花藥和花粉培養(yǎng)

1、花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)學(xué)植物組織培養(yǎng)學(xué)第第5 5章章 花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng) 本章主要內(nèi)容：本章主要內(nèi)容：l花粉和花藥培養(yǎng)技術(shù)花粉和花藥培養(yǎng)技術(shù)l花粉和花藥培養(yǎng)應(yīng)用花粉和花藥培養(yǎng)應(yīng)用花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)l(1)掌握花藥培養(yǎng)和花粉培養(yǎng)的區(qū)別；掌握花藥培養(yǎng)和花粉培養(yǎng)的區(qū)別；l(2)了解花藥最佳接種時期；了解花藥最佳接種時期；l(3)掌握花藥培養(yǎng)的大致過程；掌握花藥培養(yǎng)的大致過程；l(4)掌握花粉發(fā)育的四種途徑；掌握花粉發(fā)育的四種途徑；l(5)掌握花粉培養(yǎng)的大致過程。掌握花粉培養(yǎng)的大致過程。 花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)本章教學(xué)目的與要求本章教學(xué)目的與要求第一節(jié)第一節(jié)

2、 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥培養(yǎng)花藥培養(yǎng)是是將花粉發(fā)育至一定階段的花藥接種到將花粉發(fā)育至一定階段的花藥接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而分化成植株的技術(shù)。組織進(jìn)而分化成植株的技術(shù)?；ㄋ幒突ǚ叟囵B(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)l花粉培養(yǎng)：花粉培養(yǎng)：是將花粉從花藥中分離出來是將花粉從花藥中分離出來, ,接種到接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而分化成植株的過程。組織進(jìn)而分化成植株的過程。油菜成熟花藥的結(jié)構(gòu)油菜成熟花藥的結(jié)構(gòu)花粉囊花粉囊花粉囊壁花粉囊壁成熟花粉粒成熟花粉?；ㄋ幜芽诨ㄋ幜?/p>

3、口第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)一、花藥和花粉的培養(yǎng)方法：一、花藥和花粉的培養(yǎng)方法：（一）花粉發(fā)育時期：（一）花粉發(fā)育時期：1、適宜時期、適宜時期：單核期：單核期,尤其是單核中、晚期尤其是單核中、晚期(單核靠邊期單核靠邊期)雄配子體的發(fā)育雄配子體的發(fā)育 營養(yǎng)細(xì)胞營養(yǎng)細(xì)胞生殖細(xì)胞生殖細(xì)胞精子精子第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù) 2、花粉發(fā)育時期的檢測：、花粉發(fā)育時期的檢測：外部形態(tài)觀察外部形態(tài)觀察：在水稻中，一般葉枕距為：在水稻中，一般葉枕距為5-5-1515cmcm，穎片淡黃綠色、雄蕊長度接近穎片長穎片淡黃

4、綠色、雄蕊長度接近穎片長度的度的1/21/2時，可能為單核靠邊期的花粉。時，可能為單核靠邊期的花粉。壓片染色法壓片染色法：是檢測花粉發(fā)育時期的簡便有：是檢測花粉發(fā)育時期的簡便有效方法，常用染色劑為效方法，常用染色劑為醋酸洋紅醋酸洋紅。第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)（二）培養(yǎng)過程（二）培養(yǎng)過程1、花藥培養(yǎng)過程：、花藥培養(yǎng)過程：1）預(yù)處理）預(yù)處理:低溫冷藏低溫冷藏是最是最常用的方法常用的方法2）表面消毒）表面消毒3）接種）接種4）培養(yǎng)形成花粉植株。）培養(yǎng)形成花粉植株。 花粉花粉-愈傷組織愈傷組織-苗苗 花粉花粉-胚狀體胚狀體-苗苗第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技

5、術(shù)選幼年樹花蕾選幼年樹花蕾水稻花藥培養(yǎng)過程：水稻花藥培養(yǎng)過程：旗葉鞘用旗葉鞘用7070酒精擦洗一遍酒精擦洗一遍剝?nèi)テ烊~鞘，取出稻穗剝?nèi)テ烊~鞘，取出稻穗10漂白粉漂白粉10 min無菌水洗無菌水洗3 3次次培養(yǎng)培養(yǎng)5 5天，花藥變褐，天，花藥變褐，2020天后花藥裂天后花藥裂開，長出淡黃色的花粉愈傷組織，開，長出淡黃色的花粉愈傷組織，先長芽，后長根，形成幼苗。先長芽，后長根，形成幼苗。用接種環(huán)接種用接種環(huán)接種到培養(yǎng)基上到培養(yǎng)基上左手持穗，右手左手持穗，右手用鑷子取花藥，用鑷子取花藥，放無菌培養(yǎng)皿中放無菌培養(yǎng)皿中第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥培養(yǎng)脫毒技術(shù)花藥培養(yǎng)脫毒技術(shù)l1

6、974年日本：花藥培養(yǎng)可以脫除草莓病毒；年日本：花藥培養(yǎng)可以脫除草莓病毒；l花藥采取時期花藥采取時期單核期：花蕾單核期：花蕾4-64-6mmmm，花藥花藥1 1mmmml花藥誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基花藥誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖蔗糖3030g+g+瓊脂瓊脂7 7g/Lg/Ll增殖分化培養(yǎng)基增殖分化培養(yǎng)基MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖蔗糖3030g+g+瓊脂瓊脂7 7g/Lg/Ll生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基1

