基因工程和基因重組

1、如有幫助，歡迎下載支持！第十四章基因重組與基因工程內(nèi)容提要：細菌的基因轉(zhuǎn)移包括接合作用、轉(zhuǎn)化作用、轉(zhuǎn)導(dǎo)作用等。當(dāng)細胞與細胞或細菌通過菌毛相互接觸時，質(zhì)粒DNA從一個細胞轉(zhuǎn)移至另一個細胞，這種類型的DNA專移稱為接合作用。通過自動獲取或人為的供給外源DNA使細胞或培養(yǎng)的受體細胞獲得新的遺傳表型，這就是轉(zhuǎn)化作用。由病毒攜帶將宿主DNA片段從一個細胞轉(zhuǎn)移至另一細胞的現(xiàn)象或機制，稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。在接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)座過程中，不同DNA分子間發(fā)生的共價連接即為重組。重組DNA技術(shù)是在人們對自然界基因轉(zhuǎn)移和重組的認(rèn)識基礎(chǔ)上創(chuàng)立的新技術(shù)。為研究基因的結(jié)構(gòu)與功能，從構(gòu)建的基因組DNA文庫或cDNA文庫分離、擴

2、增某一感興趣的基因就是基因克隆或分子克隆，又稱重組DNA技術(shù)。一個完整的基因克隆過程應(yīng)包括：1分，即目的基因的獲取及基因載體的選擇。目的基因指科學(xué)家感興趣的外源基因，其來源有幾種途徑：化學(xué)合成、PCF技術(shù)、基因組文庫或cDNA文庫中獲得。載體是目的基因的攜帶者，常用的載體有質(zhì)粒、噬菌體等。2切，即限制性核酸內(nèi)切酶的應(yīng)用。限制性內(nèi)切酶是識別DNA勺特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA勺一類內(nèi)切酶，是實現(xiàn)重組DNA技術(shù)的重要的工具酶。3接，即將目的基因與載體連接形成重組體（或重組DNA）。4轉(zhuǎn)，即將重組體導(dǎo)入宿主菌（或細胞），根據(jù)采用的載體性質(zhì)不同，將重組體導(dǎo)入宿主菌的方法有轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染及感

3、染。5篩，即重組體的篩選與鑒定，將重組體導(dǎo)入宿主菌后，通過適當(dāng)形式的培養(yǎng)板生長即可獲得一定的抗藥菌落。利用原位雜交，和Southern印跡或免疫學(xué)方法對抗藥菌落進行篩選，獲得含目的基因的轉(zhuǎn)化子菌落，再經(jīng)擴增、分離重組DNA獲得基因克隆。重組DNA技術(shù)在疾病基因的發(fā)現(xiàn)，表達有藥用價值的蛋白質(zhì)，DNA診斷及疾病的預(yù)防等方面具有廣泛應(yīng)用價值，并促進了當(dāng)代分子醫(yī)學(xué)的誕生和發(fā)展。一、選擇題【A型題】1下列DNA序列屬于回文結(jié)構(gòu)的是（）AATGCCGTACGGCBGAATTCCTTAAGCGGCCGGCCGGCCDTCTGACAGACTGECTAGGGGATCCC2DNA經(jīng)限制性內(nèi)切核酸酶切割后，斷端易于

4、首尾相接，自行成環(huán)。這是因為存在著（）A.鈍性末端B.平端C.粘性末端D.5'端E.3'端3限制性內(nèi)切核酸酶的通常識別序列是（）A粘性末端B聚腺苷酸回文對稱序列D.RNA聚合酶附著點E.甲基化“帽”結(jié)構(gòu)4pBR322是（）A.經(jīng)人工改造的大腸桿菌質(zhì)粒B.天然的大腸桿菌質(zhì)粒C.天然的酵母質(zhì)粒D經(jīng)人工改造的大腸桿菌噬菌體E.經(jīng)人工改造的酵母質(zhì)粒免疫球蛋白的生成是通過以下哪個過程（）A.轉(zhuǎn)化B.轉(zhuǎn)導(dǎo)C.轉(zhuǎn)染D.轉(zhuǎn)位E.溶原常用載體-質(zhì)粒的特點（）A.是線形雙鏈DNAB.插入片斷的容納量比入噬菌體DNA大C.含有抗藥性基因D含有同一限制性內(nèi)切核酸酶的多個切口E.不隨細菌繁殖而進行自我復(fù)

