香樟油抗水霉菌效果研究

1、芳樟油抗水霉菌效果研究摘要：大多植物油都有對霉菌有一定的抑制作用，通過了解植物精油對霉菌抑制機(jī)理，研究水霉菌的生活史，及芳樟油的特有化學(xué)成分，探究對水霉菌的抑制效果，了解其化學(xué)機(jī)理作用。關(guān)鍵字：芳樟油、抑制機(jī)理、水霉菌、抑菌率近年來，人們就發(fā)現(xiàn)植物精油具有抑菌、殺菌、驅(qū)蟲、殺蟲等生物活性，且對很多種植物油進(jìn)行研究，大多都有對霉菌和害蟲有一定的抑制及殺死的作用，同時(shí)很多研究還是用不同配比的混合植物油抑制霉菌的研究。同時(shí)植物精油在醫(yī)藥、農(nóng)藥、飼料添加劑、食品防腐保鮮等方面有廣泛應(yīng)用。因植物精油具有來源于天然、對人體相對安全、與環(huán)境友好、生物活性多樣等特點(diǎn)，開發(fā)植物精油具有廣闊的發(fā)展前景，越來越引起

2、人們的關(guān)注1.1983年Singhcz研究日本薄荷精油在200Ppm勺濃度下對稻長蠕抱等15種真菌的抑制作用達(dá)100%,其抗真菌毒性比殺菌劑多菌靈、代森鋅、克瘟散等更大2.王國亮等科學(xué)家利用肉桂、山蒼油、丁子香研究霉菌也有一定抑制作用，不同濃度有不同的效果，隨著濃度升高抑制效果顯著3.本文研究芳樟油對水霉菌的抑制作用，通過不同的濃度，與水霉菌培養(yǎng)，研究其抑制效果。水霉菌分布極廣，多生活在淡水中。常見于池塘的死魚及植物殘?bào)w上，還有傷病的水產(chǎn)品表面。產(chǎn)生一層棉絮狀物，即水霉菌的菌絲、游動(dòng)抱子囊和有性繁殖器官。菌絲頂端柔軟，游動(dòng)抱子囊有內(nèi)層出現(xiàn)象，游動(dòng)抱子有典型的兩游現(xiàn)象4，5。特殊營養(yǎng)條件下，影響

3、有性生殖時(shí)性器官的形成，在充足的營養(yǎng)能夠無限地保持在營養(yǎng)生長階段。而在營養(yǎng)貧乏環(huán)境下能夠很快進(jìn)入有性階段。當(dāng)培養(yǎng)基中缺乏礦物元素時(shí)可以限制藏卵器的形成。在生長后期環(huán)境變化時(shí)，菌絲頂端及中間可見球形、長圓形或不規(guī)則形的芽抱子6。有些種寄生于魚類和高等植物，水霉病是魚體表的一種水霉寄生病，鯉科和鞋科魚類、河妒、鰻鯽以及蝦等對水霉都具有易感性。水霉對寄主無嚴(yán)格選擇性，各種水產(chǎn)品，從卵到各齡成體都可感染。當(dāng)魚、蝦體表皮膚因物理化學(xué)因素，或細(xì)菌、病毒感染受損傷時(shí)，水霉的游動(dòng)抱子侵入傷口，吸取皮膚及其組織內(nèi)的營養(yǎng)而迅速生長，菌絲與傷口的組織細(xì)胞纏繞粘附，使組織發(fā)炎、壞死，魚體負(fù)擔(dān)過重，游動(dòng)失常，食欲減退，

