重點高中生物選修一實驗必會總結(jié)

1、重點高中生物選修一實驗必會 總結(jié)作者:日期:高中生物選修一實驗必會總結(jié)專題一傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用課題一 果酒和果醋的制作1、發(fā)酵：通過微生物技術的培養(yǎng)來生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過程。2、有氧發(fā)酵：醋酸發(fā)酵 谷氨酸發(fā)酵 無氧發(fā)酵：酒精發(fā)酵 孚L酸發(fā)酵3、 酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖 (主要)分裂生殖 孢子生殖4、 在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖。C6H2Q+ 6O2T 6CO+ 6H2O5、 在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發(fā)酵。C6H12OBT 2C2H5O出6CO6、 20 C左右最適宜酵母菌繁殖酒精發(fā)酵時一般將溫度控制在18 C -25 C7、 在葡萄酒自然

2、發(fā)酵的過程中 ，起主要作用的是附著在葡萄皮外表的野生型酵母菌在發(fā)酵過程中，隨著酒精濃度的提高，紅葡萄皮的色素也進入發(fā)酵液，使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色在缺氧 呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應這一環(huán)境而受到制約。&醋酸菌是單細胞細菌(原核生物)，代謝類型是異養(yǎng)需氧型，生殖方式為二分裂9、當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿?。C 2H5O卅Qt CH3COOIH H2O10、控制發(fā)酵條件的作用醋酸菌對氧氣的含量特別敏感，當進行深層發(fā)酵時，即使只是短時間中斷通入氧氣，也會引起醋酸菌死亡。醋酸菌最

3、適生長溫度為3035 C,控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時間縮短，又減少雜菌污染的時機。有兩條途徑生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物的氧 化。11、實驗流程：挑選葡萄t沖洗t榨汁t酒精發(fā)酵t果酒(t醋酸發(fā)酵t果醋)12、酒精檢驗：果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重鉻酸鉀來檢驗。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反響呈現(xiàn)灰綠色。 先在試管中參加發(fā)酵液 2m L,再滴入物質(zhì)的量濃度為 3mol/L的fSQ3滴， 振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3滴，振蕩試管，觀察顏色13、充氣口是在醋酸發(fā)酵時連接充氣泵進行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時用來排出二氧化碳的；出料口是用來取樣的。 排氣口要通過一個長而彎曲的

4、膠管與瓶身相連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。開口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用該裝置制酒時，應該關閉充氣口；制醋時，應該充氣口連接氣泵，輸入氧氣。(1) 你認為應該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？應該先沖洗，然后再除去枝梗，以防止除去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的時機。(2) 你認為應該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？女口：要先沖洗葡萄，再除去枝梗；榨汁機、發(fā)酵裝置要清洗干凈，并進行酒精消毒；每次排氣 時只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。(3) 制葡萄酒時，為什么要將溫度控制在 1825 C?制葡萄醋時，為什么要將溫度控制在 3035C?溫度是酵母菌生長和發(fā)酵的重要條件。20

5、 C左右最適合酵母菌的繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長溫度為3035 C,因此要將溫度控制在 3035 C。課題二腐乳的制作1、多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉 是一種絲狀真菌。代謝類型是異養(yǎng)需氧型。生殖方式是孢子生殖。營腐生生活。2、原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將 脂肪水解為甘油和脂肪酸。3、實驗流程：讓豆腐上長出毛霉t加鹽腌制t加鹵湯裝瓶t密封腌制4、釀造腐乳的主要生產(chǎn)工序是將豆腐進行前期發(fā)酵和后期發(fā)酵。前期發(fā)酵的主要作用：1.創(chuàng)造條件讓毛霉生長。

6、2.使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。 后期發(fā)酵主要是酶與微生物協(xié)同參與生化反響的過程。通過各種輔料與酶的緩解作用，生成腐 乳的香氣。5、將豆腐切成3cmX3cmX1cm的假設干塊。所用豆腐的含水量為 70%左右，水分過多那么腐乳不易成形。*水分測定方法如下： 精確稱取經(jīng)研缽研磨成糊狀的樣品510g精確到0.02mg，置于重量的蒸發(fā)皿中，均勻攤平后，在 100105 C電熱枯燥箱內(nèi)枯燥 4h，取出后置于枯燥器內(nèi)冷卻至室溫后 稱重，然后再烘 30min，直至所稱重量不變?yōu)橹?。樣品水分含? 計算公式如下：烘干前容器和樣品質(zhì)量-烘干后容器和樣品質(zhì)量烘干前樣品質(zhì)量毛霉的生長：條件：將豆腐塊平放在籠屜

