中藥的含量測(cè)定

1、1第四章第四章 中藥的含量測(cè)定中藥的含量測(cè)定 2第一節(jié)第一節(jié) 含量測(cè)定的目的與意義含量測(cè)定的目的與意義 中藥的含量測(cè)定與化藥有很大區(qū)別中藥的含量測(cè)定與化藥有很大區(qū)別中藥組成復(fù)雜，產(chǎn)生療效的不是某單一成分，中藥組成復(fù)雜，產(chǎn)生療效的不是某單一成分，檢測(cè)檢測(cè)任何一種活性成分均不能反映中藥的整體療效任何一種活性成分均不能反映中藥的整體療效。但是借鑒化藥質(zhì)量控制模式，測(cè)定某一味藥味的有但是借鑒化藥質(zhì)量控制模式，測(cè)定某一味藥味的有效成分、活性成分、指標(biāo)性成分的含量的方法，對(duì)效成分、活性成分、指標(biāo)性成分的含量的方法，對(duì)于于控制中藥質(zhì)量起著不可替代的重要作用控制中藥質(zhì)量起著不可替代的重要作用。通過測(cè)定中藥中有

2、效成分、毒性成分或某些指標(biāo)性通過測(cè)定中藥中有效成分、毒性成分或某些指標(biāo)性成分的含量來成分的含量來衡量其制劑工藝的穩(wěn)定性和中藥材的衡量其制劑工藝的穩(wěn)定性和中藥材的質(zhì)量?jī)?yōu)劣質(zhì)量?jī)?yōu)劣，以保證中藥的質(zhì)量，達(dá)到臨床用藥安全、，以保證中藥的質(zhì)量，達(dá)到臨床用藥安全、有效的目的。有效的目的。 3第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 樣品處理的主要作用有：樣品處理的主要作用有： 將被測(cè)成分有效地從樣品中釋放出來，并制成便于將被測(cè)成分有效地從樣品中釋放出來，并制成便于分析測(cè)定的穩(wěn)定試樣。分析測(cè)定的穩(wěn)定試樣。 除去雜質(zhì)、純化樣品，以提高分析方法的重現(xiàn)性和除去雜質(zhì)、純化樣品，以提高分析方法的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確

3、度。準(zhǔn)確度。 富集濃縮或進(jìn)行衍生化，以測(cè)定低含量被測(cè)成分。富集濃縮或進(jìn)行衍生化，以測(cè)定低含量被測(cè)成分。衍生化不僅可提高檢測(cè)器的靈敏度，還可以提高方法的衍生化不僅可提高檢測(cè)器的靈敏度，還可以提高方法的選擇性。選擇性。 使試樣的形式及所用溶劑符合分析測(cè)定的要求。使試樣的形式及所用溶劑符合分析測(cè)定的要求。 4第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 一、樣品的粉碎一、樣品的粉碎 1.1.目的目的：W 是保證含量測(cè)定所取樣品均勻而有代表性，提高測(cè)定結(jié)果的是保證含量測(cè)定所取樣品均勻而有代表性，提高測(cè)定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度；精密度和準(zhǔn)確度；W 是使樣品中的被測(cè)組分能更快地完全提取出來。是使樣品中

4、的被測(cè)組分能更快地完全提取出來。2.2.粉碎時(shí)粉碎時(shí)注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)：S 不要粉碎得過細(xì)。樣品粉碎得過細(xì)，在樣品提取時(shí)，會(huì)造成不要粉碎得過細(xì)。樣品粉碎得過細(xì)，在樣品提取時(shí)，會(huì)造成過濾困難，因此可視實(shí)際情況進(jìn)行粉碎過篩。過濾困難，因此可視實(shí)際情況進(jìn)行粉碎過篩。S 避免污染樣品。在粉碎樣品時(shí)，要盡量避免由于設(shè)備的磨損避免污染樣品。在粉碎樣品時(shí)，要盡量避免由于設(shè)備的磨損或不干凈等原因而玷污樣品，或不干凈等原因而玷污樣品，S 防止粉塵飛散或揮發(fā)性成分的損失。防止粉塵飛散或揮發(fā)性成分的損失。 過篩時(shí)，通不過篩孔的部分顆粒決不能丟棄，必須反復(fù)粉碎過篩時(shí)，通不過篩孔的部分顆粒決不能丟棄，必須反復(fù)粉碎或碾磨，

5、讓其全部通過篩孔。或碾磨，讓其全部通過篩孔。5第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 二、樣品的提取二、樣品的提取 對(duì)于中藥材和固體制劑樣品，在粉碎后，取粉末適對(duì)于中藥材和固體制劑樣品，在粉碎后，取粉末適量精密稱定，首先用溶劑進(jìn)行提取，使被測(cè)組分和某些量精密稱定，首先用溶劑進(jìn)行提取，使被測(cè)組分和某些共存組分從中溶解出來（前者必須完全溶出），與濾渣共存組分從中溶解出來（前者必須完全溶出），與濾渣分離后，再對(duì)被測(cè)組分進(jìn)行含量測(cè)定。分離后，再對(duì)被測(cè)組分進(jìn)行含量測(cè)定。常見的提取方法常見的提取方法：Y 冷浸法冷浸法 Y 回流提取法回流提取法 Y 連續(xù)回流提取法連續(xù)回流提取法 Y 超聲提取法超

6、聲提取法 Y 超臨界流體提取法超臨界流體提取法6第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 三、樣品的分離凈化三、樣品的分離凈化 （一）沉淀法（一）沉淀法（二）蒸餾法（二）蒸餾法 （三）液一液萃取法（三）液一液萃取法（LLELLE）（四）色譜法（四）色譜法 7第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 （四）色譜法（四）色譜法 吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠色譜皆可作為中吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠色譜皆可作為中藥制劑分析中的凈化分離方法，其操作方式有柱色譜，薄層色譜藥制劑分析中的凈化分離方法，其操作方式有柱色譜，薄層色譜和紙色譜。和紙色譜。 其中經(jīng)典微柱色譜

7、，也稱固相萃取或液其中經(jīng)典微柱色譜，也稱固相萃取或液固萃?。ü梯腿。↙SELSE）具有）具有設(shè)備簡(jiǎn)單，使用方便，快速，凈化效率較高而最常用，將在此做設(shè)備簡(jiǎn)單，使用方便，快速，凈化效率較高而最常用，將在此做一簡(jiǎn)介。一簡(jiǎn)介。 LSELSE通常是指樣品溶液加到裝有合適固定相（凈化劑）的長(zhǎng)通常是指樣品溶液加到裝有合適固定相（凈化劑）的長(zhǎng)5515cm15cm，內(nèi)徑，內(nèi)徑0.50.51cm1cm的色譜柱中，將被測(cè)成分保留于柱上，的色譜柱中，將被測(cè)成分保留于柱上，洗去雜質(zhì)后，再洗脫被測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定，或者是使雜質(zhì)強(qiáng)烈保留洗去雜質(zhì)后，再洗脫被測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定，或者是使雜質(zhì)強(qiáng)烈保留于柱上，直接洗脫被測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定。

8、用這種選擇性好而柱效較于柱上，直接洗脫被測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定。用這種選擇性好而柱效較低的方法進(jìn)行樣品的凈化分離，尤其適用于一類總成分的含量測(cè)低的方法進(jìn)行樣品的凈化分離，尤其適用于一類總成分的含量測(cè)定，也可將色譜柱流出的樣品進(jìn)一步用定，也可將色譜柱流出的樣品進(jìn)一步用GCGC、HPLCHPLC、TCLTCL分離后測(cè)定。分離后測(cè)定。 LSELSE的常用凈化劑（填料）有氧化鋁、氧化鎂、硅藻土、硅膠、的常用凈化劑（填料）有氧化鋁、氧化鎂、硅藻土、硅膠、活性炭、大孔樹脂離子交換樹脂、鍵合相硅膠活性炭、大孔樹脂離子交換樹脂、鍵合相硅膠C8C8、C18C18、聚酰胺等。、聚酰胺等。視其性質(zhì)可分為親脂型、親水型和離子

