNA是怎樣被保護(hù)的。答： 轉(zhuǎn)錄過程中控板與編碼鏈分離時，聚合酶覆蓋了整個轉(zhuǎn)錄泡從解旋位點(diǎn)到螺旋重新形成位點(diǎn)，因此單鏈的DNA被保護(hù)起來。 哪三個序列對原核生物mRNA的精確轉(zhuǎn)錄是必不可少的? 答： -35(RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn))、-10(RNA聚合酶起始位點(diǎn))啟動子序列和終止子； 試證明一個基因中只有一條DNA鏈作為模板被轉(zhuǎn)錄。 答：若基因兩條鏈均被轉(zhuǎn)錄，而RNA聚合酶只能以5 3方向合成，所以兩條DNA鏈會以相反方向轉(zhuǎn)錄。兩信使攜帶著彼此互補(bǔ)的反向核苷酸序列，編碼不同的多肽。信使只可以與一條DNA鏈(重鏈)互補(bǔ)，因而DNA雙鏈中只有