7、內(nèi)，將籠屜中的控制在1518C，并保持一定的溫度。來源：1.來自空氣中的毛霉孢子，2.直接接種優(yōu)良毛霉菌種時間：5天加鹽腌制：將長滿毛霉的豆腐塊分層整齊地擺放在瓶中，同時逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增加 鹽量，接近瓶口外表的鹽要鋪厚一些。加鹽腌制的時間約為8天左右。用鹽腌制時，注意控制鹽的用量：鹽的濃度過低，缺乏以抑制微生物的生長，可能導致豆腐腐敗 變質(zhì)；鹽的濃度過高會影響腐乳的口味食鹽的作用：1.抑制微生物的生長，防止腐敗變質(zhì)2.析出水分，是豆腐變硬，在后期制作過程中不易酥爛3.調(diào)味作用，給腐乳以必要的咸味4.浸提毛酶菌絲上的蛋白酶。配制鹵湯：鹵湯直接關系到腐乳的色、香、味。鹵湯是由酒及各種香

8、辛料配制而成的。鹵湯中酒 的含量一般控制在 12眩右。酒的作用：1.防止雜菌污染以防腐 2.與有機酸結(jié)合形成酯，賦予腐乳風味3.酒精含量的上下與腐乳后期發(fā)酵時間的長短有很大關系，酒精含量越高，對蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延 長；酒精含量過低，蛋白酶的活性高，加快蛋白質(zhì)的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成塊。香辛料的作用：1.調(diào)味作用2.殺菌防腐作用3.參與并促進發(fā)酵過程防止雜菌污染：用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。裝瓶時，操作要迅速小 心。整齊地擺放好豆腐、參加鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時，最好將瓶口通過酒精燈的火 焰，防止瓶口被污染。疑難解答1利用所學的生物學

9、知識，解釋豆腐長白毛是怎么一回事？豆腐生長的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴格地說是直立菌絲，在豆腐中還有匍匐菌絲。2為什么要撒許多鹽，將長毛的豆腐腌起來？鹽能防止雜菌污染，防止豆腐腐敗。3我們平常吃的豆腐，哪種適合用來做腐乳？含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量高的豆腐制作腐乳，不易成形。4 吃腐乳時，你會發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮。這層“皮是怎樣形成的呢？它對人 體有害嗎？它的作用是什么？“皮是前期發(fā)酵時在豆腐外表上生長的菌絲匍匐菌絲，對人體無害。它能形成腐乳的“體，使腐乳成形。課題三制作泡菜-制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代謝類型是異養(yǎng)厭氧 型。在無氧條件下，降糖分解為乳酸酶分裂方式是

10、二分裂。反響式為：C6H12O62C3H6O3能量含抗生素牛奶不能生產(chǎn)酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于生產(chǎn)酸奶。亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水，在食品生產(chǎn)中用作食品添加劑。膳食中的亞硝酸鹽一般不會危害人體健康，國家規(guī)定肉制品中不超過30mg/kg，醬腌菜中不超過20mg/kg，嬰兒奶粉中不超過2mg/kg。亞硝酸鹽被吸收后隨尿液排出體外，但在適宜pH、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。*測磺紅酸亞 硝 酸 鹽 含 量般在腌制io天后亞硝酸鹽含量開始降低，故在io天之后食用最好定亞硝酸鹽含量的原理是在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯酸發(fā)生重

11、氮化反響后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰色染料，與濃度的標準顯色液目測比擬，估算泡菜中亞硝 鹽含量。發(fā)酵時間d專題二微生物的培養(yǎng)與應用課題一微生物的實驗室培養(yǎng)培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，是進行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)根底。液體培養(yǎng)基按照 物理性質(zhì) 可分為液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基 和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中參加凝固劑 瓊脂是從紅藻中提取的一種多糖，在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生 物在固體培養(yǎng)基外表生長，可以形成肉眼可見的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。培養(yǎng)基應用于工業(yè)或生活生產(chǎn)，固體培養(yǎng)基 應用于微生物的別離和鑒定，

12、半固體培養(yǎng)基 那么常用于觀察微生物的運動及菌種保藏等。按照成分培養(yǎng)基可分為 人工合成培養(yǎng)基 和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基 是用成分的化學物質(zhì)配制 而成，其中成分的種類比例明確，常用于微生物的別離鑒定。天然培養(yǎng)基 是用化學成分不明的天然物質(zhì)配制而成，常用于實際工業(yè)生產(chǎn)。按照培養(yǎng)基的 用途，可將培養(yǎng)基分為 選擇培養(yǎng)基 和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基 是指在培養(yǎng)基中參加 某種化學物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進所需要的微生物的生長。鑒別培養(yǎng)基 是根據(jù)微生物的特點，在培養(yǎng)基中參加某種指示齊域化學藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。培養(yǎng)基的化學成分包括 水、無機鹽、碳源、氮源、生長因子等。碳源：能為微生

