菌種保藏和使用技術

1、菌種傳代與保藏的意義 菌種從事微生物學及生命科學研究的基本材料，在醫(yī)學領域中，診斷制品的制備，菌苗的生產、微生物致病性研究，藥物的抑菌試驗及藥品微生物檢驗等都有一套完整的菌種。 微生物具有生命活力，在傳代過程中易發(fā)生變異甚至死亡，因此菌種傳代與保藏是一項重要的基礎工作。2標準菌株：由國內或國際菌種保藏機構保藏的，遺傳學特性得到確認和保證并可追溯的菌株。標準儲備菌株：由標準菌株經一次傳代得到的培養(yǎng)物。商業(yè)派生菌株：由供應商提供的所有特性與標準菌株等效的菌株。代：將活的微生物接種到新鮮培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，并希望獲取新的微生物培養(yǎng)物。這種操作方式，新培養(yǎng)物對接種培養(yǎng)物而言就稱為一代。工作菌株：由標準儲

2、備菌株經傳代得到的培養(yǎng)物。3菌種泛指從自然界獲取的各種微生物的不同的種。醫(yī)學領域研究菌種主要考慮其致病機理工業(yè)生產研究菌種主要考慮其發(fā)酵機理藥品微生物檢驗主要考慮其標準性 4標準菌種是指由國家授權機構制備的具有穩(wěn)定的生物學特性并用妥善方法保藏的菌種。我國的標準菌種統(tǒng)一由中國菌種保藏管理委員會（CCCCMCCCCM）管理，涉及藥品微生物檢驗的菌種由醫(yī)學微生物菌種保藏管理中心（CMCCCMCC）提供5菌種代號菌種代號國內藥品微生物檢驗所用的菌種代號是CMCC（F）或CMCC（B）CMCC 中國醫(yī)學菌種保藏中心B 代表細菌， F 代表真菌。金黃色葡萄球菌 CMCC(B)26003大腸桿菌 CMCC(

3、B) 44102枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 63501白色念珠菌 CMCC(F)98001黑曲霉CMCC(F) 980036 我國提供的標準菌種通常是以凍干粉的形式包裝于熔封的厚玻璃容器中。在這種容器中，微生物通常與賦形劑共存，由于缺乏生長必須的環(huán)境條件，一般呈休眠狀態(tài)。78 中國醫(yī)學菌種保藏中心提供中國醫(yī)學菌種保藏中心提供的標準菌株9 ATCC菌種保藏中心提供的標準菌株菌種保藏中心提供的標準菌株甘油冷凍管：1011 藥檢所購買的標準儲備菌株藥檢所購買的標準儲備菌株干粉溶解培養(yǎng)復壯穿刺半固體培養(yǎng)封裝冷藏12甘油穿刺半固體培養(yǎng)封裝冷藏13接種接種 將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的

4、生物體內的過程叫做接種。 在實驗室檢驗中的各種接種必須是無菌操作無菌操作。 培養(yǎng)基經高壓滅菌后，用經過滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上，這個過程叫做無菌接種操作。 141、接種環(huán)2、接種針3、接種鏟4、接種鉤5、其他玻璃器械151接種針接種針 2.接種環(huán)接種環(huán) 3.接種鉤接種鉤 4.5.玻璃涂棒玻璃涂棒 6.接種圈接種圈 7.接種鋤接種鋤 8.小解剖刀小解剖刀 接種和分離工具接種和分離工具 一般步驟為：準備液體石蠟并滅菌去水備用。獲得需要保藏菌種的純培養(yǎng)，將液體石蠟注入培養(yǎng)容器中，并完全覆蓋培養(yǎng)基。 液體石蠟液面以高出培養(yǎng)基上端0.51

5、cm為宜 28冰箱保藏1718細菌置28保藏，芽孢桿菌每36個月移植一次，其他細菌每月移植一次。 放線菌于28保藏，每3個月移植一次。 酵母菌于28保藏，每46個月移植一次。 絲狀真菌于28保藏，每4個月移植一次。 擔子菌于28保藏，每3個月移植一次。保藏的濕度通常在5070為宜。 1920干燥保藏法液氮保藏法真空干燥保藏法冷凍干燥保藏法甘油冷凍保藏法沙土保藏法211、菌種“代”的確定：以干燥菌種管為第“0”代，由此得到的第一批子代為第一代，以此類推。2、菌種傳代次數規(guī)定：不超過5代。3、菌種應專人保藏、專柜貯藏，認真做好登記，統(tǒng)一編號，按期傳代。4、保存菌種傳代或凍干均應填寫專用記錄，菌種管上應有標簽，表明菌種編號、代次、批號、日期。5、過期菌種應及時處理、登記，經121 30分鐘滅菌消毒。221、標準菌種必須從認可的菌種收集途經獲得；實驗室必須建立和保存所有菌種的收集、貯藏、保存、確認試驗的記錄。2、實驗室應有文件管理標準菌種（從原始菌種到工作用菌種）。該程序應包括：a:標準菌種必須定期傳代，并做確認試驗。b：每一子菌種都應以適當標簽、標記來表示名稱、標準號、接種日期和傳代日期。C:每一子菌種都應以標記從原始菌種傳代到工作用菌種的代數；記錄菌種生長的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件；菌種生存條件等。23過期菌種應及時清理、登記，并經121 、30分鐘高壓消毒滅菌。2