熊果酸的研究進展

1、熊果酸的研究進展                 作者：肖坤福 鄭云法 劉成左 張春?！娟P(guān)鍵詞】  熊果酸；,檢測方法；,提取方法；,動物實驗；,臨床研究熊果酸是廣泛存在于白花蛇舌草、女貞子、烏梅、夏枯草等天然植物中的一種五環(huán)三萜類化合物，有研究表明熊果酸具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、降血糖等多種生物學(xué)效應(yīng)，早在1996年，日本學(xué)者神藏美枝子等人從杜鵑花科越桔屬植物越桔葉中提取了具有較高熊果酸濃度的熊果酸產(chǎn)品，產(chǎn)品中除含有2

2、5%的熊果酸外，尚含有大量的熊果酸衍生物、熊果苷和其它三萜類化合物等，具有多種活性成分，用于增強機體免疫力、預(yù)防心血管系統(tǒng)疾病、穩(wěn)定肝功能等。現(xiàn)在人們對其研究越來越多，并在很多方面取得了可喜的研究進展。1   提取方法對三萜類化合物的分離提純是其研究起點，沒有較好的提取工藝，就更談不上對其進一步研究。近年來，許多科研工作者在這方面做出了突出的貢獻。有些科研工作者15，通過正交實驗確定85%95%的乙醇提取熊果酸效果最佳。崔星明等6采用超臨界流體萃取得到的蘆筍提取物，用甲醇溶解，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，得到了56個組分。發(fā)現(xiàn)有保留時間和熊果酸基本一致的峰。其質(zhì)譜分子離子

3、峰和特征碎片峰都與熊果酸的一致，確定該化合物為熊果酸。2   檢測方法在檢測方法方面，有不少科研工作者對其進行了較深入的研究。熊慧敏7全面地論證了薄層層析-雙波長掃描法測定大山楂咀嚼片中熊果酸含量的檢測限的線性范圍可行性，并考查了此方法的測定熊果酸的穩(wěn)定性和重復(fù)性，從而證明薄層層析-雙波長掃描法測定熊果酸精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率均都達有關(guān)規(guī)定的要求，本方法操作簡單方便，結(jié)果可靠，可作為檢驗產(chǎn)品質(zhì)量的一個快速而實用的定量方法。朱玉琴等8在采用薄層掃描檢測保駕膠囊中熊果酸的含量時首次對顯色劑進行了改進，并驗證了醋酸-濃硫酸 (91)比10%硫酸乙醇顯色要好，檢測限低等優(yōu)點

4、。與此同時，楊云等9在采用薄層層析檢測牙周康泰膠囊熊果酸的含量驗證了10%磷鉬酸乙醇液比10%硫酸乙醇顯色要好。羅啟劍等10采用分光光度法測定連錢草中熊果酸含量。郭艷玲等11和陳志強12采用薄層掃描法分別測定了補腎顆粒和消食貼中熊果酸含量，方法簡便、快速、準確，可作為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法。周靜等13探求用毛細管氣相色譜法測定女貞子中齊墩果酸和熊果酸含量。取女貞子氯仿提取液自然揮發(fā)干，甲醇溶解經(jīng)甲酯化后，進樣分析。色譜條件：HP1毛細管柱（25 cm×0.32 mm，0.52 m），柱溫280，氮氣為載氣，氫火焰檢測器。分析結(jié)果表明熊果酸的線性良好，回收率為99.8%±2.1

5、%。所建立的氣相色譜法可以作為女貞子藥材的質(zhì)量檢測方法。施慧君等14采用HPLC法測定知柏地黃沖劑中熊果酸的含量。選用ODS-C：色譜柱，流動相：甲醇-水(991)，磷酸調(diào)pH 2.5，檢測波長：206 nm，流速：1.2 ml/min，柱溫25的條件下，熊果酸線性關(guān)系良好(r=0.999 8) 平均回收率達98.7%(RSD=0.66%)。羅曉清等15采用RP-HPLC法測定石精葉中熊果酸含量，色譜柱為Zorbax ODS柱，用甲醇（1%），醋酸水溶液(8812)為流動相。檢測波長為215nm。結(jié)果熊果酸和齊墩果酸的平均收率分別為98.5%、97.6%(n=3)。RSD分別為1.62%，1.