9、交換型填料。視其性質(zhì)可分為親脂型、親水型和離子交換型填料。 8第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 硅膠、氧化鋁等：硅膠、氧化鋁等： 它們是傳統(tǒng)的吸附劑，多以它們是傳統(tǒng)的吸附劑，多以0.070.070.15mm0.15mm(200(200100100目目) )的的顆粒顆粒1 15g5g用于樣品的凈化處理，其作用機(jī)制為溶質(zhì)在吸附劑用于樣品的凈化處理，其作用機(jī)制為溶質(zhì)在吸附劑表面的極性吸附作用。通常是當(dāng)表面的極性吸附作用。通常是當(dāng)溶于有機(jī)溶劑的樣品溶于有機(jī)溶劑的樣品加到柱上加到柱上時(shí)非極性或時(shí)非極性或低極性的雜質(zhì)先被洗出低極性的雜質(zhì)先被洗出色譜柱，再用適當(dāng)極性的溶色譜柱，再用適當(dāng)極性

10、的溶劑洗脫被測(cè)成分，而強(qiáng)極性的雜質(zhì)仍保留在柱上。劑洗脫被測(cè)成分，而強(qiáng)極性的雜質(zhì)仍保留在柱上。 氧化鋁能將黃酮類吸附在柱上，用于生物堿、苷類等的測(cè)氧化鋁能將黃酮類吸附在柱上，用于生物堿、苷類等的測(cè)定。例如用法（吸收系數(shù)法）定。例如用法（吸收系數(shù)法） 硅膠適合于分離中性或酸性化合物，強(qiáng)烈保留堿性化合物。硅膠適合于分離中性或酸性化合物，強(qiáng)烈保留堿性化合物。若把樣品提取液加到柱上，依次用極性由小到大的溶劑洗脫，若把樣品提取液加到柱上，依次用極性由小到大的溶劑洗脫，則可以將雜質(zhì)和被測(cè)成分分離。則可以將雜質(zhì)和被測(cè)成分分離。9鍵合相硅膠：鍵合相硅膠： 十八烷基鍵合相硅膠（簡(jiǎn)稱十八烷基鍵合相硅膠（簡(jiǎn)稱C18C

11、18或或ODSODS）是常用的固體萃?。┦浅Ｓ玫墓腆w萃取劑，其次有烷基、苯基、氰基鍵合相硅膠，可用來分開脂溶性劑，其次有烷基、苯基、氰基鍵合相硅膠，可用來分開脂溶性和水溶性雜質(zhì)或成分。也常用于萃取，純化水基質(zhì)體液中憎水和水溶性雜質(zhì)或成分。也常用于萃取，純化水基質(zhì)體液中憎水性藥物。該類性藥物。該類LSELSE的一般操作程序?yàn)椋旱囊话悴僮鞒绦驗(yàn)椋?)1)柱的活化。用柱的活化。用2ml2ml甲醇沖洗以潤(rùn)濕鍵合相和除去雜質(zhì)，再用甲醇沖洗以潤(rùn)濕鍵合相和除去雜質(zhì)，再用0.50.5毫升水洗去柱中的甲醇。毫升水洗去柱中的甲醇。2)2)上樣。上樣。3)3)清洗。用清洗。用2 25ml5ml的的水水清洗以清洗以除

12、去弱保留的親水成分除去弱保留的親水成分，如無機(jī)鹽、，如無機(jī)鹽、氨基酸、親水的蛋白質(zhì)、糖以及中等保留成分的極性化合物、氨基酸、親水的蛋白質(zhì)、糖以及中等保留成分的極性化合物、低肽等。低肽等。4)4)洗脫。用洗脫。用2 25ml5ml甲醇或甲醇甲醇或甲醇- -水洗脫水洗脫大分子的肽、甾體、較親脂大分子的肽、甾體、較親脂的藥物等強(qiáng)保留的待測(cè)組分。的藥物等強(qiáng)保留的待測(cè)組分。 第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 10大孔樹脂：它可分為極性和非極性型大孔樹脂：它可分為極性和非極性型 極性極性 丙烯酰胺聚合物丙烯酰胺聚合物; ; 非極性非極性 苯乙烯和二乙烯苯的共聚物苯乙烯和二乙烯苯的共聚物.

13、 . 其吸附性質(zhì)與烷基鍵合相硅膠相似，通過疏水作用其吸附性質(zhì)與烷基鍵合相硅膠相似，通過疏水作用對(duì)非極性水溶性成份有吸附力。例如在測(cè)定復(fù)方歸芪劑對(duì)非極性水溶性成份有吸附力。例如在測(cè)定復(fù)方歸芪劑中的黃芪甲苷時(shí)，用大孔樹脂除去水溶性的多糖雜質(zhì)，中的黃芪甲苷時(shí)，用大孔樹脂除去水溶性的多糖雜質(zhì)，再用再用30%30%乙醇洗脫黃芪甲苷。大孔樹脂的主要特點(diǎn)是表乙醇洗脫黃芪甲苷。大孔樹脂的主要特點(diǎn)是表面積極大，傳質(zhì)速率較高和具有不同的極性及適于吸附面積極大，傳質(zhì)速率較高和具有不同的極性及適于吸附較大分子。較大分子。 樹脂在使用前需要前處理：用甲醇、乙醇、丙酮等樹脂在使用前需要前處理：用甲醇、乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑

14、除去雜質(zhì)，有時(shí)還需用酸、堿清洗。該填料用有機(jī)溶劑除去雜質(zhì)，有時(shí)還需用酸、堿清洗。該填料用量常為量常為1 12g2g，有時(shí)也用，有時(shí)也用100100150mg150mg來萃取血、尿中藥來萃取血、尿中藥物，操作程序類似物，操作程序類似ODSODS填料。填料。 第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 11第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 聚酰胺：聚酰胺： 它是常用的有機(jī)吸附劑，主要通過與它是常用的有機(jī)吸附劑，主要通過與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用。溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用。 常用于含酚、酸、醌類藥物樣品液的常用于含酚、酸、醌類藥物樣品液的凈化分離，凈化分離， 如測(cè)定黃酮

15、時(shí)，用樣品的乙醇提取液如測(cè)定黃酮時(shí)，用樣品的乙醇提取液上柱，水洗去部分雜質(zhì)，以上柱，水洗去部分雜質(zhì)，以95%95%乙醇洗脫總乙醇洗脫總黃酮后測(cè)定。黃酮后測(cè)定。 12第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 硅藻土、纖維素：硅藻土、纖維素： 它們?yōu)槌Ｓ玫挠H水型填料，其原理為分配它們?yōu)槌Ｓ玫挠H水型填料，其原理為分配作用。填料作為支持劑，多以水基質(zhì)液作為作用。填料作為支持劑，多以水基質(zhì)液作為固定相，與水不混溶的有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，固定相，與水不混溶的有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，較親脂的成分從固定相轉(zhuǎn)移到流動(dòng)相，而被較親脂的成分從固定相轉(zhuǎn)移到流動(dòng)相，而被洗脫，達(dá)到萃取的目的。其萃取率較高（一洗脫，達(dá)到萃

