臨床檢驗基礎(chǔ)

1、第一章血液樣本采集和血涂片制備1、常用真空管顏色添加劑用途紅色無化學(xué)、血清學(xué)、血庫紫色EDTA全血細胞計數(shù)淡藍色枸櫞酸鈉凝血檢查綠色肝素鈉、鋰、化學(xué)灰色氟化鈉葡萄糖、糖耐量黃色多聚茴香腦磺酸鈉血培養(yǎng)金黃色分離膠/凝塊激活劑化學(xué)淡綠色分離膠/肝素鋰 化學(xué)黑色枸櫞酸鈉血沉橘紅色促凝劑快速生化實驗2、抗凝劑EDTA：不適于凝血檢查、血小板檢查 草酸鹽：改變血液PH，干擾血漿鉀、鈉、氯和某些酶的活性雙草酸鹽：適用于HCT、CBC、Het計數(shù)等檢查，不適于血小板計數(shù)、白細胞分類計數(shù)肝素:有加強抗凝血酶（AT）滅活絲氨酸蛋白酶的形成，并阻止血小板聚集等作用是紅細胞脆性試驗的理想抗凝劑，不適于血細胞計數(shù)（C

2、BC）、紅3、細胞形態(tài)學(xué)檢查 嗜酸性物質(zhì)為堿性蛋白（Hb、嗜酸性顆粒）與伊紅被染成粉紅色嗜堿性物質(zhì)為酸性蛋白（細胞核蛋白、淋巴細胞、嗜堿性顆粒）與亞甲藍結(jié)合染成紫藍色或藍色嗜中性物質(zhì)中性顆粒呈等點狀態(tài)與伊紅和亞甲藍均可結(jié)合，染淡紫紅色PH（6.4-6.8）對染色的影響偏酸：紅細胞和嗜酸性顆粒偏紅，細胞核淡藍色或不染色偏堿：所有細胞呈灰藍色，顆粒呈深暗，嗜酸性顆粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性顆粒偏粗，呈紫黑色4.細胞染色方法學(xué)評價瑞氏染液：對于細胞質(zhì)成分、中性顆粒染色效果好吉姆薩染液：對細胞核、寄生蟲著色好結(jié)構(gòu)清晰瑞氏染夜的質(zhì)量控制新配制的染料偏堿，須室溫或37度保存一段時間，待亞甲藍逐漸變?yōu)樘烨郆

3、，貯存時間越久，染色越好，貯存過程，必須加塞，防甲醇揮發(fā)（加甘油）和氧化成甲酸。甲醇必須為AR級，丙酮含量過多，會使染色偏酸，白的細胞著色不良。第二章 紅細胞檢查1、血紅蛋白每克血紅蛋白可攜帶1.34ml氧，成人約含600g血紅蛋白，可攜帶約800ml氧血紅蛋白的合成調(diào)節(jié)激素:促紅細胞生成素（EPO）、雄激素2、 紅細胞內(nèi)異常結(jié)構(gòu)異常結(jié)構(gòu)來源 常見疾病嗜堿性點彩紅重金屬損傷細胞膜，嗜堿性物質(zhì)凝集或變性鉛中毒，其他各類貧血見到點彩紅細胞表明骨髓造血旺盛或紊亂豪喬氏小體暗紫紅色圓形小體，為核碎裂、溶解后的殘余部分脾切除、無脾癥、脾萎縮、脾功能低下、紅白血病、某些貧血（巨幼貧）卡波環(huán)紫紅色細線圈狀結(jié)