4、很快瘦弱死亡。水霉在寄主死后不久繁殖特別快，所以具腐生性，對水產(chǎn)動(dòng)物是一種繼發(fā)性感染14,15。給漁業(yè)帶來很大的危害，串囊水霉引起水稻爛秧，造成很大的經(jīng)濟(jì)損失7o植物精油的抗菌成分植物精油的化學(xué)成分可分為四大類：（1）菇烯類化合物是精油的主成分，如金合歡烯等；（2）芳香族化合物是精油中僅次于菇烯類的第二大類化合物，如百里草酚等；（3）脂肪族化合物是精油中分子量較小的化合物，如香茅等精油中的異戊醛等；（4）含氮含硫化合物，如具有辛辣刺激香味的大蒜索11。近年來，經(jīng)過科學(xué)家的不斷研究，植物精油對霉菌是抑制作用機(jī)理已經(jīng)有一定是基礎(chǔ)，是植物精油特有的化學(xué)成分的作用，以下總結(jié)了幾點(diǎn)：1. 醛類的電子接受

5、能力越強(qiáng)，其抗真菌的活性越高。2. a、0不飽和脂肪醛比a、0飽和酮的活性強(qiáng)。3. a、0飽和醛比相應(yīng)的醇的抗真菌活性低。4. 一元醇比二元醇、三元醇抗真菌活性高。5. 酚、愈刨木酚、苯甲醛、苯甲酵等在苯環(huán)上引入烷基后，其抗真菌活性增高12o同時(shí)CollinsJ.E.研究表明，他認(rèn)為精油成分中醛類物質(zhì)在抑菌性與其化學(xué)結(jié)構(gòu)的分子軌道能有關(guān)。單鹵化乙酸酯、過氧化衍生物a、0不飽合酮引入環(huán)氧后及硫氧酸酯衍生物的抗菌活性增強(qiáng)。還有科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)a0不飽合城基結(jié)構(gòu)，是食品防腐劑表現(xiàn)抗菌活性的高效功能結(jié)構(gòu)，具有相距約0.25rrn的電子容納（接受）中心，和電子供給中心組成的電子中心系統(tǒng)是食品防腐劑體現(xiàn)強(qiáng)抗

6、菌活性的反應(yīng)活性中心的必備條件。精油有效成分的分子結(jié)構(gòu)特征與生物膜脂成分的分子結(jié)構(gòu)特征愈相似，則愈易進(jìn)入菌體而發(fā)揮抑菌作用。國內(nèi)也有許多關(guān)于植物精油抗菌成分的研究。例如石香耨全草含揮發(fā)油主要抗菌成分為百里香酚、香荊芥酚和對聚傘花素等；肉桂醛、紫蘇醛、環(huán)丙烷基脂及酸等植物精油成份能有效延長微生物的生長適應(yīng)期，縮短對數(shù)生長期和穩(wěn)定生長期?？捎行Ы档臀⑸锏纳L勢和養(yǎng)活微生物的生長量耋藍(lán)寧正祥高建華幾種植物精油成分的抗菌效果研究。那么芳樟油抗菌作用機(jī)理與上述機(jī)理應(yīng)該有一定的聯(lián)系，通過化學(xué)成分的生化作用，影響水霉菌的生長植物精油的抗菌作用機(jī)理國內(nèi)外對植物精油抗菌作用機(jī)理的研究有一定進(jìn)展。K.Knobl

7、cnlah等研究了4O中菇類（大多數(shù)為植物精油的有效成分對菌類初生能量代謝，NAD粟丁二酸脫氫酶（SDH的活性，呼吸過程中的電子傳遞及氧化磷酸化過程的影響作用。發(fā)現(xiàn)5X10amol-L濃度下，所有供試菇類都能抑制上述反應(yīng)，這表明精油可影響菌類的呼吸作用及細(xì)胞膜功能。MxM-tinBard等研究表明，精油成分香葉醇可以提高K的細(xì)胞外滲透，并增加真菌的細(xì)胞膜的流動(dòng)性。止匕外，香葉醇還可以降低細(xì)胞膜脂質(zhì)層的相變溫度、影響膜脂的流動(dòng)性。有些精油如檸檬醛可通過其不飽和鍵與某些酶結(jié)合，進(jìn)而導(dǎo)致微生物的代謝系統(tǒng)紊亂11oCoxs等對一種茶樹中提取的精油研究表明，此茶樹油導(dǎo)致微生物最終死亡的機(jī)理是：破壞了細(xì)胞