7、/21/2MS+IBA0.2mg/L+MS+IBA0.2mg/L+活性炭活性炭3 3g/L+g/L+蔗糖蔗糖2020g+g+瓊脂瓊脂7 7g/Lg/L第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)草莓花藥愈傷組織草莓花藥愈傷組織,花藥植株花藥植株第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)2、花粉培養(yǎng)、花粉培養(yǎng)l花粉培養(yǎng)成苗途徑與花藥培養(yǎng)比較花粉培養(yǎng)成苗途徑與花藥培養(yǎng)比較: 相同點相同點：l胚狀體成苗途徑、愈傷組織再分化成苗途徑胚狀體成苗途徑、愈傷組織再分化成苗途徑 不同點不同點：l花粉培養(yǎng)：花粉培養(yǎng)： 需進(jìn)行花粉的分離需進(jìn)行花粉的分離 特殊的花粉誘導(dǎo)培養(yǎng)特殊的花粉誘導(dǎo)培養(yǎng)第一節(jié)第一

8、節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花粉培養(yǎng)過程花粉培養(yǎng)過程取花蕾（鏡檢）取花蕾（鏡檢）預(yù)培養(yǎng)數(shù)天預(yù)培養(yǎng)數(shù)天取花藥取花藥消毒消毒分離花粉分離花粉第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)接種接種培養(yǎng)培養(yǎng)愈傷組織發(fā)生愈傷組織發(fā)生二、培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)基本培養(yǎng)基本培養(yǎng)基基激素種類激素種類和濃度和濃度蔗糖濃度蔗糖濃度（一）基本培養(yǎng)基：（一）基本培養(yǎng)基：第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)lMSMS和和H H培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：適合雙子葉植物花藥培養(yǎng)；適合雙子葉植物花藥培養(yǎng)；lB5B5培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：適合豆科和十字花科花藥培養(yǎng)；適合

9、豆科和十字花科花藥培養(yǎng)；lN6N6培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：適合禾谷類作物的花藥培養(yǎng)。適合禾谷類作物的花藥培養(yǎng)。第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)u 細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素可促進(jìn)胚狀體形成；可促進(jìn)胚狀體形成； 生長素生長素可誘導(dǎo)愈傷組織形成?？烧T導(dǎo)愈傷組織形成。u 細(xì)胞分裂素與生長素比值高細(xì)胞分裂素與生長素比值高時可誘時可誘導(dǎo)愈傷組織分化苗導(dǎo)愈傷組織分化苗（二）激素種類和濃度（二）激素種類和濃度p較高較高濃度濃度蔗糖可誘導(dǎo)花粉形成蔗糖可誘導(dǎo)花粉形成愈傷組織愈傷組織；p較低較低 濃度濃度蔗糖可使愈傷組織分化成蔗糖可使愈傷組織分化成苗苗。第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)（三）

10、蔗糖濃度（三）蔗糖濃度三、單倍體植株染色體加倍的方法三、單倍體植株染色體加倍的方法第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)1、自然加倍：自然加倍：花粉細(xì)胞核有絲分裂或核融合，染色體可花粉細(xì)胞核有絲分裂或核融合，染色體可自然加倍，獲得純合二倍體。自然加倍，獲得純合二倍體。2、人工加倍人工加倍：用秋水仙素處理單倍體植物，可使染色體用秋水仙素處理單倍體植物，可使染色體加倍（溶液浸苗、處理愈傷組織和用含加倍（溶液浸苗、處理愈傷組織和用含0.4%0.4%秋水仙素秋水仙素的羊毛脂涂抹單倍體植株的頂芽、腋芽，可得到能結(jié)實的羊毛脂涂抹單倍體植株的頂芽、腋芽，可得到能結(jié)實的二倍體植株）的二倍體植株）3

11、、將單倍體植株誘導(dǎo)的、將單倍體植株誘導(dǎo)的愈傷組織反復(fù)繼代培養(yǎng)愈傷組織反復(fù)繼代培養(yǎng)，再分化，再分化可得到二倍體植株?？傻玫蕉扼w植株。第二節(jié)第二節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)的應(yīng)用花藥和花粉培養(yǎng)的應(yīng)用 -單倍體植株育種單倍體植株育種1 1、克服后代分離，縮短育種周期；、克服后代分離，縮短育種周期；2 2、有利于篩選隱性突變體，選擇效率高、有利于篩選隱性突變體，選擇效率高; ;3 3、有利于隱性基因控制性狀的選擇、有利于隱性基因控制性狀的選擇4 4、快速獲得自交系的超雄株、快速獲得自交系的超雄株花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)大大縮短育種周期大大縮短育種周期第二節(jié)第二節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)的應(yīng)用花藥和花粉培養(yǎng)的應(yīng)用l(1)花藥培養(yǎng)是器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)屬細(xì)胞培養(yǎng)?；ㄋ幣囵B(yǎng)是器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)屬細(xì)胞培養(yǎng)。l(2)花藥培養(yǎng)一般選擇花粉的單核期進(jìn)行接種?；ㄋ幣囵B(yǎng)一般選擇花粉的單核期進(jìn)行接種。l(3)花藥培養(yǎng)包括：選擇材料花藥培養(yǎng)包括：選擇材料-消毒消毒-接種培養(yǎng)接種培養(yǎng)-愈合組織愈合組織生成生成-分化出單倍體植株。分化出單倍體植株。l(4)花粉的發(fā)育途徑包括：營養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育、生殖細(xì)胞發(fā)花粉的發(fā)育途徑包括：營養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育、生殖細(xì)胞發(fā)育、營養(yǎng)和生殖細(xì)胞同時發(fā)育及花粉均等分裂