5、制基因工程的操作程序可概括為（）A.切、轉(zhuǎn)、接、篩、分B.轉(zhuǎn)、接、篩、分、切C.接、篩、分、切、轉(zhuǎn)D.篩、分、切、轉(zhuǎn)、接E.分、切、接、轉(zhuǎn)、篩5. cDNA文庫指（）A.一個生物組織和細胞的全部基因信息B.一個生物組織和細胞的全部mRNA信息C.一個生物組織和細胞所表達的mRNA信息D.一個物種的全部mRNA信息E.個物種的全部基因信息6. 限制性內(nèi)切核酸酶（）A.可將單鏈DNA任意切斷B.由噬菌體提取而得C.可將雙鏈DNA序列特異地切開D.可將兩個DNA分子連接起來E.不受DNA甲基化影響7. 在重組DNA技術(shù)中，不常用的酶是（）A.限制性內(nèi)切核酸酶B.DNA聚合酶C.DNA連接酶D.反轉(zhuǎn)錄

6、酶E.DNA解鏈酶11可作為重組DNA的目的基因的是（）A.mRNAB.tRNAC.rRNAD.基因組DNAE.mRNA和基因組DNA12以質(zhì)粒為載體，將外源基因?qū)胧荏w菌的過程稱（）A.轉(zhuǎn)化B.轉(zhuǎn)染C.感染13最常用的篩選轉(zhuǎn)化細菌是否含質(zhì)粒的方法是（A營養(yǎng)互補篩選B抗藥性篩選C免疫學(xué)方法14.a-互補篩選法屬于（A抗藥性標(biāo)志篩選C.標(biāo)志補救篩選DPCR篩選）B酶免檢測分析D原位雜交篩選D轉(zhuǎn)導(dǎo)E轉(zhuǎn)移）E分子雜交篩選E免疫學(xué)方法15F因子從一個細胞轉(zhuǎn)移至另一個細胞的基因轉(zhuǎn)移過程稱為（）A.轉(zhuǎn)化B.轉(zhuǎn)導(dǎo)C.轉(zhuǎn)染D.轉(zhuǎn)座E.接合16由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因移位或重排稱為（）A轉(zhuǎn)化B轉(zhuǎn)導(dǎo)C轉(zhuǎn)染D轉(zhuǎn)

7、座E接合17發(fā)生在同源序列間的重組稱為（）A.位點特異的重組B.非位點特異的重組C.基本重組D.隨機重組E.人工重組18在重組DNA技術(shù)中催化形成重組DNA分子的是DNA（）A.聚合酶B.解鏈酶C.連接酶D.拓?fù)涿窫.內(nèi)切酶19在重組DNA技術(shù)領(lǐng)域所說的分子克隆是指（）A.建立單克隆抗體B.建立多克隆抗體28.基因組代表一個細胞或生物體的（）A.部分遺傳信息B.整套遺傳信息C.可轉(zhuǎn)錄基因D.非轉(zhuǎn)錄基因E.可表達基因29.下列常用于原核表達體系的是（）A.酵母細胞B.昆蟲細胞C.哺乳類細胞D.真菌E.大腸桿菌30.構(gòu)建基因組DNA文庫時，首先需分離細胞的（）A.染色體DNAB.線粒體DNAC.總

