人轉(zhuǎn)化生長因子β1TGF

1、人轉(zhuǎn)化生長因子(31(TGF-(31)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中轉(zhuǎn)化生長因子B1(TGF-B1)的含量實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人轉(zhuǎn)化生長因子31(TGF-31)水平。用純化的人轉(zhuǎn)化生長因子31(TGF-31)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入轉(zhuǎn)化生長因子31(TGF-31),再與HRP標(biāo)記的轉(zhuǎn)化生長因子31(TGF-31)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生

2、長因子31(TGF-31)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人轉(zhuǎn)化生長因子31(TGF-31)的含量。試劑盒組成試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1X481X962-8C保存標(biāo)準(zhǔn)品：1800ng/L0.5mlX1瓶0.5mlX1瓶2-8C保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5mlX1瓶1.5mlX1瓶2-8C保存酶標(biāo)試劑3mlX1瓶6mlx1瓶2-8C保存樣品稀釋液3mlx1瓶6mlx1瓶2-8C保存顯色劑A液3mlx1瓶6mlx1瓶2-8C保存顯色劑B液3mlx1瓶6mlx1瓶2-8C保存終止液

3、3mlx1瓶6mlx1瓶2-8C保存濃縮洗滌液(20mlX20倍)X1瓶(20mlx30倍)x1瓶2-8C保存樣本處理及要求：1 .血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2 .血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離，°3 .尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行

4、。4 .細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5 .組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清

5、。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6 .標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7 .不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟：1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100出然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液504,混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100d分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50小混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50M棄掉，再各取50M分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別

6、加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50M分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50出混勻后從第七、第八孔中分別取50M加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50U,混勻后從第九第十孔中各取50M棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50小濃度分別為1200ng/L，800ng/L，400ng/L，200ng/L，100ng/L）。2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40小然后再加待測樣品10口（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及

7、孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘。4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑504,空白孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50U,再加入顯色劑B50M,輕輕震蕩混勻，37c避光顯色15分鐘.10 .終止：每孔加終止液50終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11 .測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后1

8、5分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項：1 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4 .請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）。5 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 .底物請避光

9、保存。7 .嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)8 .所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9 .本試劑不同批號組分不得混用。10 .如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。（此圖僅供參考）計算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。試劑盒性能：1 .樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2 .批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測范圍：50

10、ng/L-1500ng/L保存條件及有效期：1 .試劑盒保存：；2-8C。2 .有效期：6個月HumantransforminggrowthfactorsFORRESEARCHUSEONLYDrugNamesGenericNameHumantransforminggrowthfactors1（TGF資）ELISAKit.PurposeThiskitallowsforthedeterminationofT?1concentrationsinHumanUrine,andotherbiologicalfluids.PrincipleoftheassayThekitassayHumanTGF-leve

11、linthesample,usePurifiedHumanTGFntibodytocoatmicrotiterplatevells,makesolid-phaseantibody!enaddTGF-towells,CombinedTGF-1antibodywhichWithHRPlabeled,becomeantibody-antigen-enzyme-antibodycomplex,afterwashingCompletely,AddTMBsubstratesolution,TMBsubstratebecomesbluecolorAtHRPenzyme-catalyzedeactionist

12、erminatedbytheadditionofasulphuricacidsolutionandthecolorchangeismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450nm.TheconcentrationofTG用-inthesamplesisthendeterminedbycomparingtheO.D.ofthesamplestothestandardcurve.MaterialsprovidedwiththekitMaterialsprovidedwiththekit48determinations96determination

13、sStorageUsermanual11Closureplatemembrane22Sealedbags11Microelisastripplate112-8CStandard1800ng/L0.5ml1Xbottle0.5ml1Xbottle2-8CStandarddiluent1.5ml1Xbottle1.5ml1Xbottle2-8CHRP-Conjugatereagent3ml1bottle6ml1bottle2-8CSamplediluent3ml1bottle6ml1bottle2-8CChromogenSolutionA3ml1bottle6ml1bottle2-8CChromo

14、genSolutionB3ml1bottle6ml1bottle2-8CStopSolution3ml1bottle6ml1bottle2-8Cwashsolution(20mlx20folcDx1bottle(20mlx30folcDx1bottle2-8CSpecimenrequirements1. serum-coagulationatroomtemperature10-20geistrifugation20-minatthespeedof2000-3000r.p.m.removesupernatant,Ifprecipitationappeared,Centrifugalagain.2