4、構(gòu)，呈環(huán)形、8字形，為核膜殘余物、紡錘體殘余物、脂蛋白變性物白血病、巨幼貧、增生性貧血、鉛中毒、脾切除寄生蟲紅細胞質(zhì)內(nèi)可見瘧原蟲、微絲蚴、杜利什曼原蟲3、Hb結(jié)構(gòu)及各階段的生成 Fe2+ 99%還原Hb攜氧 鐵 1個亞鐵血紅素 Fe3+ 1%高鐵Hb 原卟啉Hb 2鏈（141個氨基酸）：、鏈 珠蛋白 2鏈（146個氨基酸）：、鏈各階段血紅蛋白種類和比例妊娠期：5W:HbGower(22) 6W: HbGower(22)HbGower(22) HbPortland(22) HbF(22) 8W:HbA(22)出生： 3M: HbA(22) 95%、HbF 1%、HbA2 2-3%衰老紅細胞被分解

5、為：鐵、珠蛋白、膽紅素4、紅細胞計數(shù)：計算公式：紅細胞/LN×25/5×10×106×200N×1010N/100×1012紅細胞稀釋液：Hayem液NaCl(調(diào)節(jié)滲透壓)、Na2SO4(提高比密防止細胞粘連)、HgCl2（防腐）5、Hb測定（ICSH參考方法：氰化高鐵血紅蛋白測定法）HiCN（540nm吸收峰）法除SHb外的各種Hb，氧合Hb或其他衍生物均可被高鐵氰化鉀氧化。干擾因素白細胞過高或球蛋白異常SDS法：538nm吸收峰6、紅細胞形態(tài)的改變形態(tài)改變改變部位常見疾病球形細胞膜球形紅細胞增多癥、自免溶貧、小兒橢圓形細胞膜缺鐵性

6、貧血、骨髓纖維化、巨幼 貧、鐮貧、正常人（1-15%）靶形Hb珠蛋白生成障礙性貧血、HbC病、阻塞性黃疸、脾切除口型細胞膜口型RBC增多、酒精中毒、某些溶血性貧血、肝病和正常人鐮形Hb鐮貧 、鐮狀細胞特性樣本棘紅細胞膜-脂蛋白缺乏、脾切除、酒精中毒性肝炎、尿毒癥緡錢狀血漿纖維蛋白、球蛋白增高有核紅溶貧、血液病或骨髓轉(zhuǎn)移瘤、慢性骨髓增生性疾病、脾切除裂 紅細胞DIC、巨幼貧、重型珠蛋白生成障礙、嚴重?zé)齻?、正常人新月形溶血性貧血淚滴形Hein小體貧血、骨髓纖維化、正常人形態(tài)不整某些感染、嚴重貧血、巨幼貧7、HCT測定（WHO參考方法：微量法）8、紅細胞平均指數(shù)紅細胞平均體積：MCVHCT/RBC(

7、fl)當(dāng)紅細胞凝集、嚴重高血糖癥可使MCV假性增高紅細胞平均血紅蛋白含量：MCHHb/RBC高脂血癥、白細胞增多癥可使MCH假性增高紅細胞平均血紅蛋白濃度：MCHCHb/HCT貧血形態(tài)學(xué)類型MCVMCHMCHC病因舉例正常細胞貧血80-10027-340.32-0.36急性失血、溶血、造血功能低下、白血病小細胞低色素性貧血80260.32缺鐵性貧血、慢性失血、珠蛋白生成障礙性貧血單純小細胞性貧血80260.32-0.36感染、中毒、慢性炎癥、尿毒癥大細胞性貧血100340.32-0.36VB12、葉酸缺乏9、 紅細胞體積分布寬度（RDW）貧血形態(tài)學(xué)分類 MCV減少正常增高RDW正常輕型珠蛋白生

8、成障礙性貧血慢性貧血慢性貧血、遺傳性球星紅細胞貧血（RDW也可增高）、某些重型血紅蛋白病（如AS）再障、骨髓異常增生綜合征增高缺鐵性貧血、HbH病、-珠蛋白生成障礙性貧血（非輕型）、重型血紅蛋白病（AC)、某些慢性貧血、G6PD缺乏癥、紅細胞碎片鐵缺乏早期、鐮狀紅細胞貧血、HbS、C病VB12或葉酸缺乏貧血、免疫性溶血性貧血、冷凝集素、酗酒作為缺鐵性貧血篩選診斷和療效觀察的指標：RDW增大對IDA的診斷靈敏度達95%以上，特異性不強，可作為IDA的篩選診斷指標。當(dāng)鐵劑治療有效時，RDW開始增大，隨后逐漸降至正常鑒別缺鐵性貧血和-珠蛋白生成障礙性貧血：RDW增大對IDA的診斷靈敏度達95%以上，