16、取的目的。其萃取率較高（一般大于般大于80%80%），無濃集作用，萃取液較純凈，），無濃集作用，萃取液較純凈，但洗脫劑用量較大（一般大于但洗脫劑用量較大（一般大于5ml5ml） 硅藻土柱則用干柱直接上樣，柱可再生。硅藻土柱則用干柱直接上樣，柱可再生。常見牌號(hào)為常見牌號(hào)為ExtretutExtretut。纖維素柱的使用與硅。纖維素柱的使用與硅藻土柱相似。藻土柱相似。 13離子交換樹脂：離子交換樹脂： 憎水基質(zhì)的離子交換樹脂兼有離子交換憎水基質(zhì)的離子交換樹脂兼有離子交換劑及大孔樹脂的一些性質(zhì)，所以對(duì)于在水中劑及大孔樹脂的一些性質(zhì)，所以對(duì)于在水中溶解度不大的藥物、洗脫劑中需含一定量的溶解度不大的藥物

17、、洗脫劑中需含一定量的有機(jī)溶劑。有機(jī)溶劑。 離子交換樹脂柱可用于除去樣品中的離離子交換樹脂柱可用于除去樣品中的離子，防止組分分解，更常用于萃取樣品液中子，防止組分分解，更常用于萃取樣品液中可離解化合物?？呻x解化合物。第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 14第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 此外，近年來發(fā)展起來的固相微此外，近年來發(fā)展起來的固相微萃取萃取(Solid-Phase microextraction, (Solid-Phase microextraction, SPME)SPME)和液相微萃取和液相微萃取(Liquid- Phase (Liquid-

18、Phase microextraction,LPME)microextraction,LPME)技術(shù)有良好技術(shù)有良好的應(yīng)用前景。的應(yīng)用前景。SPMESPME是一種無溶劑的萃是一種無溶劑的萃取技術(shù)，取樣方式有直接取樣和頂空取技術(shù)，取樣方式有直接取樣和頂空取樣。取樣。15（五）消化法五）消化法 對(duì)樣品進(jìn)行有機(jī)破壞，常用于中藥制劑中重金屬的檢查。對(duì)樣品進(jìn)行有機(jī)破壞，常用于中藥制劑中重金屬的檢查。 常用的破壞方法有濕法消化和干法消化法。常用的破壞方法有濕法消化和干法消化法。 濕法消化：根據(jù)所用試劑不同，下面介紹三種常見的消濕法消化：根據(jù)所用試劑不同，下面介紹三種常見的消化方法?；椒?。 （1 1）硝酸

19、）硝酸高氯酸法高氯酸法 該法破壞能力強(qiáng)，反應(yīng)較激烈，故該法破壞能力強(qiáng)，反應(yīng)較激烈，故進(jìn)行破壞時(shí)，必須嚴(yán)密注意切勿將容器中的溶液蒸干，以免發(fā)進(jìn)行破壞時(shí)，必須嚴(yán)密注意切勿將容器中的溶液蒸干，以免發(fā)生爆炸。本法適用于血，尿、組織等生物樣品和含動(dòng)植物藥制生爆炸。本法適用于血，尿、組織等生物樣品和含動(dòng)植物藥制劑的破壞，經(jīng)破壞后所得無機(jī)金屬離子均為高價(jià)態(tài)，本法對(duì)含劑的破壞，經(jīng)破壞后所得無機(jī)金屬離子均為高價(jià)態(tài)，本法對(duì)含氮雜環(huán)類有機(jī)物破壞不夠完全。氮雜環(huán)類有機(jī)物破壞不夠完全。 （2 2）硝酸）硝酸硫酸法硫酸法 該法適用于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)的破壞，該法適用于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)的破壞，無機(jī)金屬離子均氧化成高價(jià)態(tài)，與硫酸形

20、成不溶性硫酸鹽的金無機(jī)金屬離子均氧化成高價(jià)態(tài)，與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子的測(cè)定，不宜采有此法。屬離子的測(cè)定，不宜采有此法。 第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 16第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理 （3 3）硫酸）硫酸硫酸鹽法硫酸鹽法 本法所用硫酸鹽為硫酸鉀或無水硫酸納，加入本法所用硫酸鹽為硫酸鉀或無水硫酸納，加入硫酸鹽的目的是為了提高硫酸的沸點(diǎn)，以使樣品破硫酸鹽的目的是為了提高硫酸的沸點(diǎn)，以使樣品破壞加速完全。同時(shí)防止硫酸在加熱過程中過早地分壞加速完全。同時(shí)防止硫酸在加熱過程中過早地分解為解為SO3SO3而損失。經(jīng)本法破壞所得金屬離子，多為而損失。經(jīng)本

21、法破壞所得金屬離子，多為低價(jià)態(tài)。本法常用于含砷或銻的有機(jī)樣品的破壞，低價(jià)態(tài)。本法常用于含砷或銻的有機(jī)樣品的破壞，破壞后得到三價(jià)砷或銻。破壞后得到三價(jià)砷或銻。 濕法消化所用的儀器，一般為硅玻璃或硼玻璃濕法消化所用的儀器，一般為硅玻璃或硼玻璃制成的凱氏瓶（直火加熱）或聚四氟乙烯消化罐制成的凱氏瓶（直火加熱）或聚四氟乙烯消化罐（烘箱中加熱）。所用試劑應(yīng)為優(yōu)級(jí)純，水應(yīng)為去（烘箱中加熱）。所用試劑應(yīng)為優(yōu)級(jí)純，水應(yīng)為去離子水或高純水，同時(shí)必須按相同條件進(jìn)行空白實(shí)離子水或高純水，同時(shí)必須按相同條件進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)校正。操作時(shí)應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。驗(yàn)校正。操作時(shí)應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。 17第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理

22、含量測(cè)定樣品的處理 干法消化干法消化 本法是將有機(jī)物灼燒灰化以達(dá)分解的目的，將適量樣品置本法是將有機(jī)物灼燒灰化以達(dá)分解的目的，將適量樣品置于瓷坩鍋、鎳坩鍋或鉑坩堝中，常加無水于瓷坩鍋、鎳坩鍋或鉑坩堝中，常加無水Na2CO3Na2CO3或輕質(zhì)或輕質(zhì)MgOMgO等以等以助灰化，混勻后，先小火加熱，使樣品完全炭化，然后放入高助灰化，混勻后，先小火加熱，使樣品完全炭化，然后放入高溫爐中灼燒，使其灰化完全即可。本法不適用于含易揮發(fā)性金溫爐中灼燒，使其灰化完全即可。本法不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等，）有機(jī)樣品的破壞。屬（如汞、砷等，）有機(jī)樣品的破壞。 應(yīng)用本法時(shí)要注意以下幾個(gè)問題：應(yīng)用本法時(shí)要注意以

23、下幾個(gè)問題： 1 1）加熱灼燒時(shí)，控制溫度在）加熱灼燒時(shí)，控制溫度在420420以下，以免某些被測(cè)金以下，以免某些被測(cè)金屬化合物的揮發(fā)。屬化合物的揮發(fā)。 2 2）灰化完全與否，直接影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度。如欲檢查）灰化完全與否，直接影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度。如欲檢查灰化是否完全，可將灰分放冷后，加入稍過量的稀灰化是否完全，可將灰分放冷后，加入稍過量的稀HCl-HCl-水（水（1:31:3）或硝酸或硝酸- -水（水（1:31:3）溶液，振搖。若呈色或有不溶有機(jī)物，可于）溶液，振搖。若呈色或有不溶有機(jī)物，可于水浴上將溶液蒸干，并用小火炭化后，再行灼燒。水浴上將溶液蒸干，并用小火炭化后，再行灼燒。 3 3

24、）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但此時(shí)切勿棄）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但此時(shí)切勿棄去。去。18第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法 | 分類重量分析和滴定分析。分類重量分析和滴定分析。| 化學(xué)分析法所用儀器簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確?；瘜W(xué)分析法所用儀器簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確。| 主要用于測(cè)定制劑中含量較高的一些成分及主要用于測(cè)定制劑中含量較高的一些成分及含礦物藥制劑中的無機(jī)成分，如總生物堿類、總含礦物藥制劑中的無機(jī)成分，如總生物堿類、總酸類、總皂苷及礦物藥制劑等。酸類、總皂苷及礦物藥制劑等。| 化學(xué)分析法有一定的局限性，其靈敏度低，化學(xué)分析法有一定的局限性，其靈敏度低，操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)

