2022年免疫細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測技術(shù)

1、第三章第三章 免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞(xbo)(xbo)的分離及的分離及其表面標(biāo)志檢測技術(shù)其表面標(biāo)志檢測技術(shù)第一頁，共四十一頁。第一節(jié) 免疫細(xì)胞(xbo)的分離 一、 外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 二、 淋巴細(xì)胞的分離 三、 T細(xì)胞和B細(xì)胞的分離 四、 T細(xì)胞亞群的分離第二頁，共四十一頁。第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類 一、一、 細(xì)胞表面細(xì)胞表面(biomin)(biomin)標(biāo)志及亞群標(biāo)志及亞群 二、二、 B B細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志 三、三、 NKNK細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志第三節(jié)第三節(jié) 其他的免疫細(xì)胞其他的免疫細(xì)胞第四節(jié)第四節(jié) 免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測及應(yīng)用免疫細(xì)胞表面標(biāo)志

2、的檢測及應(yīng)用 一、一、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測方法免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測方法 二、二、 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義思考題小結(jié)(xioji) 第三頁，共四十一頁。第四頁，共四十一頁。第一節(jié)第一節(jié) 免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞(xbo)(xbo)的分離的分離 外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞(xbo)(xbo)分離分離 淋巴細(xì)胞的分離淋巴細(xì)胞的分離 T T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞的分離細(xì)胞的分離 T T細(xì)胞亞群的分離細(xì)胞亞群的分離第五頁，共四十一頁。一、外周血單個(gè)核細(xì)胞一、外周血單個(gè)核細(xì)胞(xbo)(xbo)分離分離 外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞(xbo)(xbo)（peri

3、pheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞（monocyte）。）。 Ficoll分離液法主要用于分離外周血中的單個(gè)核細(xì)胞，是分離液法主要用于分離外周血中的單個(gè)核細(xì)胞，是一種單次差速密度梯度離心的分離法。一種單次差速密度梯度離心的分離法。 第六頁，共四十一頁。細(xì)胞細(xì)胞(xbo)分離基本原理分離基本原理不同細(xì)胞密度不同細(xì)胞密度(md)(md)不同不同不同細(xì)胞表面生物學(xué)特性不同不同細(xì)胞表面生物學(xué)特性不同不同細(xì)胞表面分化抗原不同不同細(xì)胞表面分化抗原不同第七頁，共四十一頁。不同不同(b tn(b tn) )細(xì)胞密度不同細(xì)胞密度不同(b tn(b

4、 tn) )人的紅細(xì)胞密度(md)為1.093 粒細(xì)胞密度為1.092 單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）的密度為 第八頁，共四十一頁。不同細(xì)胞(xbo)密度不同第九頁，共四十一頁。用1.0770.001的分層液可將細(xì)胞(xbo)分離 第十頁，共四十一頁。密度梯度離心(lxn)(Ficoll)離心第十一頁，共四十一頁。二二、淋巴細(xì)胞分離、淋巴細(xì)胞分離(fnl)貼壁粘附法貼壁粘附法 吸附柱過濾法吸附柱過濾法 磁鐵吸引法磁鐵吸引法 Percoll Percoll 分離液法分離液法 （連續(xù)（連續(xù)(linx)(linx)密度梯度離心）密度梯度離心）（去單核細(xì)胞）第十二頁，共四十一頁。E E花環(huán)沉降花環(huán)沉

5、降(chnjing)(chnjing)法法 尼龍毛柱分離法尼龍毛柱分離法 三、三、T T細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)和和B B細(xì)胞的分離細(xì)胞的分離第十三頁，共四十一頁。四、四、T T細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)亞群的分離亞群的分離 親和板結(jié)合分離法親和板結(jié)合分離法 磁性磁性(cxng)(cxng)微球分離法微球分離法 熒光激活細(xì)胞分離儀分離法熒光激活細(xì)胞分離儀分離法 第十四頁，共四十一頁。熒光激活(jhu)細(xì)胞分離儀分離法第十五頁，共四十一頁。第十六頁，共四十一頁。磁珠大小可以(ky)選擇第十七頁，共四十一頁。大小免疫磁珠分離細(xì)胞(xbo)的特點(diǎn)比較 比較項(xiàng)目大磁珠小磁珠對(duì)細(xì)胞的影響對(duì)細(xì)胞造成

6、機(jī)械壓力，影響其生物學(xué)活性，不利于分離后培養(yǎng)。對(duì)細(xì)胞溫和，不影響分離細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)。對(duì)流式細(xì)胞儀的影響阻塞流式細(xì)胞儀的噴嘴，影響散射光。可直接上流式細(xì)胞儀檢測，不影響散射光。分離條件要求技術(shù)簡單，分離可在試管中完成。需要很強(qiáng)的磁場來分離細(xì)胞。 收率得率高。得率不高。純度純度低。純度高。分離時(shí)間分離速度快。分離速度慢。分離成本成本低。需要很強(qiáng)的磁場來分離細(xì)胞，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進(jìn)行。第十八頁，共四十一頁。第十九頁，共四十一頁。第二十頁，共四十一頁。免疫(miny)磁珠法細(xì)胞分選過程第二十一頁，共四十一頁。免疫磁珠細(xì)胞分選裝置第二十二頁，共四十一頁。全自動(dòng)細(xì)胞(xbo)分選系統(tǒng)第二