9、特異性不強，可作為IDA的篩選診斷指標。當(dāng)鐵劑治療有效時，RDW開始增大，隨后逐漸降至正常。-珠蛋白生成障礙性貧血沒有上述表現(xiàn)。10、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)（ICSH推薦Miller窺盤法、WHO推薦新亞甲藍染色）Miller窺盤法：網(wǎng)織紅細胞百分率大方格內(nèi)網(wǎng)織紅細胞數(shù)/小方格內(nèi)的紅細胞數(shù)×9×100%網(wǎng)織紅細胞計數(shù)儀法：將Ret分為強熒光強度Ret（HFR）、中熒光強度Ret（MFR）、弱熒光強度Ret（LFR）網(wǎng)織紅細胞成熟指數(shù)：RMI（MFR+HFR）/LFR×100臨床意義：外周血網(wǎng)織紅細胞中型（破網(wǎng)型）占20-30%，型（斑點型）70-80%，若骨髓增生明顯，可

10、出現(xiàn)型（絲球形）和型（網(wǎng)型）增多：溶血性貧血、放療化療后、紅系無效造血減少：AA、溶血性貧血再障危象，典型再障診斷標準之一Ret計數(shù)常低于0.005，絕對值低于15×109/L觀察貧血療效：IDA、巨幼貧、患者治療前Ret僅輕度增高（也可正常或減低），給予鐵劑或VB12、葉酸治療后，用藥3-5天后，Ret開始上升，7-10天達高峰，2周左右，Ret下降，表明治療有效11、 點彩紅細胞計數(shù)（殘存的嗜堿性RNA）臨床意義：增高：中毒、各類貧血、巨幼貧、惡性貧血、惡性腫瘤、表示造血旺盛12、 紅細胞沉降率（ESR ICSH推薦方法魏氏法）質(zhì)量控制血漿蛋白比例：血沉減慢：小分子蛋白如清蛋白、

11、卵磷脂 血沉加快：大分子蛋白質(zhì)如急性反應(yīng)蛋白（CRP、FIB、觸珠蛋白、銅藍蛋白1酸性糖蛋白、1抗胰蛋白酶）、免疫球蛋白、巨球蛋白、膽固醇、甘油三酯紅細胞數(shù)量和形狀：紅細胞數(shù)量：血沉加快：數(shù)量少；血沉減慢；數(shù)量多，但數(shù)量太少，則影響紅細胞緡錢狀形成，導(dǎo)致血沉減慢紅細胞直徑：直徑越大血沉越快，如靶形紅細胞；但球形紅細胞、鐮形紅細胞不易臨床意義：血沉增快：生理性：女性高于男性。老年人增快病理性：各種炎癥、組織損傷及壞死、惡性腫瘤、高球蛋白血癥、貧血、高膽固醇血癥血沉減慢：真性或相對性紅細胞增多癥、DIC消耗性低凝血期、繼發(fā)性纖溶期、肝病、腫瘤、其他嚴重疾病因未產(chǎn)生急性反應(yīng)蛋白等使血沉減慢第3章 白

12、細胞檢查一、白細胞計數(shù)：WBC/LN/4×10×20×106N/20×1091、有核紅細胞影響的矯正公式校正后的白細胞數(shù)/L校正前白細胞數(shù)×100/100+Y（Y為白細胞分類計數(shù)時，100個白細胞中有核紅細胞數(shù)量）2、質(zhì)量控制：常規(guī)考核標準（RCS）四大格WBC最大值-最小值/四大格WBC平均值×100%WBC總數(shù)(109 /L)RCS(%)430%4.1-14.920%1515%二、白細胞分類計數(shù)(參考方法：顯微鏡分類法)1、細胞分布不均：尾部：中性粒細胞多、淋巴少，單核沿涂片長軸均勻分布尾部和邊緣：大細胞和幼稚細胞頭部和體部：淋巴