8、mRNAD.tRNAE.rRNA31.構(gòu)建cDNA文庫時，首先需分離細胞的A.染色體DNAB.線粒體DNAC.總mRNAD.tRNAE.rRNAC.構(gòu)建重組DNA分子D.無性繁殖DNA20. 無性繁殖依賴DNA載體的最基本性質(zhì)是（A青霉素抗性B卡那霉素抗性C.自我復(fù)制能力D自我轉(zhuǎn)錄能力21. 在已知序列的情況下獲得目的A.化學(xué)合成法C.篩選cDNA22.重組DNAC.構(gòu)建重組DNA分子D.無性繁殖DNA22. 無性繁殖依賴DNA載體的最基本性質(zhì)是（A青霉素抗性B卡那霉素抗性C.自我復(fù)制能力D自我轉(zhuǎn)錄能力23. 在已知序列的情況下獲得目的A.化學(xué)合成法C.篩選cDNA22.重組DNADNA最常見

9、的是（B.篩選基因組文庫文庫D.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)領(lǐng)域常用的質(zhì)粒E.有性繁殖DNAE.自我表達能力）E.DNA合成儀合成A.細菌染色體DNA的一部分B.細菌染色體外的獨立遺傳單位C.病毒基因組DNA的一部分D.真核細胞染色體DNA的一部分E.真核細胞染色體外的獨立遺傳單位DNA是（）23.直接針對目的DNA進行篩選的方法是（A.青霉素抗藥性B.氨芐青霉素抗藥性24.“克隆”某一目的DNA的過程不包括（A.基因載體的選擇與構(gòu)建外源基因與載體的拼接重組DNA分子導(dǎo)入受體細胞篩選并無性繁殖含重組分子的受體細胞表達目的基因編碼的蛋白質(zhì)）C.分子雜交）D.分子篩E.電泳B.C.D.E.25.表達人類蛋白

10、質(zhì)的最理想的細胞體系是（B.原核表達體系D.昆蟲表達體系DNA是（）B.噬菌體D.腺病毒A.E.coli表達體系C.酵母表達體系26.不能用作克隆載體的A.質(zhì)粒DNAC.細菌基因組DNAE.哺乳類細胞表達體系27.關(guān)于重組體的敘述，下列哪項是錯誤的（A.包括外源性的目的基因C.重組體有獨立繁殖的能力E.目的基因和載體通過連接酶連接DNADNA）B.包括載體D.重組體要回到細胞水平表達E.逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA【X型題】1. 限制性內(nèi)切核酸酶作用特性是A.在對稱序列處切開DNAB. DNA兩鏈的切點常不在同一位點酶切后產(chǎn)生的DNA片段多半具有粘性互補末端C. DNA兩鏈的切點常在同一位點限制酶通常識別

11、46堿基對，有些識別8個或8個以上堿基對2. 一般來說限制性內(nèi)切核酸酶（）A.只識別一種核苷酸序列B其識別不受DNA來源的限制C.不同生物的DNA經(jīng)同一限制性內(nèi)切核酸酶切割后產(chǎn)生相同末端D.對雙鏈DNA和單鏈DNA一視同仁E.可識別多種不同的核苷酸序列3. 經(jīng)限制性內(nèi)切核酸酶切割后的DNA可產(chǎn)生以下哪些情況（）A.產(chǎn)生帶有5'磷酸基團的伸出股B.產(chǎn)生3'-0H的伸出股C.粘性末端D.鈍性末端E.以上均不對大腸桿菌質(zhì)粒經(jīng)ECoRI切割后，可與經(jīng)ECoRI切割后的目的DNA重組結(jié)合，為得到重組體，需經(jīng)（）A.加熱B.混合C.退火D.RNA連接酶催化E.DNA連接酶催化5有關(guān)載體和目

