免疫細(xì)胞的分離與檢驗(yàn)

1、關(guān)于免疫細(xì)胞的分離與檢驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁，共60頁 第一節(jié)第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分類與分離免疫細(xì)胞的分類與分離一、免疫細(xì)胞的種類與特征二、免疫細(xì)胞的分離技術(shù)三、細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁，共60頁免疫細(xì)胞的特征免疫細(xì)胞的特征1、免疫細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征 理化性狀 生物學(xué)特性2、免疫細(xì)胞的膜分子特征 CD分子現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁，共60頁 免疫細(xì)胞的起源與分化免疫細(xì)胞的起源與分化 紅細(xì)胞 血小板 肥大細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 巨噬細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞 漿細(xì)胞 T細(xì)胞 NK細(xì)胞現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四頁，共60頁免疫細(xì)胞的分離技術(shù)免疫細(xì)胞的分離技術(shù)1、密度梯度離心法2、黏附分離法3、熒光激活分離法4、磁性分離法5、其

2、他分離法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五頁，共60頁密度梯度離心法密度梯度離心法離心前離心后稀釋抗凝血淋巴細(xì)胞分離液血漿單個(gè)核細(xì)胞粒細(xì)胞紅細(xì)胞現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁，共60頁沉降速度 =2r2（QQ0）9 x gQ =顆粒比重 Q0 =溶質(zhì)比重 r =顆粒半徑 = 形狀因子 = 顆粒摩擦系數(shù)/同體積球型顆粒摩擦系數(shù) = 粘稠度 g = 相對(duì)離心力 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁，共60頁人類血液有形成分的平均密度與直徑人類血液有形成分的平均密度與直徑 密度 直徑（）血小板 1.041.06 淋巴細(xì)胞 1.061.08 810粒細(xì)胞 1.081.09 13紅細(xì)胞 1.091.10 7.5現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁，共60頁黏附分離法黏

3、附分離法尼龍毛法貼壁法親和板法吸附柱法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁，共60頁熒光激活分離法（熒光激活分離法（FACS）熒光檢測(cè)器濾光片透鏡接物鏡激光束偏轉(zhuǎn)板噴嘴細(xì)胞收集管流體護(hù)套樣品現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁，共60頁流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十一頁，共60頁磁性分離法磁性分離法磁鐵吸引法磁式細(xì)胞分類術(shù)法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁，共60頁MACS (陽性選擇法）陽性選擇法）NS現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁，共60頁MACS (陰性選擇法）陰性選擇法）NS現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁，共60頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十五頁，共60頁其他分離法其他分離法花環(huán)沉降法細(xì)胞活化克隆法MHC分子四聚體法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十六頁，共60頁抗原肽抗原肽

4、-MHC分子四聚體技術(shù)分子四聚體技術(shù)T現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十七頁，共60頁細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇細(xì)胞凍存的原理與方法細(xì)胞復(fù)蘇的原理與方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十八頁，共60頁細(xì)胞凍存罐細(xì)胞凍存罐現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十九頁，共60頁 第二節(jié)第二節(jié) 免疫細(xì)胞膜分子的檢測(cè)免疫細(xì)胞膜分子的檢測(cè)一、免疫細(xì)胞膜分子檢測(cè)的原理與類型二、免疫細(xì)胞膜分子的檢測(cè)方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十頁，共60頁免疫細(xì)胞膜分子檢測(cè)的原理與類型免疫細(xì)胞膜分子檢測(cè)的原理與類型1、以抗體識(shí)別抗原2、以配體識(shí)別受體現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十一頁，共60頁免疫細(xì)胞膜分子的主要檢測(cè)方法免疫細(xì)胞膜分子的主要檢測(cè)方法1、免疫標(biāo)記檢測(cè)方法 熒光抗體法 酶免疫檢測(cè)法

5、免疫金銀染色法2、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDC）3、花環(huán)形成試驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十二頁，共60頁SmIg的熒光抗體檢測(cè)法的熒光抗體檢測(cè)法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十三頁，共60頁SmIg的酶免疫檢測(cè)法的酶免疫檢測(cè)法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十四頁，共60頁補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDC）染料補(bǔ)體現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十五頁，共60頁E-花環(huán)花環(huán)T細(xì)胞B細(xì)胞花環(huán)形成細(xì)胞綿羊紅細(xì)胞現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十六頁，共60頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十七頁，共60頁EA-花環(huán)花環(huán)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十八頁，共60頁EAC-花環(huán)花環(huán)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十九頁，共60頁 第三節(jié)第三節(jié) 免疫細(xì)胞功能測(cè)定免疫細(xì)胞功能測(cè)定一、轉(zhuǎn)化、增殖試驗(yàn)二、