25、，專屬性不高，對(duì)于微量成分操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，專屬性不高，對(duì)于微量成分準(zhǔn)確性不理想。準(zhǔn)確性不理想。19第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（一）重量分析法（一）重量分析法 重量法可分為揮發(fā)法、萃取法和沉淀法。重量法可分為揮發(fā)法、萃取法和沉淀法。 1 1、揮發(fā)法可測(cè)定具有揮發(fā)性或能定量轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性物質(zhì)、揮發(fā)法可測(cè)定具有揮發(fā)性或能定量轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性物質(zhì)的組分含量。如：的組分含量。如：供試品的干燥失重測(cè)定；供試品的干燥失重測(cè)定；水分測(cè)定均屬水分測(cè)定均屬揮發(fā)法；揮發(fā)法；中藥制劑分析中灰分及熾灼殘?jiān)臏y(cè)定等。中藥制劑分析中灰分及熾灼殘?jiān)臏y(cè)定等。 2 2、萃取法是根據(jù)被測(cè)組分在互不相溶的兩相中溶解

26、度的、萃取法是根據(jù)被測(cè)組分在互不相溶的兩相中溶解度的不同，達(dá)到分離的目的。如不同，達(dá)到分離的目的。如冰硼散中冰片的含量測(cè)定；冰硼散中冰片的含量測(cè)定；地地奧心血康膠囊中甾體總皂苷含量測(cè)定；奧心血康膠囊中甾體總皂苷含量測(cè)定；昆明山海棠片中總生昆明山海棠片中總生物堿的含量測(cè)定；物堿的含量測(cè)定；甘草浸膏中甘草酸的含量測(cè)定即采用萃取甘草浸膏中甘草酸的含量測(cè)定即采用萃取法。法。 3 3、沉淀法是將被測(cè)組分定量轉(zhuǎn)化為難溶化合物，測(cè)定其、沉淀法是將被測(cè)組分定量轉(zhuǎn)化為難溶化合物，測(cè)定其含量的方法，適用于制劑中純度較高的成分。如含量的方法，適用于制劑中純度較高的成分。如西瓜霜潤(rùn)喉西瓜霜潤(rùn)喉片中西瓜霜的含量測(cè)定；片

27、中西瓜霜的含量測(cè)定；苦參片中苦參總堿的含量測(cè)定；苦參片中苦參總堿的含量測(cè)定；復(fù)方元胡注射液總堿的測(cè)定。復(fù)方元胡注射液總堿的測(cè)定。 20第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（二）滴定分析法二）滴定分析法 滴定分析法分為酸堿滴定法、沉淀滴定法、配位滴定法滴定分析法分為酸堿滴定法、沉淀滴定法、配位滴定法和氧化還原滴定法。和氧化還原滴定法。 1 1、酸堿滴定法、酸堿滴定法 適用于測(cè)定中藥制劑中所含有的生物堿、有機(jī)酸、內(nèi)酯適用于測(cè)定中藥制劑中所含有的生物堿、有機(jī)酸、內(nèi)酯類等酸、堿組分的含量。類等酸、堿組分的含量。 直接滴定：對(duì)于直接滴定：對(duì)于KC10KC10-8-8的酸、堿組分，可在水溶液的酸

28、、堿組分，可在水溶液中直接滴定。如：止喘靈注射液中總生物堿的含量測(cè)定、顛中直接滴定。如：止喘靈注射液中總生物堿的含量測(cè)定、顛茄酊中生物堿的含量測(cè)定。茄酊中生物堿的含量測(cè)定。 間接滴定或非水滴定法：如大山楂丸中總酸性物質(zhì)的間接滴定或非水滴定法：如大山楂丸中總酸性物質(zhì)的含量測(cè)定、草烏注射液中生物堿的含量測(cè)定等。含量測(cè)定、草烏注射液中生物堿的含量測(cè)定等。2 2、沉淀滴定法、沉淀滴定法 主要用于生物堿、生物堿的氫鹵酸鹽及含鹵素的其他有主要用于生物堿、生物堿的氫鹵酸鹽及含鹵素的其他有機(jī)成分的含量測(cè)定。機(jī)成分的含量測(cè)定。21第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法3 3、配位滴定法、配位滴定法 包括

29、包括EDTAEDTA法和硫氰酸銨法，在中藥制劑分析中，法和硫氰酸銨法，在中藥制劑分析中，用以測(cè)定鞣質(zhì)、生物堿及含用以測(cè)定鞣質(zhì)、生物堿及含Ca2+Ca2+、Mg2+Mg2+、Fe3+Fe3+、Hg2+Hg2+等礦物類制劑的含量。如等礦物類制劑的含量。如萬氏牛黃清心丸等萬氏牛黃清心丸等的含量測(cè)定就采用硫氰酸銨法；的含量測(cè)定就采用硫氰酸銨法；牛黃解毒片中石牛黃解毒片中石膏的含量測(cè)定。膏的含量測(cè)定。4 4、氧化還原滴定法、氧化還原滴定法 適用于測(cè)定具有氧化還原性的物質(zhì)，如含酚類、適用于測(cè)定具有氧化還原性的物質(zhì)，如含酚類、糖類及礦物藥糖類及礦物藥FeFe、AsAs等成分的中藥制劑。如等成分的中藥制劑。如

30、磁朱磁朱丸中全鐵的含量測(cè)定采用鈰量法；丸中全鐵的含量測(cè)定采用鈰量法；牛黃解毒片中牛黃解毒片中雄黃的含量測(cè)定；雄黃的含量測(cè)定；丹皮酚注射液中丹皮酚的含量丹皮酚注射液中丹皮酚的含量測(cè)。測(cè)。 22第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法二、可見一紫外分光光度法二、可見一紫外分光光度法 該法是中藥及其制劑含量測(cè)定的一種常該法是中藥及其制劑含量測(cè)定的一種常用方法用方法, ,具有靈敏度高，精度好和操作簡(jiǎn)便具有靈敏度高，精度好和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。等優(yōu)點(diǎn)。 該法要求被測(cè)成分本身或其顯色產(chǎn)物對(duì)該法要求被測(cè)成分本身或其顯色產(chǎn)物對(duì)可見可見紫外光具有選擇性吸收。按測(cè)定波長(zhǎng)紫外光具有選擇性吸收。按測(cè)定波長(zhǎng)數(shù)目不同分

31、為單波長(zhǎng)光譜法和多波長(zhǎng)光譜法。數(shù)目不同分為單波長(zhǎng)光譜法和多波長(zhǎng)光譜法。 23第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（一）單波長(zhǎng)光譜法（一）單波長(zhǎng)光譜法 分類分類方法方法特點(diǎn)特點(diǎn)吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法測(cè)定所配供試品溶液在規(guī)定波長(zhǎng)的吸測(cè)定所配供試品溶液在規(guī)定波長(zhǎng)的吸收度，根據(jù)被測(cè)成分的吸收系數(shù)收度，根據(jù)被測(cè)成分的吸收系數(shù)（E E1%1%1cm1cm）計(jì)算其含量）計(jì)算其含量對(duì)儀器要求高，使用該法時(shí)，對(duì)儀器要求高，使用該法時(shí)，應(yīng)注意儀器波長(zhǎng)、空白吸收的應(yīng)注意儀器波長(zhǎng)、空白吸收的校正，吸收度準(zhǔn)確度的檢定和校正，吸收度準(zhǔn)確度的檢定和雜散光的檢查雜散光的檢查無需對(duì)照品，方法簡(jiǎn)便無需對(duì)照品，方法簡(jiǎn)便對(duì)照

