Agilent+1260+高效液相色譜儀使用維護保養(yǎng)操作規(guī)則

1、文件名稱文件編制及管理規(guī)程頒發(fā)部門研究所文件編號頁碼第 5 頁 共 6 頁文件名稱文件編制及管理規(guī)程文件編號 頒發(fā)部門研究所替代生效日期起草人審核人批準人起草日期審核日期批準日期優(yōu)勝美特制藥有限公司&浙江巨泰藥業(yè)有限公司-藥物研究所-變更內容及定期審核版本號生效日期變更項目, 簡述修訂原因及內容00010203定期審核分發(fā)部門/人員部門/人員份數(shù)分發(fā)號一、目的 制定Agilent 1260型高效液相色譜儀操作維護規(guī)程，使操作維護規(guī)范化，保證檢測結果準確可靠。二、適用范圍 本規(guī)程適用于Agilent 1260型高效液相色譜儀的操作維護。三、職責 QC對本規(guī)程的實施負責，項目主管、研發(fā)總監(jiān)

2、對本規(guī)程實施進行監(jiān)督。四、程序內容4.1儀器配置 本儀器由梯度泵，自動進樣器，柱溫箱，VWD檢測器或DAD檢測器和操作軟件工作站組成。4.2操作前的準備4.2.1流動相的制備 用色譜純的試劑配制流動相，必要時照紫外分光光度法進行溶劑檢查，應符合要求；水為新鮮制備的重蒸餾水。對規(guī)定pH值的流動相，應使用精密pH計進行調節(jié)，配制好的流動相應通過0.45m以下的濾膜濾過，用前脫氣，應配制足量的流動相。4.2.2 供試溶液的配制 供試品用規(guī)定溶劑配成供試溶液。定量測定時，對照品溶液和樣品供試溶液均應分別配制2份。供試溶液在注入色譜儀前，一般應經0.45m以下的濾膜濾過，必要時，在配制供試溶液前，樣品需

3、經提取凈化，以免對色譜系統(tǒng)產生污染。4.2.3 檢查上次使用記錄和儀器狀態(tài)，檢查色譜柱是否適用于本次試驗，色譜柱進出口位置是否與流動相的流向一致，原保存溶劑與現(xiàn)用流動相能否互溶，流動相的pH值與該色譜柱是否相適應，儀器是否完好，儀器的各開關位置是否處于關斷的位置。4.3儀器的操作4.3.1 接通電源，打開計算機及工作站其他各部件開關，約30秒后，各部件進入待機狀態(tài)，指示燈為橘黃色，啟動完成。4.3.2用鼠標雙擊企業(yè)儀器啟動程序界面上的Agilent1260儀器圖標進入Agilent1260 LC在線色譜工作站，該頁面主要由以下幾個部分組成：4.3.2.1最上方為命令欄，依次為文件,控制,方法，

4、分析，序列，數(shù)據等；4.3.2.2命令欄下方為快捷操作圖標，如多個樣品連續(xù)進行分析、新建方法序列、單個樣品分析、調用文件、保存文件等；4.3.2.3左部有五欄從上到下依次為方法，序列，報告，控制，視圖五欄。4.3.2.3.1用鼠標單擊【方法】欄進入儀器方法界面，有儀器設置、積分事件、前處理、手動積分修正、平鋪顯示等。下面介紹以上部分方法的功能。4.3.2.3.1.1儀器設置：控制運行樣品時各部分組件滿足的要求，如柱式加熱爐的溫度.梯度泵的流速，溶劑比例，停止時間，壓力限值。檢測器的檢測波長。自動進樣器的進樣量。輔助圖譜的記錄等。4.3.2.3.1.2積分事件：用于樣品的積分，有很多參數(shù)控制樣品