6、89%(n=3)。方法準確、靈教、快速，可作為石抽葉藥材的質(zhì)量檢測方法之一。楊書良等16采用高效液相色譜法從影響熊果酸測定的各個方面(例如：粒度、煎煮次數(shù)、溶媒量、提取時間等)進行測定和和正交分析，從而論證了它比薄層層析法更精確、更可靠、靈敏度更高，重現(xiàn)性更好。鞠建華等17，也采用高效液相色譜測定熊果酸含量，但他在前人的基礎(chǔ)上調(diào)節(jié)流動相的比例和加入改性劑乙酸胺，驗證了此改進方法可以使熊果酸和它的同分異構(gòu)體齊墩果酸達到基線分離，并使基線平穩(wěn)、峰型和分離效果較佳。鄢立新等18在采用高效液相色譜測定熊果酸時通過實驗驗證了在流動相中加入少量的醋酸可提高熊果酸的分離度，因為少量醋酸的加入使流動相蒸發(fā)所需

7、的漂移管溫度和氣體流速應(yīng)比初始條件高，可以在     試驗中逐漸增加漂移管溫度和氣體流速。劉海興等19首先采用毛細管電泳法測定熊果酸含量的方法, 此方法能有效地分離和測定熊果酸，測定精密度比其它方法高，最易適合低含量測定，此方法準確、樣品及試劑消耗少等優(yōu)點。但此方法可操作性難度大，不適合簡捷檢測。閆花麗等20曾經(jīng)采用重氮甲烷衍生化氣相色譜法測定熊果酸的含量，此方法精密度高，檢測限低，并克服了齊墩果酸和熊果酸(二者是性質(zhì)和結(jié)構(gòu)相似)難分離、難分別測定等優(yōu)點。但此方法工藝繁鎖，可操作性難度大，故現(xiàn)在很少有人使用此方法。也有人如皮文霞等21采用分光光度法測定熊

8、果酸的含量。此方法很少有人采用，因為此方法精確度不夠，實驗重復(fù)性差，不便采用。3   藥理效應(yīng)在藥理研究方面也取得了可喜的成就。黃鏡等22采用MTT法、DNA凝膠電泳、形態(tài)學(xué)等方法觀察到熊果酸抑制HL-60細胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡從而發(fā)揮抗腫瘤作用。王杰軍等23探討了熊果酸對體外血管形成的抑制作用(由于新生血管形成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的重要步驟),采用MTT法、細胞遷移及小管實驗觀察到熊果酸對培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞(VEC)增殖、遷移和小管形成均有較強的抑制作用(P0.01)，并且結(jié)果表明抑制程度與熊果酸的作用濃度呈正相關(guān)。白育軍等24對熊果酸的1、2位和3位進行氧化，制備其衍生物來觀察

9、其抗腫瘤活性，結(jié)果顯示熊果酸抗腫瘤活性最強。樊明文等25采用MTT法研究熊果酸對人舌鱗癌細胞株(TSCCa)增值的影響；用原位雜交的方法檢測熊果酸對TSCCa細胞漿中核轉(zhuǎn)錄因子mRNA原位表達的影響研究了女貞葉有效成分熊果酸對TSCCa細胞增殖的影響，探討其中可能的機制。研究結(jié)果顯示，熊果酸抑制TSCCa 細胞增殖，對TSCCa細胞的半數(shù)生長的抑制劑量約為12.5 molL1，在24h內(nèi)表現(xiàn)為一定的量效關(guān)系；原位雜交顯示熊果酸對TSCCa細胞的抑制作用與抑制核轉(zhuǎn)錄因子的原位表達有關(guān)。4   動物實驗動物實驗是臨床研究的最重要前期階段，在這一方面很多科研工作者做出了不少貢獻。

10、向敏等26觀察到細胞經(jīng)熊果酸誘導(dǎo)后，B16細胞黑色素顆粒生成能力明顯增多，并通過集落形成實驗及體內(nèi)成瘤實驗證明了B16細胞分化后，致瘤力下降，由細胞周期動力學(xué)研究表明，熊果酸可使B16細胞周期阻斷在G1期，而S期細胞明顯減少。由免疫組化分析顯示，熊果酸作用后B16細胞內(nèi)C-myc蛋白含量明顯下降。黃鏡等22系統(tǒng)地考察了熊果酸對抗致癌物如苯并芘、黃曲霉素B1誘發(fā)基因突變, 可抑制TPA的促癌作用，通過抗氧化作用起到抗始發(fā)突變與抗促癌作用，還對P-388和L-1210白血病細胞、A-549人肺腺癌細胞有顯著的細胞毒作用，其ED50均小于4 mgL 。熊筱娟、陳蔚云27采用動物試驗發(fā)現(xiàn)熊果酸能使急性

11、肝損傷大鼠血清SGPT和肝甘油三脂含量明顯下降，血清甘油三脂和肝糖原含量明顯增加，并能減輕肝細胞變性、壞死，對急性肝損傷有顯著保護和治療作用。Hsue-Yin Hsu28通過輻射損傷后的小鼠分別用齊墩果酸和熊果酸治療觀察表明熊果酸比齊墩果酸更能抗癌，并且熊果酸能加強損傷的小鼠體內(nèi)的造血功能。 5    臨床研究5.1   對肝炎的作用熊果酸臨床表現(xiàn)有顯著而迅速降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶、消退黃疽、增進食欲和恢復(fù)肝功能的作用，具有見效快、療程短、效果穩(wěn)定的特點29。Lee I等30實驗研究證明熊果酸具有明顯的趨脂停用和抗纖維化，并能保護肝細胞膜及細胞器的生物

