小鼠心肌肌鈣蛋白(cTn-Ⅰ)檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

1、小鼠心肌肌鈣蛋白(cTn- ) 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)該試劑盒以 HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRP Streptavidin Conjugate ， HRP-SA ）為基礎(chǔ)，可用于檢測(cè)血液,細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性 CD40 抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的CD40 一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，最后加入HRP-SA ，形成抗原特異一抗生物素化二抗 HRP-SA復(fù)合物，顯微鏡下觀(guān)察成像。小鼠心肌肌鈣蛋白(cTn- ) 檢測(cè)試劑盒 所含試劑：試劑 A通透液： 0.1% Triton-X 10010 mL （選用）試劑 B封閉緩沖液（封閉用）

2、20 mL試劑 C（原裝進(jìn)口分裝）已稀釋的即用型CD40一抗（ 2.5ml ）試劑 D（原裝進(jìn)口分裝）生物素化羊抗兔IgG 1支（濃度 1.5 mg/mL ，稀釋比為1:3001:500 ） 50 L+ 抗體稀釋液 20ml 試劑 E HRP-SA復(fù)合物 1 支（濃度1 M ，稀釋比1:501:200 ） 100 L試劑 F DAB顯色液 5ml用戶(hù)自備試劑：1 10mM TBS （ pH7.27.4 ）三羥基氨基甲烷 1.21g氯化鈉 7.6g加蒸餾水800mL ，濃鹽酸調(diào)pH 值至7.27.4，最后定容至1000mL TBS-T ：TBS+Tween 20 （ 0.05%體積比）2抗原修復(fù)

3、液（依檢測(cè)抗原不同而選擇不同的修復(fù)液）10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液檸檬酸 0.38g檸檬酸三鈉 2.45g加蒸餾水900mL ，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，最后定容至1000mL 或： 0.5M EDTA修復(fù)液（ pH8.0 ） EDTA· 2H2O 186.1g 加蒸餾水700mL ，用10mM NaOH調(diào) pH值至8.0，最后定容至1000Ml3. 緩沖甘油封固劑 10 mL4. Tween 20 5 mL石蠟包埋組織切片免疫染色實(shí)驗(yàn)步驟（建議方案）：石蠟包埋組織切片34m厚度1.烤片：將待做切片置于切片架上，于 60恒溫烤箱中至少烤1 hr；2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器

4、中脫蠟3 次（即二甲苯、），每次10 min ；3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無(wú)水乙醇乙醇2 min ； 75%乙醇2min ，自來(lái)水沖洗，5min ， 95%乙醇 2 次（每次ddH2O洗 2×2min ；2min ）， 85%4.抗原修復(fù)：根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫度達(dá)到98100 ）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來(lái)水沖洗，ddH2O洗 2×2min ， TBS 直接進(jìn)入第洗滌（ 2×2min ）（具體修復(fù)方法見(jiàn)附5 步封閉。1） *注：有些抗原勿需修復(fù)，5.封閉：滴加試劑B， 37濕盒孵育30 min ； 6.加一抗：滴加用試

5、劑用型一抗）， 37濕盒孵育2 hr 或 4過(guò)夜；C（即7.洗滌： TBS-T 洗滌（ 3× 5 min）；8.封閉：滴加試劑B， 37濕盒孵育10 min ；9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D ）， 37濕盒中孵育30 min ；10.洗滌：TBS-T洗滌（3× 5 min ）；11.封閉：滴加試劑Tween 20， 37濕盒孵育封閉20 min ；12.加 HRP-SA ： 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E（ 1： 50200，終濃度 520 nM ）， 37 濕盒中孵育 30 min ；13.洗滌： TBS-T 洗滌（ 3× 5 min ）

6、， TBS 洗滌（ 2× 5 min ）；14.顯色：應(yīng)用DAB溶液（試劑F）顯色；15.復(fù)染：自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；16.封片：待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；17.觀(guān)察成像：顯微鏡下觀(guān)察成像。原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復(fù)合物，顯微鏡下觀(guān)察成像。小鼠心肌肌鈣蛋白(cTn- ) 檢測(cè)試劑盒 注意事項(xiàng)：1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻，自來(lái)水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導(dǎo)致結(jié)晶或抗原封閉。2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過(guò)的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使用。3. 若試劑為微量濃縮液，用前應(yīng)低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4. 封片前一定要換

7、用TBS 充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween 20，否則會(huì)影響結(jié)果觀(guān)察。5. 如須復(fù)染細(xì)胞核，則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封片。附 1： 抗原修復(fù)方法常用抗原修復(fù)液：檸檬酸緩沖液（0.01M pH6.0 ）、 EDTA 抗原修復(fù)液（ pH8.0或 9.0）等等。一、酶消化修復(fù)法酶消化修復(fù)切片脫蠟水化處理， TBS 沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37孵育2030min后 TBS 沖洗即可。二、微波抗原修復(fù)法微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或高檔繼續(xù)微波1015min ，取出微波盒冷卻至室溫后，自來(lái)水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時(shí)間存在差異，須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復(fù)法取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復(fù)液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計(jì)時(shí)1.52.5min 即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來(lái)水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測(cè)或核抗原的修復(fù)。四、隔水式高壓抗原修復(fù)法不