線粒體染液-詹姆斯綠B-Janus-green-B的使用及其原理

1、Janus green B中文名稱：詹納斯綠B英文名稱：Janus green B 別名：健那綠；雙氮嗪綠。 蘇鐵木精英文別名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。 化學(xué)式：C30H31N6Cl定義：主要用于生物活體染色的一種堿性偶氮吖嗪染料。能穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞特異地顯示線粒體。 詹納斯綠B是一種活體染色劑，專一用于線粒體的染色。它可以和線粒體中的細(xì)胞色素C氧化酶結(jié)合，從而出現(xiàn)藍(lán)綠色。原理是線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)即有色狀態(tài)呈藍(lán)綠色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被復(fù)原，成為無色狀態(tài)。必須指出的是，只有具有活性的細(xì)胞色素C氧化酶才

2、能夠把詹納斯綠B氧化，從而使它顯出顏色，因此，在實(shí)驗(yàn)過程中務(wù)必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于04的冰水浴低溫中，并且操作要迅速。Cas 編號(hào):2869-83-2EINECS 編號(hào):220-695-6 MDL 編號(hào):MFCD00011758Beilstein 編號(hào):分子式:C30H31ClN6分子量:511.06中文別名: 詹姆斯綠B，健那綠，健那綠B，雙氮嗪綠，真那氏綠，詹姆斯綠，煙魯綠，3-(二乙基氨基)-7-4-(二甲基氨基)苯基偶氮-5-苯基吩嗪翁氯化物 英文別名:3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylph

3、enazinium chlorideDiazin Green SUnion Green BC.I. 11050 性狀:棕色呈深棕色結(jié)晶性粉末，溶于水呈藍(lán)色，微溶于醇。常用作線粒體專一性活體染色劑.線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))呈藍(lán)綠色,而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被復(fù)原,成為無色狀態(tài). 用途:用于線粒體活體染色，真菌和原蟲染色，胚胎切片染色，以及用作氧化復(fù)原指示劑和銅的電鍍添加劑。貯存:密封枯燥保存。聯(lián)合國(guó)編號(hào):Risk:Safety:S24/25 Hazard:小鼠肝細(xì)胞線粒體的Janus green B染色及觀察1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)超活染色的原理及方法，用詹納斯綠B給小鼠

4、的肝細(xì)胞線粒體染色。 2. 實(shí)驗(yàn)用品：1 儀器及器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、手術(shù)剪、解剖盤、膠頭滴管、雙凹載玻片 2 實(shí)驗(yàn)藥品：蒸餾水、Ringer液、詹納斯綠B染液 3 實(shí)驗(yàn)材料：小鼠 3. 實(shí)驗(yàn)原理： 1 活體染色又稱超活染色，是指對(duì)生命有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色又無毒害的一種染色方法。這種染色方法常用的是化學(xué)染料。 目的：顯示生活中細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)，不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)或產(chǎn)生任何的物理、化學(xué)變化以致細(xì)胞的死亡。 應(yīng)用：研究生活狀態(tài)下細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理病理狀態(tài)。 2 通常把活體染色分為體內(nèi)活體染色與體外活體染色兩類。體外活體染色又稱超活染色，它是由活的動(dòng)、植物別離出局部細(xì)胞或組織小塊

5、，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色?；铙w染料之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的局部，主要是靠染料的“電化學(xué) 特性。堿性染料的膠粒外表帶陽(yáng)離子，酸性染料的膠粒外表帶有陰離子，而被染的局部本身也是具有陰離子或陽(yáng)離子，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活體染色，理論上應(yīng)選擇那些對(duì)細(xì)胞無毒性或毒性極小的染料，且使用時(shí)需要配成稀淡的溶液。一般說來，最為適用的是堿性染料，這可能是因?yàn)樗哂腥芙庠陬愔|(zhì)(如卵磷脂、膽固醇等)的特性，易于被細(xì)胞吸收。詹納斯綠B(Janus green B)和中性紅(neutral red)兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料

