沙門氏菌血清學(xué)鑒定

1、竭誠(chéng)為您提供優(yōu)質(zhì)文檔 /雙擊可除第 1 頁(yè)共 13 頁(yè)沙門氏菌血清學(xué)鑒定篇一：沙門氏菌生化鑒定沙門氏菌生化試驗(yàn)判定步驟三糖鐵瓊脂原理分析：本培養(yǎng)基適合于腸桿菌科的鑒定。 用于觀察細(xì)菌對(duì)糖的利用和硫化氫（變黑）的產(chǎn)生。該培養(yǎng) 基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為 10:10:110:10:1，只能利用葡萄糖的細(xì) 菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的 少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物 質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來(lái)又變紅，底部由于是在厭 氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的 細(xì)菌（e.colie.coli） ，則產(chǎn)生大量的酸，使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。

2、如培養(yǎng)基接種后產(chǎn)生黑色沉淀，是因?yàn)槟承┘?xì)菌能分解含硫 氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng)，生成 黑色的硫化亞鐵沉淀。底層產(chǎn)酸：是因?yàn)榧?xì)菌分解糖類物質(zhì) 使酚紅退色變黃。斜面產(chǎn)堿，低層產(chǎn)酸：是細(xì)菌分解葡萄糖（不能分解乳糖和蔗糖）, ,由于量較少進(jìn)而分解蛋白胨而產(chǎn)堿變紅。因?yàn)榈讓邮菂捬醐h(huán)境，葡萄糖分解慢，24小時(shí)培養(yǎng)后還沒(méi)分解蛋白胨產(chǎn)堿；而斜面是需氧環(huán)境分解較快，一般8小時(shí)左右就把葡萄糖分解完（此時(shí)斜面也是酸性），但繼而分解蛋白胨 產(chǎn)堿，斜面又轉(zhuǎn)為堿性。2-2-志賀氏菌：都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生 h2sh2s。4 4-大腸桿菌：能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解

3、乳糖，不產(chǎn)生 h2sh2s。3-3-沙門氏菌：能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多數(shù)產(chǎn)生 h2sh2s，多數(shù)產(chǎn)氣。賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)1 1、 試驗(yàn)管及對(duì)照管均要加一層約10mm10mm 厚的滅菌石蠟或礦物油以覆蓋表面，此可使培養(yǎng)基中的溶解氧通過(guò)細(xì)菌消耗掉，并控制培養(yǎng)基的 phph。2 2、陽(yáng)性試驗(yàn)管培養(yǎng)初期（1010 12h12h）因發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸變黃，繼續(xù)培養(yǎng)由于氨基酸脫羧產(chǎn)生胺類而使培養(yǎng)基由酸變堿，故又由黃變?yōu)樽仙ｊ幮栽囼?yàn)管則始終呈黃色。氨基酸脫羧酶試驗(yàn)（1 1）原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生氨基酸脫羧酶使氨基酸脫羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，可用指示劑指示出來(lái)。（2 2）方法：將待檢

4、菌分別接種于 1 1 支氨基酸（賴氨酸，鳥氨酸或精氨酸）脫羧酶第 2 頁(yè)共 13 頁(yè)試驗(yàn)管和 1 1 支氨基酸脫羧酶對(duì)照管（無(wú)氨基酸），各覆蓋至 少 0.5cm0.5cm 高度的無(wú)菌石蠟油，3535C孵育 1 14d4d,觀察結(jié)果。（3 3） 結(jié)果：若為溴甲酚紫指示劑，則試驗(yàn)管紫色為陽(yáng)性，黃色為 陰性，對(duì)照管應(yīng)為黃色。（4 4）應(yīng)用：主要用于某些細(xì)菌種間 的鑒別，如賴氨酸用于產(chǎn)氣腸桿菌 （陽(yáng)性）與陰溝腸桿菌（陰 性）；鳥氨酸用于陰溝腸桿菌（陽(yáng)性）和克雷伯菌（陰性）；精氨酸用于陰溝腸桿菌（陽(yáng)性）和產(chǎn)氣腸桿菌（陰性）等。精氨酸雙水解酶試驗(yàn)（1 1）原理：精氨酸經(jīng)兩次水解后，生 成鳥氨酸、氨及二氧化