7、十三頁，共四十一頁。流式細(xì)胞分析儀第二十四頁，共四十一頁。第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細(xì)胞標(biāo)志淋巴細(xì)胞標(biāo)志(biozh)(biozh)及亞群分類及亞群分類 常用常用(chn(chn yn yn) )于鑒定和檢測淋巴細(xì)胞表面于鑒定和檢測淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志是簇分化抗原（標(biāo)志是簇分化抗原（Cluster of Cluster of differentiationdifferentiation，CDCD）。）。 第二十五頁，共四十一頁。細(xì)胞表面細(xì)胞表面(biomin)(biomin)分化抗原（分化抗原（CDCD抗原抗原）適用于T、B細(xì)胞的分離(fnl)已知CD抗原細(xì)胞亞群的分離未知CD抗原細(xì)胞亞群的分離（陰性分選

8、）第二十六頁，共四十一頁。一、一、T T細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)表面標(biāo)志及其亞群表面標(biāo)志及其亞群 CD3+CD4+CD8-輔助性輔助性T細(xì)胞細(xì)胞(xbo)（helpTcell,Th） CD3+CD4-CD8+細(xì)胞毒性細(xì)胞毒性T細(xì)胞細(xì)胞（cytotoxicTcell,TcorCTL） CD4+CD25+調(diào)節(jié)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞細(xì)胞（regulatoryTcell,TrorTreg）第二十七頁，共四十一頁。二、二、B B細(xì)胞表面細(xì)胞表面(biomin)(biomin)標(biāo)志標(biāo)志 SmIgSmIg、FcFc受體、補(bǔ)體受體、受體、補(bǔ)體受體、EBEB病毒受體，部分病毒受體，部分CDCD分分子是子是B B細(xì)胞

9、的重要表面標(biāo)志，其中以細(xì)胞的重要表面標(biāo)志，其中以SmIgSmIg為為B B細(xì)胞所特細(xì)胞所特有，是鑒定有，是鑒定(jindng)(jindng)B B細(xì)胞可靠的指標(biāo)。細(xì)胞可靠的指標(biāo)。 CD19/CD5CD19/CD5分子：可將分子：可將B B細(xì)胞區(qū)分為細(xì)胞區(qū)分為B1B1細(xì)胞和細(xì)胞和B2B2細(xì)胞，細(xì)胞，B1B1細(xì)胞為細(xì)胞為CD19CD19和和CD5CD5雙陽性，而雙陽性，而B2B2細(xì)胞僅為細(xì)胞僅為CD19CD19陽性，陽性，B2B2細(xì)胞為通常所指的細(xì)胞為通常所指的B B細(xì)胞細(xì)胞。 第二十八頁，共四十一頁。三、三、NKNK細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)表面標(biāo)志表面標(biāo)志 人類人類NK細(xì)胞表面標(biāo)志主要以細(xì)

10、胞表面標(biāo)志主要以CD16、CD56來認(rèn)定，臨床來認(rèn)定，臨床(lnchun)上將上將CD3-CD56+CD16+淋巴細(xì)胞認(rèn)定為淋巴細(xì)胞認(rèn)定為NK細(xì)胞。細(xì)胞。第二十九頁，共四十一頁。T細(xì)胞(xbo)及NK細(xì)胞第三十頁，共四十一頁。第三節(jié)第三節(jié) 其他其他(qt)(qt)的免疫細(xì)胞的免疫細(xì)胞抗原提呈類細(xì)胞抗原提呈類細(xì)胞(xbo)表面標(biāo)志表面標(biāo)志第三十一頁，共四十一頁。第四節(jié)第四節(jié) 免疫細(xì)胞表面免疫細(xì)胞表面(biomin)(biomin)標(biāo)志的檢測及標(biāo)志的檢測及應(yīng)用應(yīng)用免疫細(xì)胞表面免疫細(xì)胞表面(biomin)(biomin)標(biāo)志的檢測方法標(biāo)志的檢測方法 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測

11、的臨床意義第三十二頁，共四十一頁。一、免疫細(xì)胞一、免疫細(xì)胞(xbo)表面標(biāo)志的檢測表面標(biāo)志的檢測抗體致敏細(xì)胞抗體致敏細(xì)胞(xbo)(xbo)花環(huán)法花環(huán)法 免疫細(xì)胞化學(xué)法免疫細(xì)胞化學(xué)法 免疫熒光法免疫熒光法 流式細(xì)胞分析法流式細(xì)胞分析法 第三十三頁，共四十一頁。二、淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志二、淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志(biozh)(biozh)檢測的臨床檢測的臨床意義意義 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測是評(píng)價(jià)免疫功能的重淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測是評(píng)價(jià)免疫功能的重要要(zhngyo)(zhngyo)指標(biāo)。指標(biāo)。 對(duì)對(duì)CD4+CD4+和和CD8+TCD8+T細(xì)胞的測定，有助于免疫細(xì)胞的測定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移