6、，對(duì)于線粒體和液泡系的染色分別具有專一性。 3 選擇活體染料的原那么： 性質(zhì)：有電化學(xué)特性 低毒、無毒 低濃度：如實(shí)驗(yàn)中使用的是1/5000的詹納斯綠B染液 專一、特異性：中性紅可特異性地對(duì)植物液泡染色 常以堿性染料為主，因?yàn)閴A性染料多可溶于類脂，容易穿膜。 4. 實(shí)驗(yàn)步驟： 1 用斷頭法處死小鼠，置于解剖盤中。剪開腹腔，取出肝臟。選取邊緣較薄的肝組織0.5cm2放入小燒杯中，用Ringer液沖洗去血污。 2 滴加1/5000的詹納斯綠B染液于雙凹片的凹穴中，再將上述洗凈肝組織移入染液染色2030mins。以組織邊緣被染成藍(lán)綠色為準(zhǔn)。 3 吸去染液，重新把組織置于小燒杯中。滴加Ringer液約

7、0.5mL，用剪刀充分剪碎組織制成懸液。 4 靜置上述懸液12mins，取靜置好的懸液滴片，加蓋玻片，高倍鏡下觀察。 5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：視野中可見比擬大的、呈圓形的肝細(xì)胞，此種細(xì)胞內(nèi)有一些小顆粒被染成藍(lán)綠色，就是線粒體。視野中也有一些較小的細(xì)胞，有些可看到紅色，是血細(xì)胞。 10*40顯微鏡下觀察： 6. 分析與討論 1 結(jié)果分析：局部肝細(xì)胞的線粒體被染成綠色 2 考前須知 取肝組織：取肝組織時(shí)，應(yīng)注意選擇肝的邊緣局部，這一局部組織的厚度差比分剪碎組織制成懸液。 3 靜置上述懸液12mins，取靜置好的懸液滴片，加蓋玻片，高倍鏡下觀察。 5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：視野中可見比擬大的、呈圓形的肝細(xì)胞，此種細(xì)胞

8、內(nèi)有一些小顆粒被染成藍(lán)綠色，就是線粒體。視野中也有一些較小的細(xì)胞，有些可看到紅色，是血細(xì)胞。 10*40顯微鏡下觀察： 6. 分析與討論 GENMED線粒體功能詹納斯綠B染色試劑盒產(chǎn)品說明書中文版主要用途 GENMED線粒體功能詹納斯綠B染色試劑是一種旨在通過一種毒性較小的堿性染料特異性地使具有活性功能的線粒體呈現(xiàn)藍(lán)綠色，從而判斷線粒體功能的完整性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種線粒體動(dòng)物、人體、植物、昆蟲等制備物的功能檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，活體檢測(cè)，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。 技術(shù)背景線粒體是細(xì)胞中重要的細(xì)胞器，其主要功能是提供細(xì)胞內(nèi)各種物

9、質(zhì)代謝所需要的能量。線粒體大量存在于代謝旺盛的細(xì)胞中，如動(dòng)物的心肌、肝、腎等器官和組織的細(xì)胞中。大量制備線粒體就是從這些器官組織中提取，或從組織培養(yǎng)細(xì)胞中提取。在光學(xué)顯微鏡下線粒體呈現(xiàn)為顆粒狀、棒狀或彎曲細(xì)線。詹納斯綠BJanus green B，是一種毒性較小的堿性染料。它可以對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行直接染色，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可以看到被染成藍(lán)綠色的線狀或顆粒小體的線粒體。線粒體所以能顯示出藍(lán)綠色，是由于線粒體中具有細(xì)胞色素氧化酶系統(tǒng)，它是染料始終處于氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中的染料被復(fù)原呈無色。 產(chǎn)品內(nèi)容 GENMED保存液Reagent A 毫升GENMED染色液Reagent B 毫升GENME

10、D清理液Reagent C 毫升 保存方式 保存在20冰箱里；GENMED染色液(Reagent B)，防止光照；有效保證6月 用戶自備 毫升離心管：用于線粒體染色的容器 光學(xué)顯微鏡：用于線粒體染色觀察分析實(shí)驗(yàn)步驟 實(shí)驗(yàn)開始前，將 冰箱里的試劑盒中的GENMED染色液Reagent B置于冰槽里融化，并放在暗室里。然后進(jìn)行以下操作。 一、純化線粒體染色 1 從純化的線粒體樣品中移出 至 微升含 細(xì)胞中提取的線粒體到新的預(yù)冷的 毫升離心管，置于冰槽里注意：線粒體須均勻分布，沒有聚集成團(tuán)。 2 參加等量微升的GENMED染色液Reagent B，輕柔混勻 。3 放進(jìn)暗室里，在室溫下孵育1分鐘。 4