12、膜系統(tǒng)，使主動運輸功能恢復(fù)正常，細胞內(nèi)外離子和水的移動及分布亦隨之復(fù)原，再生能力相繼恢復(fù)，促進肝小葉中央?yún)^(qū)壞死肝細胞修復(fù)。5.2   抑制腫瘤形成生長以及誘導(dǎo)癌細胞分化作用熊果酸對腫瘤形成生長各階段具有預(yù)防和抑制作用。Li J等31通過實驗及臨床試驗證明熊果酸能抗DNA突變、抑制癌變的啟動, 并且熊果酸能對抗致癌物如苯并芘，黃曲霉毒素Bl誘發(fā)基因突變。王鵬32試驗對早期抗體(EBV-EA)活化試驗型來篩選皮膚癌促癌物的抑制劑，發(fā)現(xiàn)熊果酸對TPA誘導(dǎo)Raji細胞EBV-EA活化具有幾乎同維甲酸相同的抑制作用，并使Raji細胞的存活率更高；利用同位素標記的佛酯化合物3H-PDB

13、2證明熊果酸不影響TPA與受體的結(jié)合，不是通過競爭TPA位點，而是有效地阻斷致癌物與受體     結(jié)合后的環(huán)節(jié)發(fā)揮作用。論文出處(作者):5.3   對艾滋病病毒的抑制作用人體免疫缺陷病毒 (HIV)是獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)的致病因子。田 英等33通過臨床試驗證明熊果酸對HIV-1蛋白酶活性有強的抑制作用，其50%抑制濃度(IC50)為8 mol/L。HIV-1蛋白酶是一個同型二聚體酶，熊果酸可能是通過抑制HIV-1蛋白酶的二聚作用來抑制HIV-1蛋白酶的活性，從而抑制HIV蛋白酶發(fā)揮作用。5.4   利

14、膽退黃作用李開泉等34證明熊果酸不但使正常人體膽汁流量增加，而且使膽汁流量增加，膽汁中SB濃度增高，血清中SB含量下降，有明顯的利膽、促進膽紅素排泄作用。臨床上，濕熱黃疽證肝、膽疾患癥狀與APIT肝損傷大鼠的病理特征相似。熊果酸利膽、退黃的作用與中藥陸英糖漿、沖劑治療急性病毒性肝炎其迅速退黃，增進食欲，恢復(fù)肝功能的療效一致。5.5   抗炎抑菌作用熊果酸能導(dǎo)致細胞生存能力下降。王鵬32證明熊果酸誘導(dǎo)基因組DNA分裂表明其誘導(dǎo)細胞死亡的機理是通過細胞凋亡, 熊果酸能抑制人急性早幼粒白血病細胞(HL-60)的增殖，對HL-60細胞的半數(shù)生長的抑制劑量(IC50)為8.26 m，

15、并能誘導(dǎo)共發(fā)生凋亡。5.6   抗氧化作用熊果酸是一個較強的抗氧化劑。You等35能明顯地捕獲O-      2，在肝微粒體和P450單胺氧化酶系中對脂質(zhì)過氧化均顯示較強的抑制作用。另外，有試驗證明熊果酸對環(huán)氧合酶的活性有較強的抑制作用，其IC50值為130 m。6   其它熊果酸具有抑制癌細胞和腫瘤細胞，以及抗炎抑菌和抗艾滋病病毒等作用當(dāng)然也不可避免對人體其它細胞有一定的毒害作用，孫備36驗證它對精子有一定毒性作用，它能破壞膽間橋的肌動蛋白，打開橋鍵，產(chǎn)生共質(zhì)體，抑制精子的形成, 利用這一作用有望開發(fā)成

16、男性避孕藥。熊果酸毒性很低、毒性周期短，在醫(yī)藥和化妝品中越來越被人們關(guān)注。參考文獻：1   韓   晶，孫來九.從毛泡桐葉中提取，分離熊果酸的新工藝研究J.西北大學(xué)學(xué)報，2003，33(3):304304.2    李開泉，鄒盛勤，陳武，等.陸英中烏索酸提取工藝的正交優(yōu)選J.中草藥, 2003，34(9)：791791.3    原春蘭，李宗孝，楊佩云.地榆中熊果酸的提取J.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2002，33(10)：478478.4    陳鴻英，馬雪梅.澤蘭中齊墩

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