13、物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CQ、NaHCO等無機碳源；糖類、石油、花生粉餅等有機碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如Nb、NH、NQ-、NH4+ 無機氮源蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨有機氮源等。只有固氮微生物才能利用 N2。培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對 PH特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng) 孚L酸桿菌時需要在 培養(yǎng)基中添加 維生素，培養(yǎng)霉菌時須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細菌是需要將pH調(diào)至中性或微 堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物 是那么需要提供 無氧的條件無菌技術獲得純潔培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，要注意以下幾個方面：

14、對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。 將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌。 為防止周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。 實驗操作時應防止已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？ 答：無菌技術還能有效防止操作者自身被微生物感染。消毒與滅菌的區(qū)別消毒指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體外表或內(nèi)部一局部對人體有害的微生物不包括芽孢和孢子。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法對于一些不耐高溫的液體還有 化學藥 劑如酒精、氯氣、石炭酸等消毒、紫外線消毒。滅菌那么是指使用強烈

15、的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法： 接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法； 玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱； 培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。 外表滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。比擬項理化因素的作用強度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和局部生活狀態(tài)的微生物不能火菌強烈全部微生物臺匕 冃匕制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基(1 )方法步驟：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(2) 倒平板操作的步驟： 將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿

16、裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。 右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。 用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿翻開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約1020mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。 等待平板冷卻凝固，大約需 510min。然后，將平板倒過來放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在 上。倒平板操作的討論1培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到 50C左右時，才能用來倒平板。你用什么方法來估計培養(yǎng)基的溫度？ 提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進 行倒平板了。2為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3平板冷凝后，為什

17、么要將平板倒置？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基外表的濕度也比擬高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基外表的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微 生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微 生物。純化大腸桿菌(1 )微生物接種的方法最常用的是 平板劃線法 和稀釋涂布平板法。(2) 平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基外表連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散 到培養(yǎng)基的外表。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以別離到由一個細胞繁殖而

18、來的肉眼可見的子細胞群體，這就是菌落。(3) 稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的外表，進行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作 兩步。(4) 用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而 能在培養(yǎng)基外表形成單個的菌落，以便于純化菌種。(5 )平板劃線法操作步驟：將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)，并翻開棉塞。將試管口通過火焰。將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。 將試管通過火焰，并塞上棉塞。左手將皿蓋翻開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋

19、上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)皿。灼燒接種環(huán)，待其冷卻后， 從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。平板劃線操作的討論1. 為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼 燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前 灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種 直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便 得到菌落。劃線

20、結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，防止細菌污染環(huán)境和感染操 作者。2. 在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3. 在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細 菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。(6 )涂布平板操作的步驟：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基外表。將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻810s。用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基外表。涂布平板

21、操作的討論涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？提示：應從操作的各個細節(jié)保證無菌例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要適宜、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。菌種的保存(1) 對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。 臨時保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在適宜的溫度下培養(yǎng)。 當菌落長成后，將試管放入4 C的冰箱中保藏。以后每 36個月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。 缺點：這種方法保存的時間不長，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。(2) 對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方

22、法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混 勻后，放在一20C的冷凍箱中保存。疑難解答(1) 生物的營養(yǎng)營養(yǎng)是指生物攝取、利用營養(yǎng)物質(zhì)的過程。營養(yǎng)物質(zhì)是指維持機體生命活動，保證發(fā)育、生殖 所需的外源物質(zhì)。人及動物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。 植物的營養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。微生物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機鹽、碳源、氮源及特殊營養(yǎng)物質(zhì)五類。(2) 確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12天，無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否那么需要重新制備。課題二 土壤中分解尿素的細菌的別離與計數(shù)尿

23、素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當土壤中的細菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為他們能合成脲酶尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的篩選菌株(1) 實驗室中微生物的篩選應用的原理人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH 等),同時抑制或阻止其他微生物生長。(2) 選擇性培養(yǎng)基在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。(3 )配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點參加某種物質(zhì)以到達選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不參加有機物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不參加氮元