8、膜的通透屏障，并伴隨化學(xué)滲透控制作用的喪失。表現(xiàn)在，阻礙革蘭氏染色陰性及陽性細(xì)菌的細(xì)胞呼吸并增加了細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)的透性；通過一種磺化物破壞酵母的細(xì)胞質(zhì)膜；導(dǎo)致大腸桿菌的K大量滲漏12.1.1 試驗(yàn)材料芳樟油芳樟油樟油具有高度的抗氧化性，適度的溶解性，很好的表面活性，高效發(fā)泡性和去污性，可用于制造表面活性劑，還可以代替進(jìn)口椰子油、棕桐仁油等制造月桂醇硫酸鈉、月桂醇聚氧乙烯酸、樟核油醇酰胺等表面活性劑以及高級洗衣皂、香皂；天然冰片除是是名貴中藥外，由于具有香氣兼消炎滅菌功能，還是高級香料和重要的化工原料，已得到廣泛應(yīng)用，如在皂用香精和薰香香精中用以增加清爽嗅感，與薄荷油同用于牙粉、舜子粉、氣霧噴霧劑等

9、，還可用于傳統(tǒng)制墨、宗教儀式及生產(chǎn)糖果、軟飲料等的食用香精；樟樹中的枝葉素是制取枝葉油素的原料，也是一種重要的有機(jī)溶劑，可作礦石浮選劑；樟腦可用作殺蟲防蛀劑，是制造賽璐珞的增韌劑，還可用于香料、膠片、塑料、橡膠、爆炸穩(wěn)定劑等；樟樹籽油富含中碳鏈脂肪酸，是合成中碳鏈甘油三酯的理想原料，而中碳鏈甘油三酯與普通植物油脂相比，熱量低、能量高，對預(yù)防高脂血癥、降低膽固醇、治療腸道疾病有很好的效果舊，因此可用于制作減肥、運(yùn)動(dòng)食品和嬰幼兒食品；中碳鏈甘油三酯還有很好的乳化穩(wěn)定作用，可用作美容化妝品的乳化劑、均質(zhì)劑、防凍劑，食品乳化劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑8，9，10.主要器材：1.1 材料1.1.1 菌種來源多子

10、水霉Saprolegniaferax水生生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供（頸枯紋枯稻瘟）1.1.2藥品孔雀石綠：龍游第八化工廠戊二醛：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司芳樟油乙醇丙二醇丙三醇慶大二甲基亞碉：汕頭市西隴化工有限公司麥芽糖：上海強(qiáng)順化學(xué)試劑有限公司批號(hào)：20090808瓊脂：泉州市泉港化工廠批號(hào)：2009003蛋白月東：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司批號(hào)：2009112531.1.3 儀器設(shè)備單人無菌操作臺(tái)SW-CJ-1G型、MJX-150型霉菌培養(yǎng)箱、二十四孔板若干、d=9cmrd=15cm的培養(yǎng)皿若干、移液槍、離心管若干、相機(jī)、拍照顯微鏡、高壓滅菌鍋等。試驗(yàn)方法1.2 .1擴(kuò)菌1、沙氏固體培養(yǎng)基配制：在電子

11、天平上分別稱取蛋白月東10g、麥芽糖40g、瓊脂18g,倒入1000ml的三角錐形瓶中，用200ml左右的自來水加熱溶解，用自來水定容至1000mL，裝入三角瓶中，最后塞上棉花塞。配制PDA:稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切成小塊，加水1000ml煮沸半個(gè)小時(shí)，紗布過濾，再加10-20g葡萄糖和17-20g瓊脂，充分溶解后趁熱紗布過濾，分裝三角瓶。2、滅菌：將包扎好的培養(yǎng)皿、蒸儲(chǔ)水、沙氏固體培養(yǎng)基，PDA固體，統(tǒng)一進(jìn)行高壓蒸汽滅菌（121攝氏度、15min）3、倒平板：超凈工作臺(tái)紫外滅菌（照射20min、吹風(fēng)20min防止部分臭氧未被全部吹出，影響接入的霉菌的生長，因?yàn)槌粞鯇φ婢幸种谱饔茫?；?/p>

