生物檢測(cè)技術(shù)

1、第九章 生物檢測(cè)技術(shù)采用生物體對(duì)被檢測(cè)物質(zhì)的特有反應(yīng)而鑒定被檢測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量和功效的方法。生物體主要是各種微生物和某些動(dòng)物。檢測(cè)范圍：生物效價(jià)和安全性實(shí)驗(yàn)一 生物檢測(cè)的主要內(nèi)容生物檢測(cè)常用標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)照法國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)樣品聯(lián)合國(guó)世界衛(wèi)生組織生物檢定委員會(huì)，丹麥哥本哈根血清所，倫敦國(guó)家醫(yī)研所國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（參考標(biāo)準(zhǔn)）本國(guó)制備，用國(guó)際標(biāo)樣校合，北京藥品與生物制品研究所實(shí)驗(yàn)室對(duì)照樣品本室制備，要與國(guó)家標(biāo)樣、國(guó)際標(biāo)樣校合1 生物效價(jià)測(cè)定效價(jià)：指某一物質(zhì)引起生物反應(yīng)的功效單位，可用理化方法檢測(cè)，也可用生物檢測(cè)方法測(cè)定。生物法：各類抗生素，維生素及氨基酸等生長(zhǎng)因子。一個(gè)青霉素效價(jià)單位：能在50mL肉湯培養(yǎng)基中完全抑制金色

2、葡萄球菌發(fā)育的最小青霉素劑量。一個(gè)鏈霉素效價(jià)單位：能在1mL肉湯培養(yǎng)基中完全抑制大腸桿菌發(fā)育的最小鏈霉素劑量。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)單位IU，對(duì)純的化學(xué)物質(zhì)，可用重量來表示，如1mg鏈霉素能抑制1000mL培養(yǎng)基中大腸桿菌的繁殖，則含有1000IU，1IU=1 g2 安全性試驗(yàn)（1）毒性試驗(yàn)：常用動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)LD50（2）局部刺激性試驗(yàn)將被檢藥物注射進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)，觀察在注射部位是否出現(xiàn)炎癥或產(chǎn)生過敏反應(yīng)等局部刺激現(xiàn)象。陽性不能臨床使用 陰性可供臨床使用（3）溶血實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物是否引起紅血球膜破裂而釋放出血紅蛋白（4）熱原試驗(yàn)檢測(cè)藥物中有沒有使動(dòng)物體溫升高的致熱性物質(zhì)存在一般用家兔試驗(yàn)（5）過敏試驗(yàn)檢測(cè)藥物中有無

3、引起過敏反應(yīng)的物質(zhì)存在的一種方法。過敏反應(yīng)致敏原一般豚鼠或雄性小白鼠試驗(yàn)（6）變異原試驗(yàn)檢測(cè)藥物或食物中有沒有引起生物產(chǎn)生變異的物質(zhì)（變異原）存在?？捎脛?dòng)物和微生物檢測(cè)。二 抗生素的生物檢測(cè)（生長(zhǎng)抑制劑生物效價(jià)檢測(cè)）有些可以用化學(xué)檢測(cè)或光學(xué)檢測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)，廣泛采用生物檢測(cè)法。利用抗生素對(duì)特定微生物的生長(zhǎng)起抑制作用而進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)?？捎糜谝阎股氐男r(jià)測(cè)定，也可用于檢出未知的抗生素。方法：稀釋法，擴(kuò)散法1 稀釋法將樣品和標(biāo)準(zhǔn)抗生素分別進(jìn)行不同稀釋度的稀釋，加入培養(yǎng)基中，用指定的適當(dāng)?shù)木杲臃N，培養(yǎng)后比較微生物的生長(zhǎng)情況，從而測(cè)定樣品的效價(jià)。固體平板，接入相同量指示菌，比較生長(zhǎng)菌落數(shù)；液體培養(yǎng)基

4、，接入相同量指示菌，比較OD值。還可測(cè)抗生素的最低抑菌濃度和半致死劑量LD502 擴(kuò)散法利用擴(kuò)散作用形成連續(xù)的濃度梯度，試驗(yàn)菌在最低抑菌濃度范圍內(nèi)生長(zhǎng)受阻，形成抑菌圈，從抑菌圈直徑測(cè)定抗生素效價(jià)。用標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，選擇在試驗(yàn)菌最適生長(zhǎng)條件下培養(yǎng)。（1）紙片平板法（紙碟法）（2）圓筒平板法（管碟法、杯碟法）應(yīng)用最廣泛的生物檢測(cè)法雙層平板標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算得到樣品效價(jià)（3）雙層試管法試管含試驗(yàn)菌及指示劑美藍(lán)（最終濃度1ppm）瓊脂培養(yǎng)基，垂直放置，加入標(biāo)準(zhǔn)液和樣品液，培養(yǎng)后測(cè)定藍(lán)色抑菌帶高度，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線可得樣品效價(jià)。（4）生物生長(zhǎng)圖譜法樣品液進(jìn)行紙層析，層析后風(fēng)干平鋪在含試驗(yàn)菌平板上，4 幾小時(shí)，取去

5、濾紙，37 1618h，得到生長(zhǎng)圖譜，可檢測(cè)樣品中的抗生素或抑菌物質(zhì)種類，并可得Rf 也可用薄層層析分離后測(cè)定三 生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)的生物檢測(cè)生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)：對(duì)生物生長(zhǎng)繁殖有促進(jìn)作用或不可欠缺的物質(zhì)，如維生素、氨基酸、激素等。一般以微生物為試驗(yàn)材料方法：1 生長(zhǎng)抑制物質(zhì)生物檢測(cè)方法均可用于生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)的檢測(cè) 全合成培養(yǎng)基（不含待測(cè)物 ） 結(jié)果通過長(zhǎng)菌直徑或長(zhǎng)菌高度而測(cè)定2 比濁法采用適宜菌株和限量全合成液體培養(yǎng)基加不同濃度待測(cè)樣品，37 ，1824h，測(cè)定OD，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照，查濃度3 滴定法在以乳酸菌為試驗(yàn)菌的場(chǎng)合，隨著菌生長(zhǎng)而生成乳酸，一定范圍內(nèi)生成乳酸的量與添加的生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)的量成正比。培養(yǎng)結(jié)束后，用0.05 mol/L或0.1 mol/L NAOH滴定，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照思考題生物檢測(cè)內(nèi)容主要有哪些？安全性檢測(cè)包