32、品比較法對(duì)照品比較法在同樣條件下配制對(duì)照品溶液和供試在同樣條件下配制對(duì)照品溶液和供試溶液，且使前者中所含被測(cè)成分的量溶液，且使前者中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為后者中被測(cè)成分的量的應(yīng)為后者中被測(cè)成分的量的100%100%10%10%，用規(guī)定波測(cè)定二者的吸，用規(guī)定波測(cè)定二者的吸收度，則可計(jì)算出供試品中被測(cè)成分收度，則可計(jì)算出供試品中被測(cè)成分的濃度或含量的濃度或含量對(duì)儀器要求較高對(duì)儀器要求較高標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法配制一系列不同濃度的對(duì)照品溶液配制一系列不同濃度的對(duì)照品溶液（常為（常為5 5個(gè)），在相同條件下分別測(cè)個(gè)），在相同條件下分別測(cè)定吸收度，繪制定吸收度，繪制A-CA-C曲線，或求出其曲線，或求出其回

33、歸直線方程（相關(guān)系數(shù)回歸直線方程（相關(guān)系數(shù)r0.999r0.999），），即得標(biāo)準(zhǔn)曲線。在相同條件下，測(cè)定即得標(biāo)準(zhǔn)曲線。在相同條件下，測(cè)定供試品溶液的吸收度，就可求得供試供試品溶液的吸收度，就可求得供試品中被測(cè)成分的濃度或含量。品中被測(cè)成分的濃度或含量。本法對(duì)儀器的精度要求不高，本法對(duì)儀器的精度要求不高，有時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過原點(diǎn)，只有時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過原點(diǎn)，只要重現(xiàn)性好也可使用要重現(xiàn)性好也可使用該法在比色法中最常用該法在比色法中最常用24第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（二）多波長(zhǎng)光譜法（計(jì)算分光光度法）（二）多波長(zhǎng)光譜法（計(jì)算分光光度法） 供試品溶液中若有多種（兩種或兩種以上）供試

34、品溶液中若有多種（兩種或兩種以上）組分共存，其紫外光譜彼此發(fā)生不同程度的重疊組分共存，其紫外光譜彼此發(fā)生不同程度的重疊時(shí)，則可通過測(cè)定多種波長(zhǎng)處的吸收度，根據(jù)吸時(shí)，則可通過測(cè)定多種波長(zhǎng)處的吸收度，根據(jù)吸收度的加和性，采用適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)處理方式進(jìn)行多收度的加和性，采用適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)處理方式進(jìn)行多組分的同時(shí)測(cè)定，或者用其排除共存組分干擾，組分的同時(shí)測(cè)定，或者用其排除共存組分干擾，測(cè)定其中的某個(gè)組分。這就屬于多波長(zhǎng)光譜法的測(cè)定其中的某個(gè)組分。這就屬于多波長(zhǎng)光譜法的范疇。范疇。 下面簡(jiǎn)要介紹用多波長(zhǎng)法測(cè)定存在光譜干擾下面簡(jiǎn)要介紹用多波長(zhǎng)法測(cè)定存在光譜干擾的多組分樣品中某個(gè)組分的一些技術(shù)：的多組分樣品中某個(gè)組分

35、的一些技術(shù)：雙波長(zhǎng)法雙波長(zhǎng)法（包括等吸收點(diǎn)法和系數(shù)倍率法）、三波長(zhǎng)法、（包括等吸收點(diǎn)法和系數(shù)倍率法）、三波長(zhǎng)法、導(dǎo)數(shù)光譜法和差示光譜法等。導(dǎo)數(shù)光譜法和差示光譜法等。 25第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法優(yōu)點(diǎn)是可省去或簡(jiǎn)化樣品預(yù)處理步驟，測(cè)定組成已知的復(fù)優(yōu)點(diǎn)是可省去或簡(jiǎn)化樣品預(yù)處理步驟，測(cè)定組成已知的復(fù)雜樣品，但是使用該法應(yīng)慎重。雜樣品，但是使用該法應(yīng)慎重。 首先因?yàn)橹兴幖捌渲苿┑墓┰嚻啡芤和M成復(fù)雜，首先因?yàn)橹兴幖捌渲苿┑墓┰嚻啡芤和M成復(fù)雜，甚至干擾組分或陰性空白樣品的變動(dòng)性大，因此，使得其甚至干擾組分或陰性空白樣品的變動(dòng)性大，因此，使得其方法的適應(yīng)性差，而只適應(yīng)于同批樣品

36、或內(nèi)控應(yīng)用，目前方法的適應(yīng)性差，而只適應(yīng)于同批樣品或內(nèi)控應(yīng)用，目前很少在藥典和新藥報(bào)批中使用多波長(zhǎng)法作為中藥制劑含量很少在藥典和新藥報(bào)批中使用多波長(zhǎng)法作為中藥制劑含量測(cè)定方法。測(cè)定方法。 再者，當(dāng)測(cè)定的吸收度處在吸收曲線的陡峭部位時(shí)，再者，當(dāng)測(cè)定的吸收度處在吸收曲線的陡峭部位時(shí)，波長(zhǎng)的微小變動(dòng)可能對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯著的偶然誤差。波長(zhǎng)的微小變動(dòng)可能對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯著的偶然誤差。 還有在實(shí)際工作中，由于測(cè)試條件的變化，儀器精度還有在實(shí)際工作中，由于測(cè)試條件的變化，儀器精度與性能的限制，多波長(zhǎng)法不用吸收系數(shù)法，而采用標(biāo)準(zhǔn)品與性能的限制，多波長(zhǎng)法不用吸收系數(shù)法，而采用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比的方法（常用標(biāo)準(zhǔn)曲線法）來

37、進(jìn)行樣品的測(cè)定。對(duì)比的方法（常用標(biāo)準(zhǔn)曲線法）來進(jìn)行樣品的測(cè)定。 26第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法三、薄層掃描法三、薄層掃描法 薄層掃描法是以薄層色譜法為基礎(chǔ)發(fā)展起來薄層掃描法是以薄層色譜法為基礎(chǔ)發(fā)展起來的薄層色譜組分原位分析方法及薄層色譜的記錄的薄層色譜組分原位分析方法及薄層色譜的記錄方法，又稱薄層色譜掃描法（方法，又稱薄層色譜掃描法（TLCS），相應(yīng)儀），相應(yīng)儀器稱為薄層掃描儀（器稱為薄層掃描儀（Thin Layer Chromatogram Scanner）。）。 薄層掃描法是用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板薄層掃描法是用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中吸收紫外光或可見

38、光的斑點(diǎn)，上，對(duì)薄層色譜中吸收紫外光或可見光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別、雜質(zhì)描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定。檢查或含量測(cè)定。27第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（一）基本原理（一）基本原理 薄層掃描法是指薄層色譜斑點(diǎn)的色譜掃薄層掃描法是指薄層色譜斑點(diǎn)的色譜掃描，薄層色譜掃描是指固定波長(zhǎng)，斑點(diǎn)移動(dòng)，描，薄層色譜掃描是指固定波長(zhǎng)，斑點(diǎn)移動(dòng)，測(cè)定測(cè)定A-lA-l或或F-lF-l曲線。根據(jù)薄層掃描的測(cè)定方曲線。根據(jù)薄層掃描的測(cè)定方式分為式分為薄層吸收掃描法薄層吸