24、素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；參加高 濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。統(tǒng)計菌落數(shù)目(1 )測定微生物數(shù)量的常用方法有 稀釋涂布平板法 和顯微鏡直接計數(shù)。(2)稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目的原理當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基外表生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活細菌。為了保證結(jié)果準確，一般設置35個平板，選擇菌落數(shù)在 30300的平板進行計數(shù)，并 取平均值。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際 數(shù)目低，因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。采用此方法的考前須知：1一般選取菌落數(shù)在 30300之間的平板進行計數(shù) 2.為

25、了防止菌落蔓延，影 響計數(shù)，可在培養(yǎng)基中參加 TTC 3.本法僅限于形成菌落的微生物設置對照設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。對照實驗是指除了被測試的條件以外，其他條件都相同的實驗，其作用是比照試驗組，排除任何其他可 能原因的干擾，證明確實是所測試的條件引起相應的結(jié)果。實驗設計實驗設計包括實驗方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實施步驟以及時間安排等的綜 合考慮和安排。(1)土壤取樣：同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物，數(shù)量最大，種類最多。在富含有機質(zhì)的土 壤表層，有更多的微生物生長。從富含有機物、潮濕、pH- 7的土壤中取樣。鏟去表層土，在

26、距地表約38cm的土壤層取樣。(2 )樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。在實際操作中，通常選用一 定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30300之間、適于計數(shù)的平板。測定土壤中細菌的數(shù)量，一般選用104 105 106測定放線菌的數(shù)量，一般選用103 104 105測定真菌的數(shù)量，一般選用102 103 104(3)微生物的培養(yǎng)與觀察不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細菌3037C 12天放線菌2528 C 57天 霉菌2528 C 34天每隔24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足而導致一樓菌落

27、的數(shù)目。一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、唯獨及培養(yǎng)時間)，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。形狀、大小、隆起程度、顏色疑難解答(1)如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值每克樣品中的菌落數(shù) =(C/V) *M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml), M代表稀釋倍數(shù)課題三 分解纖維素的微生物的別離纖維素，一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維素與纖維素酶(1 )棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈

28、等也富含纖維素。(2)纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即Ci酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖， 為微生物的生長提供營養(yǎng)。纖維素分解菌的篩選(1) 篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過顏色反響直接對微生物進行篩選。(2) 剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復合物，但并不和水解后的纖 維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反響。當我們在含有纖維素的培養(yǎng)基中參加剛果紅時，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅-纖維素的復合物就無法形

29、成， 培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖 維素分解菌。別離分解纖維素的微生物的實驗流程土壤取樣T選擇培養(yǎng)(此步是否需要，應根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定)T梯度稀釋T將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上T挑選產(chǎn)生透明圈的菌落(1 )土壤采集 選擇富含纖維素的環(huán)境。(2) 剛果紅染色法別離纖維素分解菌的步驟倒平板操作、制備菌懸液、涂布平板(3) 剛果紅染色法種類一種是先培養(yǎng)微生物，再參加剛果紅進行顏色反響，另一種是在倒平板時就參加剛果紅。課題延伸對分解纖維素的微生物進行了初步的篩選后，只是別離純化的第一步，為確定得到的是纖維素分解菌，還需

30、要進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵 和固體發(fā)酵 兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進行定量的測定。疑難解答(1) 為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？由于生物與環(huán)境的相互依存關系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。(2) 將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應該埋進土壤多深？將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，實際上是人工設置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應將紙埋于深約 10cm左右腐殖土壤中。(3) 兩種剛果紅染色法的比擬方法一是傳統(tǒng)的方法，缺

31、點是操作繁瑣，參加剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反響根本上是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點是操作簡便，不存在菌落混雜問 題，缺點是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn) 假陽性反響。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因為培養(yǎng)基中纖維素占主要地 位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點是：有些微生物具有降解色素的 能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分。(4) 為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應這種營養(yǎng)條件的微生物得

32、到迅速繁殖，而那些不適應這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮的作用。專題三植物的組織培養(yǎng)技術課題一菊花的組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)的根本過程細胞分化：在生物個體發(fā)育過程中，細胞在形態(tài)、結(jié)構和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程。離體的植物組織或細胞，在培養(yǎng)了一段時間以后，會通過細胞分裂，形成愈傷組織，愈傷組織的細 胞排列疏松而無規(guī)那么，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞。由高度分化的植物組織或細 胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細胞的脫分化，或者叫做去分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進 行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做再分化。再分化形成的試管苗，移栽到地 里，可以發(fā)育成

