藥物安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

1、安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)材料及動(dòng)物受試物:五味消毒飲分散片實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：清潔級(jí)昆明小鼠100只急性毒性試驗(yàn)方法取小鼠100只，隨機(jī)分為10組，每組10只，雌雄各半，禁食12h后分別稱(chēng)重。根據(jù)改進(jìn)寇氏法設(shè)9個(gè)劑量組,由低到高的組間劑量比為0175:1,第IIX組的給藥劑量分別以28,88,38.51,51,34,68,46,91,28,121,70,162,27,216,36,和288.48gkg-1,以0,75稀釋等級(jí)系數(shù)，第I皿組用蒸儲(chǔ)水稀釋成相等的容量2,4mL灌胃，IX組為五味解毒水煎劑原液2,4mL灌胃，第IIX組的藥物配制濃度分別0,24,0,32,0,43,0,57,0,76,1,01,1,

2、35,1,80,2.40g-mL-10,每次灌胃體積均為20mL-kg-1,每次間隔4h;第X為對(duì)照組，灌服等量蒸儲(chǔ)水。每天觀察記錄動(dòng)物的毒性反應(yīng)及死亡情況,對(duì)死亡動(dòng)物及時(shí)剖檢、記錄病理變化,連續(xù)觀察7do根據(jù)各組小鼠死亡數(shù),再計(jì)算LD50O亞慢性毒性試驗(yàn)方法動(dòng)物分組處理取小鼠80只，隨機(jī)分為4組，每組20只，雌雄各半。I、H、田組為藥物的高、中、低劑量組，分別以LD50勺四分之一，十分一，二十五分之一劑量灌胃，每次灌胃體積均為20mL-kg-1;IV組為對(duì)照組，每日定時(shí)灌胃等量蒸儲(chǔ)水。各組連續(xù)灌胃14d，停藥后再持續(xù)觀察14d觀察指標(biāo)臨床表現(xiàn)每天觀察小鼠的一般狀況，每周測(cè)定體重變化情況，死亡

3、小鼠及時(shí)剖檢。血常規(guī)變化于停藥后第1天和第14天,各組隨機(jī)抽取10只采血，EDTA二鉀鹽抗凝，立即用AC-Tdiff2型全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析儀測(cè)定紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)、血小板數(shù)和血紅蛋白含量。血清生化值變化于停藥后第1天和14天,每組隨機(jī)抽取10只采血，分離血清，用VitalabSelecctraE自動(dòng)生化分析儀測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、尿素氮、肌酊、總蛋白、白蛋白的含量。病理學(xué)變化于停藥后第1天每組隨機(jī)抽取3只，停藥后第14天對(duì)剩余所有小鼠剖檢，采集心、肝、脾、肺、腎、胃和腸，固定，石蠟切片,HE染色，顯微鏡下觀察病理變化。通過(guò)急性毒性實(shí)驗(yàn)，得出五味消毒飲分散片在相應(yīng)的劑量中，

4、未引起小鼠的死亡，可以認(rèn)為五味消毒飲分散片在劑量范圍內(nèi)未引起毒性反應(yīng)。亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)期間，觀察各組小鼠生長(zhǎng)發(fā)育是否良好，各種體征表現(xiàn)是否正常。五味消毒飲分散片提取物對(duì)動(dòng)物體重、臟器重量、血液谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌醉（Cr）、血清白蛋白（Alb）和血糖（Glu）均有無(wú)顯著影響。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)受試物六個(gè)月喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)，采用灌胃的方式給予受試物會(huì)對(duì)動(dòng)物造成較大損傷，因此考慮將五味解毒分散片加入飼料，由動(dòng)物在攝食時(shí)攝入受試物。低、中、高3個(gè)劑量組分別在基礎(chǔ)飼料粉中添加4%8%口16%勺五味解毒分散片，做成含黃連解毒湯提取物的飼料。動(dòng)物分組及劑量設(shè)計(jì)取80只清潔級(jí)昆明小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為4組（正常對(duì)照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組）。每組雌雄各10只，分籠喂養(yǎng)。低、中、高三個(gè)劑量組分別按5g/Kg-Bw10g/xg-BwF口20g/Kg-B給予受試物。實(shí)驗(yàn)處理每周稱(chēng)量一次動(dòng)物體重，根據(jù)體重及給予受試物劑量，精確計(jì)算應(yīng)給予的飼料量，每天定量給予，保證所給予的飼料各組動(dòng)物均能吃完。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后，每天觀察并記錄動(dòng)物的一般表現(xiàn)、行為、中毒表現(xiàn)和死亡情況。于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后的第六個(gè)月最后一天傍晚禁食，不禁水，次日早上眼眶取血，分離血清，測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶（A