手把手教你做出仿制藥四條溶出曲線

1、手把手教你做出仿制藥四條溶出曲線原創(chuàng)？2016-03-09?書(shū)立？讀完本文大約需要？8?分鐘2016年3月5日，國(guó)務(wù)院辦公廳印發(fā)了關(guān)于開(kāi)展仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)的意見(jiàn)，仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作正式展開(kāi)。仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作中，首先需要評(píng)價(jià)的是仿制制劑與參比制劑在體外溶出曲線要一致。然而，將仿制制劑與參比制劑做到體外四條溶出曲線一致，并不是一件容易的工作。作者將平日的工作經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出來(lái)，欲與大家交流分享。開(kāi)始前的準(zhǔn)備將BCS ?再次分類生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)（BCS biopharmaceutics classification system ）是 1995 年由Amid on提出的基于藥物溶解性質(zhì)和

2、滲透性差異的分類系統(tǒng)，分為四類。對(duì)于體外四條溶出曲線而言，溶解性性質(zhì)比滲透性更實(shí)用，因此根據(jù)溶解性質(zhì)的差異將？BCS 再次分類，分為?A類（I和 川）和?B類（U和W）。之所以這樣二次分類，是因?yàn)椋? 和和w分別在體外呈現(xiàn)出相同的溶解度性質(zhì)。將化合物根據(jù)？pH-溶解度差異來(lái)分類仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)口服固體制劑溶出曲線測(cè)定與比較指導(dǎo)原則中提出，在進(jìn)行溶出度實(shí)驗(yàn)之前，建議繪制化合物 pH-溶解度圖。那么根據(jù)pH-溶解度的差異性，也可以將化合物分為兩類：一類是溶解度不存在pH依賴性或差異性。暫且將飽和溶解度無(wú) pH依賴性的原料藥分為 a類。另一類是溶解度存在pH依賴性或差異性，其飽和溶解度隨pH值增

3、加而增加，或隨pH值 增加而降低。將這類化合物分為 b類，比如NAISD類的布洛芬、雙氯芬酸鈉等。這樣分類如何應(yīng)用呢？舉個(gè)例子。如表1所示，雙氯芬酸鈉在不同介質(zhì)中的飽和溶解度差異性較大，再結(jié)合根據(jù)上述BCS的二次分類，那么可將雙氯芬酸鈉可定義為 Bb類化合物。之所以這樣區(qū)分，是為了建立自我工作模型，以后在工作遇到相同的化合物，直接進(jìn)行套用，從而降低工作量。如何快速有效地做出四條溶出曲線？根據(jù)化合物性質(zhì)不同，其溶出曲線難易程度也是各有差別。Aa 類首先，最簡(jiǎn)單的化合物模型屬于 Aa類，即高溶解性無(wú)pH依賴性藥物。如果?Aa類藥物的參比制劑（RLD呈現(xiàn)出四條溶出曲線如圖1，那么在處方篩選工作中可

4、選擇任意一種介質(zhì)作為區(qū)分介質(zhì)。當(dāng)然，如果是速釋制劑，建議選擇低 pH介質(zhì)，如pHI.O或pH1.2，因?yàn)槠涓玫哪芨?的模擬體內(nèi)溶出環(huán)境。如果參比制劑的四條溶出曲線不一致，即呈現(xiàn)出pH依賴性（如圖2），這說(shuō)明參比制劑中存在一種或幾種pH依賴性輔料，而自制處方和參比處方的輔料用量不一致。如圖2和圖3示例中，在pHI.O介質(zhì)中，仿制制劑與參比制劑的f2值為80 ;然而在 pH6.8和水中，f2 值為35和23。之所以差異較大，原因在于參比制劑中 pH依賴型輔料的用量，遠(yuǎn)大于參比制劑的用量。這種情況需要將這些輔料用量調(diào)至跟參比一致或接近。常見(jiàn)存在pH依賴性的輔料有海藻酸鈉、卡波姆、尤特奇EPO等等

5、。Ab 類一對(duì)于Ab類化合物，其參比制劑的溶出或釋放曲線呈現(xiàn)出pH依賴性一般是因?yàn)榛衔锏膒H-溶解度性質(zhì)。如果參比制劑的四條曲線呈現(xiàn)出一致， 那可能是由于輔料抵消了原料藥的 pH-溶解度性質(zhì)。對(duì)于A類化合物，尤其是BCS 3類化合物，除了在較高轉(zhuǎn)速下考察溶出度或釋放度，建 議也要對(duì)比不同轉(zhuǎn)速的溶出度差異，因?yàn)樵纤幍母呷芙舛瓤赡苎谏w制劑工藝過(guò)程中參數(shù) 的不一致或者崩解劑用量的差異?？傮w而言，A類化合物相對(duì)比較容易調(diào)整至四條曲線與參比制劑一致。B類根據(jù)BCS定義，BCS II和IV類原料藥在pH1.07.4中，最高劑量不能溶于250 ml的 介質(zhì)中。由于溶解度較低這一特質(zhì)，溶出度釋放也會(huì)偏慢，