12、沙氏固體培養(yǎng)基（PDA）,倒入培養(yǎng)皿中，使其均勻鋪開，培養(yǎng)皿厚度約為3mm,然后放在旁邊涼。4、接種：用直徑為8mm的打孔器在水霉的培養(yǎng)皿上打孔，打出厚度均勻、的直徑為8mm、霉菌長勢良好的菌餅，接在新的、一個(gè)培養(yǎng)皿中，接3個(gè)菌餅。5、水霉菌和綿霉在19M.5C、相對濕度78%的真菌培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)。稻瘟、紋枯、頸枯在28S5C.相對濕度78%的真菌培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)一方法：1、配沙氏液體培養(yǎng)基：在電子天平上分別稱取蛋白月東10g、麥芽糖40g、倒入1000ml的三角錐形瓶中，用200ml的自來水加熱溶解，最后定容1000ml,倒入三角瓶，最后塞上棉花塞。2、滅菌：將包扎好的槍頭（1000ul

13、、100ul、10ul）、蒸儲(chǔ)水、沙氏固體培養(yǎng)基，統(tǒng)一進(jìn)行高壓蒸汽滅菌（120攝氏度、25min）3、配制植物精油：一般配藥先配母液，在加不同的量一達(dá)到不同的濃度，首先，分別先取9ml的乙醇，二甲亞楓，丙二醇三種溶劑于50ml的離心管中，再加分別加1ml的芳樟油，輕輕振蕩。因丙三醇的粘度大，所以取1ml的溶劑，再取8ml的蒸儲(chǔ)水配制。同時(shí)還要貼上標(biāo)簽，寫明日期，精油名稱及配比。3、設(shè)計(jì)藥物梯度濃度：藥+二甲亞楓：0.1ul/L、1ul/L、10ul/L、100ul/L、1000ul/L、10000ul/L藥+丙二醇：0.1ul/L、1ul/L、10ul/L、100ul/L、1000ul/L、1

14、0000ul/L藥+丙三醇：0.1ul/L、1ul/L、10ul/L、100ul/L、1000ul/L、10000ul/L藥+乙醇：0.1ul/L、1ul/L、10ul/L、100ul/L、1000ul/L、10000ul/L以上母液濃度為：藥：溶劑=1:9（丙三醇：藥：蒸儲(chǔ)水=1:1:8）4、接種24孔板:(1)、實(shí)驗(yàn)反應(yīng)體系總體積：2ml/孔。(2)、沙氏液體培養(yǎng)基+0.2%體積的慶大霉素(即200ml液體培養(yǎng)基+400U1慶大霉素).(3)、將移液槍、酒精燈、試管、24孔板等儀器放入超凈工作臺(tái)中，開啟紫外燈消毒滅菌(照射20min、吹風(fēng)20min)。(4)、待紫外滅菌結(jié)束后，用酒精燈將手

15、擦拭干凈，打開24孔板，用移液槍按照如下順序依次加入藥品：2ml/孔=1800ml的沙氏液體培養(yǎng)基+200ml的藥物123456A：白藥力加基0.1ul/L1ul/L10ul/L100ul/L1000ul/L10000ul/LB：白藥力加基0.1ul/L1ul/L10ul/L100ul/L1000ul/L10000ul/LC:小藥九加生o.iui/L1ul/L10ul/L100ul/L1000ul/L10000ul/LCK:純培D:對照組H基養(yǎng)CK:純培養(yǎng)基CK純培養(yǎng)基尤由水尤由水尢菌水(一列前二個(gè)為平行實(shí)驗(yàn)，D1、D2、D3及D4D5D6力組平行實(shí)驗(yàn))(5)、接入菌餅：用2mm勺打孔器在長勢