39、收掃描法和和薄層熒光掃描法薄層熒光掃描法二二種方法。種方法。28第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法1 1、薄層吸收掃描法、薄層吸收掃描法 基本原理：基本原理：Kubelka-MunkKubelka-Munk理論及曲線。由于薄層板存在理論及曲線。由于薄層板存在明顯的散射現(xiàn)象，斑點(diǎn)中物質(zhì)的濃度與吸光度的關(guān)系需用明顯的散射現(xiàn)象，斑點(diǎn)中物質(zhì)的濃度與吸光度的關(guān)系需用Kubelka-MunkKubelka-Munk理論及曲線來描述。理論及曲線來描述。Kubelka-MunkKubelka-Munk理論以斑點(diǎn)理論以斑點(diǎn)的相對(duì)的相對(duì)反射率反射率和相對(duì)透光率計(jì)算薄層色譜斑點(diǎn)的吸光度，說和相對(duì)透光率計(jì)

40、算薄層色譜斑點(diǎn)的吸光度，說明了固定相的散射參數(shù)明了固定相的散射參數(shù)SXSX對(duì)斑點(diǎn)中物質(zhì)的濃度與吸光度間關(guān)對(duì)斑點(diǎn)中物質(zhì)的濃度與吸光度間關(guān)系的影響，獲得不同散射參數(shù)系的影響，獲得不同散射參數(shù)SXSX時(shí)斑點(diǎn)的時(shí)斑點(diǎn)的A-KXA-KX理論曲線，即理論曲線，即Kubelka-MunkKubelka-Munk曲線。曲線。 光源：鎢燈和氘燈；光源：鎢燈和氘燈； 靈敏度：在靈敏度：在200-800nm200-800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)選擇合適波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)波長(zhǎng)范圍內(nèi)選擇合適波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定，其靈敏度可達(dá)定，其靈敏度可達(dá)ngng級(jí)；級(jí)； 適用范圍：適用于在可見、紫外區(qū)有吸收的物質(zhì)，及通適用范圍：適用于在可見、紫外區(qū)有吸收的物

41、質(zhì)，及通過色譜前或色譜后衍生成上述化合物的樣品組分。過色譜前或色譜后衍生成上述化合物的樣品組分。292 2、薄層熒光掃描法、薄層熒光掃描法 基本原理：基本原理：F=2.3KIF=2.3KI。ECLECL或或F=KCF=KC 光源：氙燈或汞燈。光源：氙燈或汞燈。 靈敏度：最低可測(cè)到靈敏度：最低可測(cè)到10-50pg10-50pg。 適用范圍：適合于本身具有熒光或經(jīng)過適當(dāng)處理適用范圍：適合于本身具有熒光或經(jīng)過適當(dāng)處理后可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的測(cè)定。后可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的測(cè)定。 Kubelka-MunkKubelka-Munk理論不適用于薄層熒光掃描，無需理論不適用于薄層熒光掃描，無需進(jìn)行曲線校直。用薄層熒光

42、掃描進(jìn)行定量分析時(shí)，用進(jìn)行曲線校直。用薄層熒光掃描進(jìn)行定量分析時(shí)，用斑點(diǎn)熒光強(qiáng)度的積分值（色譜峰峰面積）與斑點(diǎn)中組斑點(diǎn)熒光強(qiáng)度的積分值（色譜峰峰面積）與斑點(diǎn)中組分的含量代替上式中分的含量代替上式中F F與與C C 進(jìn)行運(yùn)算。進(jìn)行運(yùn)算。第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法30（二）薄層色譜的規(guī)范化操作（二）薄層色譜的規(guī)范化操作1 1、儀器與材料、儀器與材料薄層板；薄層板；涂布器；涂布器；點(diǎn)樣器材；點(diǎn)樣器材；展開箱展開箱（層析缸）（層析缸）顯色與檢測(cè)儀器顯色與檢測(cè)儀器2 2、操作方法、操作方法薄層板的制備；薄層板的制備；點(diǎn)樣；點(diǎn)樣；展開；展開；檢測(cè)；檢測(cè)；第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常

43、用定量分析方法31第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（三）定量分析方法（三）定量分析方法1 1、方法學(xué)考察、方法學(xué)考察 新建薄層掃描定量方法必須進(jìn)行方新建薄層掃描定量方法必須進(jìn)行方法考察，以說明新建方法的可靠性，考法考察，以說明新建方法的可靠性，考察的內(nèi)容有工作曲線、定量結(jié)果的精密察的內(nèi)容有工作曲線、定量結(jié)果的精密度及準(zhǔn)確度、統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)等內(nèi)容。度及準(zhǔn)確度、統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)等內(nèi)容。32（1 1）工作曲線）工作曲線 檢查所選擇的散射參數(shù)檢查所選擇的散射參數(shù)SXSX值是否適宜。值是否適宜。SXSX值適宜則工值適宜則工作曲線被校直為直線，否則，調(diào)整作曲線被校直為直線，否則，調(diào)整SXSX值再校正，直至

44、在一定值再校正，直至在一定點(diǎn)樣量范圍內(nèi)工作曲線成直線為止。點(diǎn)樣量范圍內(nèi)工作曲線成直線為止。 考察工作曲線是否過原點(diǎn)，以便確定采用一點(diǎn)法或二考察工作曲線是否過原點(diǎn)，以便確定采用一點(diǎn)法或二點(diǎn)法定量。點(diǎn)法定量。 確定點(diǎn)樣量的線性范圍。既使采用曲線校直，也只是確定點(diǎn)樣量的線性范圍。既使采用曲線校直，也只是在一定點(diǎn)樣量范圍內(nèi)工作曲線為直線，因此需確定點(diǎn)樣量的在一定點(diǎn)樣量范圍內(nèi)工作曲線為直線，因此需確定點(diǎn)樣量的上、下限。上、下限。 為降低定量誤差，最好調(diào)整點(diǎn)樣量，使供試品與對(duì)照品為降低定量誤差，最好調(diào)整點(diǎn)樣量，使供試品與對(duì)照品的峰面積相接近。的峰面積相接近。 為了克服薄層板間差異，外標(biāo)法及內(nèi)標(biāo)法均應(yīng)采用隨

45、行為了克服薄層板間差異，外標(biāo)法及內(nèi)標(biāo)法均應(yīng)采用隨行標(biāo)準(zhǔn)法，即標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品溶液交叉點(diǎn)在同一塊薄層板上。標(biāo)準(zhǔn)法，即標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品溶液交叉點(diǎn)在同一塊薄層板上。 第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法33第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（2 2）精密度考察）精密度考察 取同一供試品溶液，在同一塊薄層板上以取同一供試品溶液，在同一塊薄層板上以相同點(diǎn)樣量平行點(diǎn)相同點(diǎn)樣量平行點(diǎn)5 5點(diǎn)以上，展開后測(cè)定其峰點(diǎn)以上，展開后測(cè)定其峰面積，求算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（面積，求算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSDRSD），作為衡量定），作為衡量定量分析結(jié)果精密度的指標(biāo)。量分析結(jié)果精密度的指標(biāo)。RSDRSD應(yīng)小于應(yīng)小于

46、4%4%。 式中：為式中：為n n次測(cè)量的平均值，次測(cè)量的平均值，S S為標(biāo)準(zhǔn)差。為標(biāo)準(zhǔn)差。%100(%) XSRSD34第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（3 3）準(zhǔn)確度考察）準(zhǔn)確度考察 回收率是衡量定量方法準(zhǔn)確度的指標(biāo)，常用回收率是衡量定量方法準(zhǔn)確度的指標(biāo)，常用加樣回收率（加樣回收率（R R）來衡量，其值應(yīng)在）來衡量，其值應(yīng)在95-105%95-105%之間，之間，測(cè)量數(shù)據(jù)一般為測(cè)量數(shù)據(jù)一般為5-65-6個(gè)。個(gè)。 將加入純品的試樣溶液、供試品溶液及標(biāo)準(zhǔn)將加入純品的試樣溶液、供試品溶液及標(biāo)準(zhǔn)溶液點(diǎn)于同一塊薄層板上，展開后進(jìn)行薄層掃描，溶液點(diǎn)于同一塊薄層板上，展開后進(jìn)行薄層掃描，測(cè)