12、的基因連接方法的敘述，正確的是（）A平端切口可直接連接B.平端切口可采用“尾接法”C.載體與目的基因通過非共價鍵連接D利用人工連接器也可連接E.需要DNA連接酶參與6自然界基因轉(zhuǎn)移可能伴發(fā)基因重組的有（）A.接合作用B.轉(zhuǎn)化作用C.轉(zhuǎn)導(dǎo)作用D.轉(zhuǎn)座E.以上都不是7在分子克隆中，目的DNA可來自（）A.原核細胞染色體DNAB.真核細胞染色體DNAC.真核細胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNAD聚合酶鏈反應(yīng)E.人工合成的DNA8從基因組DNA文庫或A基因克隆CD聚合酶鏈反應(yīng)E.人工合成的DNA8從基因組DNA文庫或A基因克隆C9A重組DNA技術(shù)可用作克隆基因載體的細菌質(zhì)粒DNA病毒DNAC10將重組DN

13、A分子導(dǎo)入受體細菌的方法有（A.接合B轉(zhuǎn)座11下述操作可能用于DNAADNA的制備和降解C.核酸分子雜交cDNA文庫分離、擴增某一感興趣基因的過程就是（B分子克隆D.構(gòu)建基因組DNA文庫DNA有（）B.噬菌體DNAD酵母人工染色體E.構(gòu)建cDNA文庫E.真核細胞基因組DNAC.轉(zhuǎn)化克隆過程的是（B.不同來源）D.轉(zhuǎn)染）DNA的拼接D.細菌的生長和繁殖E感染ERNA的制備12關(guān)于質(zhì)粒DNA的敘述正確的是（）A.是基因組DNA的組成部分B.具有獨立復(fù)制功能C.可以賦予宿主細胞額外的生物學(xué)特性D.含有感興趣的目的DNAE.含有各種抗生素抗性基因13重組DNA時，外源基因又稱（）D.外源RNAD.外源

14、RNAE.重組DNAA.目的基因B.目的RNAC.目的DNA14作為載體的質(zhì)粒應(yīng)具備下列哪些特點（）A分子量相對小B.常用的質(zhì)粒載體有pBR322和pUC系列等C.用作基因工程載體的常是接合型質(zhì)粒D.在復(fù)制子以外的適當(dāng)位置，存在幾個單一的限制性內(nèi)切核酸酶位點E.具有插入失活的篩選標(biāo)記15. 載體必需具備下列哪些特點（）A.本身是一個復(fù)制單位，具有復(fù)制起點B.插入外源性DNA后并不影響載體本身的復(fù)制C.進入細胞后用本身的酶系進行復(fù)制D.易進入受體細胞E.易于鑒定和篩選16. DNA重組的步驟包括（）A.用PCR技術(shù)合成大量的重組DNAB用連接酶將外源性DNA與載體連接C.通過轉(zhuǎn)化將重組DNA引入

15、受體細胞D.培養(yǎng)細胞以擴增重組DNAE.篩選出含有重組體的克隆二、填空題1. 通過自動獲取或人為地供給外源，使細胞或培養(yǎng)的受體細胞獲得新的，這就是轉(zhuǎn)化作用。2. 由和介導(dǎo)的基因移位或重排，稱為轉(zhuǎn)座。3. 基因重組包括、和等類型。4. 依賴整合酶，在兩個DNA序列的特異位點間發(fā)生的整合稱。5. 發(fā)生在同源序列間的重組稱為，又稱。6. 一個完整的基因克隆過程應(yīng)包括：目的基因的獲取，的選擇與改造，的連接，重組DNA分子導(dǎo)入受體細胞，篩選出含感興趣基因的重組DNA轉(zhuǎn)化細胞。7. 限制性內(nèi)切核酸酶是一類識別的核酸酶。8. 科學(xué)家感興趣的外源基因又稱，其來源有幾種途徑：化學(xué)合成、酶促合成cDNA、制備的基