16、均勻的培養(yǎng)基上打出一系列的菌餅，然后接入24孔板中，并蓋上蓋子。重復(fù)上述步驟，分別再做同樣一組。(菌種是同絲水霉菌、紋枯、頸枯、稻瘟)(6)、貼好標(biāo)簽，寫上日期，藥和溶劑，菌種，將24孔板放入真菌培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。1.2.4觀察記錄每24h觀察一次菌落生長狀況，用直尺測量菌落直徑；并記錄和計(jì)算抑制率。用解剖鏡、相機(jī)拍照，記錄菌絲的生長情況；抑制率=(對照菌落生長值一處埋菌落生長值)/對照菌落生長值*100%故實(shí)驗(yàn)結(jié)果：扒一一濃比0123456CK0.451.101.601.100.910.200.201.60芳樟油十二甲業(yè)碉0.420.811.601.080.910.200.201.600.3

17、51.501.210.810.200.201.60平均值0.410.961.571.130.880.200.201.60抑制率0.850.460.020.340.521.001.00(0.00)0123456CK0.500.650.790.490.700.200.201.60芳樟油十丙二醇0.200.720.700.650.450.200.201.600.201.100.960.960.500.200.201.40平均值0.300.820.820.700.550.200.201.53抑制率0.920.480.490.580.711.001.000.00次-j-濃度*r_0123456CK0.2

18、01.201.100.400.400.200.201.58芳樟油十丙二醇0.201.501.300.500.400.200.201.600.201.401.350.550.450.200.201.60平均值0.201.371.250.480.420.200.201.59抑制率1.000.170.250.800.851.001.000.00-扒0123456CK0.201.351.201.101.200.200.201.50芳樟油+乙醇0.201.401.301.201.000.200.201.600.201.501.101.000.700.200.201.40平均值0.201.421.201.

19、100.970.200.201.50抑制率1.000.060.230.310.411.001.000.00同絲水霉抑制由圖可知各溶劑加藥的MICo丙二醇、二甲亞楓、乙醇、 丙三醇對照實(shí)驗(yàn)方法同上濃度設(shè)置:溶劑：1000U1/L、2000ul/L、4000ul/L、6000U1/L、8000ul/L、10000ul/L(母液濃度：1/10)孔雀石綠：0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、4mg/L、8mg/L、16mg/L(母液濃度:5g/L)戊二醛：10ul/L、20ul/L、40ul/L、80ul/L、160ul/L、320ul/L()123456A：含藥培養(yǎng)1000ul/L2000ul/

20、L4000ul/L6000ul/L8000ul/L10000ul/L基(0.5mg/L)(1mg/L)(2mg/L)(4mg/)(8mg/L)(16mg/)(10ul/L)(20ul/L)(40ul/L)(80ul/L)(160ul/L)(320ul/)B：含藥培養(yǎng)1000ul/L2000ul/L4000ul/L6000ul/L8000ul/L10000ul/L(0.5mg/L)(1mg/L)(2mg/L)(4mg/)(8mg/L)(16mg/)(10ul/L)(20ul/L)(40ul/L)(80ul/L)(160ul/L)(320ul/)C：含藥培養(yǎng)1000ul/L2000ul/L4000

21、ul/L6000ul/L8000ul/L10000ul/L基(0.5mg/L)(1mg/L)(2mg/L)(4mg/)(8mg/L)(16mg/)(10ul/L)(20ul/L)(40ul/L)(80ul/L)(160ul/L)(320ul/)D:CK：純培養(yǎng)CK:純培養(yǎng)尢菌水CK：純土口喬基尢菌水尤由水（備注：第一行濃度為溶劑，第二行為孔雀石綠，第三行為戊二醛）（5）、接的菌種有同絲水霉菌和綿霉、紋枯，重復(fù)上述步驟，分別再做一組溶劑、孔雀綠、戊二醛板用于48h觀察（6）、貼好標(biāo)簽，將24孔板放入真菌培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。1.2.4觀察記錄每24h觀察一次菌落生長狀況，用直尺測量菌落直徑；并記錄和

22、計(jì)算抑制率。用解剖鏡、相機(jī)拍照，記錄菌絲的生長情況；抑制率=（對照菌落生長值處理菌落生長值）/對照菌落生長值*100%對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果:菌種是扒,溶劑分別是丙二醇、二甲業(yè)楓、乙醇、內(nèi)二醇。（橫坐標(biāo)為濃度，縱坐標(biāo)為直徑）扒0123456CK而一耐0.201.101.080.890.550.650.790.9010.201.150.890.810.650.690.600.900.200.701.020.700.790.750.901.14平均值0.200.981.000.800.660.700.760.98抑制率1.000.00-0.020.230.410.360.280.00扒0123456CK0.

