第一章 血液標本的采集與抗凝

1、第一章第一章 血液標本的采集與抗凝血液標本的采集與抗凝第一節(jié)第一節(jié) 概概 論論血液學主要用途：血液學主要用途： 1. 協(xié)助診斷及鑒別診斷協(xié)助診斷及鑒別診斷 2. 病情觀察和預后判斷病情觀察和預后判斷 3. 某些治療的監(jiān)護某些治療的監(jiān)護 4. 術前準備術前準備 為了手術安全，術前做血液學某些為了手術安全，術前做血液學某些項目檢查是必須的。項目檢查是必須的。 5. 協(xié)助傳染病和職業(yè)病的調(diào)查協(xié)助傳染病和職業(yè)病的調(diào)查一、血液生理概要一、血液生理概要1. 血液的組成血液的組成 血細胞（紅細胞、白細胞、血小板）血血細胞（紅細胞、白細胞、血小板）血漿組成漿組成 血清與血漿的概念和區(qū)別血清與血漿的概念和區(qū)別

2、血漿缺少某些凝血因子血漿缺少某些凝血因子 血細胞組成血細胞組成2. 血液主要的理化性質(zhì)血液主要的理化性質(zhì) （1）血量）血量 血漿量與血細胞量的總和血漿量與血細胞量的總和 成人約成人約45升，約占體重的升，約占體重的6%8% （2）顏色）顏色 紅色紅色, 血紅蛋白血紅蛋白 動脈血動脈血: 鮮紅色。鮮紅色。 靜脈血靜脈血: 暗紅色。暗紅色。 嚴重貧血患者的血嚴重貧血患者的血:紅色變淺。紅色變淺。 嚴重嚴重CO中毒或氰化物中毒中毒或氰化物中毒:櫻紅色櫻紅色 高脂膳食后血漿高脂膳食后血漿:呈乳白色呈乳白色 溶血溶血:呈不同程度的紅色。呈不同程度的紅色。（3）紅細胞在血漿中的懸浮穩(wěn)定）紅細胞在血漿中的懸

3、浮穩(wěn)定性性 均勻混懸狀態(tài)均勻混懸狀態(tài): 1.紅細胞膜唾液酸根紅細胞膜唾液酸根帶有負電荷，形成帶有負電荷，形成Zeta電位電位 2. 血漿成分、血漿粘血漿成分、血漿粘度及血流動力學等度及血流動力學等（4）粘滯性）粘滯性 取決于血細胞比容和血漿粘度取決于血細胞比容和血漿粘度 健康成人健康成人: 全血粘度為生理鹽水粘度的全血粘度為生理鹽水粘度的45倍倍 血漿粘度為生理鹽水粘度的血漿粘度為生理鹽水粘度的1.6倍左右倍左右 （5）比重和滲透濃度）比重和滲透濃度 全血比重全血比重:男性約為男性約為1.0551.063女性約為女性約為1.0511.060；與紅細胞的百分比有關與紅細胞的百分比有關 血漿的比重

4、約在血漿的比重約在1.0251.030之間，與蛋之間，與蛋白濃度有關。白濃度有關。 血漿滲量（滲透壓）：血漿滲量（滲透壓）： 290310mOsm/kgH2O。（6）pH 血液血液pH值為值為7.357.45（7）凝固性）凝固性 與凝血因子激活有關與凝血因子激活有關3. 血液的功能血液的功能 （1）運輸功能）運輸功能 氧氣和營養(yǎng)成分氧氣和營養(yǎng)成分 （2）協(xié)調(diào)功能）協(xié)調(diào)功能 （3）維護機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定）維護機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定 （4）防御功能）防御功能二、血液標本的采集二、血液標本的采集 1. 毛細血管采血法毛細血管采血法 采血部位采血部位： 左手中指或無名指指端內(nèi)側為左手中指或無名指指端內(nèi)側為宜，嬰幼

5、兒大趾及足底內(nèi)外側緣部采血，宜，嬰幼兒大趾及足底內(nèi)外側緣部采血，嚴重燒傷的患者選擇皮膚完整處采血。嚴重燒傷的患者選擇皮膚完整處采血。 采血器材采血器材：帶刃三棱針或一次性使用：帶刃三棱針或一次性使用“專專用采血針用采血針”為好為好 穿刺深度：穿刺深度：3mm 采血順序：血小板計數(shù)、紅細胞計數(shù)、血采血順序：血小板計數(shù)、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定、白細胞計數(shù)、血型鑒定。紅蛋白測定、白細胞計數(shù)、血型鑒定。如圖如圖2. 靜脈采血法靜脈采血法通常采用肘部靜脈通常采用肘部靜脈三、血液標本的抗凝三、血液標本的抗凝 抗凝：抗凝：用物理或化學的方法，除掉或抑制血液中用物理或化學的方法，除掉或抑制血液中某些凝血因子