5、碳。鳥氨酸又在脫羧酶的作用下生成 腐胺。氨及腐胺均為堿性物質(zhì)，故可使培養(yǎng)基變堿，用指示 劑指示出來(lái)。（2 2）方法：將待檢菌接種于試驗(yàn)培養(yǎng)上，置 3535C孵箱孵育 14d14d，觀察結(jié)果。（3 3）結(jié)果：溴甲酚紫指示劑呈紫 色為陽(yáng)性，酚紅指示劑呈紅色為陽(yáng)性。黃色為陰性。（4 4）應(yīng)用：主要用于腸桿菌科及假單胞菌屬的鑒定。非發(fā)酵菌：是一大群不發(fā)酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厭氧、無(wú)芽孢的革蘭陰性桿菌。表 2 2進(jìn)行判定。反應(yīng) 3 3:補(bǔ)做 onpgonpg。onpgonpg 為陰性，同時(shí)賴氨酸脫羧酶為陽(yáng)性；賴氨酸脫羧酶為陰性時(shí)為甲型副傷寒沙門氏菌。必要時(shí)按表 4 4 進(jìn)行沙門氏菌生活群

6、的鑒別篇二：沙門氏菌屬診斷血清說(shuō)明書第 3 頁(yè)共 13 頁(yè) 沙門氏菌屬診斷血清學(xué)試驗(yàn)操作程序1.1. 目的制定沙門氏菌屬診斷血清使用程序，指導(dǎo)對(duì)沙門氏菌屬進(jìn)行血清學(xué)分型。2.2. 原理用沙門氏菌屬的代表菌株制成滅活菌抗原分別或混合免疫家兔所得的血清，經(jīng)吸收出去非特異性凝集素后制成， 通過(guò)凝集試驗(yàn)原理供沙門氏菌屬常見菌型定型。3.3. 試劑及實(shí)驗(yàn)設(shè)備3.13.1 沙門氏菌屬診斷血清：寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的規(guī)格為 1111 種的沙門氏菌屬診斷血清3.23.2 試劑保存：2 28 8 c c 避光保存，防止凍結(jié)，在有效期內(nèi)使用。3.33.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備：玻片、吸樣槍、接種環(huán)、水浴箱、玻璃管、血

7、平板、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、電熱高溫接種滅菌器。4.4. 程序步驟4.14.1 將診斷血清于冰箱取出后平衡至室溫。4.24.2 選擇經(jīng)初步生化檢測(cè)符合沙門菌生物特性的疑似菌落。4.34.3 菌群分析將經(jīng) 1824h1824h 血平板上純培養(yǎng)的待檢菌， 先用 o o 多價(jià) AFAF第 4 頁(yè)共 13 頁(yè)第 5 頁(yè)共 13 頁(yè)群血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，如陽(yáng)性，提示待檢菌可能屬于A AF F 群范圍內(nèi)，因 97%97%以上的沙門菌都包括在 AF6AF6 個(gè) o o 群之內(nèi)，如 果不凝再使用其他o o 抗血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，如與其中一種抗 血清凝集，待檢菌即屬于相應(yīng)的菌群。若與多價(jià)o o 抗血清不凝集，有如下 3 3 種

8、可能：含有 ViVi 抗原；AFoAFo 群之外的 沙門菌；沙門氏菌屬以外的細(xì)菌?？砂聪率龇椒ㄟM(jìn)一步檢 測(cè)，將純菌落用無(wú)菌生理鹽水洗下，制成濃菌液，再分成2 2份。1 1 份不經(jīng)處理，為活菌液，另 1 1 份放 100100 c c 水浴中 30min30min， 為加熱菌液。取活菌與 ViVi 抗血清，取加熱菌與 ViVi 抗血清凝 集，加熱菌與 ViVi 抗血清、AAF F多價(jià) o o 抗血清分別進(jìn)行玻片凝 集試驗(yàn)。根據(jù)結(jié)果作如下分析：活菌與V Vi i抗血清凝集，加熱菌與 ViVi 抗血清凝集者，可能屬于 c c 群或 D D 群菌，用。7 7 和 o9o9 抗血清定群；活菌與 ViVi 抗血清不凝，可能屬于 A AFoFo 群之外的沙門菌或其他菌屬細(xì)菌，需進(jìn)行生化試驗(yàn)定屬，若符合沙門氏菌屬細(xì) 菌特征，可送 cDcDc c鑒定；加熱菌與 ViVi 抗血清凝集，而與 AFAF 多價(jià) o o 抗血清不凝集者，可報(bào)告為陰性。4