23、20.550.710.710.890.50.91.01二甲亞0.20.810.710.80.90.490.90.73楓0.20.70.790.610.820.450.611.02平均值0.20.690.740.710.870.480.80.92抑制率10.320.250.30.070.610.160扒0123456CK乙醇0.21.020.910.90.850.650.4510.21.150.920.770.90.520.490.920.21.191.121.010.890.790.421.15平均值0.21.120.980.890.880.650.451.02抑制率1-0.120.040.1

24、50.170.450.690扒0123456CK0.200.890.820.690.450.500.450.85丙二醇0.200.780.910.560.460.410.400.800.200.720.690.650.490.490.420.51平均值0.200.800.810.630.470.470.420.72抑制率1.00-0.15-0.170.170.490.490.570.00對照1.201.00直 0.801 0.600.400.200.00（由上往下依次是：乙醇、丙二醇、丙三醇、二甲亞楓）對圖進(jìn)行分析：由圖分析可知，乙醇和丙三醇的菌直徑曲線比較平滑。說明相對誤差比較小，乙醇和丙三

25、醇對菌的生長影響比較小，不同濃度下，扒的生長比較明顯，生長趨勢有一定的抑制。再加上取的菌餅有一定的差異，通過取平均值及制出的曲線，我們選擇乙醇和丙三醇作為藥的溶劑比較合適，可以減少溶劑對菌生長的影響。菌種是紋枯0.001.002.003.004.005.006.00CK0.201.101.080.890.550.650.790.900.201.150.890.810.650.690.600.90丙二醇0.200.701.020.700.790.750.901.14平均值0.200.981.000.800.660.700.760.98抑制率1.000.00-0.020.230.410.360.2

26、80.000.001.002.003.004.005.006.00CK0.200.550.710.710.890.500.901.01二甲亞0.200.810.710.800.900.490.900.73楓0.200.700.790.610.820.450.611.02平均值0.200.690.740.710.870.480.800.92抑制率1.000.320.250.300.070.610.160.000.001.002.003.004.005.006.00CK0.201.020.910.900.850.650.451.000.201.150.920.770.900.520.490.92乙

27、醇0.201.191.121.010.890.790.421.15平均值0.201.120.980.890.880.650.451.02抑制率1.00-0.120.040.150.170.450.690.000.001.002.003.004.005.006.00CK0.200.890.820.690.450.500.450.850.200.780.910.560.460.410.400.80丙二醇0.200.720.690.650.490.490.420.51平均值0.200.800.810.630.470.470.420.72抑制率1.00-0.15-0.170.170.490.490.5

28、70.00（乙醇、丙三醇和丙二醇、二甲亞楓）分析:陽性對照孔雀石綠和戊二醛兩種藥作為抑制藥物，對扒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。24h菌落直徑（mm）孔雀石綠48hABC平均值抑制率ABC平均值抑制率00.200.200.200.201.000.200.200.200.201.000.5mg/L0.700.700.600.670.580.410.310.450.390.831mg/L0.200.500.200.300.910.320.240.270.280.932mg/L0.400.200.400.330.880.230.260.220.240.974mg/L0.200.200.200.201.000.200.2

29、00.200.201.008mg/L0.200.200.200.201.000.200.200.200.201.0016mg/L0.200.200.200.201.000.200.200.200.201.00CK1.301.301.301.300.001.321.351.311.301.18戊一醛24h48hABC平均值抑制率ABC平均值抑制率00.700.200.200.370.860.300.450.360.370.7910ul/L1.201.301.401.300.061.381.020.981.13-0.1420ul/L1.001.500.801.100.230.960.980.560