33、完整的植物體。植物細胞工程具有某種生物全套遺傳信息的任何一個活細胞，都具有發(fā)育成完整個體的能力，即每個生物細胞都 具有全能性。但在生物體的生長發(fā)育過程中并不表現(xiàn)出來，這是因為在特定的時間和空間條件下， 通過基因的選擇性表達，構成不同組織和器官。植物組織培養(yǎng)技術的應用有：實現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖；培育脫毒作物；制作人工種子；培育作物 新品種以及細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等。細胞分化是一種持久性的變化，它有什么生理意義？使多細胞生物體中細胞結(jié)構和功能趨向?qū)ｉT化，有利于提高各種生理功能的效率。 比擬根尖分生組織和愈傷組織的異同組織類型細胞來源細胞形態(tài)細胞結(jié)構細胞排列細胞去向根尖 分生組織受精卵正方形無液泡緊

34、密分化成多種 細胞組織愈傷組織高度分化細胞無定形高度液泡化疏松再分化成新個體相同點都通過有絲分裂進行細胞增殖影響植物組織培養(yǎng)的條件材料：不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差異很大。植物材料的選擇直接關系到試驗的成敗。植物 的種類、材料的年齡和保存時間的長短等都會影響實驗結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開花植物的 莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。一般來說，容易進行無性繁殖的植物容易進行組織培養(yǎng)。選取生長旺 盛嫩枝進行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導脫分化和再分化。營養(yǎng)：離體的植物組織和細胞，對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對特殊，需要配制適宜的培養(yǎng)基。常用的培養(yǎng)基是 MS培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、

35、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co,有機物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。激素：植物激素中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素。在生長素 存在的情況下，細胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強趨勢。在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細胞分裂素等植物 激素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果先生長素，后細胞分裂素有利于分裂但不分化先細胞分裂素，細胞既分裂也分化后生長素同時使用分化頻率提高+環(huán)境條件：PH溫度、光等環(huán)境條件。生長素/細胞分裂素比值與結(jié)果比值高時促根分化，抑芽形成比值低時促芽分化，抑根形成比值適中促進愈傷組織生長不同的

36、植物對各種條件的要求往往不同。進行菊花 的組織培養(yǎng)，一般將 pH控制在5.8左右，溫度控制在1822C,并且每日用日光燈照射 12h.4、操作流程配制MS固體培養(yǎng)基：配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成的濃縮液培養(yǎng)基母液。使用時根據(jù)母液的濃縮倍數(shù)，計算用量，并加蒸餾水稀釋。配制培養(yǎng)基：應參加的物質(zhì)有瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有機物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到1000毫升。在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比擬容易。滅菌：采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。 MS培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？與肉湯培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基有哪些特點？大量元素和微量元素提供植物

37、細胞所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，維持細胞滲透壓；甘氨酸、維 生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。 微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基那么需提供大量無機營養(yǎng)。外植體的消毒 外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。選取菊花莖段時，要取生長旺盛的嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體外表的水分，放入體積分數(shù)為70%的酒精中搖動23次，持續(xù)67s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗。取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體外表水分，放入質(zhì)量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液中12min。取

38、出后，在無菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。注意：對外植體進行外表消毒時，就要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植物的耐受能力。接種：接種過程中插入外植體時形態(tài)學上端朝上，每個錐形瓶接種78個外植體。外植體接種與細菌接種相似，操作步驟相同，而且都要求無菌操作。培養(yǎng)：應該放在無菌箱中進行，并定期進行消毒，保持適宜的溫度1822 C和光照12h移栽：栽前應先翻開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后 將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時間，進行壯苗。最后進行露天栽培。栽培外植體在培養(yǎng)過程中可能會被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹底；接種中被雜菌 污染

39、；錐形瓶密封性差等。專題二月季的花藥培養(yǎng)被子植物的花粉發(fā)育被子植物的雄蕊通常包含 花絲、花藥兩局部?；ㄋ帪槟覡罱Y(jié)構，內(nèi)部含有許多花粉。花粉是由 花粉母細胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細胞。被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷 小孢子四分體時期、單核期和雙核期等階段。在小孢子四分體時期，4個單倍體細胞連在一起，進入單核期時，四分體的4個單倍體細胞彼此別離，形成 4個具有單細胞核的花粉粒。這時的細胞含濃厚的原生質(zhì)，核位于細胞的中央單核居中期。隨著細胞不斷長大，細胞核由中央移向細胞一側(cè)單核靠邊期，并分裂成1個生殖細胞核和1個花粉管細胞核，進而形成兩個細 胞，一個是生殖細胞，一個是營養(yǎng)細胞。生殖