15、. plasma-usesuitedEDTAorcitrateplasmaasananticoagulant,mix10-20mins,centrifugation20-minatthespeedof2000-3000r.p.m.removesupernatant,Ifprecipitationappeared,Centrifugalagain.3. Urine-collectsueasterilecontainer,centrifugation20-minatthespeedof2000-3000r.p.m.removesupernatant,Ifprecipitationappeared,

16、Centrifugalagain.TheOperationofHydrothoraxandcerebrospinalfluidReferencetoit.4. cellculturesupernatan-detectsecretorycomponentscollectsueasterilecontainer,centrifugatior20-minatthespeedof2000-3000r.p.m.removesupernatant,detedttiecompositionofcells,DilutcellsuspensionwithPBS(PH7.2-7.4,Cellconcentrati

17、onreached1million/ml,repeatedfreeze-thawcycles,damagecellsandreleaseofintracellularcomponents,centrifugation20-minatthespeedof2000-3000r.p.m.removesupernatant,Ifprecipitationappeared,Centrifugalagain.5. Tissuesamples-Aftercuttingsamples,checktheweight,add(PPBHS7.2-7.4),Rapidlyfrozenwithliquidnitroge

18、n,maintainsamplesat2-8aftermelting,addPB(SPH7.4),HomogenizedbyhandorGrinders,centrifugation20-minatthespeedof2000-3000r.p.m.removesupernatant.6. extractassoonaspossibleafterSpecimencollection,andaccordingtotherelevantliterature,andshouldbeexperimentassoonaspossibleaftertheextraction.Ifitcant,specime

19、ncanbekeptin-20topreserve,Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.7. CantdetectthesamplewhichcoNnataNin3,becauseNaN3inhibitsHRPactive.Assayprocedure1 .DiluteandaddsampletoStandard:set10StandardwellsontheELISAplatescoated,addStandard100仙ltothefirstandthesecondwell,thenaddStandOOdidilUrtithefirstandthesecondwe

20、ll,mix;takeout100仙lformthefirstandthesecondwellthenaddittothethiandtheforthwellseparatelythenaddStandarddilution50仙tothethirdandtheforthwell,mix;thentakeout50仙lfromthethirdandtheforthwelldiscard,add50thesixthwell,thenaddStandarddili50)nltothefifthandthesixthwell,mix;takeout50fromthefifthandthesixthw

21、ellandaddtotheseventhandtheeighthwell,thenaddStandarddilution50仙ltotheseventhandtheeighthwell,mix;takeout50仙lfromtheseveneighthwellandaddtotheninthandthetenthwell,addStandard50lutiotothenintndthetenthwell,mix,takeout50mtheninthiiahfrcthetenthwescard(addSample50仙ltoeachwellafterDiluting,(density:1200

22、ng/L,800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L)2 .addsample：Setblankwellsseparately(blankcomparisonwellsdonatddsampleandHRP-Conjugatereagent,othereachstepoperationissame).testingsamplewell.addSampledilution40(itotestingsamplewellthenaddtestingsample10仙Qsamplefinaldilutionis5-fold),addsampletowelldso,nttouchth

23、ewellwaallraassfpossible,andGentlymix.1 .Incubate:AfterclosingplatewithClosureplatemembrane,incubatefor30m.inat374.Configurateliquid:30-fold(or20-fold)washsolutiondiluted30-fold(or20-fold)withdistilledwaterandreserve.5 .washin：gUncoverClosureplatemembrane,discardLiquid,drybyswing,addwashingbuffertoe

24、verywell,stillfor30sthendrain,repeat5times,drybypat.6 .addenzymeAddHRP-Conjugatereag50tltoeachwell,excebtankwell.7.incubat：eOperationwith3.8.washin：gOperationwith5.9.colo：rAddChromogenSolutionA50ulandChromogenSolutionBtoeachwell,evadethelightpreservationfor15minat3710.StopthereactionAddStopSolutio50

25、(itoeachwell,Stopthereaction(thdoluecolorchangetoyellowcolor).11.assa：ytakeblankwellaszero,Readabsorbanceat450nmafterAddingStopSolutionandwithin15min.Importantnotes1. Thekittakesoutfromtherefrigerationenvironmentshouldbebalanced15-30minutesintheroomtemperature,ELISAplatescoatedifhasnotuseupafteropened,theplateshouldbestoredinSealedbag.2. washingbufferwillCrystallizationseparation,itcanbeheatedthewaterhelpsdissolvewhendilute.Wa