6、以阻止血液凝固的方法某些凝血因子以阻止血液凝固的方法 抗凝劑：抗凝劑：能阻止血液凝固的化學試劑能阻止血液凝固的化學試劑常用化學抗凝劑：常用化學抗凝劑： 1. 枸櫞酸鈉（枸櫞酸鈉（trisodium citrate） 也稱檸檬酸鈉配成也稱檸檬酸鈉配成109mmol/L或或106mmol/L的溶的溶液。液。 抗凝原理：抗凝原理： 枸櫞酸鈉與血液中的鈣離子形成可溶性螯合物，枸櫞酸鈉與血液中的鈣離子形成可溶性螯合物，阻止血液凝固。阻止血液凝固。 Na3C6H5O7+Ca2+CaC6H5O7-+3Na+ 枸櫞酸鈉用于血栓與止血檢驗（枸櫞酸鈉用于血栓與止血檢驗（1:9 ）及紅細胞）及紅細胞沉降率（沉降率（

7、 1:4 ）等的測定，也多用于配制血液保）等的測定，也多用于配制血液保養(yǎng)液。養(yǎng)液。2. 乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTA）鹽）鹽 EDTA鹽有二鈉、二鉀和三鉀鹽，與血液中的鈣鹽有二鈉、二鉀和三鉀鹽，與血液中的鈣離子結合形成螯合物，從而阻止血液凝固。離子結合形成螯合物，從而阻止血液凝固。 Na2C10H12O8N2+Ca2+CaC10H12O8N2+2Na+ 對血細胞形態(tài)和血小板計數(shù)影響較小，適用于多對血細胞形態(tài)和血小板計數(shù)影響較小，適用于多項血液檢查，尤其是血小板計數(shù)。但其影響血小項血液檢查，尤其是血小板計數(shù)。但其影響血小板聚集和白細胞吞噬功能，故不適于血栓與止血板聚集和白細胞吞噬功能，故

8、不適于血栓與止血檢查及血小板功能檢查。檢查及血小板功能檢查。3. 草酸鈉草酸鈉 與血液中的鈣離子形成與血液中的鈣離子形成 草酸鈣沉淀阻止血草酸鈣沉淀阻止血液凝固。液凝固。 Na2C2O4+Ca2+CaC2O4+2Na+4. 雙草酸鹽抗凝劑雙草酸鹽抗凝劑 草酸鉀可使紅細胞草酸鉀可使紅細胞 ，草酸銨則可使紅細，草酸銨則可使紅細胞胞 ，按適當比例混合不影響紅細胞形態(tài)和，按適當比例混合不影響紅細胞形態(tài)和體積，可用于血細胞比容、血細胞計數(shù)、體積，可用于血細胞比容、血細胞計數(shù)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)等項目網(wǎng)織紅細胞計數(shù)等項目雙草酸鹽作用于RBC形態(tài)變化示意圖草酸鉀 草酸銨草酸銨l可使可使RBC縮小縮小 l可使可使

9、RBCRBC脹大脹大草酸鉀草酸鉀: :草酸銨草酸銨l RBC RBC形態(tài)、體積無變化形態(tài)、體積無變化 適用于測適用于測HctHct。5. 肝素肝素 肝素能阻止凝血酶形成肝素能阻止凝血酶形成 和抑制血小板聚集和抑制血小板聚集 肝素具有抗凝能力強，不影響血細胞體積，肝素具有抗凝能力強，不影響血細胞體積，不引起溶血不引起溶血 肝素會引起白細胞聚集，使血涂片染色產(chǎn)肝素會引起白細胞聚集，使血涂片染色產(chǎn)生藍色背景，不能用于白細胞計數(shù)和分類生藍色背景，不能用于白細胞計數(shù)和分類計數(shù)計數(shù) 四、血涂片的制備四、血涂片的制備 好的血涂片：厚薄適宜、頭體尾分明、好的血涂片：厚薄適宜、頭體尾分明、染色良好染色良好良好血