30、.830.2240ul/L1.401.600.701.230.120.820.810.890.840.2180ul/L1.001.501.401.300.060.780.820.820.810.25160ul/L0.200.200.200.201.000.720.580.480.590.51320ul/L0.200.200.200.201.000.200.200.200.201.00CK1.201.501.401.370.001.151.150.731.010.00從表口以乍i出：孔雀石綠、戊一醛、在24h和48h時(shí)的MIC,如下所示：24h時(shí)：48h時(shí)：孔雀石綠的MIC:4mg/L孔雀石綠的

31、MIC:4mg/L戊二醛的MIC:160ul/L戊二醛的MIC:320ul/L由表可知，孔雀石綠無論是在24h還是48h,MIC都是4mg/L,戊二醛MIC在24h和48h時(shí)發(fā)生變化,由160U1/L變成320U1/L,孔雀石綠抑制能力沒有隨著時(shí)間的增長而減弱，而戊二醛抑制能力卻發(fā)生變化，表明，戊二醛抑制能力下降可能于菌消耗物質(zhì)有關(guān)，或菌適應(yīng)了某一較小的濃度，只有在更大濃度才會(huì)抑制菌的生長。并且多子水霉菌絲在純無菌水中的長勢也有一定的差異?？赡芘c打菌餅時(shí)接種的菌有一定的差異。結(jié)合以上表，以24孔板為載體，2ml為體系，將藥物以不同濃度加到液體沙氏培養(yǎng)基，來培養(yǎng)多子水霉菌絲，以此測定不同濃度的藥

32、物對多子水霉菌絲生長的影響，及找出藥物對菌抑制的MIC,此實(shí)驗(yàn)方法的科學(xué)性與可靠性。1.2.3正式試驗(yàn)從預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果中，可知，在不同藥物濃度的培養(yǎng)基中，菌餅生長情況均不相同，同時(shí)隨藥物濃度增加，其菌落是直徑也越來越小，到某一濃度時(shí)達(dá)到完全抑制，所以藥物對多子似水霉生長的影響的方法是可行的。再從對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析時(shí)，溶劑丙三醇和丙二醇對菌生長影響較小，從而先這兩種溶劑加藥培養(yǎng)，參考以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，兩種溶劑與藥物均以2ul/L和20ul/L為頂端，進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)。菌種是紋枯和扒。溶劑是丙三醇和丙二醇方法同一，但是配藥比例改變，藥：溶劑=0.1ml:9.9ml。(丙三醇：藥：蒸儲(chǔ)水=1:0.1:8.9)1

33、、方法同1.2.2.12、設(shè)計(jì)濃度：0.1ml/L、0.2ml/L、0.4ml/L、0.6ml/L0.8ml/L、1ml/L3、接種24孔板：(1)、沙氏液體培養(yǎng)基+0.2%體積的慶大霉素的比例混合均勻。(2)、打開24孔板，用移液槍按照如下順序依次加入：123456A藥+基藥+基藥+基藥+基藥+基藥+基B藥+基藥+基藥+基藥+基藥+基藥+基C藥+基藥+基藥+基藥+基藥+基藥+基D/口加小/口加小/口加小無菌水無菌水無菌水加藥方法：123456濃度10.1ml/0.2ml/L0.4ml/L0.6ml/L0.8ml/L1ml/L藥L20ul40ul80ul120ul160ul200ul無菌水180ul160ul120ul80ul40ul0ul(3)、接入菌餅：用2mm勺打孔器在長勢均勻的培養(yǎng)基上打出一系列的菌餅，然后接入24孔板中，并蓋上蓋子。分別接種紋枯和扒，用的溶劑是丙三醇和丙二醇，各做兩板，24h和48h對照觀察。(4)、將24孔板放入真菌培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。4、觀察方法同1.2.2.1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1劉洪波，史東輝。植物精油抗菌活性研究發(fā)展J.畜牧與飼養(yǎng)科學(xué)，2009,30(1):12-142Singlt,AKFungltx