6、會(huì)造成處方或制備工藝細(xì)節(jié)在溶出曲線 中被放大，因而增加了體外四條溶出曲線一致性的難度。除了共性的問(wèn)題，對(duì)于B類原料藥，做溶出曲線時(shí)還可能存在個(gè)性問(wèn)題：每一條溶出曲線都比RLD快通過(guò)處方篩選，優(yōu)化崩解劑用量（0%常規(guī)用量）、親水性/疏水性輔料比例、原料藥粒徑 （增大粒徑）后，每一種介質(zhì)中仿制制劑的溶出仍然比參比制劑快。這種現(xiàn)象說(shuō)明影響參比制劑的溶出行為的關(guān)鍵因素不是處方因素，而是制備工藝參數(shù)。如果制粒時(shí)間過(guò)短，那么制得的顆粒就會(huì)比較疏松、孔隙率比較大。對(duì)于易溶解的A類化合物來(lái)說(shuō)，溶解后可以形成新的孔道，有利于整體藥物的溶出。但對(duì)于B類化合物來(lái)說(shuō)，由于低溶解性，其對(duì)工藝參數(shù)會(huì)更為敏感。如果制粒時(shí)間

7、過(guò)長(zhǎng)，也會(huì)存在問(wèn)題。我在之前工作中，就碰到過(guò)兩個(gè)BCS I類化合物過(guò)度制粒的例子。一個(gè)例子是，先在處方篩選時(shí)采用手工制粒，此后在放大處方時(shí)采用625所的濕法制粒機(jī) 進(jìn)行制粒。結(jié)果是，小試處方跟參比制劑一致，但放大時(shí)仿制制劑在四種介質(zhì)中均比參比 制劑溶出度慢（如圖4 ）。另一個(gè)例子是這樣的：處方篩選時(shí)，無(wú)論如何仿制制劑的溶出度均比參比制劑快，而采用濕法制粒機(jī)制粒后，只有在固定參數(shù)、固定時(shí)間（1525 min）下，溶出曲線才一致（如圖 4）。以上兩個(gè)例子中的溶出曲線不一致，均是由于存在制粒參數(shù)引起的，也就是說(shuō)，制粒是關(guān) 鍵參數(shù)。遇到類似情況，建議采用 DOE的實(shí)驗(yàn)方案，設(shè)計(jì)出合理的參數(shù)空間。但是，

8、基于目前的審 批現(xiàn)狀，找出關(guān)鍵參數(shù)是不夠的，還需要保障工藝是受控的。 三條溶出曲線對(duì)上，一條快于或慢于RLD這是制劑工作者最糾結(jié)的情況之一，常常出現(xiàn)在Bb類化合物上。例如，在pHI.O、pH4.0、pH6.8中f2 值50或者甚至是80 ,但在pH5.0中的f2 值 慘得可憐。原因是：pHI.O和pH4.0條件下，溶解度較低，累計(jì)溶出度會(huì)受到本身溶解度的影響pH6.8中屬于易溶，15 min >85%pH5.0條件剛好是最有區(qū)分的時(shí)候這種情況下，應(yīng)該按仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)口服固體制劑溶出度曲線測(cè)定與比較指導(dǎo)原 則的建議進(jìn)行操作：對(duì)于溶出度受pH值影響較大的藥物，需要在多種 pH介質(zhì)中進(jìn)行

9、考察，必要時(shí)可細(xì)分 至0.5。如何選擇表面活性劑的最佳用量？對(duì)于B類化合物，pH水平、膽鹽或其他表面活性劑的共存等因素，都能很大程度上影響 藥物的溶解性，從而影響吸收的速度和程度。在體外實(shí)驗(yàn)中，常常需要添加一定量的表面 活性劑來(lái)增加溶解度，以達(dá)到漏槽條件。但如何選擇表面活性劑的最佳用量卻是一個(gè)難題：如果用量太高，則溶出太快，不存在區(qū) 分性；如果用量太低，則溶出太慢。中國(guó)、美國(guó)、日本的規(guī)定是這樣的：CFDA發(fā)布的仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)口服固體制劑溶出度曲線測(cè)定與比較指導(dǎo)原則建議,表面活性劑的濃度在0.01%1.0（w/v）依次增加；卩。人的（1092）溶出度試驗(yàn)的開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證中提到，表面活性劑的用量