47、定各斑點(diǎn)的峰面積，計(jì)算各溶液中組分的量，測(cè)定各斑點(diǎn)的峰面積，計(jì)算各溶液中組分的量，計(jì)算回收率（計(jì)算回收率（R R）。）。加加入入純純品品量量供供試試品品中中被被測(cè)測(cè)組組分分量量加加入入純純品品后后測(cè)測(cè)得得總總量量100% R35（4 4）統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)）統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn) 統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)是檢驗(yàn)兩種方法、兩臺(tái)儀器或兩個(gè)人測(cè)量統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)是檢驗(yàn)兩種方法、兩臺(tái)儀器或兩個(gè)人測(cè)量的兩組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精密度或準(zhǔn)確度（偶然誤差或系統(tǒng)誤的兩組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精密度或準(zhǔn)確度（偶然誤差或系統(tǒng)誤差）間是否存在顯著性差異，說明新建定量方法可否代差）間是否存在顯著性差異，說明新建定量方法可否代替舊方法或優(yōu)于舊方法。替舊方法或優(yōu)于舊方法。 統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)包括統(tǒng)計(jì)

48、檢驗(yàn)包括F F檢驗(yàn)與檢驗(yàn)與t t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)。 F F檢驗(yàn)檢驗(yàn)即精密度差別檢驗(yàn)，用以檢驗(yàn)兩組數(shù)據(jù)的精即精密度差別檢驗(yàn)，用以檢驗(yàn)兩組數(shù)據(jù)的精密度或偶然誤差是否存在顯著性差異，一般為單側(cè)檢驗(yàn)。密度或偶然誤差是否存在顯著性差異，一般為單側(cè)檢驗(yàn)。 t t檢驗(yàn)檢驗(yàn)即準(zhǔn)確度差別檢驗(yàn)，用以檢驗(yàn)兩組測(cè)量數(shù)據(jù)即準(zhǔn)確度差別檢驗(yàn)，用以檢驗(yàn)兩組測(cè)量數(shù)據(jù)的平均值或系統(tǒng)誤差是否存在顯著性差異。若的平均值或系統(tǒng)誤差是否存在顯著性差異。若t t檢驗(yàn)證檢驗(yàn)證明兩種方法測(cè)得的均值不存在顯著性差異時(shí)，則新方法明兩種方法測(cè)得的均值不存在顯著性差異時(shí)，則新方法可以代替舊方法，可以代替舊方法，t t檢驗(yàn)一般為雙側(cè)檢驗(yàn)。檢驗(yàn)一般為雙側(cè)檢驗(yàn)。

49、 t t檢驗(yàn)與檢驗(yàn)與F F檢驗(yàn)的具體方法參見分析化學(xué)的有關(guān)論著，檢驗(yàn)的具體方法參見分析化學(xué)的有關(guān)論著，此從略。此從略。第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法36第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法2 2、定量方法、定量方法 常用的定量方法有常用的定量方法有外標(biāo)法外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法、追加法追加法（疊（疊加法）及加法）及回歸曲線回歸曲線定量法。定量法。（1 1）外標(biāo)法）外標(biāo)法 外標(biāo)法是薄層色譜掃描最常用的定量方法，方法外標(biāo)法是薄層色譜掃描最常用的定量方法，方法簡(jiǎn)便，但點(diǎn)樣必須準(zhǔn)確。簡(jiǎn)便，但點(diǎn)樣必須準(zhǔn)確。外標(biāo)一點(diǎn)法外標(biāo)一點(diǎn)法 工作曲線通過原點(diǎn)（截距為零）時(shí)可用外標(biāo)一點(diǎn)工作曲線通過

50、原點(diǎn)（截距為零）時(shí)可用外標(biāo)一點(diǎn)法定量。只需點(diǎn)一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，與供試液同法定量。只需點(diǎn)一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，與供試液同板展開，對(duì)比，測(cè)定組分含量，其計(jì)算公式為：板展開，對(duì)比，測(cè)定組分含量，其計(jì)算公式為：C=FC=F1 1AA 式中：式中：C C為組分的重量或濃度，為組分的重量或濃度，A A為測(cè)得該組分的為測(cè)得該組分的峰面積，峰面積，F(xiàn)1F1為直線的斜率或比例常數(shù)。為直線的斜率或比例常數(shù)。37外標(biāo)二點(diǎn)法外標(biāo)二點(diǎn)法 工作曲線不通過原點(diǎn)時(shí)，只能用外標(biāo)二點(diǎn)法定量，工作曲線不通過原點(diǎn)時(shí)，只能用外標(biāo)二點(diǎn)法定量，至少需點(diǎn)二種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（或一種濃度兩種點(diǎn)至少需點(diǎn)二種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（或一種濃度兩

51、種點(diǎn)樣量），才能決定一直線樣量），才能決定一直線, ,其計(jì)算公式為：其計(jì)算公式為：C=FC=F1 1A+FA+F2 2 式中：式中：C C、A A同前，同前，F(xiàn) F1 1為直線的斜率或比例常數(shù)，為直線的斜率或比例常數(shù)，F(xiàn) F2 2為縱坐標(biāo)的截距，為縱坐標(biāo)的截距，F(xiàn) F1 1和和F F2 2值由儀器自動(dòng)算出。值由儀器自動(dòng)算出。 外標(biāo)一點(diǎn)法、二點(diǎn)法只是指用一種或二種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)比外標(biāo)一點(diǎn)法、二點(diǎn)法只是指用一種或二種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)比定量，為減小誤差，同一薄板上定量，為減小誤差，同一薄板上供試品點(diǎn)樣不得少于供試品點(diǎn)樣不得少于4 4個(gè)個(gè)，對(duì)照品對(duì)照品每一濃度不得少于每一濃度不得少于2 2個(gè)個(gè)；并調(diào)

52、整標(biāo)淮溶液的濃度或供試品與標(biāo)準(zhǔn)溶；并調(diào)整標(biāo)淮溶液的濃度或供試品與標(biāo)準(zhǔn)溶液的點(diǎn)樣量，使其峰面積相接近；且點(diǎn)樣量必須準(zhǔn)確，宜用定量毛液的點(diǎn)樣量，使其峰面積相接近；且點(diǎn)樣量必須準(zhǔn)確，宜用定量毛細(xì)管點(diǎn)樣細(xì)管點(diǎn)樣。第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法38第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（2 2）內(nèi)標(biāo)法）內(nèi)標(biāo)法 內(nèi)標(biāo)法是選一個(gè)純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，并準(zhǔn)確稱內(nèi)標(biāo)法是選一個(gè)純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，并準(zhǔn)確稱取一定量?jī)?nèi)標(biāo)物加至供試液及標(biāo)準(zhǔn)液中，計(jì)算供試取一定量?jī)?nèi)標(biāo)物加至供試液及標(biāo)準(zhǔn)液中，計(jì)算供試品溶液中某組分含量的定量方法。品溶液中某組分含量的定量方法。 內(nèi)標(biāo)物的選擇要求是：內(nèi)標(biāo)物的選擇要求是：Z