16、因組DNA及技術(shù)。9. 根據(jù)采用的克隆載體性質(zhì)不同，將重組DNA分子導(dǎo)入細菌的方法有、及感染。三、名詞解釋5.回文結(jié)構(gòu)6.Vector7. 目的基因8. restrictionendonuclease5.回文結(jié)構(gòu)6.Vector9. 目的基因10. restrictionendonuclease1. DNA克隆cDNA文庫(cDNAlibrary)2. 基因組DNA文庫(genomicDNAlibrary)Plasmid四、簡答題何謂DNA克??？試述DNA克隆的基本過程。1. 試述基因組文庫的定義和制備方法。2. 試述質(zhì)粒的特性及天然質(zhì)粒作為基因載體必須具備的條件。參考答案一、選擇題【A型題】

17、1.B2.C3.C4.A5.D6.C7.E8.C9.C10.E11.D12.A13.B14.C15.E16.D17.C18.C19.D20.C21.D22.B23.C24.E25.E26.C27.C28.B29.E30.A31.C【X型題】1.ABCE2.ABC3.ABCD4.BCE5.ABDE6.ABCD7.ABCDE8.ABC9.ABCD10.CDE8. ABCDE12.BC13.AC14.ABDE15.ABDE16.BCDE解析【A型題】如有幫助，歡迎下載支持！1B考察要點為回文結(jié)構(gòu)特點?；匚慕Y(jié)構(gòu)是指該DNA片段的堿基序列在其互補鏈上正讀、反讀都相同。6. C考察要點為質(zhì)粒的特點。常見錯

18、誤選D或E。質(zhì)粒是存在于細菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈DNA分子，其本身是含有復(fù)制功能的遺傳結(jié)構(gòu)，能在宿主細胞獨立自主地進行復(fù)制，又依賴細菌的繁殖而復(fù)制。理想的質(zhì)粒對同一限制性內(nèi)切核酸酶只有一個切口。質(zhì)粒往往帶有一個或一個以上的抗藥性基因，根據(jù)質(zhì)粒賦予細菌的表型，可識別質(zhì)粒的存在，是篩選轉(zhuǎn)化子細菌的根據(jù)，這是質(zhì)粒作為載體的特性。質(zhì)粒的分子小于入噬菌體，能容納的插入片斷也較小。如pBR322只能容納小于10kb的外源基因。而入噬菌體可插入20kb以上的DNA片段。7. E考察要點是基因工程操作的基本原理。常見錯誤選A，基因工程是一項較為復(fù)雜的技術(shù)，其操作基本過程可簡單概括為：（1）分-分離提純載體和

19、目的基因；（2）切-限制性核酸內(nèi)切酶的應(yīng)用（切割載體和目的基因）；（3）接-將載體和目的基因連接成重組體；（4）轉(zhuǎn)-把重組體導(dǎo)入宿主菌；（5）篩-重組體的篩選與鑒定。8. C考察要點為cDNA文庫的概念。常見錯誤選B或D。cDNA文庫的建立首先是從特定組織或細胞中提取總的mRNA，然后經(jīng)反轉(zhuǎn)錄作用合成與mRNA互補的DNA（complementaryDNA,cDNA），再復(fù)制成雙鏈cDNA片斷，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌，即獲得cDNA文庫。建立cDNA文庫所用的mRNA只來自某一特定組織或細胞，所以此文庫包含了一個生物組織或細胞所表達的各種mRNA信息。10. E重組DNA技術(shù)中常用的工具酶

20、為考察要點。常見錯誤為選B或D或C。在重組DNA技術(shù)中的許多工作都涉及到對DNA進行切割和重組，或?qū)NA進行修飾或合成。這些工作都是通過酶的作用來完成的。常用的一些基本工具酶：（1）限制性內(nèi)切核酸酶：它能識別雙鏈DNA內(nèi)部特異位點，并在準(zhǔn)確的位置上切割DNA，使較大的DNA分子成為一定大小的DNA片段；（2）DNA連接酶：將DNA片段與克隆載體共價連接構(gòu)建重組DNA分子；（3）反轉(zhuǎn)錄酶：用于以mRNA為模板合成cDNA，構(gòu)建cDNA文庫；（4）DNA-pol:禾U用其5't3'聚合活性及核酸外切酶活性，主要用于合成雙鏈cDNA的第二條鏈，填補3'末端，DNA序列分析及