40、細胞將在分裂一次，形成兩個精子。注意：成熟的花粉粒有兩類，一類是二核花粉粒，其花粉粒中只含花粉管細胞核和生殖細胞核， 二核花粉粒的精子是在花粉管中形成的；另一類是三核花粉粒，花粉在成熟前，生殖細胞就進行一 次有絲分裂，形成兩個精子，此花粉粒中含有兩個精子核和一個花粉管核營養(yǎng)核花粉發(fā)育過 程中的四分體和動物細胞減數(shù)分裂的四分體不同。花粉發(fā)育過程中的四分體是花粉母細胞經(jīng)減數(shù)分 裂形成的4個連在一起的單倍體細胞；而動物細胞減數(shù)分裂過程中的四分體是聯(lián)會配對后的一對同 源染色體，由于含有四條染色單體而稱為四分體。同一生殖細胞形成的兩個精子，其基因組成完 全相同。產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑 通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花

41、粉植株 即單倍體植株一般有兩種途徑，一種是 花粉通過胚狀體階段發(fā)育為植物，另一種是花粉在誘導培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導分化 成植株。這兩種途徑之間并沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類 及其濃度配比。注意：無論哪種產(chǎn)生方式，都要 先誘導生芽，再誘導生根 胚狀體：植物體細胞組織培養(yǎng)過程中， 誘導產(chǎn)生的形態(tài)與受精卵發(fā)育成的胚非常類似的結(jié)構，其發(fā)育也與受精卵發(fā)育成的胚類似，有胚芽、胚根、胚軸等完整結(jié)構，就像一粒種子，又稱為細胞胚。影響花藥培養(yǎng)的因素 誘導花粉能否成功及誘導成功率的上下，受多種因素影響，其中材料的選擇與培養(yǎng)基的組成是主要的影響因素親本的生理狀況：花粉早期是的花藥比后期的

42、更容易產(chǎn)生花粉植株，選擇月季的初花期。適宜的花粉發(fā)育時期：一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側(cè)的時期，花藥培養(yǎng)成功率最高花蕾：選擇完全未開放的花蕾親本植株的生長條件、材料的低溫預處理 以及接種密度等對誘導成功率都有一定影響材料的選?。哼x擇花藥時，一般要通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。確定花粉發(fā)育時期的最常用的方法是 醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用焙花青-鉻磯法，這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色材料的消毒接種和培養(yǎng)：滅菌后的花蕾，要在無菌條件下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花藥時，要盡量不損傷花藥否那么接種后容易從受傷部位長生愈傷

43、組織，同時還要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成，通常每瓶接種花藥 710個,培養(yǎng)溫度控制在25 C左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照 一般經(jīng)過2030天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花 藥開裂，長出愈傷組織或形成胚狀體。將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。如果花藥開裂釋放出胚狀體，那么一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快 將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否那么這些植株將很難分開。還需要對培養(yǎng)出來的植株做進一步的鑒定和篩選。植物組織培養(yǎng)技術與花藥培養(yǎng)技術的相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無菌技術及接種操作等根本相 同。兩者的不同之

44、處在于：花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時期適宜的花蕾；花藥裂開后釋 放出的愈傷組織或胚狀體也要及時更換培養(yǎng)基；花藥培養(yǎng)對培養(yǎng)基配方的要求更為嚴格。這些都使 花藥培養(yǎng)的難度大為增加。專題五DNA和蛋白質(zhì)技術課題一DNA的粗提取與鑒定提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？DNA在不同濃度NaCI溶液中溶解度不同； DNA不溶于酒精。DNA在不同濃度NaCI溶液中溶解度有何特點？要使 DNA溶解，需要使用什么濃度？要使DNA析出, 又需要使用什么濃度？在0.14mol/L時溶解度最?。惠^高濃度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析 出。在溶解細胞中的 DNA寸，人們通常選用2mol/LNa

45、CI溶液；將DNA分子析出 的方法是向溶有 DNA的 NaCI溶液中緩慢注入蒸餾水，以稀釋 NaCI溶液。酒 精是一種常用有機溶劑，但DNA卻不能溶于酒精特別是 95%冷卻酒精，但細胞中蛋白質(zhì)可溶于酒精。從理論上分析，預冷的乙醇溶液具有以下優(yōu)點。一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子運動，易于形成沉淀析出；三是低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。采用DNA不溶于酒精的原理，可以到達什么目的？將DNA和蛋白質(zhì)進一步別離。提取DNA還可以利用DNA寸酶、高溫和洗滌劑的耐受性原理。禾U用該原理時，應選用怎樣的酶和 怎樣的溫度值？蛋白酶，因為酶具有專一性，蛋白酶只水解蛋白質(zhì)而不會對

