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文檔簡介

1、Capillary Gel Electrophoresis毛細管凝膠電泳nCITPnCZEnCIEF nCGE nCECCapillary Gel Electrophoresisn根據(jù)帶電組分的大小分離n毛細管的表面電荷少n分離介質(zhì) 交聯(lián)聚丙烯酰胺 線性聚丙烯酰胺其它可更換的水溶性聚合物n適用于淌度相近而大小不同的組分DNAProteins-SDS complexOgston ModelRepatation ModelCH2=CHC=ONHCH2NHCH2=CHC=OCH2=CHCONH2丙烯酰胺量(a)甲叉雙丙烯酰胺(b)PA凝膠的濃度T和CT單體和交聯(lián)劑的百分濃度C交聯(lián)劑的量a 丙烯酰胺量

2、（g）b甲叉雙丙烯酰胺的量（g）m緩沖溶液的體積（ml）%100%100babCmbaT聚丙烯酰胺凝膠毛細管柱的制備方法聚丙烯酰胺凝膠毛細管柱的制備方法檢測窗口制備檢測窗口制備內(nèi)壁修飾內(nèi)壁修飾 120C熱空氣吹，室溫氨氣沖洗2h，后503甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷（3methacryloxypropyl-trimethoxysilane)充滿一晝夜后，用甲醇和水沖洗緩沖溶液制備緩沖溶液制備 1.1g Tris和 0.01g EDTA溶于100 ml 7M尿素溶液，用NaH2PO4調(diào)至pH 8.6單體溶液制備單體溶液制備 29g 丙烯酰胺和1g N甲叉雙丙烯酰胺溶解在100ml 緩沖溶液中催化

3、劑制備催化劑制備 0.2g 過硫酸銨溶于2ml 緩沖溶液中凝膠溶液制備凝膠溶液制備 10ml 單體溶液加入到30ml緩沖溶液中，甲4ul 催化劑溶液，2.5 ul 四甲基乙二胺（TEMED）預(yù)聚合45分鐘1.1.灌注聚合灌注聚合 上述凝膠溶液注入毛細管到無氣泡，將兩端浸入緩沖溶液中聚合數(shù)小時。親水高分子聚合物無膠篩分體系Mobility of dsDNA and the choice of gel concentration凝膠的濃度ssDNAConcentration of HPMC on the separation of dsDNA ladderA-0.1%， B-0.3%， C-0.7%電場強度ssDNA 高效分離塔板數(shù)達3千萬！EB and dsDNAssDNASanger 鏈中止法擴增測序HV supplyCapillaryGlass slideDetectionwindowITO thermostatPCR vialFractureChip PCR online with chip CEDenaturing of protein before SDS-C-PAGEDenature condition: 1% SDS, 2% beta-mercaptoethanol 30min at 90C.SDS CGE of prote

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