21、切口平移標(biāo)記DNA探針等。11. D考察要點為目的基因及其來源。常見錯誤為選E或A。目的基因本質(zhì)是DNA,所以A,B,C不是，而mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與其互補的cDNA可作為目的基因，答案E只有基因組DNA可作為目的基因。B或D?；蚬こ讨袑⑼庠碊NA導(dǎo)入transformation）、轉(zhuǎn)染（transfection）及DNA導(dǎo)入受體菌，并使其獲得新的表型12. A考察要點是將外源DNA導(dǎo)入受體菌的方法。常見錯誤為選宿主菌的方法，根據(jù)重組DNA時所采用的載體性質(zhì)不同有轉(zhuǎn)化（感染（infection）等不同手段。轉(zhuǎn)化是指以質(zhì)粒作為載體，將外源的過程。感染是以入噬菌體和真核細胞病毒為載體的重組DN

22、A分子，在體外經(jīng)過包裝成為具有感染能力的病毒和噬菌體顆粒，感染適當(dāng)細胞，并在細胞內(nèi)擴增。由噬菌體和細胞病毒介導(dǎo)的遺傳信息轉(zhuǎn)移也稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）。轉(zhuǎn)染是由轉(zhuǎn)化和感染兩個詞構(gòu)成的新詞。指真核細胞主動攝取或被動導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。13. B考察要點為質(zhì)粒的特點。常見錯誤：選A或C。B是針對載體攜帶某種或某些標(biāo)志基因和目的基因而設(shè)計的篩選方法。其特點是直接測定基因或基因表型。如質(zhì)粒攜帶有某種抗藥性標(biāo)志基因（如ampr,tetr），轉(zhuǎn)化后只有含這種抗藥性基因的轉(zhuǎn)化子細菌才能在含有該抗菌素的培養(yǎng)板上幸存并形成菌落，這樣就可直接將含質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化菌與非轉(zhuǎn)化菌區(qū)分開，是篩選

23、含有質(zhì)粒轉(zhuǎn)化菌的最常用方法。標(biāo)志補救篩選，是禾用克隆的基因在宿主菌表達產(chǎn)物與宿主菌（營養(yǎng)突變株）的營養(yǎng)缺陷互補進行篩選。免疫學(xué)方法是禾用特異抗體與目的基因表達產(chǎn)物相互作用進行篩選。其特異性強，靈敏度高，適用于選擇不為宿主菌提供任何選擇標(biāo)志的基因。免疫學(xué)方法又分為免疫化學(xué)方法和酶免檢測分析。分子雜交篩選是禾用32p標(biāo)記的探針與轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上的轉(zhuǎn)化子DNA或克隆的DNA片斷進行分子雜交，直接選擇并鑒定目的基因。PCR（ploymerasechainreaction）技術(shù)及酶切鑒定也是篩選和鑒定目的基因的方法。14. C考察要點為重組篩選的方法及原理。常見錯誤：選不出答案。a互補是指質(zhì)粒pUC

24、18載體攜帶有細菌的LacZ基因，它編碼B半乳糖苷酶的一段由146個氨基酸殘基組成的a片段（酶的N端）。而突變型細菌可表達該酶的3片段（酶的C端）。單獨存在的a及3片段均無3-半乳糖苷酶的活性，只有突變型細菌與pUC18載體同時共表達兩個片段時，突變型細菌內(nèi)才有完整的3-半乳糖苷酶活性，使特異性作用物變?yōu)樗{色化合物，這就是所謂的a互補。就是禾用載體在細菌的表達與細菌的營養(yǎng)缺陷互補，所以這種篩選方法屬于標(biāo)志補救法。答案D是分子雜交篩選中的一種。如有幫助，歡迎下載支持！27C重組體為目的基因與載體用連接酶連接而成，是利用細胞內(nèi)各種酶系復(fù)制、表達，沒有獨立的繁殖能力?！綳型題】ABDE考察要點為外源

