微生物平板劃線法-文檔資料

1、 平板劃線實驗平板劃線實驗 STEPSTEPSTEPSTEP1 細(xì)菌的培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng) 細(xì)菌培養(yǎng)是一種用人工方法使細(xì)菌生長繁殖的技術(shù)。細(xì)菌在自然界中分布極廣，數(shù)量大，種類多，它可以造福人類，也可以成為致病的原因。大多數(shù)細(xì)菌可用人工方法培養(yǎng)，即將其接種于培養(yǎng)基上，使其生長繁殖。培養(yǎng)出來的細(xì)菌用于研究、鑒定和應(yīng)用。細(xì)菌培養(yǎng)是一個復(fù)雜的技術(shù)。STEPSTEPSTEPSTEP2 培養(yǎng)基 在土壤、水、食品、空氣以及人和動、植物中，不同種類的細(xì)菌混雜地生活在一起。若要研究其中某種細(xì)菌，就必須將各種細(xì)菌進(jìn)行分離，以得到只含有這一種細(xì)菌的純培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)菌分離成純種后，常需要接種到有關(guān)的培養(yǎng)基中，以測試其

2、各種生物學(xué)性狀，不同的細(xì)菌需要不同的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類按其物理性狀分為：按其物理性狀分為： 固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基按用途分為：按用途分為： 基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基STEPSTEPSTEPSTEP3 細(xì)菌接種方法常見的幾種細(xì)菌的培養(yǎng)和基接種方法舉例常見的幾種細(xì)菌的培養(yǎng)和基接種方法舉例 平板劃線法平板劃線法 平板劃線法主要是借劃線而將細(xì)菌在瓊脂平板表面分散開，使單個細(xì)菌能固定在某一點，生長繁殖后形成單個的菌落從而達(dá)到分離純種的目的。常用于分離單個菌落，也可用于觀察細(xì)菌的生長狀況和觀察某些生化反應(yīng)。平板劃線法平板劃線法接種方法接種方法（一

3、）標(biāo)記（一）標(biāo)記 在培養(yǎng)皿底面，用記號筆注明接種的菌名、接種者姓名、日期等。 平板劃線法平板劃線法接種方法接種方法（二）滅菌接種環(huán)（二）滅菌接種環(huán) 點燃酒精燈，右手以持筆式握持接種環(huán)，并放置火焰中燒灼滅菌，先將接種環(huán)的接種絲部分置于火焰中，待金屬絲燒紅并蔓延至金屬端，再直接燒灼金屬環(huán)直至燒紅，然后由金屬環(huán)至金屬桿方向快速通過火焰，隨后再反方向通過火焰，如此23次。然后將接種環(huán)移開火焰，待其冷卻。平板劃線法平板劃線法接種方法接種方法（三）取菌種（三）取菌種 左手持裝有金黃色葡萄球菌或大腸桿菌菌液的試管，用持有接種環(huán)的右手手掌及小指拔取試管塞，將試管管口迅速通過火焰23次進(jìn)行滅菌。 將已滅菌且已冷

4、卻的接種環(huán)伸入菌種管中，取一接種環(huán)的菌液，然后退出菌種管，將菌種管管口及試管塞再次通過火焰23次滅菌，塞好試管塞，放至原來的位置。 平板劃線法平板劃線法接種方法接種方法（四）分離劃線接種細(xì)菌（四區(qū)接種法）（四）分離劃線接種細(xì)菌（四區(qū)接種法） （1）左手手掌持瓊脂平板培養(yǎng)基，大拇指與中指輕輕將平皿蓋子拿起，右手持接種環(huán)在瓊脂平板上端來回劃線，涂成一細(xì)菌薄膜（約占平板的1/10），視為一區(qū)。劃線時使接種環(huán)與接種平板面呈3040度角，以腕力在平板表面行輕而快地來回滑動動作。 平板劃線法平板劃線法接種方法接種方法 （2）旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，燒灼接種環(huán)，以殺滅環(huán)上的殘留細(xì)菌，將接種環(huán)觸及培養(yǎng)基表面以使其冷卻。滅菌接種環(huán)通過薄膜處作連續(xù)平行劃線（約占平板1/5），此視為二區(qū)。平板劃線法平板劃線法接種方法接種方法 （3）旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，灼燒接種環(huán)滅菌并使之冷卻。將滅菌接種環(huán)接二區(qū)連續(xù)平行劃線（約占平板1/4），此為三區(qū)。 （4）旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，接種環(huán)不必再滅菌，接三區(qū)連續(xù)平行劃線，劃滿平板其余部分，此視為四區(qū)。 各區(qū)接種線間盡量互不交接，以達(dá)到細(xì)菌逐漸稀釋的目的。 平板劃線法平板劃線法接種方法接種方法平板劃線法平板劃線法接種方法接種方法 （5）劃線完畢，將瓊脂平板放進(jìn)皿蓋，將培養(yǎng)皿倒放，送進(jìn)37溫箱培