10、涂片良好血涂片尾尾體體頭頭1. 載玻片的清潔載玻片的清潔 新玻片常用濃度約新玻片常用濃度約1mol/L HCl浸泡浸泡24h后后用清水徹底沖洗，干燥后備用。用清水徹底沖洗，干燥后備用。 用過的載玻片可放入含適量肥皂或其它洗用過的載玻片可放入含適量肥皂或其它洗滌劑的清水中煮沸滌劑的清水中煮沸20min，趁熱將血膜刷，趁熱將血膜刷洗干凈，再用清水反復沖洗干燥備用。洗干凈，再用清水反復沖洗干燥備用。 使用載玻片時，切勿用手觸及玻片表面，以使用載玻片時，切勿用手觸及玻片表面，以保持玻片清潔、干燥、中性、無油膩保持玻片清潔、干燥、中性、無油膩 2. 血涂片的制備血涂片的制備 如圖如圖影響因素：影響因素：

11、 涂片的厚薄與血滴的大小、推片與載片之間的角涂片的厚薄與血滴的大小、推片與載片之間的角度、推片時的速度及血細胞比容有關。度、推片時的速度及血細胞比容有關。 血滴大、角度大、速度快則血膜越厚；反之則血滴大、角度大、速度快則血膜越厚；反之則血膜越薄。血膜分布不勻主要是推片邊緣不齊、血膜越薄。血膜分布不勻主要是推片邊緣不齊、用力不勻和載玻片不清潔所致用力不勻和載玻片不清潔所致 血細胞比容高于正常時，血液粘度較高，保持血細胞比容高于正常時，血液粘度較高，保持較小的角度，可得滿意結果；相反，血細胞比容較小的角度，可得滿意結果；相反，血細胞比容低于正常時，血液較稀，則用較大角度。低于正常時，血液較稀，則用

12、較大角度。 五、血細胞常用的染色方法五、血細胞常用的染色方法 （一）瑞氏染色法（一）瑞氏染色法 1. 瑞氏染粉瑞氏染粉由酸性染料伊紅和堿性染料美藍組成的復由酸性染料伊紅和堿性染料美藍組成的復合染料。伊紅為鈉鹽，有色部分為陰離子。合染料。伊紅為鈉鹽，有色部分為陰離子。美藍為氯鹽，有色部分為陽離子。美藍和美藍為氯鹽，有色部分為陽離子。美藍和伊紅的水溶液混合后，產(chǎn)生一種不溶于水伊紅的水溶液混合后，產(chǎn)生一種不溶于水的伊紅化美藍（的伊紅化美藍（ME）中性沉淀，即瑞氏染）中性沉淀，即瑞氏染料。料。 將適量的將適量的ME溶解于甲醇中，即成為瑞氏染液。溶解于甲醇中，即成為瑞氏染液。 甲醇的作用：甲醇的作用：

13、一方面使一方面使ME溶解，并解離為溶解，并解離為M+和和E-。這兩種有。這兩種有色離子可以選擇性地與細胞內(nèi)不同成分結合而著色離子可以選擇性地與細胞內(nèi)不同成分結合而著色。色。 另一方面因其具有強大的脫水作用，可將細胞固另一方面因其具有強大的脫水作用，可將細胞固定為一定形態(tài)。當細胞發(fā)生凝固時，蛋白質(zhì)被沉定為一定形態(tài)。當細胞發(fā)生凝固時，蛋白質(zhì)被沉淀為顆粒狀或者網(wǎng)狀結構，增加細胞結構的表面淀為顆粒狀或者網(wǎng)狀結構，增加細胞結構的表面積，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。積，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。2. 細胞的著色原理細胞的著色原理 既有既有化學的親合作用化學的親合作用，又有，又有物理的吸附

14、作用物理的吸附作用。 不同的細胞由于其所含化學成分不一樣，化學性不同的細胞由于其所含化學成分不一樣，化學性質(zhì)各不相同，對染料的親合力也不一樣。質(zhì)各不相同，對染料的親合力也不一樣。 細胞中的堿性物質(zhì)與酸性染料伊紅結合染成紅細胞中的堿性物質(zhì)與酸性染料伊紅結合染成紅色，稱為色，稱為嗜酸性物質(zhì)嗜酸性物質(zhì)，如血紅蛋白及嗜酸性粒細，如血紅蛋白及嗜酸性粒細胞胞質(zhì)中的嗜酸性顆粒等為堿性物質(zhì)，與酸性伊胞胞質(zhì)中的嗜酸性顆粒等為堿性物質(zhì)，與酸性伊紅結合而染成紅色。紅結合而染成紅色。細胞中的酸性物質(zhì)可與染液中的堿性染料美藍細胞中的酸性物質(zhì)可與染液中的堿性染料美藍結合而染成藍色，該物質(zhì)又稱結合而染成藍色，該物質(zhì)又稱嗜堿