25、基因與載體的連接方式。常見錯誤：漏選A或D,多選G目的（外源）基因與載體連接方式：（1）粘性末端連接：同一限制酶切割位點連接；不同限制酶切位點（即配伍末端）連接。（2）平末端連接，限制酶切割DNA后產(chǎn)生的平端屬配伍末端，可彼此相互連接。（3）平端切口加尾連接，即在DNA片段末端加上同聚物序列，制造出粘性末端，經(jīng)退火作用完成連接，此方式屬粘性末端連接的一種特殊形式。（4）人工連接器連接：指在平端DNA片段或載體DNA末端接上人工合成的含有某些限制酶切位點的寡核苷酸片段，而后用相應(yīng)的限制酶切割產(chǎn)生粘性末端，在DNA1接酶的作用下形成共價結(jié)合的重組DNA分子。二、填空題1.DNA；遺傳表型2. 插入

26、序列；轉(zhuǎn)座子3. 位點特異的重組；同源重組；轉(zhuǎn)座重組4. 位點特異的重組5. 同源重組；基本重組6. 克隆基因載體；目的基因與載體7. DNA特異序列；內(nèi)切8目的基因；PCR9轉(zhuǎn)化；轉(zhuǎn)染三、名詞解釋1.應(yīng)用酶學(xué)的方法，在體外將目的基因與載體DNA結(jié)合成具有自我復(fù)制能力的DNA分子復(fù)制子，繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細胞、篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細胞，再進行擴增，提取獲得大量同一DNA分子的過程。DNA克隆又稱基因克隆或重組DNA以mRNA為模板，利用反轉(zhuǎn)錄酶合成與mRNA互補的DNA（complementaryDNA,cDNA）,再復(fù)制成雙鏈cDNA片段，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌，這些受體菌包含

27、了細胞所表達的基因信息，稱為cDNA文庫。2. 利用限制性內(nèi)切核酸酶將組織或細胞染色體DNA切割后，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌，這些受體菌包含了所有基因組DNA信息，稱基因組DNA文庫。（或存在于轉(zhuǎn)化細菌內(nèi)，由克隆載體所攜帶的所有基因組DNA片段的集合稱基因組DNA文庫）。3. Plasmid即質(zhì)粒，是存在于細菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈DNA分子。質(zhì)粒分子本身是含有復(fù)制功能的遺傳結(jié)構(gòu)，能在宿主細胞獨立自主地進行復(fù)制，并在細胞分裂時恒定地傳給子代細胞。質(zhì)粒帶有某些遺傳信息，所以會賦予宿主細胞一些遺傳性狀。因為質(zhì)粒DNA有自我復(fù)制功能及所攜帶的遺傳信息等特性，故可作為重組DNA操作的載體。4. 大部

28、分限制性內(nèi)切核酸酶為II類酶，識別DNA位點的核苷酸序列呈二元旋轉(zhuǎn)對稱，通常稱這種特殊的結(jié)構(gòu)順序為回文結(jié)構(gòu)。5. Vector即基因載體，或稱克隆載體，是在基因工程中為“攜帶”感興趣的外源DNA實現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子，具有自我復(fù)制和表達的功能。其中，為使插入的外源DNA序列可轉(zhuǎn)錄、進而翻譯成多肽鏈而特意設(shè)計的克隆載體又稱表達載體?？寺≥d體有質(zhì)粒DNA噬菌體DNA和病毒DNA它們經(jīng)適當(dāng)改造后仍具有自我復(fù)制能力，或兼有表達外源基因的能力。6. 應(yīng)用重組DNA技術(shù)有時是為分離、獲得某一感興趣的基因或DNA序列，或是為獲得感興趣基因的表達產(chǎn)物一一蛋白質(zhì)。這些感興趣的基因或DNA序列就是目的基因，又稱目的DNA7. Restrictionendonuclease即限制性核酸內(nèi)切酶，就是識別DNA的特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA的一類核