53、純度合乎要求，展開后不得有雜質(zhì)斑點(diǎn)，否則內(nèi)純度合乎要求，展開后不得有雜質(zhì)斑點(diǎn)，否則內(nèi)標(biāo)斑點(diǎn)的峰面積將不能代表內(nèi)標(biāo)物的量。標(biāo)斑點(diǎn)的峰面積將不能代表內(nèi)標(biāo)物的量。Z 內(nèi)標(biāo)物須為樣品中所不含有的成分。內(nèi)標(biāo)物須為樣品中所不含有的成分。Z 內(nèi)標(biāo)物不與其它斑點(diǎn)相重疊，分離度合乎要求。內(nèi)標(biāo)物不與其它斑點(diǎn)相重疊，分離度合乎要求。Z 為簡(jiǎn)化計(jì)算，內(nèi)標(biāo)物在標(biāo)準(zhǔn)溶液及供試品溶液中為簡(jiǎn)化計(jì)算，內(nèi)標(biāo)物在標(biāo)準(zhǔn)溶液及供試品溶液中的濃度應(yīng)相等。的濃度應(yīng)相等。39特點(diǎn)：特點(diǎn)： 1 1）在一定點(diǎn)樣量范圍內(nèi)，內(nèi)標(biāo)法定量準(zhǔn)確度與點(diǎn)樣量無關(guān)。）在一定點(diǎn)樣量范圍內(nèi)，內(nèi)標(biāo)法定量準(zhǔn)確度與點(diǎn)樣量無關(guān)。 2 2）不易找到適宜）不易找到適宜RfRf

54、值的純品內(nèi)標(biāo)物，且溶液配制等操作較值的純品內(nèi)標(biāo)物，且溶液配制等操作較麻煩。麻煩。方法：方法： 1 1）內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法：當(dāng)工作曲線通過原點(diǎn)時(shí)采用內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法。）內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法：當(dāng)工作曲線通過原點(diǎn)時(shí)采用內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法。內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法公式：內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法公式： 2 2）工作曲線不通過原點(diǎn)時(shí)必須采用內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法）工作曲線不通過原點(diǎn)時(shí)必須采用內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法公式：內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法公式： 式中：式中：C C、CisCis分別為組分及內(nèi)標(biāo)物的濃度或重量，分別為組分及內(nèi)標(biāo)物的濃度或重量，A A、AisAis分分別為測(cè)得組分及內(nèi)標(biāo)物的峰面積，別為測(cè)得組分及內(nèi)標(biāo)物的峰面積，F(xiàn)1F1為直線的斜率或比例常數(shù)，為直線的斜率或比例常數(shù)，F(xiàn)2F2為

55、截距，為截距，F(xiàn)1F1和和F2F2由儀器自動(dòng)計(jì)算并內(nèi)存，可直接給出樣品的濃由儀器自動(dòng)計(jì)算并內(nèi)存，可直接給出樣品的濃度或重量。度或重量。isisAAFCC1 21FAAFCCisis 第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法40（3 3）回歸曲線定量法）回歸曲線定量法 將不同濃度（或不同量）的標(biāo)準(zhǔn)溶液與供將不同濃度（或不同量）的標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試液點(diǎn)在同一塊薄層板上，展開、掃描試液點(diǎn)在同一塊薄層板上，展開、掃描; ; 由計(jì)算機(jī)對(duì)所測(cè)得的峰面積及相應(yīng)點(diǎn)樣量由計(jì)算機(jī)對(duì)所測(cè)得的峰面積及相應(yīng)點(diǎn)樣量進(jìn)行線性或非線性回歸進(jìn)行線性或非線性回歸; ; 直接由回歸方程或回歸曲線計(jì)算供試液含直接由回歸方程或回歸曲

56、線計(jì)算供試液含量的方法量的方法; ; CAMAG CAMAG系列薄層掃描儀即采用此方法。系列薄層掃描儀即采用此方法。第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法41第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（四）影響薄層色譜分析的主要因素（四）影響薄層色譜分析的主要因素1 1、樣品的預(yù)處理及供試液的制備、樣品的預(yù)處理及供試液的制備2 2、薄層色譜的點(diǎn)樣技術(shù)、薄層色譜的點(diǎn)樣技術(shù)3 3、吸附劑的活性與相對(duì)濕度的影響、吸附劑的活性與相對(duì)濕度的影響4 4、溶劑蒸氣在薄層色譜中的作用、溶劑蒸氣在薄層色譜中的作用5 5、溫度的影響、溫度的影響42相對(duì)濕度（相對(duì)濕度（% %）所需硫酸濃度（所需硫酸濃度

57、（V/VV/V）硫酸（硫酸（mlml）水（水（mlml）3232686810010042425757100100585839.539.510010065653434100100727227.527.5100100888810.810.88989控制相對(duì)濕度用的硫酸溶液控制相對(duì)濕度用的硫酸溶液第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法43第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法四、氣相色譜法四、氣相色譜法 氣相色譜法是以氣體為流動(dòng)相的柱色譜分離氣相色譜法是以氣體為流動(dòng)相的柱色譜分離分析方法。分析方法。 特點(diǎn)：分離效能高、選擇性好、靈敏度高，特點(diǎn)：分離效能高、選擇性好、靈敏度高，樣品用量

58、少及分析速度快等特點(diǎn)，兼具分離、分樣品用量少及分析速度快等特點(diǎn)，兼具分離、分析的功能，適用于熱穩(wěn)定性好的易揮發(fā)性或可轉(zhuǎn)析的功能，適用于熱穩(wěn)定性好的易揮發(fā)性或可轉(zhuǎn)化為易揮發(fā)性組分的分析?；癁橐讚]發(fā)性組分的分析。 適用范圍：適用于熱穩(wěn)定性好的易揮發(fā)性或適用范圍：適用于熱穩(wěn)定性好的易揮發(fā)性或可轉(zhuǎn)化為易揮發(fā)性組分的分析?？赊D(zhuǎn)化為易揮發(fā)性組分的分析。44第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（一）基本原理（一）基本原理 氣相色譜是根據(jù)汽化后的試樣被載氣帶入氣相色譜是根據(jù)汽化后的試樣被載氣帶入色譜柱，由于各組分在兩相間作用不同，在色色譜柱，由于各組分在兩相間作用不同，在色譜柱中移動(dòng)有快慢，經(jīng)一定柱

59、長(zhǎng)后得到分離，譜柱中移動(dòng)有快慢，經(jīng)一定柱長(zhǎng)后得到分離，依次被載氣帶入檢測(cè)器，將各組分濃度或質(zhì)量依次被載氣帶入檢測(cè)器，將各組分濃度或質(zhì)量變化轉(zhuǎn)換成電信號(hào)變化記錄成色譜圖，利用色變化轉(zhuǎn)換成電信號(hào)變化記錄成色譜圖，利用色譜峰保留值進(jìn)行定性分析，利用峰面積或峰高譜峰保留值進(jìn)行定性分析，利用峰面積或峰高進(jìn)行定量分析的方法。進(jìn)行定量分析的方法。45第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法（二）實(shí)驗(yàn)條件的選擇（二）實(shí)驗(yàn)條件的選擇 在氣相色譜分析中，為達(dá)到滿意的分離效果，需在氣相色譜分析中，為達(dá)到滿意的分離效果，需依據(jù)依據(jù)Van DeemeterVan Deemeter方程式和分離度方程式選擇合適的方程

60、式和分離度方程式選擇合適的分離條件，主要有固定相、柱溫、載氣流速等條件的分離條件，主要有固定相、柱溫、載氣流速等條件的選擇。選擇。 1 1、固定相的選擇、固定相的選擇 1 1）氣）氣液色譜液色譜 固定液：按極性相似、化學(xué)官能團(tuán)相似的固定液：按極性相似、化學(xué)官能團(tuán)相似的相似相似性原則性原則和主要差別選擇。和主要差別選擇。 載體：一般為適宜粒度，經(jīng)酸洗并硅烷化處理載體：一般為適宜粒度，經(jīng)酸洗并硅烷化處理的硅藻土。的硅藻土。 2 2）氣）氣固色譜：固定相大多采用高分子多孔微球固色譜：固定相大多采用高分子多孔微球（GDXGDX），用于分離水及含羥基（醇）化合物。），用于分離水及含羥基（醇）化合物。46