46、DNA產(chǎn)生影響。溫度值為 6080C,因為該溫度值蛋白質(zhì)變性沉淀，而DNA不會變性。補充：DNA的變性是指DNA分子在高溫下解螺旋，其溫度在80C以上，如在PCR技術中DNA變性溫度在95 C。洗滌劑在提取DNA中有何作用？洗滌劑將細胞膜上的蛋白質(zhì)，從而瓦解細胞膜。當鑒定提取出的物質(zhì)是否是 DNA寸，需要使用什么指示劑進行鑒定？在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺呈現(xiàn)藍色。原理總結(jié)：通過利用不同濃度NaCI溶液溶解或析出 DNA可以從細胞中提取和提純 DNA再利用酒精進一步將 DNA與蛋白質(zhì)別離開來，到達提純的目的；最后利用二苯胺試劑鑒定提取的物質(zhì)是 否是DNA實驗材料的選取不同生物的組織中 DNA

47、含量不同。在選取材料時，應本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原那么。本實驗用雞血細胞做實驗材料有兩個原因。一是因為雞血細胞核的DNA含量豐富，材料易得；二是雞血細胞極易吸水脹破，而用動物肝臟細胞作實驗材料常常需要勻漿和離心，對設備要求較高，操作繁瑣，歷時較長。雞血細胞破碎以后釋放出的 DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取過程中為了減少DNA的損失，最好使用塑料的燒杯和試管盛放雞血細胞液。破碎細胞，獲取含 DNA的濾液假設選用雞血和洋蔥作實驗材料，那么怎樣獲取含DNA的濾液？在雞血細胞液中參加一定量蒸餾水并用玻棒攪拌，過濾后收集濾液；切碎洋蔥，參加一定量洗 滌劑和食鹽，攪拌研磨，過濾后收集

48、濾液。為什么參加蒸餾水能使雞血細胞破裂？答：蒸餾水對于雞血細胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進入血細胞內(nèi)，使血細胞脹裂，再加 上攪拌的機械作用，就加速了雞血細胞的破裂 細胞膜和核膜的破裂，從而釋放出DNA。在以上實驗中，參加蒸餾水、洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？過濾時應中選用濾紙、尼龍布血細胞在蒸餾水中大量吸水而張裂；洗滌劑瓦解細胞膜；食鹽溶解DNA物質(zhì)；選用尼龍布進行過濾。在處理植物組織時需要進行研磨，其目的是什么？研磨不充分產(chǎn)生什么結(jié)果？破碎細胞壁，使核物質(zhì)容易溶解在 NaCI溶液中；研磨不充分會使 DNA的提取量減少，影響實驗結(jié)果， 導致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍色等。具體

49、做法。10mL雞血+ 20mL蒸餾水宀同方向攪拌宀3層尼龍布過濾宀濾液 去除濾液中的雜質(zhì) 為什么反復地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？用高鹽濃度的溶液溶解 DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復溶解與析出DNA，就能夠除去與 DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。最初獲得的DNA濾液含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)，需要進一步提純DNA方案一的原理是DNA在不同濃度NaCI溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì)， 不分解DNA方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同。方案二與方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，

50、從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA別離。析出與鑒定在濾液中仍然含有一些雜質(zhì)，怎樣除去這些雜質(zhì)呢？得到的DNA呈何顏色？23分鐘，析出的白色絲狀物就是 DNA DNA呈白5mLNaC I溶液t甲中放入混合均勻t沸水浴5min濾液與等體積的冷卻酒精混合均勻，靜置 色。怎樣鑒定析出的白色絲狀物就是DNA呢？具體做法。試管2支，編號甲乙t各加等量 少量白色絲狀物，使之溶解t各加4mL二苯胺,t觀察顏色變化實驗操作制備雞血細胞液加檸檬酸鈉，靜置或離心破碎細胞，釋放 DNA加蒸餾水，同一方向快速通方向攪拌過濾，除去細胞壁、細胞膜等。溶

51、解核內(nèi)DNA 參加NaCI至2mol/L，同一方向緩慢攪拌DNA析出 加蒸餾水至O.14mol/L，過濾，在溶解到 2moI/L溶液中除去細胞質(zhì)中的大局部物質(zhì)。DNA初步純化 與等體積95%冷卻酒精混合，析出白色絲狀物Jt除去核蛋白、RNA多糖等。DNA鑒定 二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍色考前須知：在雞血中參加檸檬酸鈉防止凝固； 雞血靜置或離心以提高細胞懸液濃度； 使用塑料燒杯; 使用尼龍布過濾；玻棒沿同一方向攪拌； 玻棒攪拌要緩慢細胞破裂快速攪拌 ；玻棒不要碰到燒杯 壁；二苯胺試劑要現(xiàn)用現(xiàn)配等。專題六植物有效成分的提取課題一植物芳香油的提取天然香料的來源：植物、動物不同植物的根、莖、葉、花、果實、