10、，首先應(yīng)滿足表 面活性劑的CMC其次是能夠滿足漏槽條件；日本規(guī)定的用量也是一個(gè)用量篩選過(guò)程，與CFDA 一致。鑒于仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作的初衷是通過(guò)體外溶出實(shí)驗(yàn)減低體內(nèi)生物等效的風(fēng)險(xiǎn)這一 點(diǎn)，建議使用體內(nèi)相關(guān)的生物介質(zhì)來(lái)測(cè)定原料藥的飽和溶解度，然后測(cè)定化合物在不同濃 度表面活性劑中的飽和溶解度，選擇兩者相接近。生物相關(guān)介質(zhì)如下：這里采用一個(gè)FDA的QbD案例作為說(shuō)明。案例中，測(cè)定了原料藥在生物相關(guān)介質(zhì)和不同濃度SLS中的濃度，結(jié)果如表3：表3.?原料藥在生物相關(guān)介質(zhì)和不同濃度 SLS中的濃度如表3，化合物在1.0% ?SLS介質(zhì)中與生物相關(guān)介質(zhì)中的飽和溶解度比較接近，所以選取 1.0% ?SLS

11、介質(zhì)以及藥典中的規(guī)定的2.0% SLS作為溶出介質(zhì)。如圖5所示，化合物在2.0% ?SLS中仿制制劑與參比制劑的溶出度一致，但是在體內(nèi)并 不等效。如圖6所示，化合物在1.0%的介質(zhì)中，能夠檢測(cè)到故意變更的工藝參數(shù)（原料藥粒徑） 并且得到的結(jié)果，能夠判斷是否生物等效。圖6.不同粒徑樣品在1%中的溶出SDS體外一致，體內(nèi)未必一致需觀察現(xiàn)象結(jié)果有時(shí)候，體外四條曲線一致，但在體內(nèi)卻未必一致，可能是因?yàn)檫x擇的溶出方法沒(méi)有區(qū)分 力，或者說(shuō)溶出度的結(jié)果沒(méi)有區(qū)分力。對(duì)于A類化合物來(lái)說(shuō)，其體外溶出現(xiàn)象與參比制劑并不一致?？赡艽嬖谶@樣的情況，雖然 仿制制劑和參比制劑在四條溶出曲線一致， 但屬于兩種不同的機(jī)理，參比

12、制劑為崩解溶出， 而仿制制劑為溶蝕溶出，這樣可能會(huì)增加體內(nèi)生物不等效的風(fēng)險(xiǎn)。由于不同的溶出機(jī)理，所以處方篩選時(shí)溶出后的可能現(xiàn)象結(jié)果比數(shù)據(jù)結(jié)果還要重要。例如:普通片崩解時(shí)，需要注意觀察：RLD崩解為顆粒還是粉末，是崩解還是溶蝕？仿制制劑的崩解時(shí)間與參比制劑的崩解時(shí)間是否會(huì)有差異？仿制制劑衣膜溶解的時(shí)間與參比制劑溶解的時(shí)間是否有差異？腸溶微丸溶出時(shí)，需要觀察：耐酸過(guò)程中RLD是否變色（拉唑類耐酸過(guò)程中常常變色）？腸溶層是被溶解還是被撐破？對(duì)于膜控系統(tǒng)的緩釋微丸，需要觀察：RLD釋放后微丸是否變大？不溶物殘留情況如何?仿制藥膠囊殼與參比制劑膠囊殼溶解的時(shí)間是否有差異?基于溶出過(guò)程中觀察到的現(xiàn)象，有助

13、于判斷參比制劑與自制制粒釋藥機(jī)制是否一致，也有 助于為處方調(diào)整提供方向。四條溶出曲線并不難四條溶出曲線并不難，通過(guò)理解原料藥性質(zhì)、pH-溶解度關(guān)系、輔料是否有依賴性，然后再通過(guò)DOE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，細(xì)致的觀察實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的現(xiàn)象，對(duì)存在不符合邏輯的現(xiàn)象、結(jié)果進(jìn)行 探索和驗(yàn)證，你就可以輕松搞定仿制藥一致性評(píng)價(jià)中的溶出曲線。你學(xué)會(huì)了嗎？參考文獻(xiàn)【1】 Gordon L. Amid on, Vinod P. Shah, Joh n R. Crison ； ATheoretical Basis for aBiopharmaceutic Drug Classificatio n: The Correlati on ofin Vitro Drug ProductDissolution and in Vivo Bioavailability， PharmRes,1995,12(3):413-420.【2】仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)口服固體制劑溶出曲線測(cè)定與比較指導(dǎo)原則【3】(1092)溶出度試驗(yàn)的開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證【4 Dressma n,J.B,Amido n,