5、的積分，如閾值、最小面積、寬度、積分關閉等。4.3.2.3.1.3用鼠標單擊【序列】欄進入序列編輯界面。4.3.2.3.1.4用鼠標單擊【報告】欄進入建立報告界面，有歸一化，面積百分比，內標法，外標法等報告格式。4.3.2.3.1.5用鼠標單擊【控制】欄進入儀器控制界面，有儀器設置，運行隊列，儀器狀態(tài)三項。下面介紹以上三項的控制功能。4.3.2.3.1.5.1儀器設置：控制運行樣品時各部分組件滿足的要求，如柱式加熱爐的溫度.梯度泵的流速，溶劑比例，停止時間，壓力限值。檢測器的檢測波長。自動進樣器的進樣量。輔助圖譜的記錄等。4.3.2.3.1.5.2運行隊列：控制樣品運行的順序。也是提交單針和序

6、列的界面，下面介紹提交樣品運行的方法。在運行隊列界面上單擊鼠標右鍵出現(xiàn)單次運行/單次分析，序列運行/序列分析等欄，提交單次運行需單擊右鍵后停留在單次運行項后單擊鼠標左鍵，出現(xiàn)單次運行對話框，出現(xiàn)以下幾欄，樣品ID（樣品名稱），方法，數(shù)據路徑，數(shù)據文件（數(shù)據名稱），樣品瓶等，單擊方法圖標，調用已保存在系統(tǒng)內運行樣品的方法（即以上介紹的儀器設置），單擊數(shù)據路徑圖標將數(shù)據保存在你可找到的文件夾內，將數(shù)據文件命名，設置好分析對應進樣盤的樣品瓶后，即可以提交即將要分析的樣品了，優(yōu)先提交即走完當前樣品后第一針樣品。區(qū)別：手動提交每次做樣之前必須給出新名字，否則儀器會將上次的數(shù)據覆蓋掉。4.3.2.3.1.

7、5.3儀器狀態(tài)：體現(xiàn)儀器運行/預運行/空閑時的狀態(tài)。單擊儀器狀態(tài)一欄，從左至右依次是自動進樣器梯度泵柱溫箱檢測器的狀態(tài)，橘黃色為未就緒狀態(tài)，綠色為空閑狀態(tài)，粉色為進樣狀態(tài)，藍色為運行狀態(tài)，紅色為出錯狀態(tài)。4.3.2.3.1.5.3.1自動進樣器：是系統(tǒng)提交的提取規(guī)定位置的樣品瓶的執(zhí)行者，也是吸取樣品瓶中定量的樣品的操作者。4.3.2.3.1.5.3.2梯度泵：體現(xiàn)流動相的流動速度和整個系統(tǒng)的壓力，A、B兩相的比例。4.3.2.3.1.5.3.3柱溫箱：體現(xiàn)色譜柱所在柱溫箱的溫度。4.3.2.3.1.5.3.4檢測器：體現(xiàn)樣品運行時的檢測波長。4.3.2.3.1.6用鼠標單擊【視圖】欄出現(xiàn)數(shù)據顯

8、示，數(shù)據，平鋪顯示三項。4.3.2.3.1.6.1數(shù)據顯示下有顯示所有數(shù)據，平鋪數(shù)據，重疊數(shù)據，在線信號等。顯示所有數(shù)據：即打開運行樣品時所有記錄運行狀態(tài)的數(shù)據圖譜。平鋪數(shù)據：即將所有運行狀態(tài)圖譜平鋪。重疊數(shù)據：即將所有運行狀態(tài)圖譜重疊。4.3.2.3.1.6.2數(shù)據下有手動積分修正，基線檢查狀態(tài)。4.3.2.3.1.6.3平鋪顯示下有樣品錄入。4.3.2.3.1.7視圖下還有一欄：即控制左部五欄的出現(xiàn)和隱藏。4.3.2.3.1.8最下面一欄為手動積分修正一欄，出現(xiàn)很多操作圖標，如積分關閉、分割峰、定義單峰、手動峰等。4.4色譜條件的設定及數(shù)據采集操作過程4.4.1從化學工作站菜單的儀器狀態(tài)的