13、、嗜堿2、白細胞總數(shù)與分類白細胞數(shù)的關(guān)系WBC總數(shù)(109 /L)應(yīng)分類WBC數(shù)（個）450-1004-1010010-2020020-3030030400三、 核左移：早幼粒至桿狀細胞5% 核右移：5葉核以上超過3%常伴有細胞總數(shù)減低核左移再生性輕度WBC總數(shù)和N百分比均增高，僅桿狀核增多（5%），輕度感染，機體抵抗力較強中度WBC總數(shù)和N百分比均增高,桿狀核10%，有少數(shù)晚幼粒，嚴重感染重度WBC總數(shù)和N百分比均明顯增高，桿狀核25%，并出現(xiàn)幼稚的粒細胞退行性WBC總數(shù)不增高，甚至減低，見于再障、粒細胞減少癥、嚴重感染（傷寒、敗血癥）核右移常伴WBC總數(shù)減低，為造血物質(zhì)缺乏、DNA減低、造

14、血功能減退所致。見于營養(yǎng)性巨幼貧、惡性貧血、應(yīng)用抗代謝藥物、炎癥恢復(fù)期。 四、 嗜酸性粒細胞計數(shù)計算公式：嗜酸性粒細胞/LN/10×10×20×106N/50×109五、 異常WBC形態(tài)毒性變大小不均、空泡、Dohle體退行性變、巨多分葉巨幼貧、抗代謝藥物治療后棒狀小（Auer）急性白血病，尤其是M3型可見數(shù)條-數(shù)十條，M5可見一條，ALL不見Pelger-Huet常染色體顯性遺傳性異常，可繼發(fā)于嚴重感染、白血病、MDS、腫瘤轉(zhuǎn)移、某些藥物治療后Chediak-HigashiChediak-Higashi畸形，為常染色體隱性遺傳Alder-Reilly脂

15、肪軟骨營養(yǎng)不良、遺傳性多糖代謝障礙、為常染色體隱性遺傳May-Hegglin常染色體顯性遺傳漿細胞外周血出現(xiàn)漿細胞，見于傳染性單核細胞增多癥、流行性出血熱、弓形體病、梅毒、結(jié)核病漿細胞異常形態(tài)：Mott細胞（見于反應(yīng)性漿細胞增多癥、瘧疾、黑熱病、多發(fā)性骨髓瘤）、火焰漿細胞(見于IgA型骨髓瘤)、Russell小體（見于多發(fā)性骨髓瘤、傷寒、瘧疾、黑熱?。┑谒恼?血液分析儀及臨床應(yīng)用一、光散射法血液分析儀檢測原理1、POX活性：ENM2、多角度偏振光散射（MAPSS）法：0o：前角光散射（1o-3o），可測細胞大小10o：狹角光散射（7o-11o），可測定細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)90o：垂直光散射（70o-110o），可測定細胞分葉情況-90o：消偏振光散射（70o-110o），可將嗜酸性粒細胞和其他細胞區(qū)分出來二、光散射法紅細胞檢測原理低角度（2o-3o）光散射能測量單個紅細胞體積高角度（5o-15o）光散射測量單個紅細胞血紅蛋白濃度三、光散射法血小板檢測原理高角度（5o-15o）光散射能測量細胞折射指數(shù)（RI）低角度（2o-3o）光散射能測量細胞大小。四、細胞直方圖1、白細胞直方圖：正常WBC直方圖，在35-450fl范圍內(nèi)將WBC分為3群白細胞直方圖變化的部分原因白細胞正