培養(yǎng)基配制liangrq2011217

1、MS 培養(yǎng)基的成分及配制方法表1：MS 培養(yǎng)基成分名稱分子式分子量組成（mg/L）無(wú)機(jī)物·大量元素硝酸銨NH4NO31650硝酸鉀KNO31900二水氯化鈣CaCl2·2H2O440七水氯化鎂MgCl2·7H2O370磷酸二氫鉀KH2PO4170無(wú)機(jī)物·微量元素碘化鉀KI0.83硼酸H3BO36.20四水硫酸錳MnSO4·4H2O22.30七水硫酸鋅ZnSO4·7H2O8.60二水鉬酸鈉Na2MoO4·2H2O0.25五水硫酸銅CuSO4·5H2O0.025六水氯化鈷CoCl2·6H2O0.025無(wú)機(jī)物&

2、#183;鐵鹽七水硫酸亞鐵FeSO4·7H2O27.80EDTA鈉鹽Na2·EDTA·2H2O37.3有機(jī)物肌醇100.00煙酸0.50鹽酸吡哆醇VB60.50鹽酸硫胺素VB10.10甘氨酸2.00蔗糖30gpH5.80目前廣泛采用的配制方法是先配制一系列的濃縮貯備液（表2):：大量元素（濃縮20倍）；：微量元素（濃縮200倍）；：鐵鹽（濃縮200倍）；：有機(jī)物質(zhì)（蔗糖除外，濃縮200 倍）注意1：容易吸水、氧化、失水的化學(xué)藥品用前檢查、用后擰緊。保留、蓋緊小的內(nèi)蓋。必要時(shí)，再用封口膜密封一次。注意2：配制的貯備液要標(biāo)明溶液名稱、配制人、配制時(shí)間。注意3：在制備每

3、種貯備液的時(shí)候，應(yīng)當(dāng)使每種成分分別溶解，然后再把它們彼此混合。或者按先后順序，一種成分充分溶解后，再溶解另一種。注意4：各種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的貯備液應(yīng)當(dāng)分別配制，如果它們是不溶于水的，則應(yīng)先把它們?nèi)芙庠诤苌倭康倪m當(dāng)溶劑中，然后再加蒸餾水到最終體積。注意5：在制備貯備液和培養(yǎng)基的時(shí)候，應(yīng)當(dāng)使用蒸餾水或無(wú)離子水，以及高純度的化學(xué)試劑。表2：貯備液的配制成分名稱分子式數(shù)量（mg/L）貯備液（MS大量）20×硝酸銨NH4NO333,000硝酸鉀KNO338,000二水氯化鈣CaCl2·2H2O8,800七水氯化鎂MgCl2·7H2O7,400磷酸二氫鉀KH2PO4 3,400

4、注：如配制1L貯備液，將燒杯中加入900mL蒸餾水，依次稱取上述藥品，加入燒杯中（溶好一個(gè)后，再加下一個(gè)）。最后定容至1L，4冰箱保存?zhèn)溆?。貯備液(MS微量)碘化鉀KI166200×硼酸H3BO31,240四水硫酸錳MnSO4·4H2O4,460七水硫酸鋅ZnSO4·7H2O1,720二水鉬酸鈉Na2MoO4·2H2O50五水硫酸銅CuSO4·5H2O5六水氯化鈷CoCl2·6H2O5注1：如配制1L貯備液，將燒杯中加入900mL蒸餾水，依次稱取上述藥品，加入燒杯中（溶好一個(gè)后，再加下一個(gè)）。最后定容至1L，4冰箱保存?zhèn)溆?。?：Cu

5、SO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于稱取量很小，如果天平精確度沒(méi)有達(dá)到萬(wàn)分之一，可先配成調(diào)整液。分別稱取CuSO4·5H2O 0.05g，CoCl2·6H2O 0.05g，各自配成100mL的調(diào)整液，然后取10mL即是0.005g（即5mg）的量。貯備液(鐵鹽)七水硫酸亞鐵FeSO4·7H2O5,560200×EDTA鈉鹽Na2·EDTA·2H2O7,460配制過(guò)程：將FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分別置于450mL蒸餾水中，加熱并不斷攪拌使之溶解。

6、然后，趁熱將前者緩慢倒入后者，邊倒邊攪拌，混合均勻后，調(diào)節(jié)pH值至5.5，加蒸餾水定容到1L。配好后冰箱冷藏，防止霉菌滋生，產(chǎn)生絮狀沉淀。須先分別溶解。乙二胺四乙酸二鈉可以加熱助溶，硫酸亞鐵溶解時(shí)不可加熱，否則立即氧化成棕褐色三價(jià)鐵。注意順序，將硫酸亞鐵溶液緩慢倒入乙二胺四乙酸二鈉溶液，邊倒邊攪拌。貯備液（MS有機(jī)）肌醇20，000200×煙酸 100鹽酸吡哆醇VB6 100鹽酸硫胺素VB1 100甘氨酸 400注：如配制1L貯備液，將燒杯中加入900mL蒸餾水，依次稱取上述藥品，加入燒杯中（溶好一個(gè)后，再加下一個(gè)）。最后定容至1L，4冰箱保存?zhèn)溆?。制?×MS固體培養(yǎng)基的

7、步驟如下：1. 稱出規(guī)定質(zhì)量的蔗糖，加水直到培養(yǎng)基最終容積的7580%；2. 分別加入一定量的各種貯備液；（制備1L MS培養(yǎng)基取50mL貯備液、5mL貯備液、5mL貯備液、5mL貯備液）3. 按設(shè)計(jì)好的方案添加各種激素，由于激素的用量很小，而且激素對(duì)組培植物的生長(zhǎng)至關(guān)重要。所以最好用微量可調(diào)移液器吸取，減少誤差。*: 激素母液的配制: 各種生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素要單獨(dú)配制，不能混合在一起。生長(zhǎng)素類一般要先用少量95%的酒精或1當(dāng)量的NaOH溶解。細(xì)胞分裂素一般要先用1當(dāng)量的鹽酸溶解，然后再加蒸餾水定容。 一般取100mg配成100ml母液。4. 充分混合后，用精密試紙或酸度計(jì)調(diào)整pH至5.7-5.8（有條件的話使用酸度計(jì)，比較精確）。用0.1 mol/L NaOH 和0.1 mol/L HCl調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH； 1N HCL配制：用量筒量取8.3mL發(fā)煙濃鹽酸，配成100ml溶液。 1N NaOH配制：稱取NaOH 4g 配成100ml溶液。5. 加入58g質(zhì)量好的瓊脂粉（agar）或植物凝膠，搖勻；6. 加蒸餾水直至培養(yǎng)基的最終容積。7. 把培養(yǎng)基分裝到三角瓶（或玻璃瓶）中，用牛皮紙和橡皮圈封嚴(yán)瓶口；8. 用高壓滅菌鍋在120 （1.O6kg/cm2