9、啟動系統(tǒng)，也可點擊桌面左下方上的接通系統(tǒng)電源按鈕，還可以點擊每一模塊圖標中的控制來開或關。把泵上的Purge閥逆時針松開，調流速為3.0ml/min,啟動泵，系統(tǒng)開始排氣泡，直到管線內（由容器瓶到泵出口）無氣泡為止，切換通道繼續(xù)Purge，直到所用流動相通道中無氣泡為止，調流速為1.0ml/min，再把Purge閥順時針旋緊。4.4.2流動相設置：單擊泵左面的瓶圖標，輸入溶劑的實際體積和瓶體積，也可輸入阻止分析和關泵的流動相體積底限，單擊確定。4.4.3進樣及方法的設定: 4.4.3.1點擊化學工作站菜單的方法中新建方法。4.4.3.2 柱溫箱參數(shù)設定：在溫度下面的方框內輸入溫度，選中“與泵和

10、進樣器一致”使柱溫箱溫度一致，單擊確定進入下一畫面。4.4.3.3泵參數(shù)設定：在流速處輸入流量，在溶劑 B處輸入另一溶劑體積百分比(A=100-B)，也可插入一行時間表編輯梯度，在“最大壓力限度”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護柱子，單擊確定進入下一畫面。4.4.3.4 VWD檢測器參數(shù)的設定在“波長”下方的空白處輸入所需的檢測波長，如254nm，在“峰寬（響應時間）”下方點擊下拉成三角框，選擇合適的響應時間，如0.1min（2秒響應時間）。點擊確定進入下一畫面。4.4.3.5自動進樣器參數(shù)設定：在進樣量輸入進樣量，選擇洗針進樣,輸入洗針瓶位置，單擊確定進入下一畫面。4.4.3.6 DAD檢測器

11、參數(shù)的設定參數(shù)設定 檢測波長：一般選擇最大吸收處的波長，最多可同時檢測8個波長。樣品帶寬：一般選擇最大吸收值一半處的整個寬度。參比波長：一般選擇在靠近樣品信號的無吸收或低吸收區(qū)域。參比帶寬：至少要與樣品信號的帶寬相等，通常情況下用100nm作為缺省值。可以根據所需保存光譜圖的張數(shù)最多同時設定5個通道采集信號，無需采集光譜時應將“存儲”設在“無”，若做峰純度檢測或優(yōu)化求知的樣品檢測條件，建議選擇“全部”。峰寬（響應時間）：其值盡可能接近要測的窄峰峰寬。狹縫：窄時，光譜分辨率高；寬時，噪音低。同時可以輸入采集光譜方式，步長，范圍，閾值。根據檢測波長選擇氘燈或鎢燈。4.4.3.7 單擊“方法”菜單，

12、選中“方法另存為”，輸入一方法名。如“test”，單擊確定。4.4.3.8 從菜單視圖中選出在線信號，選中信號窗口1，然后單擊改變按鈕，將所要繪圖的信號移到右邊的框中，點擊確定。（如同時檢測兩個信號，則重復1、2，選中信號窗口24.4.3.9自動進樣序列設定：在系統(tǒng)內保存即提交序列的方法，單擊文件下拉菜單中序列并找到序列向導，選擇已保存在系統(tǒng)中的儀器設置方法，單擊確定進入下一對話框，輸入樣品信息：樣品總體名稱，數(shù)據路徑中為將數(shù)據保存在規(guī)定文件夾中，在樣品名稱項中輸入樣品名稱，未知樣品運行次數(shù)項中輸入樣品瓶數(shù)，在每次運行重復次數(shù)輸入進樣針數(shù)，單擊確定進入下一對話框，在樣品瓶項中輸入第一個樣品瓶的