15、性物質(zhì)嗜堿性物質(zhì)，如淋，如淋巴細胞胞質(zhì)及嗜堿性粒細胞胞質(zhì)內(nèi)的顆粒為酸性巴細胞胞質(zhì)及嗜堿性粒細胞胞質(zhì)內(nèi)的顆粒為酸性物質(zhì)，可與堿性染料美藍結合染成藍色。物質(zhì)，可與堿性染料美藍結合染成藍色。 中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅美藍均可結合，染中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅美藍均可結合，染淡紫紅色為中性物質(zhì)。淡紫紅色為中性物質(zhì)。 原始紅細胞和早幼紅細胞的胞質(zhì)和細胞核的核原始紅細胞和早幼紅細胞的胞質(zhì)和細胞核的核仁中含有較多的酸性物質(zhì)，與美藍親合力強，故仁中含有較多的酸性物質(zhì)，與美藍親合力強，故染成較濃厚的藍色；隨著細胞的發(fā)育，中幼紅細染成較濃厚的藍色；隨著細胞的發(fā)育，中幼紅細胞階段既含有酸性物質(zhì)，又含有堿性物質(zhì)，既能胞

16、階段既含有酸性物質(zhì)，又含有堿性物質(zhì)，既能與堿性染料美藍結合，又能與酸性染料伊紅結合，與堿性染料美藍結合，又能與酸性染料伊紅結合，故染成紅藍色或灰紅色；當紅細胞完全成熟，酸故染成紅藍色或灰紅色；當紅細胞完全成熟，酸性物質(zhì)徹底消失后，只與伊紅結合，則染成粉紅性物質(zhì)徹底消失后，只與伊紅結合，則染成粉紅色。色。3. pH對細胞染色的影響對細胞染色的影響 細胞著色對氫離子濃度十分敏感，蛋白質(zhì)細胞著色對氫離子濃度十分敏感，蛋白質(zhì)帶正電荷即在酸性環(huán)境中正電荷增多，易帶正電荷即在酸性環(huán)境中正電荷增多，易與酸性伊紅結合，染色偏紅；相反，當環(huán)與酸性伊紅結合，染色偏紅；相反，當環(huán)境的境的pHPi即在堿性環(huán)境中負電荷

17、增多，即在堿性環(huán)境中負電荷增多，則易與美藍結合染色偏藍。則易與美藍結合染色偏藍。 使用清潔中性的玻片，優(yōu)質(zhì)的甲醇配制染使用清潔中性的玻片，優(yōu)質(zhì)的甲醇配制染液以及常用緩沖液（液以及常用緩沖液（pH6.46.8）來調(diào)節(jié)）來調(diào)節(jié)染色時的染色時的pH值值4. 瑞氏染液的質(zhì)量評價瑞氏染液的質(zhì)量評價 除用血液片實際染色評價外，采用吸光度比值除用血液片實際染色評價外，采用吸光度比值（RA）作為瑞氏染液的質(zhì)量評價指標）作為瑞氏染液的質(zhì)量評價指標,瑞氏染液瑞氏染液的成熟指數(shù)以的成熟指數(shù)以RA（A650nm/A525nm）=1.30.1為宜。為宜。 新配制的瑞氏染液往往偏堿，染色效果較差，需新配制的瑞氏染液往往偏

18、堿，染色效果較差，需在室溫或在室溫或37下存放一定時間，待染液下存放一定時間，待染液“成熟成熟”。染液成熟的過程主要是染液成熟的過程主要是美藍逐漸轉變?yōu)樘烨嗝浪{逐漸轉變?yōu)樘烨郆的的過程過程。在密封條件下，貯存時間愈久，轉化的天。在密封條件下，貯存時間愈久，轉化的天青青B愈多，染色效果愈好。愈多，染色效果愈好。5. 染色結果分析染色結果分析 在正常情況下，在正常情況下，血膜外觀呈淡紫紅色血膜外觀呈淡紫紅色。顯微鏡。顯微鏡下，紅細胞呈下，紅細胞呈粉紅色粉紅色。白細胞胞質(zhì)中顆粒清楚，。白細胞胞質(zhì)中顆粒清楚，并顯示出各種細胞特有的色彩，細胞核染紫紅并顯示出各種細胞特有的色彩，細胞核染紫紅色，核染色質(zhì)結構清楚。色，核染色質(zhì)結構清楚。 染色偏酸則紅細胞和嗜酸