52、種子都可以提取芳香油。芳香油的提取方法：蒸餾、壓榨、萃取等。芳香油的性質(zhì)：揮發(fā)性強，成分復雜，以萜類化合物及其衍生物為主。水蒸氣蒸餾法：原理：水蒸汽可將揮發(fā)性較強的芳香油攜帶出來形成油水混合物，冷卻后水油分層。 方法：水中蒸餾：原料放在沸水中加熱蒸餾。水上蒸餾：原料隔放在沸水上加熱蒸餾。水汽蒸餾：利用外來高溫水蒸氣加熱蒸餾。缺乏：有些原料不適宜于水中蒸餾，如柑橘、檸檬等易焦糊，有效成分容易水解。通常用壓榨法通過機械壓縮力將液相物從液固兩相混合物中別離出來的一種簡單操作萃取法：原理：芳香油易溶于有機溶劑，溶劑揮發(fā)后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。方法：原料浸泡在溶劑中T得到浸泡液T有機溶劑揮

53、發(fā)T芳香油。缺乏：有機溶劑中的雜質(zhì)影響芳香油的品質(zhì)蒸餾裝置包括：鐵架臺兩個、酒精燈、石棉網(wǎng)、蒸餾瓶、橡膠塞、蒸餾頭、溫度計、直型冷凝管、 接液管、錐形瓶，以及連接進水口和出水口的橡皮管。所有儀器必須事先枯燥，保證無水。整套蒸餾裝置可分為左、中、右三局部， 其中左邊的局部通過加熱進行蒸 餾，中部將蒸餾物冷凝，右邊的部 分用來接收。安裝儀器一般都按照 自下而上、從左到右的順序。拆卸 儀器的順序與安裝時相反。具體安 裝順序和方法如下。(1)固定熱 源酒精燈。(2) 固定蒸餾瓶，使其離熱源的 距離如教科書中圖 6-2所示，并且 保持蒸餾瓶軸心與鐵架臺的水平面垂直。(3) 安裝蒸餾頭，使蒸餾頭的橫 截面

54、與鐵架臺平行。(4) 連接冷凝管。保證上端出水口向上，通過橡皮管與水池相連；下端進水口向下，通過橡皮管與 水龍頭相連。(5) 連接接液管(或稱尾接管)。(6) 將接收瓶瓶口對準尾接管的出口。常壓蒸餾一般用錐形瓶而不用燒杯作接受器，接收瓶應在實 驗前稱重，并做好記錄。(7) 將溫度計固定在蒸餾頭上，使溫度計水銀球的上限與蒸餾頭側(cè)管的下限處在同一水平線上。 蒸餾裝置安裝完畢后，可以在蒸餾瓶中加幾粒沸石，防止 液體過度沸騰。翻開水龍頭，緩緩通入冷水，然后開始加 熱。加熱時可以觀察到， 蒸餾瓶中的液體逐漸沸騰，蒸氣逐漸上升，溫度計讀數(shù)也略有上升。當蒸氣的頂端到達溫 度計水銀球部位時，溫度計讀數(shù)急劇上升

55、。在整個蒸餾過 程中，應保證溫度計的水銀球上常有因冷凝作用而形成的 液滴?？刂普麴s的時間和速度， 通常以每秒12滴為宜。分液漏斗的使用方法如下。(1 )首先把活塞擦干，為活塞均勻涂上一層潤滑脂，注意切勿將潤滑脂涂得太厚或使?jié)櫥M入活 塞孔中，以免污染萃取液。(2)塞好活塞后，把活塞旋轉(zhuǎn)幾圈，使?jié)櫥植季鶆?。并用水檢查分液漏斗的頂塞與活塞處是否 滲漏，確認不漏水后再使用。(3 )將分液漏斗放置在大小適宜的、并已固定在鐵架臺上的鐵圈中，關好活塞。將待別離的液體從 上部開口處倒入漏斗中，塞緊頂塞，注意頂塞不能涂潤滑脂。(4) 取下分液漏斗，用右手手掌頂住漏斗頂塞并握住漏斗頸，左手握住漏斗活塞處，大拇指壓緊活 塞，將分液漏斗略傾斜，前后振蕩(開始振蕩時要慢)。5振蕩后，使漏斗口仍保持原傾斜狀態(tài)，左手仍握在漏斗活塞處，下部管口指向無人處，用拇指 和食指旋開活塞，使其