11、 即刻移取 微升到載玻片上，放上蓋玻片 。5 在光學(xué)顯微鏡油鏡下進(jìn)行觀察：功能完整的線粒體呈現(xiàn)藍(lán)綠色圓形或橢圓形顆粒注意：可見藍(lán)綠色漸漸變淡現(xiàn)象。 6 籃綠色強(qiáng)度顯著減弱或呈現(xiàn)無色，說明線粒體細(xì)胞色素氧化酶系統(tǒng)功能不全或功能喪失。 二、活體細(xì)胞染色1 將待測(cè)細(xì)胞 X 細(xì)胞移入到1.5毫升離心管 2 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心1分鐘，速度為500g或2000RPM；例如 eppendorf 5415 3 小心抽去上清液 4 參加 微升GENMED清理液Reagent C或GENMED保存液Reagent A 5 參加 微升GENMED染色液Reagent B，充分混勻 6 放進(jìn)暗室里，在冰槽里孵育

12、分鐘 7 即刻移取 微升到載玻片上，放上蓋玻片 8 在光學(xué)顯微鏡油鏡下進(jìn)行觀察：功能完整的線粒體呈現(xiàn)藍(lán)綠色線狀或顆粒小體。 9 籃綠色強(qiáng)度顯著減弱或呈現(xiàn)無色，說明線粒體細(xì)胞色素氧化酶系統(tǒng)功能不全或功能喪失 ?？记绊氈?1 本產(chǎn)品為20次活體細(xì)胞或400次純化線粒體操作 2 所有操作均須無菌狀態(tài)下進(jìn)行 3 線粒體樣品操作須在低溫下進(jìn)行，且操作快速 4 操作時(shí)，須戴手套 5 建議染色完成后，即刻進(jìn)行顯微鏡觀察分析 6 孵育時(shí)，須防止光照 7 本公司提供系列線粒體試劑產(chǎn)品 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能長(zhǎng)期穩(wěn)定 2 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰 使用承諾 杰美基因秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾的宗旨為我

13、們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和效勞。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)假設(shè)發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請(qǐng)立即以書面形式實(shí)驗(yàn)報(bào)告與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承當(dāng)由此造成的損失。 友情提醒 IF IT DOESNT WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。 訂購(gòu)信息 編號(hào) 名稱 規(guī)格 GMS10015 GENMED線粒體功能詹納斯綠B染色試劑盒 20/

14、400次 GMS10015A GENMED保存液Reagent A 10毫升 GMS10015B GENMED染色液Reagent B 10毫升 GMS10015C GENMED清理液Reagent C 10毫升 產(chǎn)品編號(hào) 名稱 規(guī)格 GMS10006.1 動(dòng)物細(xì)胞/組織線粒體粗提別離試劑盒 10/50次 GMS10006.2 動(dòng)物細(xì)胞/組織活性線粒體別離試劑盒 10/50次 GMS10006.3 動(dòng)物細(xì)胞/組織高質(zhì)純化線粒體別離試劑盒 10次 GMS10006.4.1 動(dòng)物硬組織線粒體別離試劑盒 50次 GMS10006.4.2 動(dòng)物硬組織線粒體別離試劑盒 50次 GMS10006.4.3

15、動(dòng)物硬組織線粒體別離試劑盒 10次 GMS10013.1 純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 100次 GMS10013.2 活體細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 20次 GMS10013.3 線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 50次 GMS10013.4 活體組織線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 10次 GMS10014.1 線粒體外膜功能檢測(cè)試劑盒 20次 GMS10014.2 細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 20次 GMS10014.3 細(xì)胞/組織懸液細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 20次 GMS10014.4 純化細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 20次 GMS10015 線粒體功能詹納斯綠BJGB染色試劑盒 20/400次 GMS10016.1 細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒 20次 GMS10016.2 細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒 100次 GMS10016.3 活體組織活性氧ROS高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒 8/20次 GMS10016.4 活體組織活性氧ROS初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒 40/100次 GMS10016.5 冰凍切片活性氧ROS高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒 50次 GMS10016.6 冰凍切片活性氧ROS初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒 50次 GMS10067 細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS比色法定量檢測(cè)試劑盒