6、細(xì)胞毒試驗(yàn)三、抗體形成試驗(yàn)四、細(xì)胞吞噬與殺傷試驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十頁，共60頁1、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)2、混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化、增殖試驗(yàn)轉(zhuǎn)化、增殖試驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十一頁，共60頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十二頁，共60頁放射性測(cè)定3H-TdR絲裂原（抗原）刺激淋淋巴巴細(xì)細(xì)胞胞轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化試試驗(yàn)驗(yàn)原原理理示示意意現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十三頁，共60頁1、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)2、NK活性測(cè)定3、ADCC作用測(cè)定細(xì)胞毒檢測(cè)試驗(yàn)細(xì)胞毒檢測(cè)試驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十四頁，共60頁放射性測(cè)定細(xì)細(xì)胞胞毒毒試試驗(yàn)驗(yàn)原原理理示示意意靶細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞分離上清現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十五頁，共60頁1、直接溶血空斑試驗(yàn)2、間接溶血空斑試驗(yàn)3、SP

7、A-SRBC溶血空斑試驗(yàn)抗體形成試驗(yàn)抗體形成試驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十六頁，共60頁直接溶血空斑試驗(yàn)直接溶血空斑試驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十七頁，共60頁間接溶血空斑試驗(yàn)間接溶血空斑試驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十八頁，共60頁SPA-SRBC溶血空斑試驗(yàn)溶血空斑試驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十九頁，共60頁1、細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)2、細(xì)胞殺菌功能試驗(yàn)細(xì)胞吞噬與殺傷功能試驗(yàn)細(xì)胞吞噬與殺傷功能試驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十頁，共60頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十一頁，共60頁吞噬百分率 =吞有顆粒的吞噬細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)的吞噬細(xì)胞數(shù)吞噬指數(shù) =吞噬細(xì)胞吞噬的總顆粒數(shù)計(jì)數(shù)的吞噬細(xì)胞數(shù)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十二頁，共60頁NBT還原試驗(yàn)還原試驗(yàn)原理：N-N-C +

8、 H+N=N-R-N-NH2C N=NH四氮唑基（淡黃色）甲月簪基（紫黑色）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十三頁，共60頁NBT還原試驗(yàn)還原試驗(yàn)方法：1、抗凝血 + 硝基藍(lán)四氮唑（NBT），37。C孵育25min。2、推片染色、鏡檢。正常值：NBT陽性細(xì)胞 7.5-15%現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十四頁，共60頁 第四節(jié)第四節(jié) 免疫細(xì)胞凋亡測(cè)定免疫細(xì)胞凋亡測(cè)定一、細(xì)胞凋亡的概念與原理二、細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十五頁，共60頁 細(xì)胞凋亡的概念與原理細(xì)胞凋亡的概念與原理1、細(xì)胞凋亡的概念2、細(xì)胞凋亡的原理3、細(xì)胞凋亡的特點(diǎn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十六頁，共60頁 細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡（apoptosisapoptosis

9、） 細(xì)胞在內(nèi)源性基因調(diào)控下發(fā)生的主動(dòng)死亡過程，也稱程序性死亡。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十七頁，共60頁 細(xì)胞凋亡的過程細(xì)胞凋亡的過程凋亡信號(hào)凋亡受體信號(hào)傳導(dǎo)凋亡基因啟動(dòng)編碼程序性死亡蛋白細(xì)胞結(jié)構(gòu)解體細(xì)胞凋亡現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十八頁，共60頁 細(xì)胞凋亡機(jī)制細(xì)胞凋亡機(jī)制現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十九頁，共60頁 細(xì)胞凋亡的特點(diǎn)細(xì)胞凋亡的特點(diǎn)1、細(xì)胞皺縮2、染色質(zhì)邊集3、凋亡小體出現(xiàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十頁，共60頁 細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十一頁，共60頁 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法1、形態(tài)觀察法2、生化檢測(cè)法3、流式細(xì)胞儀檢測(cè)法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十二頁，共60頁形態(tài)觀察法形態(tài)觀察法普通光鏡檢測(cè)HE染色

10、甲基綠-派諾寧染色熒光顯微鏡檢測(cè)溴化丙錠染色透射電鏡檢測(cè)典型形態(tài)改變現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十三頁，共60頁生化檢測(cè)法生化檢測(cè)法凝膠電泳法原位末端標(biāo)記法二苯胺分光光度法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十四頁，共60頁凝膠電泳法凝膠電泳法原理：斷裂DNA在凝膠中呈梯形排列 （DNA ladder）方法：提取總DNA DNA凝膠電泳 觀察DNA ladder現(xiàn)象現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十五頁，共60頁原位末端標(biāo)記法（原位末端標(biāo)記法（TUNEL）原理：利用標(biāo)記的dUTP，在TdT作用 下結(jié)合DNA斷片的3末端羥基， 顯示斷鏈DNA，提示凋亡方法：制備組織切片 標(biāo)記物結(jié)合 標(biāo)記物顯色 鏡檢現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十六頁，共60頁二苯胺分光光度法二苯胺分光光度法原理：細(xì)胞凋亡可產(chǎn)生低分子量DNA，通過超速離心可與細(xì)胞核的高分子量DNA分離，分別測(cè)定兩種DNA，即可得出凋亡百分率。方法：裂解細(xì)胞 13000g超速離心 分別提取DNA 使DNA顯色，測(cè)定現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十七頁，共60頁凋亡百分率 =上清液OD值上清