12、植排斥缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反應(yīng)的監(jiān)測。反應(yīng)的監(jiān)測。 第三十四頁，共四十一頁。臨床(lnchun)常見疾病中的T淋巴細(xì)胞的變化第三十五頁，共四十一頁。思考題思考題1.1.免疫細(xì)胞都包括哪些細(xì)胞？為什么要將其分離免疫細(xì)胞都包括哪些細(xì)胞？為什么要將其分離(fnl)(fnl)純純化？化？2.2.淋巴細(xì)胞有哪幾類細(xì)胞？能用形態(tài)學(xué)的方法加以淋巴細(xì)胞有哪幾類細(xì)胞？能用形態(tài)學(xué)的方法加以區(qū)別嗎？區(qū)別嗎？3.3.將細(xì)胞分離的原理有哪些？各有什么特點(diǎn)？將細(xì)胞分離的原理有哪些？各有什么特點(diǎn)？4.4.形態(tài)學(xué)相同的一類細(xì)胞為什么還要分亞群？形態(tài)學(xué)相同的一類細(xì)胞為什么還要分亞群？5.T5.T細(xì)胞和細(xì)胞和B B

13、細(xì)胞進(jìn)一步區(qū)分亞群的依據(jù)是什么？細(xì)胞進(jìn)一步區(qū)分亞群的依據(jù)是什么？第三十六頁，共四十一頁。6.6.什么是細(xì)胞表面標(biāo)志？其作用是什么？什么是細(xì)胞表面標(biāo)志？其作用是什么？7.7.細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測方法有哪些？細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測方法有哪些？8.8.利用細(xì)胞表面標(biāo)志（利用細(xì)胞表面標(biāo)志（CDCD抗原）分離細(xì)胞的方法有哪抗原）分離細(xì)胞的方法有哪幾種？幾種？9.T9.T細(xì)胞、細(xì)胞、B B細(xì)胞、細(xì)胞、NKNK細(xì)胞、單核細(xì)胞的主要細(xì)胞、單核細(xì)胞的主要(zhyo)(zhyo)生生物標(biāo)志是什么？物標(biāo)志是什么？10.10.淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義是什么？淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義是什么？第三十七頁，共四十一頁

14、。小小 結(jié)結(jié) 淋巴細(xì)胞并不是功能單一的群體，但其在光學(xué)淋巴細(xì)胞并不是功能單一的群體，但其在光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)基本是一樣的，因此要對(duì)其進(jìn)顯微鏡下的形態(tài)基本是一樣的，因此要對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的分類和觀察就不能采用形態(tài)學(xué)的方行進(jìn)一步的分類和觀察就不能采用形態(tài)學(xué)的方法法(fngf)(fngf)，而要依靠對(duì)其表面標(biāo)志的檢測。常，而要依靠對(duì)其表面標(biāo)志的檢測。常用于鑒定和檢測計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞的表面標(biāo)志是用于鑒定和檢測計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞的表面標(biāo)志是CDCD抗原?？乖５谌隧?，共四十一頁。 進(jìn)一步區(qū)分淋巴細(xì)胞亞群可使某一類淋巴細(xì)胞進(jìn)一步區(qū)分淋巴細(xì)胞亞群可使某一類淋巴細(xì)胞的功能趨向一致和單一。但目前看來，還很少的功能趨向一

15、致和單一。但目前看來，還很少有只通過一個(gè)有只通過一個(gè)CDCD抗原就能將某一類淋巴細(xì)胞亞抗原就能將某一類淋巴細(xì)胞亞群指示出來的群指示出來的CDCD抗原，抗原，CDCD抗原指示出來的淋抗原指示出來的淋巴細(xì)胞亞群多數(shù)都是相對(duì)巴細(xì)胞亞群多數(shù)都是相對(duì)(xingdu)(xingdu)特異。特異。第三十九頁，共四十一頁。根據(jù)根據(jù)T T細(xì)胞的免疫效應(yīng)功能細(xì)胞的免疫效應(yīng)功能(gngnng)(gngnng)和表面和表面CDCD分分子表達(dá)至少可以分為：輔助性子表達(dá)至少可以分為：輔助性T T細(xì)胞、細(xì)胞毒細(xì)胞、細(xì)胞毒性性T T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T T細(xì)胞；細(xì)胞；SmIgSmIg為為B B細(xì)胞所特細(xì)胞所特有，是鑒定有，是鑒定B B細(xì)胞可靠的指標(biāo)，以細(xì)胞可靠的指標(biāo)，以CD5CD5和和CD19CD19為標(biāo)志可將為標(biāo)志可將B B細(xì)胞分為細(xì)胞分為B1B1和和B2B2兩個(gè)亞群；目前兩個(gè)亞群；目前多以多以CD3-CD3-、CD16+CD16+、CD56+ CD56+ 作為作為NKNK細(xì)胞的典型細(xì)胞的典型標(biāo)志。標(biāo)志。第四十頁，共四十一頁。內(nèi)容(