13、位置，在樣品架上放入樣品瓶，在進樣量選項中選擇使用方法，然后單擊確定。出現(xiàn)一個有樣品瓶數(shù)的序列，將每一個樣品名稱都區(qū)別開來，以防保存數(shù)據時將相同名稱的數(shù)據覆蓋掉，將序列保存在規(guī)定文件夾中，在運行隊列中進行提交。4.4.3.10 等儀器ready，基線平穩(wěn)，從運行控制菜單選擇運行序列進樣。4.4.4采樣進程中可進行的操作4.4.4.1當出峰時間超過設定的分析停止時間時，可以點擊右下部的工作參數(shù)“停止時間”進行適當?shù)恼{整，可使主峰出完并與使雜質峰出完。4.4.4.2中止采集4.6圖譜數(shù)據的處理4.4.5從文件命令欄中選擇打開文件選項，選中你要的數(shù)據文件名，單擊確定。4.4.6從方法菜單中，單擊積分

14、事件進入積分參數(shù)畫面。進行修改積分參數(shù)后在命令欄內選擇分析。4.4.7將圖譜優(yōu)化，選擇自定義報告進入報告編輯?？蓪⒆V圖設置在任何量程區(qū)域內，也可以將譜圖調節(jié)成任何顏色，在數(shù)據結果中單擊鼠標右鍵選擇報告屬性將需要的積分參數(shù)選入，如理論塔板數(shù)，分離度等。在報告結果中就會出現(xiàn)應保存的結果。4.4.8打印報告：在打印報告之前，要將此方法保存后在報告菜單中選擇 打印報告，將打印機的型號選擇對，則報告已打印出來。4.5關機操作4.5.1清洗柱和流路：反相色譜系統(tǒng)先用10%甲醇水以1ml/min沖洗20min以上（如流動相中沒有鹽可直接用甲醇沖洗）再用甲醇沖洗15min。如果流動相中有鹽先用10%乙腈水以1

15、.0ml/min沖洗60min以上，再用乙腈沖洗20min,甲醇沖洗20min。4.5.2清洗完成后，先將流速降到0，先關閉工作站，再依次關閉儀器各部件開關，斷開電源。4.5.3填寫儀器使用記錄。4.6 注意事項：4.6.1流動相必須用色譜純的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45m或更細的膜過濾)。 4.6.2 流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應該恢復到室溫后使用。4.6.3 不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。4.6.4 長時間不用儀器，應該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應該用有機相(如甲醇等)，因為純水易長霉。4.6.5

16、 每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。4.6.6 C18柱絕對不能進蛋白樣品，血樣、生物樣品。4.6.7 堵塞導致壓力太大，按預柱混合器中的過濾器管路過濾器單向閥檢查 并清洗。清洗方法；以異丙醇作溶劑沖洗：放在異丙醇中間用超聲波清洗；用10稀硝酸清洗。4.6.8 氣泡會致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產生氣泡。4.6.9 要注意柱子的pH值范圍，不得注射強酸強堿的樣品，特別是堿性樣品。4.6.10更換流動相時應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊清洗，然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。4.6.11 無論是否使用緩沖鹽，都要配制90%水+10%異丙醇，在線儀器下拉菜單更多泵項下泵控制設置用于泵密封墊清洗的泵，選擇定期清洗（包括周期和持續(xù)時間）或單次清洗，點擊確定，注意溶劑不能干涸。4.6.12 泵頭不可用超聲清洗（可用乙醇、水清洗）、寶石桿不可超聲，石英窗可用超聲清洗。4.6.13溶劑過濾頭不可超聲清洗，可用35%硝酸浸泡1小時后再用溶劑清洗。4.6.14開機脫氣前需觀察真空脫氣機狀態(tài)，直至狀態(tài)燈熄滅，說明可以正常工作，方可脫氣。設定脫氣流速不得過5ml/min！4.6.15緩沖鹽嚴禁在流路中靜置過夜